酵母工艺与生产 化验室检验操作规程
酵母管理规定
酵母管理规定一、酵母菌种引进与实验1、新酵母的引进，应了解来源和特性。
并编号、记录，编号采用“G-XX”，G代表“金星”，XX表示编号，如01、02、03。
2、新菌种引进后要求做以下试验，从集团公司取得的酵母菌种可以不做试验。
（1）降糖速度（2）CO失重情况2（3）酵母死灭温度（4）酵母凝聚性（5）双乙酰峰值和还原速度（6）极限发酵度3、经实验室证实酵母性能良好，由酿造副厂长批准后，方可在子公司试验1～2罐。
4、经大生产试验证实性能良好，报集团酿造总监批准后可在集团内全面推广使用。
二、菌种的保存1、采用两种方法保存菌种，液体石腊保存法和固体斜面保存法。
金星公司负责液体石腊保存法，子公司采用固体斜面保存法。
2、液体石腊保存法，保存期一年，每年淡季分离、纯化一次；3、固体斜面保存法，每2－3个月转接一次；4、对保存的菌种应做好记录，并在菌种试管上标注菌种编号、接种日期和接种人；5、所有菌种不得传与集团外的公司或个人；6、大生产用酵母泥不得私自卖给或送给其他啤酒厂；三、酵母菌种培养1、实验室阶段扩培所用麦汁由酵母扩培人员制备，制备方法由集团酿造管理总部提供。
2、现场扩培所用麦汁为大生产使用麦汁，在使用大生产麦汁24小时前通知生产车间，注明所用麦汁的时间、温度、数量等。
3、严格执行酵母扩培工艺规定的时间、温度、压力等参数。
4、扩培操作严格遵守SOP标准。
5、扩培过程中的卫生工作按CIP工艺要求执行。
四、酵母菌种的检查1、扩培人员对每个阶段的酵母数、酵母形态、出芽率、死亡率等进行检查并做好记录；记录要求规范，不允许出现“大于多少”或“小于多少”。
2、子公司应确定专人（非酵母扩培人员）对二次罐和零代进行酵母数、酵母形态、出芽率、死亡率等兼职检查，并做好记录。
3、及时通知化验室进行微生物检验，检验项目为：好氧菌、厌氧菌。
4、当检验项目不合格（指好氧菌、厌氧菌、出芽率、死亡率、酵母数等）、或个别项目来不及检验（指厌氧菌），而生产急需要进入大生产时，按《菌种紧急放行规则》执行。
酵母样真菌检验标准操作程序
酵母样真菌检验标准操作程序酵母样真菌检验标准操作程序1检验目的规范酵母样真菌鉴定的标准操作程序。
2检验程序的原理和方法通过美华MA120微生物鉴定仪及其他鉴别实验对酵母样真菌进行鉴定。
3性能特征酵母样真菌为侵犯表皮以外组织和器官的病原真菌和条件致病真菌，通过对分离的病原菌鉴定及抗真菌药物的敏感性试验等，协助临床诊断、治疗、流行病学调查研究和院内感染的检测。
4样品类型痰、尿、脓、各种体液、尿道及阴道分泌物、咽拭、脑脊液、血等标本。
5所需的仪器和试剂5.1仪器：美华MA120鉴定仪、比浊仪。
5.2试剂：念珠菌显色平板、革兰染液、白念珠菌ATCC 90028、生理盐水。
5.3其他：洁净玻片、无菌试管。
6环境和安全控制满足二级实验室的生物安全柜内进行操作试验。
7程序性步骤7.1镜检及染色方法7.1.1直接镜检直接镜检阳性说明送检标本中有真菌存在，排除污染的可能性后结合临床症状可做出初步诊断。
7.1.2革兰染色后镜检此法适用于大多数临床标本，将临床标本或培养物固定于洁净载玻片上，进行革兰染色，酵母样真菌被染成蓝紫色。
7.2培养特征：在科玛嘉念珠菌显色平板上生长18～24小时可见菌落，菌落呈奶油色、光滑的菌落。
7.3鉴定：从科玛嘉念珠菌显色平板上挑取可疑菌落，用比浊仪配置菌液浓度相当于1麦氏单位，用美华MA120微生物鉴定仪进行细菌鉴定。
7.4药敏：参见《MA120微生物鉴定药敏仪标准操作程序》及CLSI M100-S26最新版本文件。
8质量控制程序参见《微生物组室内质量控制管理程序》。
9警示或危急值当无菌部位培养出该菌属时，需联系临床。
10实验室临床解释10.1目前临床上分离出的酵母70%～80%为白色假丝酵母菌及热带假丝酵母菌，其他在念珠菌显色培养基不能鉴定的酵母，可用微生物鉴定仪鉴定到种。
无菌部位采集的标本中分离的任何酵母都必须鉴定到种，均有诊断意义。
同一部位反复分离出同一菌种也具有重要意义。
10.2从非无菌部位（痰、咽拭、粪等）分离到的条件致病菌（如白色假丝酵母菌），如直接镜检阳性，须认定具致病性。
发酵车间操作规程
发酵车间操作规程标题：发酵车间操作规程引言概述：发酵车间是生产发酵食品的重要场所，严格的操作规程能够保证产品质量和生产效率。
本文将详细介绍发酵车间操作规程的五个部份。
一、人员操作规范1.1 人员培训：所有进入发酵车间的工作人员必须接受相关培训，了解发酵工艺流程和操作规程。
1.2 人员卫生：工作人员进入车间前必须穿戴干净的工作服和鞋套，保持个人卫生。
1.3 人员交接：工作人员交接班时必须进行详细的工作内容交接，确保信息传递准确。
二、设备操作规范2.1 设备检查：每天开工前必须对发酵设备进行检查，确保设备正常运转。
2.2 设备清洁：设备使用后必须及时清洁，避免污染产品。
2.3 设备维护：定期对设备进行维护保养，确保设备长期稳定运行。
三、原料使用规范3.1 原料检验：进货原料必须进行严格检验，确保原料质量符合要求。
3.2 原料存储：原料必须存放在干燥通风的地方，避免受潮。
3.3 原料配比：按照配方要求准确称量原料，确保产品口感和质量。
四、生产操作规范4.1 发酵过程控制：严格控制发酵温度、湿度和时间，确保产品发酵效果。
4.2 搅拌操作：搅拌过程中必须均匀、稳定，避免产生气泡。
4.3 产品出料：产品出料前必须进行检查，确保产品符合质量标准。
五、清洁消毒规范5.1 车间清洁：发酵车间必须定期清洁，保持车间整洁。
5.2 设备消毒：设备使用后必须进行消毒处理，避免交叉污染。
5.3 人员消毒：工作人员接触产品前必须进行手部消毒，确保产品卫生。
结论：严格执行发酵车间操作规程，可以有效提高产品质量，保障生产安全，是发酵食品生产的重要保障。
xxxx4-菌落、酵母、霉菌检验(混合平板培养法)标准操作规程
编制： 核准：
分别加12-15ml平板计数琼脂（约45℃左右）到平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1ml稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基。
培养
待琼脂凝固后将平皿翻转，菌落培养立即放进36±1℃的恒温培养箱培养48±2h；霉菌酵母培养立即放入26±1℃恒温培养箱内培养3天并观察培养5天。培养箱应保持一定的湿度。
目的
规范菌落、酵母、霉菌检验过程
范围
适用于菌落、霉菌、酵母等采用混合平板培养法的检验
职责
Lab tech
个人防护要求
物料/工具需求
无菌操作间、恒温培养箱（36±1℃）、振荡器、吸管（1ml、10ml）、平皿、试管、天平、平板计数琼脂。
编号
主要步骤
描述
图片显示
步骤要点
要以无菌操作取25g/ml
菌落计数
培养后，立即计数每个平板上的菌落数。25-250个菌落为合适范围。
操作者对同一平板复核自己的计数结果，其差异应在5％之内
计算和记录数字
适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释度倍数计算出每g/ml样品中平板菌落数。
记录时，在换算到每g/ml样品中平板菌落数时，定下两位有效数字。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式。
样品，放入装有225ml稀释剂的灭菌三角瓶中迅速振摇，将样品混匀，制成1：10的样品匀液
用1ml灭菌吸管准确吸取1：10的样品匀液10ml，放入装有9ml稀释剂试管中。迅速振摇，将样品混匀，制成1：100的样品匀液
平板接种
分别用灭菌吸管吸取1ml样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。
酵母菌检测流程
酵母菌检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. l hope that after you downloadthem,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified afterdownloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!酵母菌检测流程：①样本准备：根据检测对象，如培养液、食品或临床样本，采集并处理样品，确保无菌操作。
②培养增菌：将样本接种至特定培养基（如Sabouraud培养基），在适宜温度下培养，促进酵母菌生长。
③菌落观察：培养后，观察培养皿上的菌落特征，区分酵母菌与其他微生物。
④纯化分离：选取典型菌落，通过划线或稀释涂布法进一步纯化分离酵母菌。
⑤染色镜检：采用革兰氏染色或其他适宜染色方法，显微镜下观察酵母菌形态与结构。
⑥生化鉴定：进行生化试验，如糖发酵试验、酶活性检测等，以鉴定酵母菌种类。
⑦分子生物学鉴定：必要时，运用PCR扩增特定基因序列（如18S rRNA基因）及测序，进行种属鉴定。
⑧计数测定：使用血球计数板进行活菌计数，评估酵母菌浓度，适用于需定量分析的情况。
⑨结果记录与报告：详细记录检测过程与数据，撰写检测报告，包括酵母菌种类、数量及鉴定结论。
此流程概览了从样本到鉴定的一般步骤，具体操作可能依据实验室条件与检测目的有所调整。
混合型饲料添加剂活性干酵母酿酒酵母的检验操作规程
水分/% ≤
6.0
4试验方法：
4.1感官：取100g样品置于干净白色纸片上，观察其色泽、形态、有无杂质、嗅其气味。
4.2水分：取本品1g，精密称定，置于经105℃烘干至恒重的扁形称量瓶中，在105℃条件下干燥至恒重，减失重量应不得过9.0%。
4.3酵母活细胞数检测方法
4.3.1仪器
a)显微镜：放大倍数400以上；
4.3.3操作步骤
a.称取0.1g样品，精确至0.0002g，准确加入38℃～40℃无菌生理盐水20mL，振荡使其充分分散，置于32℃恒温水浴中活化1h。
b.将活化液振荡均匀，去酵母活化液0.1mL至一试管中，加入染色液0.9mL，摇匀，室温下染色10min。
c.将盖玻片置于血球计数板上计数室上，使之紧紧盖在血球计数板上。去0.2mL染色后的菌液（b）于血球计数板和盖玻片结合处，让菌液自动吸入计数室。菌液中不得有气泡，静置1min后，用显微镜观察计数。
d.用10×接目镜找出方格后，换用40×接物镜，调整微调至视野最清晰，开始计数，当细胞处于方格线上时，计数原则为；数上不数下，数左不数右。计出芽时，超过母细胞的二分之一者按细胞计，小于二分之一者忽略不计。染为蓝色的为死细胞，无色的为活细胞，只计活细胞数。
4.3.4结果计算
每克样品中活细胞数按下式计算：
混合型饲料添加剂活性干酵母（酿酒酵母）
Saccharomyces cerevisiae
1质量标准来源：GB/T 22547-2008
2名称：酿酒酵母
3技术要求：
3.1感官：淡黄色至淡棕黄色的颗粒状或条状，具有酵母特殊气味，无腐败，无异臭味。
3.2理化要求：
表1理化要求
项目
要求
酵母活细Байду номын сангаас数/（亿个/g）≥
酵母菌操作规程
2.2稀释剂和试剂
PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水使溶解成1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
2.2.2无菌磷酸盐缓冲液（PH7.2）取磷酸氢二钠25.8g与磷酸二氢钠4.4g，加水稀释至1000ml，121℃灭菌20分钟。
4.3.2离心沉淀集菌法取规定量的供试液，3000r/min，离心20min，弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量。如供试液中有不溶颗粒、沉淀，先以500r/min，离心5min，留离心沉淀物，取全部上清液按上述高速再离心，留底部集菌液约2min，加稀释剂至原规定量。
4.3.3薄膜过滤法
4.2.2固体、半固体或黏稠液供试品取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪（3000～5000r/min、2～4min）或其他有效的方法，混匀，作为供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.3非水溶性供试品
4.2.3.1软膏、乳膏剂先将已备妥灭菌的含司盘80 5g、单硬脂酸甘油脂3g、聚山梨脂80 10g的混合物融化，待冷至45℃时，加入供试品5g（或5ml），立即用玻棒搅拌均匀，分次少量慢慢加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液80ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1﹕20供试液。
规程：
1.仪器、设备和用具
1.1净化工作台
1.2恒温培养箱（30～35℃）
1.3微波炉（或其他适宜加热装置）
1.4电冰箱
1.5药物天平
1.6菌落计数器
1.7恒温水浴锅（45±1℃）
1.8放大镜、显微镜（1500×）
发酵车间操作规程 (2)
发酵车间操作规程标题：发酵车间操作规程引言概述：发酵车间是食品加工行业中一个重要的环节，操作规程的严谨性直接影响产品的质量和安全。
本文将从发酵车间操作规程的角度，详细介绍相关内容。
一、操作人员要求1.1 操作人员需接受专业培训，了解发酵车间的工作流程和操作规程。
1.2 操作人员需佩戴相关防护用具，如手套、口罩和工作服，以确保操作安全。
1.3 操作人员需具备基本的食品安全知识，严格遵守卫生规定，保持工作环境清洁。
二、设备操作规程2.1 发酵罐操作：操作人员需按照操作手册的要求，正确操作发酵罐的控制面板，调节温度、湿度和氧气浓度。
2.2 搅拌设备操作：定期检查搅拌设备的运行状态，保持设备清洁，避免发酵物料不均匀。
2.3 清洁消毒：发酵罐和设备在使用前后需进行严格的清洁消毒，防止交叉污染。
三、原料处理规程3.1 原料采购：选择优质原料，保证产品的质量和口感。
3.2 原料配比：按照配方要求进行原料配比，确保发酵过程中微生物的生长。
3.3 原料加工：对原料进行必要的加工处理，如研磨、破碎或蒸煮，以提高发酵效果。
四、发酵过程控制规程4.1 温度控制：根据产品要求设定合适的发酵温度，保持恒定。
4.2 时间控制：严格控制发酵时间，避免过度或不足发酵。
4.3 检测监控：定期对发酵过程进行检测，监控微生物的生长情况，确保产品质量。
五、成品存储规程5.1 包装封装：对发酵完成的产品进行包装封装，防止外界污染。
5.2 温湿度控制：存储环境需保持适宜的温度和湿度，避免产品受潮或变质。
5.3 货物运输：在运输过程中注意轻放，避免挤压或震动，确保产品的完整性。
结论：发酵车间操作规程的严格执行对产品的质量和安全至关重要。
只有严格按照规程操作，才能生产出优质的发酵产品，保障消费者的健康和安全。
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目录一、原辅材料的分析(一)糖蜜及糖质原料分析1、锤度2、灰分3、总糖4、还原糖5、色度7、胶体物质（二）化工原料分析1、硫酸铵2、尿素3、磷酸氢二铵4、硫酸5、纯碱（三）土豆淀粉的分析1、水分的测定2、灰分的测定3、蛋白质的测定4、斑点的测定5、细度的测定（四）乳化剂的分析1、酸值的测定2、皂化值的测定3、羟值的测定二、生产过程中的分析（一）纯种培养种子分析1、糖度2、酸值与PH3、残余还原糖4、酵母湿重5、酵母成熟标准的确定（二）流加糖分析1、非发酵性还原物质和可发酵性糖的测定2、可发酵性氮（三）发酵液分析三、酵母成品分析1、水分分析2、灰分分析3、酸度分析4、蛋白质分析5、五氧化二磷分析6、海藻糖分析7、发酵力（高糖、低糖、无糖）分析8、粗脂肪分析四、酵母生产废水的测定1、总固形物2、酸度的测定3、化学需氧量一、原辅材料的分析（一）糖蜜及糖质原料分析一、锤度1．仪器：比重计、糖度计2．操作步骤：将200g糖蜜与等重量的蒸馏水均匀混合，调节温度至20℃，补加蒸馏水至总重正好为糖蜜重量的2倍，测定温度。
将测定值（Bg或°Bx）乘以因子2即得未稀释糖蜜的密度。
糖蜜检测中视检测糖蜜的浓度，若浓度高，则还可稀释，如100g糖蜜加水至400g，这样测量值应乘以4。
由于密度和温度相关，所以表示密度应在标准温度下，即在20℃情况下，高于或低于此温度，均要加一个修正值。
二、灰分1．仪器：分析天平（0.1mg）、坩埚（30mL）、马弗炉（800℃）、本生灯、干燥器等2．试剂：浓硫酸（AR）3．操作步骤：（1）先把干净的坩埚放在800℃高弗炉中保温15min，取出冷至 200℃左右后放在干燥器中冷却至室温。
（2）对冷却的坩埚称重，精确至0.1mg，然后称取3.0g的糖蜜。
（3）在糖蜜中加入0.5mL浓硫酸，水平振荡仪上振荡混合，使硫酸和糖蜜充分混合。
（4）用本生灯把糖蜜烧成灰烬，注意调节本生灯火焰温度，防止杯中糖蜜起泡。
（5）待杯中糖蜜灰化后，把坩埚放到约550℃的高弗炉中，直到前面形成的炭黑完全氧化，不留痕迹。
（6）从高弗炉中取出坩埚，放在空气中冷却，加入3滴浓硫酸，再把它放到800℃的高弗炉中。
（7）在800℃保温30 min后，把坩埚从高弗炉中取出，放在干燥器中冷却，称重，然后再放回高弗炉中800℃保持15min，取出放在干燥器中冷却称重，直至坩埚恒重。
大多数情况下，30 min的保温能使样品重量在0.5mg范围内波动。
（8）从灰分的重量数据即可计算出原糖蜜中灰分的重量百分比，这种灰分一般被认为是硫酸盐。
三、总糖1．原理首先将试样进行处理，使用中型醋酸铅和脱铅剂将试样中的可还原性的非糖分及钙盐等杂质清除干净，然后用盐酸使双糖转化为还原性单糖，单糖在一定碱度的斐林溶液中使二价铜还原为一价铜，从而求出糖蜜中的总糖。
2．仪器：分析天平（0.1mg）、容量瓶（100mL）、吸管（5mL）、漏斗、移液管（50mL、5mL）、温度计、三角瓶（150mL）、滴定管（50mL）、电炉3．试剂：（1）中性醋酸铅溶液：称取中性醋酸铅250g，加蒸馏水500mL搅拌使溶解，静置，倾去上清液，沉淀过滤，将清液及过滤液混合后，逐滴加入醋酸，使呈中性或微酸性，用石蕊试纸为指示剂（2）脱铅剂：称取十二水磷酸氢二钠70 g和草酸钾（K2C2O4.H2O）30g,用少量蒸馏水分别溶解，并不断搅拌，溶解后，将两种溶液混合，用蒸馏水稀释至1000mL，混匀（3）盐酸（AR，4mol/L溶液）：量取盐酸340mL慢慢注入约600mL的蒸馏水中，混匀，然后定容至1000mL（4）酚酞指示剂（1g/L）：称取酚酞0.10 g，溶于95%乙醇，并用乙醇稀释至100mL，混匀（5）氢氧化钠（AR，4mol/L溶液）：称取150g NaOH，溶于150mL蒸馏水中，混匀，装入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮，用塑料管吸上清液208mL，注入1000mL无CO2的水中，摇匀（6）次甲基蓝指示剂（10g/L）：称取次甲基蓝1g，加水100mL，加热使溶解，贮存于棕色瓶中（7）斐林溶液：①斐林氏甲液：称取硫酸铜（CuSO4.5H2O）69.2g，加水溶解并稀释至1000mL，混匀过滤②斐林氏乙液：称取酒石酸钾钠346g，NaOH100g，加适量水溶解，稀释至1000mL，放置2日，如液面降低，补加水至刻度，然后过滤（8）标准转化糖溶液（1g/100mL）：精确称取纯蔗糖9.5000g，用少量水溶解，并转移至1000mL容量瓶中，加浓盐酸5mL，轻轻摇匀，在20℃时放置2～3d，低于20℃放置8d，然后加水至约800mL，加入2g已用水溶解的苯甲酸，再稀释至刻度，摇匀（9）标准转化糖溶液（0.20g/100mL）：用50mL移液管准确吸取标准糖转化溶液（1g/100mL）50.00mL于250mL容量瓶中，用NaOH溶液中和至中性，再加水至刻度，摇匀（10）斐林溶液的标定：用5mL移液管分别吸取斐林氏甲、乙液各5.00mL 于250mL三角瓶中，摇匀，由滴定管加入0.2g/100mL的标准转化糖24mL，轻轻摇匀，于电炉加热至溶液沸腾，再准确煮沸2min，加入次甲基蓝指示剂2滴，在糖液保持沸腾的情况下小心从滴定管继续加转化糖，至次甲基蓝的蓝色刚消失为止，即为终点。
整个滴定过程溶液必须保持沸腾，且滴定终点应在加入次甲基蓝后1min内达到斐林氏溶液浓度系数按下式计算：K= V25.00式中：K——斐林氏溶液浓度系数V——标准转化糖溶液（0.2g/100mL）的用量，mL4．操作步骤：（1）试液的准备：用分析天平称取糖蜜试样2.0g（称准至0.0001 g），用蒸馏水溶解于100mL容量瓶中，加入中性醋酸铅溶液2.0mL～2.5mL，加水至刻度，摇匀后放置1～2min，摇匀，过滤，弃去少量初滤液，继续收集滤液，用50mL 移液管吸取滤液50mL放入100mL容量瓶中，加入脱铅剂5mL后，再加水至刻度，摇匀，过滤，弃去少许初滤液，继续收集滤液，用50mL移液管吸取此滤液50mL 放入100mL容量瓶内。
（2）试液的转化及中和：在上述容量瓶中加入盐酸(4mo1/L)10mL，用少许蒸馏水清洗其颈部的盐酸，插入0～100℃温度计，摇匀后在水浴中加热，待瓶内温度达到68℃时起计算转化时间，控制在66～68℃之间转化10min，转化期间应间断摇动。
转化完毕后，用流动冷水冷却至室温，取出温度计，温度计所附着的糖液用少量蒸馏水洗入容量瓶内，加入酚酞指示剂（1g/L）2滴，用NaOH(4mo1/L)中和至微红，再冷却至室温，加水至100mL，摇匀备用。
（3）试液的滴定：用试液将移液管内壁冲洗两次，然后加入试液备用。
用5mL移液管准确吸取斐林氏甲、乙液各5.00mL于250mL的三角瓶中，然后加入蒸馏水约25mL（加水量应使滴定完毕后的总容量为60mL，如预滴定试液为25mL，斐林氏混合液为10mL，则加水量为25mL ，如预滴定试液为20mL，则加水量为30mL），用滴定管加入相当还原物质50mg左右的检液（可用上次分析结果来预测）。
在电炉上加热至沸腾并准确保持沸腾2min，然后立即加入次甲基蓝指示液（10g/L）2滴，（此时应呈蓝色，若为红色，即为滴入试液过多，应重新滴定），在沸腾状态下，从滴定管徐徐滴入试液，使沸腾的试液由蓝色变为紫色，再变为红色，即为终点。
此项滴定操作在1min内完成，使整个煮沸时间控制在3min内，记下滴定耗用试液的毫升数。
此项滴定操作应重复两次，第一次预滴定是试液的大约数，第二次为滴定试液滴定数，第二次于煮沸前加入三角瓶的试液数量比第一次预滴定量少0.5～1.0mL作为终点滴定之用。
5．结果计算：试样中总糖的含量按下式计算：X=0.05×F×1001V×G/400——糖蜜中总糖的百分含量，%式中：X10.05——10mL斐林氏混合液相当的总糖的质量，gF——斐林氏混合液的浓度系数V——滴定耗用试液的量，mLG——试样质量，gG/400——（G/100）·（50/100）·（50/100）6．注意事项：中性醋酸铅用量应以沉淀完全、获得清晰透明的溶液为准。
过多、过少均影响分析结果的准确性，一般情况每克糖蜜用量1mL左右即可。
过剩的铅和钙均影响分析结果偏低，所以必须完全除净铅和钙。
操作时在加入脱铅剂以后，静置3～4min，然后于上清液中再添加1～2滴脱铅剂，若发生浑浊即脱铅剂用量不足，若不发生浑浊即表示脱铅剂用量合适。
转化时，要注意掌握转化时酸的浓度和用量、温度和时间，过高过低均影响分析结果。
如温度超过69℃，果糖就要破坏。
反应时温度需要一致，电炉温度恒定后才能进行加热，并控制在2min内沸腾，否则煮沸时间就会改变，引起蒸发量的改变，使反应液浓度发生变化，从而引入误差。
次甲基蓝易被还原为无色，但与空气接触又氧化成蓝色，所以在滴定过程中，应保持沸腾状态，使瓶内不断逸出水蒸气，以防止空气进入瓶内氧化次甲基蓝而影响终点的判断。
次甲基蓝是氧化—还原反应的指示剂，本身能参加反应，即一定量的还原糖能还原一定量的次甲基蓝溶液，所以过早加入与加量过多也会引入滴定误差。
斐林试剂吸量要准确，特别是甲液，因起反应的是二价铜，吸量不准就会引入较大误差。
滴定产物中氧化亚铜极不稳定，易被空气氧化而增加耗糖量，故滴定时不能随意摇动三角瓶，更不能从电炉上取下后再进行滴定。
滴定速度需一致，一般以4～5s一滴的速度进行。
滴定速度过快，消耗糖量增加，反之消耗糖量减少。
试样水解后应立即冷却，并用碱中和，因在强酸性或强碱性溶液中会有部分糖被分解。
四、还原糖1．原理样品经除蛋白质后，在加热条件下,直接滴定已标定过的斐林氏液，斐林氏液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2．试剂：（1）斐林氏甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）,及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1L。
（2）斐林氏乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g NaOH，溶于水中，再加入4g 亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内（3）乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL（4）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100mL （5）盐酸（6）葡萄糖标准溶液：精密称取1.000g经过98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1L。
此溶液相当于1mg/mL葡萄糖3．操作步骤：（1）样品处理：称取2.0g（称准至0.0002g）样品，置于250mL容量瓶中，加入50mL蒸馏水，溶解后边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL 10.6%亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。