鸡胚培养灭活疫苗生产工艺流程
灭活苗制备
灭活苗制备简介灭活苗制备是一种常用的疫苗制备方法，通过将病原体经过一定的处理方法来减弱其致病性，从而使其成为安全有效的疫苗。
本文将介绍灭活苗制备的步骤和常用的方法。
步骤灭活苗制备的步骤一般可以分为以下几个部分：1.病原体培养：首先要获得足够数量的病原体，通常可以通过培养方法来实现。
培养方法可以根据具体的病原体的特性而定，包括使用不同的培养基和培养条件。
2.病原体收集：当病原体达到一定数量和生长状态时，需要将其收集起来用于后续的处理。
收集方法可以包括离心、过滤等。
3.病原体灭活：将收集到的病原体进行灭活处理，以减弱其致病性。
常用的灭活方法包括化学灭活、物理灭活和辐射灭活等。
化学灭活可以使用一些化学物质如福尔马林、酚等，物理灭活可以使用高温、低温或者超声波等，辐射灭活可以使用紫外线或者γ射线。
4.灭活效果检测：灭活后的病原体需要进行灭活效果检测，确保其致病性已经被有效减弱。
常用的方法包括细胞培养、动物感染实验等。
5.疫苗制备：在确认病原体已经被灭活的基础上，可以将其进行进一步处理，制备成疫苗。
具体的处理方法可以根据不同的病原体而定，包括添加适宜的辅料、进行浓缩和纯化等。
常用方法灭活苗制备的方法有很多种，根据不同的病原体和制备需求，可以选择合适的方法。
以下是一些常用的方法：•化学灭活：通过使用化学物质来杀灭病原体，常用的化学物质包括福尔马林、酚等。
化学灭活能够迅速杀灭病原体，但可能会影响病原体的表位结构和免疫原性。
•物理灭活：通过使用物理因素如高温、低温或者超声波来杀灭病原体。
物理灭活相对较为简单易行，不会对病原体的免疫原性产生明显影响。
•辐射灭活：通过使用紫外线或者γ射线来杀灭病原体。
辐射灭活能够有效地杀死病原体，但可能会对病原体的遗传物质产生损伤，进而影响病原体的免疫原性。
结论灭活苗制备是一种常用的疫苗制备方法，通过对病原体进行灭活处理，有效地减弱其致病性，并制备成安全有效的疫苗。
根据不同的病原体和制备需求，可以选择合适的灭活方法。
疫苗的生产流程
疫苗的生产流程(总2页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--疫苗是如何生产出来的呢？近日，在工作人员的带领下，健康时报记者实地探访了甲型H1N1流感疫苗企业，看到了“种在”鸡蛋里的甲感疫苗。
名词解释：疫苗就是病毒，不过这种病毒已经剔除致病能力。
当人体接种疫苗时，免疫系统就会产生一定的保护物质。
当人再次接触该类病毒时，人的免疫系统就会循着原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病毒对人体的伤害。
甲感疫苗是“种”在鸡胚里培育出来的，也就是间说的毛鸡蛋在一间阴暗的照检室，四名工作人员正在拿着手电筒，麻利地照射每颗鸡蛋，透过光线，鸡蛋壳红彤彤的，能看到里面的丝丝血管。
“检查这些鸡蛋是否合格，是生产疫苗的第一道工序。
”工作人员说。
这些鸡蛋就是用来培养甲型H1N1流感疫苗的。
北科兴生物制品有限公司获得由美国CDC（美国疾病预防控制中心）提供的甲型H1N1流感疫苗“原始种子”，是在6月8日，种子只有一小瓶，由专业公司从美国空运过来，在旅途中处于“冷冻”状态。
“要想获得更多的种子，只能把它种在土壤里，等着发芽开花结果。
要想获得更多疫苗，就要把疫苗‘种在’鸡蛋里。
”该公司企业发展部宣传主管刘沛诚说。
说这是鸡蛋，其实有点“外行”，用专业术语说这是鸡胚，通俗地说就是受精后开始发育的鸡蛋，间称之为“毛鸡蛋”。
这些“毛鸡蛋”是美国引进的海兰白鸡所生。
记者仔细观察后发现，它们大小相当一致，外壳为白色，就像白色瓷器一样。
“这种鸡胚透光好，在暗室光源的照射下，可以清晰地看到鸡胚里的血管等，从而容易剔除弱胚、死胚等。
”工作人员说。
鸡胚多是由出生28周至38周的母鸡所生，这些母鸡必须是没有接种过疫苗、没有使用过抗生素的，就连吃的饲料也是纯天然的，这样生下的鸡胚才不会具有强大的抵抗力，注入用于疫苗的流感病毒时，能比较顺利地“通行无阻”。
检查合格的鸡胚经过消毒，就被传入病毒接种操作生产线上。
疫苗制造基本程序
（二）种毒与毒种继代
目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自然弱毒与人工培育的弱毒 两类。各种制苗用的种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保存， 保存的种毒多为冻干毒。 冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通常继代3代以上，经检定 符合标准后方可作力生产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、毒 价测定和其他项目的检定等。
动物选择 种毒与接种 观察与收获 配苗
病毒在易感动物体内可大量增殖，但在各器官组织、部位中增殖病 毒的量却有很大的差异，利用病毒增殖迅速、含毒量高的组织制造的疫苗 称为组织疫苗(tissue vaccine)。 动物组织疫苗包括动物组织灭活疫苗和动物组织弱毒活苗两类，前者 多数由强毒株制造，如猪瘟结晶紫疫苗、狂犬病羊脑组织疫苗；后者均以 弱毒株生产，如猪瘟兔化弱毒乳兔组织疫苗、牛瘟兔化弱毒组织疫苗等。
三浓缩二细菌性活疫苗制造菌种的选择菌液培养浓缩配苗流程图1细菌疫苗制造工艺流程蛋白质肉浸液等原料培养基细菌分离菌种弱毒菌种配置灭菌鉴定减毒检验配制灭菌检验配制灭菌原料佐剂灭活菌液配苗乳化灭活疫苗培养菌苗原液配苗活疫苗保护剂菌液分装冻干分装灭活原料活化种子项目三病毒疫苗制造病毒性禽胚培养疫苗制造病毒性细胞培养疫苗制造病毒性动物组织疫苗制造一病毒性禽胚培养疫苗制造受精卵应来自spf鸡群至少源于未用抗生素药物的非免疫鸡群以免受母源抗体的干扰和残留抗生素的影响
病毒培养液收获时间和方法依疫苗性质而定，可将培养 瓶冻融数次后收集；或加入 EDTA- 胰蛋白酶液消化分散收取； 或在病毒增殖培养过程中可收获5-7次毒液，细胞毒液经无菌 检验、毒价测定合格后供配苗用。
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二、病毒性细胞培养疫苗制造
种毒与毒种继代 （五）配 苗 细胞制备 接毒与收获 配苗
1．灭活疫苗
鸡胚灭活疫苗生产工艺流程
鸡胚灭活疫苗生产工艺流程英文回答：Chicken embryo-inactivated vaccine production process.The production process of chicken embryo-inactivated vaccine is as follows:1. Preparation of seed virus: The seed virus is the original virus used to infect the chicken embryos. It is usually obtained from a previous infection of chickens or from a vaccine seed bank. The seed virus is titrated to determine its concentration and infectivity.2. Inoculation of chicken embryos: Chicken embryos are used to propagate the seed virus. The embryos arefertilized eggs that are incubated at 37 degrees Celsius for 9-11 days. The seed virus is injected into the allantoic cavity of the embryos. The allantoic cavity is a fluid-filled space between the embryo and the eggshell.3. Incubation of embryos: The embryos are incubated for 48-72 hours after inoculation with the seed virus. During this time, the virus replicates in the allantoic cavity. The allantoic fluid is harvested after incubation, and it contains the inactivated virus.4. Inactivation of the virus: The harvested allantoic fluid is treated with a chemical agent, such as formaldehyde or β-propiolactone, to inactivate the virus. The inactivation process kills the virus while preserving its immunogenicity.5. Purification of the vaccine: The inactivated virusis purified to remove any impurities, such as cellular debris or other viruses. The purification process may involve filtration, centrifugation, or ultrafiltration.6. Formulation of the vaccine: The purified inactivated virus is formulated into a vaccine by adding adjuvants, stabilizers, and other ingredients. Adjuvants are substances that enhance the immune response to the vaccine.Stabilizers are substances that prevent the vaccine from losing its potency over time.7. Testing of the vaccine: The finished vaccine is tested to ensure that it is safe and effective. The vaccine is tested for sterility, potency, and safety in animals.8. Storage and distribution of the vaccine: The vaccine is stored at 2-8 degrees Celsius and distributed to poultry farms. The vaccine is administered to chickens to protect them from the disease caused by the seed virus.中文回答：鸡胚灭活疫苗生产工艺流程。
畜禽疫苗生产工艺
畜禽疫苗生产工艺畜禽疫苗的生产工艺一般包括疫苗病毒菌种的培养、疫苗制备、生产质控和疫苗包装等几个步骤。
下面对畜禽疫苗生产工艺进行详细介绍。
1. 疫苗病毒菌种的培养：首先，需要选择适宜的病毒菌种进行培养。
通常，制备畜禽疫苗的菌种是通过无害化处理后的致病菌株。
在无菌条件下，将病毒菌种接种到培养基中进行培养，提供适当的温度、pH值、营养物质等，使菌种能够迅速繁殖。
2. 疫苗制备：疫苗制备是将培养好的病毒菌种进行处理，制备成疫苗产品。
制备的具体步骤包括病毒提取、病毒灭活或减毒、病毒纯化等。
病毒提取是将培养好的细胞和病毒分离，通常采用离心等方法进行。
接下来，对病毒进行灭活或减毒，以减少病原性。
最后，通过离心、过滤等方法进行病毒纯化，去除杂质，得到纯净的病毒疫苗。
3. 生产质控：疫苗生产过程中需要进行严格的质量监控，确保疫苗的质量和安全性。
常见的质控方法包括生物学检测和化学物理检测。
生物学检测主要是对疫苗的病毒突变性、病毒浓度、病毒活性等进行测试，以确保疫苗的有效性。
化学物理检测主要是对疫苗的pH值、溶菌酶活性、重金属含量等进行测试，以确保疫苗的安全性。
4. 疫苗包装：疫苗制备完成后，需要将疫苗进行包装，以保证疫苗在储存和运输过程中的质量稳定。
常见的包装方式有冻干法、液体法和冻融法。
冻干法是将制备好的疫苗通过冷冻干燥的方式进行包装，这样可以延长疫苗的保存期限。
液体法是将制备好的疫苗直接进行包装，并使用适当的保护剂进行稳定。
冻融法是将制备好的疫苗通过冷冻和融化来提高疫苗的稳定性。
包装完成后，将疫苗进行标签和随货单的贴签，以便于追溯和监管。
总之，畜禽疫苗的生产工艺包括疫苗病毒菌种的培养、疫苗制备、生产质控和疫苗包装等几个步骤。
在生产过程中严格控制质量，确保疫苗的有效性和安全性。
这样可以为畜禽养殖行业提供有力的疫病防控保障。
病毒的鸡胚培养法
（一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验器材 （四）实验方法 （五）实验作业
（一）实验目的
1.了解鸡胚培养有哪几种常用的接种方法。 2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒的操作技术
。
（ 实二验）室培实养验病原毒常理使用动物接种和鸡胚培养两种方
法，而鸡胚培养更为常见。一般而言，禽病毒病大 部分可经鸡胚分离病毒，其他动物病如犬瘟热也可 经鸡胚分离病毒。
（五）实验作业
1.用鸡胚培养病毒，在选用鸡胚时应注意什么问题？ 2.绒毛尿囊腔内接种在培养和收毒过程中应注意哪些
问题？
鸡胚接种技术是养禽业中一种相对新的疫苗接种方法 。这种方法就是对孵化后期的鸡胚接种某些活的病毒 疫苗。这些病毒疫苗不会对孵化率产生不利的影响， 通过这种方式接种疫苗后孵出的雏鸡具有免疫保护力 。
（三）实验器材
1.鸡胚：要选择SPF鸡胚或低母源抗体的鸡胚。从 实践看，法氏囊炎病毒对抗体相当敏感，所以要 用无母源抗体的鸡胚；而新城疫病毒、禽流感病 毒等可抵御母源抗体的作用而得以繁殖致死鸡胚 。
法氏囊病毒的分离
取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5（w/v）加入 生理盐水，研磨，-20℃，反复冻融2次；每次冷冻时 间以研磨物结冰为准；
将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心5分钟，将 上清取出，使用无菌滤器过滤
2.接种
鸡胚接种的方法有几种：
绒毛尿囊腔内接种
★★
绒毛尿囊膜接种
羊膜腔接种
1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜4.羊膜
卵黄囊内接种
选择6-8日龄的鸡胚 ，照蛋检查，划出气 室和胎位，并以气室 向上竖立在蛋托上， 气室端的蛋壳经消毒 后以打孔器钻一小孔 ，将注射针头刺过小 孔，沿着卵的纵轴刺 入约3cm，然后注入 0.2ml的病毒接种液 ，用氧化锌胶布及石 蜡封口后放回孵化器 中培养。
疫苗生产实验方法
疫苗生产实验方法实验一生产用毒种制备一、实验目的1.掌握血凝（HA）实验的原理。
2.掌握病毒HA效价测定方法。
3.熟悉无菌操作采集尿囊液方法3.了解常用的生产用毒种的制备方法。
二、实验用品1.器具：照蛋器、鸡胚孵化箱、超净台、注射器、EP管、微量移液器、枪头、小烧杯、离心机、离心管、培养皿、96孔反应板、恒温箱等。
2.试剂：生理盐水、1%鸡红细胞悬液。
3.实验材料：9日龄鸡胚、未免疫过的鸡、新城疫种毒三、实验内容1.参加实验的学生领取鸡胚，做好标记。
2.教师讲解实验过程及步骤并演示具体的实验操作技术。
(1)病毒增殖将已分装的种毒用生理盐水作10-3倍稀释，尿囊腔接种10日龄鸡胚，每胚0.lmL。
(2)收集病毒病毒接种后24h，48h，96h分别来检验并记录活死胚情况于表1中，并及时弃去腐败胚。
无菌操作方法釆集48-96h死亡胚及96h活胚的尿囊液，收获前先将鸡胚置于4℃冷冻6-18小时，冷冻后的鸡胚钝端向上，将气室上方卵室用碘伏消毒除去，暴露壳膜，用无菌镊子小心将壳膜从绒毛尿囊膜上撕下，不要损伤绒毛尿囊膜。
用注射器刺入尿囊腔，吸取尿囊液，置低温保存。
可将若干胚液混合后测定血凝实验（HA）效价。
(3)HA效价测定用微量移液器向96孔反应板的第1-12孔各加生理盐水50uL。
用灭菌的生理盐水将收集的鸡新城疫抗原50uL加入第一孔中，反复吹打4-5次后，吸出50uL到第二孔，依次倍比稀释到第11孔，弃去50uL，病毒稀释倍数依次为1:2-1:2048，第12孔不加抗原作为红细胞对照。
用微量移液管向1-12个加1%的鸡红细胞悬液50uL。
置于微量振荡器上，振荡1-2分钟，室温静置15-20分钟后观察结果，记录于表2中。
结果判定：将反应板倾斜为45度角，沉于管底的红细胞沿着斜面向下呈线状流动者，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集，如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
实验一 鸡新城疫疫苗(一)
尿囊膜贴在卵壳内壁上，用镊子夹住将其撕脱下来即
可。
胚胎：消毒、打开气室卵壳后，用镊子撕破卵壳膜和
绒毛尿囊膜，夹起胚胎，用剪刀剪断卵黄带，将胎儿
放灭菌容器内即可。
8.鸡胚接种注意事项
（1）接种材料一般都应按每毫升1000ＩＵ或μg加入 青、链霉素。
（2）接种位点应避开鸡胚、血管和胚头，以免针头 刺伤鸡胚而造成接种后的损伤性死亡。
实验一 鸡新城疫油乳剂灭活苗的制备技术（一）
新城疫病毒可以在鸡胚中大量增殖，收获的鸡胚
尿囊液中即含有新城疫活病毒，将收获的尿囊液经过
灭活，并加入佐剂，便制成了新城疫灭活疫苗。
目的和要求：
1.掌握鸡胚的孵化过程和鸡胚的接种途径、接 种方法； 2.掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔的增殖过程， 掌握接毒和收毒的方法。
头约1cm左右。
4.病料接种：
若用鸡胚分离、培养病毒，则应选9～12日龄之
间的发育鸡胚。许多病毒，特别是大多数禽病毒都能
在鸡胚或鸭胚中生长繁殖。接种时应先在照蛋器下检 查鸡胚是否健康、活泼，并划出气室和接种部位。然 后严格消毒接种部位和气室（先用碘酊消毒，再用 70%酒精消毒），用打孔器打孔后，每胚接种处理好
水瓶中，使两种抗生素在生理盐水中的含量均
达到1000-2000 IU(μg)/ml。将注射用生理盐
水3-4ml注入一瓶新城疫Ⅳ系弱毒疫苗中，稀释。
3.照蛋定位 ： 接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚 和弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室 位臵，再于胚胎侧画出接种位点（进针点）， 接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚
此法适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣
原体及立克次氏体的分离、培养。接种方法：
气室端蛋壳消毒后，在气室中央打一小孔，用
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灭菌 灭菌
配制 精洗
白油 粗洗
塑料瓶
铝盖
细胞培养灭活疫苗生产工艺流程
照蛋
浓缩
胶塞
粗洗
精洗
灭菌
成品检验
蛋库 洗蛋 熏蛋 鸡胚孵化 制细胞悬液 转瓶培养 38.5±1℃ 接毒 转瓶培养 38.5±1℃ 冷库-15℃ 解冻 2-8℃ 收获病毒 病毒液暂存-15℃ 化苗 灭活 抗原保存 4℃ 乳化配苗 分装 压塞 轧盖 贴标 装箱 入库 2-8℃
转瓶 粗洗 精洗 晾干 灭菌
培养液
中间品检验
中间品检验
灭菌 灭菌
配制 精洗
白油 粗洗
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标签
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成品检验
菌种 种子培养 发酵罐培养
收毒 灭活 2-8℃ 抗原保存 4℃ 乳化配苗
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照蛋 照蛋 超滤
浓缩
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精洗
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蛋库 洗蛋 熏蛋 鸡胚前孵化 接毒 后孵化 冷蛋（4℃） 收获病毒 病毒液暂存-15℃ 化苗 灭活 抗原保存 4℃ 乳化配苗 分装 压塞 轧盖 贴标 装箱 入库 2-8℃
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