病毒的鸡胚培养法
病毒的鸡胚培养法接种途径
新乡医学院微生物学教研室 监督电话:3029945 Email:jcbwsw@
内容提要
一 抗酸染色 二 病毒的接种技术 三 真菌菌落的观察 （小白鼠和鸡胚共用注射器16支，病毒悬液用 锥蓝染液代替，小白鼠8只，鸡胚15只，微 量移液器4支，真菌示教培养管4支）
缺陷：带毒，缺敏感动物。
常用动物：鼠、家兔、猴和羊等。
接种的途径：脑内、鼻内、皮内、腹腔内和静
脉注射等。
1 病毒的动物接种
目的 了解病毒的动物接种法 材料 小白鼠（1~3天或3周龄）， 乙型脑炎 病毒悬液， 1ml注射器（8支），碘酒 ， 棉签，眼科剪等
小白鼠的脑内接种（共8只小白鼠）
病毒的培养
病毒的概念：形态最小，结构最简 单的微生物。缺乏完整的酶系统， 无完整的细胞结构，必须在活的组 织细胞中才能增殖。
常用的分离、 培养、鉴定 病毒的分离培养 病毒的方法
动物接种法
鸡胚培养法
组织细胞培养法
动物接种（Animal inoculation）
最早应用的病毒培养法。 用途：分离鉴定、传代、制备免疫血清。
本次实验不做培养，接种完病毒，可将 鸡胚去除部分卵壳后，小心将卵壳内组 织倒入平皿中，观察接种的病毒替代液 （锥蓝染液）是否接种部位正确及各膜 囊等的组织结构。
注意事项
消毒小白鼠时不要碰到眼睛
注射时不要扎的太深以免扎到手
磨卵壳及钻孔时力量要适中
看过的鸡胚不要倒入水池，倒入指定的 大烧杯中
菌落光滑、湿润；无菌丝 隐球菌菌落 外观和酵母型菌落相似，显微镜下可看到假菌丝 白色念株菌菌落 菌落系由多细胞菌丝体所组成 大多数丝状真菌或霉菌的菌落
实验八 病毒鸡胚接种与细培养
兽医微生物实验教学课件
（动物医学本科专业）
动物医学系
实验八 病毒鸡胚接种与培养
目的要求：
1、了解不同日龄鸡胚接种的途径和应用。 2、掌握鸡新城疫病毒鸡胚尿囊腔接毒、收毒方法。 3、掌握鸡胚成纤维细胞培养和新城疫病毒接种、病变观察及收毒。
病毒分离培养
分离培养：动物接种——原动物/实验动物 鸡胚接种——尿囊腔、卵黄囊、尿囊膜、羊膜腔等
细胞培养——原代细胞
二倍体细胞 传代细胞
cpe观察空斑ຫໍສະໝຸດ 基因克隆/扩增组织块培养——肠管、气管环等
鸡 胚 成 纤 维 细 胞 培 养 程 序 ：
在无菌条件下采取9－10日龄鸡胚 ↓ 除去头(或仅除去喙和眼)、爪和内脏，并剪成块 ↓ 用Hanks液等充分冲洗 ↓ 剪将其剪成lmm大小的碎块 ↓ 加入Hanks液或其他洗液，充分冲洗 ↓ 约4倍量的0.25％胰酶，并调整pH至7.6－7.8 ↓ 37℃水浴中感作30分钟，每10分钟轻轻摇动一次 ↓ 吸弃上层胰酶溶液 ↓ 用洗液轻洗2次后 ↓ 吸管充分吹打，直至形成均匀的细胞悬液 ↓ 准备细胞计数 ↓ 单层细胞培养
实验内容：
1、鸡胚的选择和接种途径：鸡胚发育正常时，可见清晰的血管和活 的鸡胚，血管及其主要分支均明显，呈鲜红色，鸡胚可以活动。 卵黄囊接种：6-8日龄的鸡胚； 绒毛尿囊腔接种：9-13日龄的鸡胚； 鸡胚血管注射：12-13日龄鸡胚； 羊膜腔和脑内注射：10日龄鸡胚。 2、鸡新城疫病毒接种液或接种病料的处理；照蛋、打孔；接种。接 种后的检查和收毒。 3、鸡胚成纤维细胞培养和新城疫病毒接种、病变观察及收毒。
实训八 病毒的鸡胚接种技术
实训八病毒的鸡胚接种技术目的要求掌握鸡胚培养病毒的接毒和收毒方法，明确鸡胚培养病毒的应用。
仪器及材料受精卵、恒温箱、照蛋器、接种箱、蛋架、一次性注射器（1～5ml）、中号镊子、眼科剪和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、锉、煮沸消毒器、消毒剂（5%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸或3%来苏儿）、新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗。
方法与步骤（实验视频六）（一）鸡胚的选择和和孵化应选择健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。
为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。
用孵化箱孵化，要注意温度、湿度和翻蛋。
孵化最低温度为36℃，一般为37.5℃，相对湿度为60%。
每日最少翻蛋3次。
发育正常的鸡胚照蛋时可见清晰的血管及鸡胚的活动。
不同的接种材料需不同的接种途径（见图2-4），不同的接种途径需选用不同日龄的鸡胚。
卵黄囊接种，用6～8日龄鸡胚；绒毛尿囊膜接种，用9～13日龄的鸡胚；绒毛尿囊腔接种，用9～12日龄的鸡胚；血管注射，用12～13日龄的鸡胚；羊膜腔和脑内注射，用10日龄的鸡胚。
（二）接种前的准备病毒材料的处理怀疑污染细菌的液体材料，加抗生素（青霉素1000IU和链霉素1000μg/ml）置室温1h或4℃冰箱12～24h，高速离心，取上清液，或经细菌滤器滤过除菌。
如为患病动物组织，应剪碎、匀浆、离心后取上清液，必要时加抗生素处理或过滤除菌。
若用新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗，则无菌操作用生理盐水将其稀释100倍。
照蛋以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置，标明胚龄及日期气室朝上立于蛋架上。
尿囊腔接种选9～12日龄的鸡胚，接种部位可选择在气室中心或远离胚胎侧气室边缘，避开大血管。
（三）鸡胚的接种（以新城疫病毒的绒毛尿囊腔接种为例）在接种部位先后用5%碘酊棉及75%酒精棉消毒，然后用灭菌锥子打一小孔，一次性1ml注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插入气室,刺入尿囊，向尿囊腔内注入0.1～0.3ml。
鸡胚
鸡胚培养法的缺点：
1. 一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指 征。 2. 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。 3. 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传 递到鸡胚。 4. 通常鸡胚常常含有白血病病毒。 5. 在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡 胚，鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵 抗。
五、注意事项
鸡胚为一活的有机体，因此要严格 无菌操作，同时动作要仔细，以免造成 物理死亡。接种后24小时内死亡应不计 结果。
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流感病毒鸡Байду номын сангаас培养法
福建省疾病预防控制中心 杨式芹
一、概况
1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚 培养研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。 1938年Goodpasture和Burnet等应用 鸡胚繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克 次氏体。
鸡胚培养法的优点：
1. 它的组织分化程度低，可选择适当途径 接种，病毒易复制，感染病毒的膜和液体 含大量病毒。 2. 是个整体，有神经血管的分布及脏器的 构造。 3. 来源充足，操作简单，通常是无菌的， 对接种的病毒不产生抗体。
二、鸡胚的结构与生理
鸡胚是由三个胚层发育起 来的，即外胚层，中胚层和内 胚层，它们构成胚胎的组织与 器官。
（约10日龄鸡胚的结构见图）
三、材料
（一）7~11日龄鸡胚
（二）孵卵箱
（三）检卵灯、开卵钻和卵盘 （四）其它
四、接种技术
（一）活胚检查
1.血管：活胚可见清晰的血管，有时可见血管搏 动，死胚血管模糊成淤血带或淤血块。 2.胎动：活胚可见明显的自然运动，尤其在转动 胚胎时，死胚见不到任何胎动，胚胎发红像出血样， 有的呈现黑块。 3.血管网是否丰满：发育好的鸡胚可见密布丰满 的血管网，也就是绒毛尿囊膜，死胚则见不到这一 现象。
病毒的培养方法哪几种
病毒的培养方法哪几种病毒的培养方法是研究和了解病毒特性、生命周期以及对人类和生态系统的影响的重要手段。
通过培养病毒，科学家可以进一步研究病毒的基本特征、复制和传播机制，以及开发疫苗和药物。
本文将介绍几种常见的病毒培养方法。
一、细胞培养法细胞培养法是常见的病毒培养方法之一。
病毒在体内是依赖于宿主细胞才能生存和复制的，因此通过培养感染体细胞的方式，可以实现病毒的大规模培养。
这种方法需要选取合适的细胞系，如HeLa细胞、Vero细胞等，将病毒接种在细胞培养基中，让病毒感染细胞并进行复制。
通过观察细胞的形态学变化、病毒颗粒释放和细胞死亡等现象，可以判断病毒的感染情况和生命周期。
二、鸡胚培养法鸡胚培养法常用于培养禽类和一些昆虫病毒。
在鸡胚培养技术中，科学家会将病毒接种到受精鸡蛋的卵黄囊或坏死胚中，利用卵黄囊提供的营养和鸡胚的生长环境，促进病毒的复制和生产。
通过观察鸡胚的发育情况和病变症状，可以判断病毒感染的程度和效果。
三、动物模型法动物模型法常用于病毒研究的初期，用于检测病毒分离和扩增的能力。
科学家会选择合适的动物种类，如小鼠、大鼠、兔子或猴子等，将病毒接种到动物的体内。
通过观察动物是否出现病征、病毒在体内的分布和病理变化，判断病毒的毒性和致病能力。
然而，由于动物模型法具有伦理和实验条件限制，现在越来越多的科学家转向细胞培养法和分子生物学技术。
四、感染性核酸和蛋白质培养法感染性核酸和蛋白质培养法是一种近年来发展起来的新技术。
通过利用已经纯化的病毒核酸或蛋白质，将其与适当的宿主细胞或胚胎培养在一起，使其感染并继续生长。
这种方法可以绕过病毒的复制步骤，直接利用病毒的核酸或蛋白质进行培养，从而更快地得到病毒产物。
然而，由于该方法无法复制整个病毒生命周期，可能会影响病毒的完整性和活性。
总结起来，病毒的培养方法有细胞培养法、鸡胚培养法、动物模型法和感染性核酸和蛋白质培养法等。
不同的方法适用于不同类型的病毒和研究目的。
鸡胚接种实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚接种病毒的方法和步骤。
2. 了解病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
3. 学习病毒分离和培养的基本原理。
二、实验原理鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法。
病毒接种于鸡胚后，能够在鸡胚中繁殖，从而便于观察和分析病毒的生物学特性。
本实验主要采用尿囊腔接种法，将病毒接种于鸡胚尿囊腔内，观察病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
三、实验材料1. 实验动物：9-11日龄的鸡胚。
2. 实验试剂：新城疫病毒悬液、生理盐水、碘酒、酒精、消毒棉球等。
3. 实验仪器：照蛋器、无菌手术刀、镊子、注射器、剪刀、平皿等。
四、实验方法1. 鸡胚准备：取9-11日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒鸡胚蛋壳，用手术刀在鸡胚气室处划一小孔，用注射器吸取适量新城疫病毒悬液。
2. 尿囊腔接种：将鸡胚置于卵盘上，气室端向上，用注射器将病毒悬液注入鸡胚尿囊腔内，注入量约为0.1-0.2ml。
3. 孵育：将接种后的鸡胚放入37℃孵卵箱中孵育48-72小时。
4. 观察：定期观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、畸形等现象。
5. 病毒分离：取出死亡鸡胚，无菌操作下取出尿囊液，进行病毒分离和培养。
五、实验结果1. 接种后，部分鸡胚出现死亡现象，死亡时间集中在接种后24-48小时。
2. 死亡鸡胚的尿囊液中检测到新城疫病毒。
3. 成活鸡胚生长发育正常，未出现明显异常。
六、实验讨论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法，适用于多种病毒的研究。
2. 尿囊腔接种法是一种常用的鸡胚接种方法，适用于新城疫病毒、流感病毒等多种病毒。
3. 本实验结果表明，新城疫病毒能够在鸡胚中繁殖，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
七、实验结论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法。
2. 尿囊腔接种法适用于新城疫病毒等多种病毒的分离和培养。
3. 本实验成功分离和培养了新城疫病毒，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
八、实验心得1. 实验过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。
鸡胚培养
病毒的鸡胚培养, 提纯, 鉴定1. 鸡胚的选择和孵化选SPF鸡胚, 入孵前0.1%新洁尔灭消毒表面. 在温度37.5-38℃, 湿度40%-57%通风良好的条件下孵育. 孵育过程中每天翻蛋两次, 要求蛋的角度要达到前俯后仰45°.在孵育的第五天照蛋, 去除无精蛋和死胚蛋, 第九日起每天照蛋2次, 去除死胚蛋.2. 病毒的接种病毒的浓度, 由病毒原始浓度, 将其稀释至效价为1:1280备用, 接种鸡胚时将其稀释1000倍,接种: 采用第9-10日龄的鸡胚, 进行尿囊腔接种, 接种量0.1ml,接种步骤: a 照蛋标出气室和大血管位置b 气室底边胚胎附近无大血管处标记注射位置c 气室向上放置于卵架上, 碘酒酒精消毒蛋壳d 注射点和气室顶分别队蛋壳打洞,e 1ml针头以30度夹角刺入3-5mm, 注射病毒液f 石蜡封口孵育: 气室向上, 孵箱温度36℃,湿度40%-57%, 定时换气, 捡出24小时内死亡的鸡胚, 培养48小时, 搜集24小时以后死亡的鸡胚,收获: 48小时后, 4℃冰箱过夜/-20℃ 1小时,避免收获时流血.气室端卵壳表面消毒, 镊子击破卵壳, 除去壳膜, 撕破绒毛尿囊膜, 吸出尿囊液和羊水, 无菌容器4℃保存待用. 同时可以取出鸡胚, 观察有无出血, 卷曲等病毒的提纯、分装及保存尿囊液经低速离心（2800r/min，800g）30min，弃去沉渣，含NDV的上清液再经低温超速离心（4℃，30000r/min，90000g）60min沉淀病毒。
沉淀物用pH7.2、0.01mol/L PBS重悬，并用0.5%新鲜鸡红细胞悬液测定NDV的血凝单位（Hu），然后稀释成1:1280Hu/ml，分装于安瓿，置-20℃保存备用，临用前解冻病毒的鉴定:(1)血凝实验(HA):试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10稀释倍数1:5 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 对照生理盐水(ml) 0.40 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 病毒液(ml) 0.10 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 生理盐水(ml) 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25得最好稀释倍数, 称为病毒得血凝滴度.(2)毒力测定将BSR T7/5细胞培养于九孔板, 对数生长期, 24小时前换培养液, 将所得到的病毒液倍比稀释(按上表), 分别感染BSR T7/5细胞培养皿,(小时后)观察细胞病变情况,计数噬菌斑, 将其与病毒浓度做图, 取呈线性关系的浓度段, 判断病毒的侵染力所需材料:1.SPF鸡蛋2.1%鸡血红细胞悬液3.0.1%新洁尔灭溶液4.病毒原液5.石蜡6.照蛋器7.卵架8.1ml注射器9.孵箱10.4℃冰箱11.无菌容器12.碘酒, 酒精, 镊子, 剪刀, 洗管, (打孔器)附:1.病毒血球凝集单位: 能使鸡红细胞凝集的最高稀释倍数的病毒液0.25ml称为一个病毒血球凝集单位2.病毒的效价: 每单位体积中侵染单位的数量, 如寄生某寄主所需最小量病毒是0.1ml稀释至1/106的病毒悬液, 其效价为:1/(10-1X10-6)= 107.3.噬菌斑形成单位(pfu): 如0.1ml病毒悬液再单层细胞上形成20个蚀斑, 则每毫升病毒悬液的pfu是(1/0.1)X20=200pfu/ml4.鸡胚的判断: 正常胚胎: 可见有清晰得血管小团, 有鸡胚迹象, 可见有胚胎主动活动无精卵, 经过4天孵育后未见有胚胎迹象,仅见模糊卵黄影死胚或濒死卵: 胚胎运动呆滞或不动, 血管昏暗, 折断或飘落。
病毒的鸡胚培养法
（四）收获病毒
鸡胚为活的有机体，因此要严格无菌操作， 同时动作要仔细，以免造成物理死亡。接种 后24小时内死亡应不计结果。
病 毒 的 鸡 胚 培 养 法
刘映乐
1911年 Rous首先将鸡胚应用于Rous肉瘤病 毒的培养 1938年 Cox应用卵黄囊培养立克次氏体
鸡胚培养法的优点：
1. 组织分化程度低
2. 有神经血管的分布及脏器的构造
3. 来源充足，操作简单 4. 胚体通常无菌
5. 对接种的病毒不产生抗体
鸡胚培养法的缺点：
（三）接种途径
尿囊腔接种
该途径一般用于病毒的（流感、新城鸡瘟病毒 和腮腺炎）适应和传代。
尿囊腔接种
卵黄囊接种
该途径主要用于抗病毒（流感）的药物实验。
羊膜腔接种
该途径主要用于临床材料（如患者的鼻洗液及咽 漱液）的病毒分离。
绒毛尿囊膜接种
该途径主要用于病毒滴定、中和试验和药物实验。
1. 病毒通常不能使鸡胚产生特异性的感染指征。 2. 常规饲养方式的不足
3. 培养病毒的种类有限
鸡胚的结构与生理
鸡胚由三个胚层发育而来，即外胚层，中胚
层和内胚层，它们构成了胚胎的组织与器官
鸡 胚 培 养 的 病 毒 接 种（一）活胚检查 Nhomakorabea1.血管
2.胎动 3.绒毛尿囊膜
（二）实验材料
鸡受精卵, 照蛋灯, 打孔器或剪刀, 蛋盘, 无菌注 射器和针头, 消毒酒精, 酒精灯, 石腊 病毒毒种用生理盐水稀释备用
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法氏囊病毒的分离
• 取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5 （w/v）加入生理盐水，研磨，-20℃，反复 冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为准；
• 将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心 5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤
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2.接种
• 鸡胚接种的方法有几种：
绒毛尿囊腔内接种 ★★
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• 鸡胚接种技术是养禽业中一种相对新的疫 苗接种方法。这种方法就是对孵化后期的 鸡胚接种某些活的病毒疫苗。这些病毒疫 苗不会对孵化率产生不利的影响，通过这 种方式接种疫苗后孵出的雏鸡具有免疫保 护力。
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（三）实验器材
• 1.鸡胚：要选择SPF鸡胚或低母源抗体的鸡胚。
从实践看，法氏囊炎病毒对抗体相当敏感，所以 要用无母源抗体的鸡胚；而新城疫病毒、禽流感 病毒等可抵御母源抗体的作用而得以繁殖致死鸡 胚。
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4.废料处理
• 操作完毕，将所有的用具煮沸消毒，擦净 后再以消毒水浸洗，卵壳、壳膜和胚胎等 残物煮沸消毒后弃去。
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（五）实验作业
• 1.用鸡胚培养病毒，在选用鸡胚时应注意什 么问题？
• 2.绒毛尿囊腔内接种在培养和收毒过程中应 注意哪些问题？
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病毒的鸡胚培养
• （一）实验目的 • （二）实验原理 • （三）实验器材 • 四）实验方法 • （五）实验作业
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（一）实验目的
• 1.了解鸡胚培养有哪几种常用的接种方法。 • 2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒的
操作技术。
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2
（二）实验原理
• 实验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培 养两种方法，而鸡胚培养更为常见。一般 而言，禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒， 其他动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。
绒毛尿囊膜接种
1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜
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羊膜腔接种
取10-12日龄的鸡胚，消
毒气室顶上的蛋壳，并
将气室顶端的蛋壳锉一
三角形的裂痕，用灭菌
镊子揭去裂痕部位的蛋
壳和壳膜，用灭菌平头
镊子刺破尿囊膜，并轻
轻夹去羊膜，用小号针
头刺进羊膜腔内，注入
0.05-0.1ml的病毒接种
液，以氧化锌胶布封口，
滴上溶化的固体石蜡。
羊膜腔接种
放回孵化器，使蛋直立 1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜4.羊膜
孵化。
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12
卵黄囊内接种
选择6-8日龄的鸡胚，
照蛋检查，划出气室
和胎位，并以气室向
上竖立在蛋托上，气
室端的蛋壳经消毒后
以打孔器钻一小孔，
将注射针头刺过小孔，
沿着卵的纵轴刺入约
3cm，然后注入
0.2ml的病毒接种液，
• 孵化前的鸡胚应注意消毒，置37-38℃、相对湿
度45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵 蛋第4天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采用 9-11日龄的活胚接种。
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（四）实验方法
• 1.接种前的准备：
• a.鸡胚的准备：选择9-11日龄的鸡胚，在照蛋
时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而 血管明显的区域中，在血管之间的间隙划上记号， 作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒， 再用75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔， 气室向上竖放于蛋托上。
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鸡胚的模式结构
1.卵壳 2.绒毛尿囊膜 3.尿囊腔
4.羊水腔 5.卵黄囊 6.鸡胚胎 7.卵白
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• b.病毒材料的准备：要分离培养的病毒材料应
是无菌的，因此在处理材料的过程中，应严格按 照无菌操作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每 1000羽份配成250ml,为达到无菌的目的，可在 每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各1005000IU，置室温中1h处理。
绒毛尿囊膜接种
羊膜腔接种
卵黄囊内接种
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绒毛尿囊膜接种
• 取10-12日龄的鸡胚，照 蛋选择血管较少的部位做 一记号，用磨蛋器磨一于 纵轴平行的裂痕，小心挑 开蛋壳，将白色的壳膜用 针尖小心挑破，不要伤及 血管丰富而透明的绒毛尿 囊膜，在气室顶端钻一小 孔，用滴管贴近小孔，轻 轻一吸，绒毛尿囊膜便下 陷成一小凹。
用氧化锌胶布及石蜡
封口后放回孵化器中
卵黄囊接种
培养。
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鸡胚的各种接种途径
1.绒毛尿囊膜接种 2.尿囊腔接种 3.羊水腔接种 4.卵黄囊接种
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3.收毒：病毒的收毒根据接种的途径而定。
绒毛尿囊腔内接种 ★★
尿囊液
绒毛尿囊膜接种
绒毛尿囊膜
羊膜腔接种 卵黄囊内接种
羊水 卵黄液和卵黄膜