酒精性肝纤维化中Smad4的表达情况研究(一)
抗肝纤维化综述
抗肝纤维化研究进展摘要：肝纤维化（Hepatic Fibrosis）是细胞外基质(ECM)过度沉积，降解相对不足的结果。
肝纤维化是多数慢性肝病所共有的病理特征，并最终可能转变为肝癌。
而目前临床上尚无理想的治疗药物，因此防治形势依然很严峻。
本文就肝纤维化发生的机制以及α-干扰素、TGF-β1/Smads信号转导、基质金属蛋酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)与肝纤维化之间的联系进行综述。
关键词：肝纤维化；α-干扰素；TGF-β1/Smads信号转导；基质金属蛋白酶肝纤维化（Hepatic Fibrosis）的形成是一个缓慢的动态过程，涉及到包括细胞—细胞因子—细胞外基质等构成的复杂网络结构，最终导致细胞外基质（ECM）过度沉积，降解相对不足[1]。
肝纤维化是慢性肝病的病理特征，也是肝硬化形成的病理基础。
随着肝组织的持续损伤，可能最终进展为肝癌[2]。
为了阻止和逆转肝纤维化和肝硬化的进展，临床上需采取有效的治疗措施进行抗纤维化治疗，而近年来的研究也表明肝纤维化患者经过有效的治疗是可以逆转的，但目前对于患者有效抗肝纤维化的药物相对较少，如何寻找和开发新的有效抗肝纤维化药物成为人们关注的热点和难点[3]。
1.肝纤维化形成的机制肝纤维化从形态学上讲是肝结缔组织（基质—蛋白多糖和非胶原糖蛋白）异常增生，肝窦毛细血管化（基底增厚和窗孔消失）；从生化考虑则为细胞外间质合成分泌增加，降解减少，肝内沉积增加，肝纤维化逐渐形成即瘢痕形成；从细胞考虑是产生ECM 的主要细胞—肝星状细胞（HSC，Hepatic Stellate Cell）被激活增殖合成分泌大量 ECM，而降解减少。
免疫学认为肝纤维化是CD8介导的疾病，活化的HSC可抑制 T细胞的活化，活化的 NK 细胞可杀伤活化的 HSC ，但B细胞促进 HSC 的活化[4]。
在肝纤维化发生时，一般可检测到 5 种主要的胶原蛋白，其中以Ⅰ、Ⅲ型为主，早期以Ⅲ型为主，后期以Ⅰ型为主[5,6 ],新形成的Ⅰ、Ⅲ型胶原形成纤维束，并沿这些细胞呈树枝状分布，形成新的纤维间隔[8]。
肝纤检查报告怎么看
肝纤检查报告怎么看肝纤检查是一种检查肝脏纤维化程度的方法，能够帮助医生了解肝脏疾病的严重程度以及预测病情的发展趋势。
肝纤检查报告是医生依据检查结果所制作的报告，它包含了许多专业性很强的指标和术语，对于很多患者来说，可能会有些难以理解。
那么肝纤检查报告具体应该怎么看呢？本文将从检查指标、正常值范围和异常情况三个方面进行解析。
一、检查指标肝纤检查常见的指标有：FibroScan、ElastPQ、Fibrosis-4指数（FIB-4指数）和AAR（AST/ALT比值）等。
这些指标都是反映肝脏纤维化程度的，那么它们各自有何特点呢？1. FibroScanFibroScan是目前较为常用的检查方法之一，它通过使用特定的超声探头，对肝脏进行超声测量，直接测量肝脏纤维化程度。
FibroScan的结果用kPa作为单位，一般范围在0～25kPa之间，数值越大，说明肝脏纤维化程度越高。
2. ElastPQElastPQ是一种比FibroScan更新的检查方法，它采用了多点弹性成像技术，能够更全面地反映肝脏的纤维化程度。
ElastPQ结果也是用kPa作为单位，数值越大，说明肝脏的纤维化程度越重。
3. Fibrosis-4指数（FIB-4指数）FIB-4指数是一种简便的检测肝脏纤维化程度的指标，它可以简单地通过抽血检测后计算而得。
FIB-4指数的正常范围是0.5～1.3，如果FIB-4指数越高，说明肝脏的纤维化程度越重。
4. AAR（AST/ALT比值）AST和ALT是常见的肝功能检查指标，虽然它们不能直接反映肝脏的纤维化程度，但是它们的比值（AAR）能够辅助肝纤维化的诊断。
一般来说，AAR的正常范围在0.7～1.5之间，如果AAR越高，说明肝脏的纤维化程度越重。
二、正常值范围肝纤检查报告中，不同指标的正常值范围是不同的。
在正常情况下，FibroScan和ElastPQ的结果一般都应该在0～7kPa之间；FIB-4指数的正常范围在0.5～1.3之间，AAR的正常范围在0.7～1.5之间。
酒精性肝病病例报告(1)
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既往史及个人史
患者否认肝炎、结 核病史，无 手 术 、 外伤、输血史。
个人史：偶尔吸烟史， 饮酒史20年，每日约 40 ° 白 酒 半 斤 ， 折 合 酒精量160g/L。
否认“高血压”、 “糖尿病”、“冠 心病”病史。 否 认 食物药物过敏史。
入院查体
神志清楚，精神差，皮肤、巩膜黄染，双肺呼吸 音粗，未闻及干湿性啰音。心律齐，心音有力， 未闻及病理性杂音。腹软，上腹部有压痛，无反 跳痛，肝脾肋下未触及。移动性浊音阴性，肠鸣 音4次/分。四肢肌力肌张力正常，双下肢无水肿。 双手细微震颤。神经系统病理征未引出。
肝衰竭诊断标准目前仍不统一，不同地区和组织对 于肝衰竭的认识存在差异。肝衰竭早诊断可以改善 患者的预后，且肝衰竭前存在“黄金窗口期”，该 窗口期对于预后非常重要。病因及诱因、炎症和免 疫反应相关指标、氧化应激相关指标、肝细胞再生 相关指标、风险预测模型等方面的研究可能对肝衰 竭前期的发生进行预警。作为一名临床医师，应该 及早发现、早诊断肝衰竭，给予对症治疗，避免肝 衰竭持续加重，减轻患者病痛，减少医疗支出。
02
体质量减轻;
03ห้องสมุดไป่ตู้
黄疸;
04
神经精神症 状;
05
肝掌、蜘蛛 痣。
诊断
一．有长期饮酒史，一般超过5 年，折合乙醇量男性≥40g/d，女性≥20g/d；或 2 周 内有大量饮酒史，折合乙醇量>80g/d。（乙醇量（g）= 饮酒量（ml）×乙醇含 量（%）×0.8）
二．血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、γ- 谷氨酰转移酶 （GGT）、总胆红素（TBil）、凝血酶原时间（PT）、平均红细胞容积（MCV） 和缺糖转铁蛋白（CDT）等指标升高。其中AST/ALT>2、GGT 升高、MCV 升高 为酒精性肝病的特点，禁酒后通常4 周内基本恢复正常（但GGT恢复较慢）。
NOX4相关信号通路在肝纤维化发病机制中的作用
NOX4相关信号通路在肝纤维化发病机制中的作用罗方云【摘要】还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)是一种多蛋白质亚基组成的复合体,是活性氧簇(ROS)生成的主要酶类.现已证实NOXs介导的氧化应激与肝纤维化的发生发展密切相关,而其亚基NOX4则起了关键作用,其生成的ROS不仅能直接对引起肝纤维化的主要细胞-肝星状细胞(HSCs)具有显著的活化效应,还可通过介导包括HSCs在内的多种细胞内的信号传导通路参与HSCs的持续激活、细胞外基质的异常增殖、肝细胞的凋亡及肌成纤维细胞的迁移等过程,最终诱导肝纤维化的发生与发展.文章就NOX4相关信号通路在肝纤维化发病机制中的作用进行综述.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2019(032)003【总页数】5页(P298-302)【关键词】肝纤维化;还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4;活性氧簇;信号通路【作者】罗方云【作者单位】330006南昌,南昌大学第一附属医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R5750 引言肝纤维化是肝对各种慢性损伤发生修复反应的动态过程，其主要以细胞外基质（extracellular ma⁃trix，ECM）过度沉积为特点，肌成纤维细胞（myofi⁃broblasts，MFB）的迁移是ECM的主要来源，且活化的肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSCs）在形态和功能发生一系列改变后将转化为MFB，故HSCs的活化是肝纤维化的中心环节［1-2］。
大量研究证实还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nico⁃tinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）氧化酶（NADPH oxidase，NOX）介导的氧化应激与肝纤维化的发生发展密切相关，而其亚基NOX4产生的活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）及其介导的相关信号通路引起HSCs的持续激活、ECM的形成、肝细胞的凋亡及MFB的迁移等促进肝纤维化的形成起了关键作用［3］。
Smad4蛋白在胃癌中的表达及意义
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Ｓ ｍ ￣ １ ４ 蛋 白在 胃癌 中的表达及意义
刘海旺 ， 李春辉△， 程 玉
（ 承德医学院附属医院病理科， 河北承德 ０ ６ ７ ０ ０ ０ ） 【 摘要】 目的： 观察胃￣Ｓ ｍ ａ ｄ ４ 蛋白的表达情况及与胃癌临床病理特征的关系。 方法： 应用免疫组织化学染色
活性 ， 因此， 本研究就北苍术 中水溶 性多糖 的提取方法及 含量 测定方法进行了研究。 通 过实验 ， 得 到北苍术最佳提 取工艺 为料液 比为 １ ： ３ ０ ， 提取温度９ ０ Ｅ， 提取时 间为每次
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【 ２ 】 欧 阳臻 ， 江涛 涛 ， 缪亚 东 ， 等． 苍术 的化学 成分 、 道地性 和
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药理活性研究进展【 Ｊ 】 ． 时珍国医国药， ２ ０ ０ ６ ， ４ （ １ ０ ） ： １ ９ ３ ６ －
Ｓ Ｐ法检 测２ ５ 例 正常 胃黏膜 、 ６ ０例 胃癌组织Ｓ ｍａ ｄ ４蛋 白的表 达情况 。 结果 ： 胃癌组 织Ｓ ｍａ ． ０ ０ ％ ） 明显低于正常胃黏膜（ ９ ２ ． ０ ０ ％ ， 尸＜０ ． ０ ５ ） 。 胃癌组织Ｓ ｍ ａ ｄ ４ 蛋白的表达与胃癌分化程度、 淋 巴结转 移和 压 分期有关（ 尸＜０ ． ０ １ ， Ｐ＜０ ． ０ ５ ） 。 结论： 胃癌组织Ｓ ｍ ａ ｄ ４ 蛋白表达降低可能是胃癌发生发展的重要因
丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1及Smad4表达的影响
丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1及Smad4表达的影响朱祖成【摘要】目的:研究丹皮酚对氧应激致人源肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC) LX2增殖及TGF-β1、Smad4和Collagen I mRNA表达的影响.方法:在建立体外过氧化氢(H2O2)致HSC-LX2细胞氧应激模型基础上,用MTT法检测丹皮酚对HSC-LX2细胞增殖的影响,生化检测HSC-LX2细胞内MDA及SOD,荧光定量PCR 检测丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1、Smad4和Collagen I mRNA表达的影响.结果:丹皮酚呈剂量依赖性抑制H2O2诱导HSC-LX2增殖,抑制细胞MDA含量及增加SOD活性,以50μmol/L浓度时最为明显,与DMSO组比较差异有显著性( P＜0.01);丹皮酚各剂量组作用24 h 后,HSC-LX2细胞中TGF-β1、Smad4和Collagen I mRNA 的水平降低,与DMSO组比较(P＜0.01),且作用呈剂量依赖性.结论:丹皮酚预处理肝星状细胞可下调TGF-β1、Smad4mRNA的表达,进而抑制肝星状细胞Collagen I的合成,发挥抗肝纤维化作用.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2013(022)005【总页数】3页(P22-24)【关键词】丹皮酚;过氧化氢;人肝星状细胞;肝纤维化【作者】朱祖成【作者单位】湖北民族学院医学院,湖北,恩施,445000【正文语种】中文【中图分类】R289丹皮酚（Paeonol）又称牡丹酚，分离自中药牡丹、芍药的干燥根皮和徐长卿的根或全草，具有较广药理作用，且具有抗过敏与抗炎、抗心肌缺血再灌注损伤、抗神经系统的氧化应激损伤、抗肿瘤作用等作用［1，2］。
近年研究表明丹皮酚显著抑制乙醇灌胃大鼠的酒精性肝损害，降低血清转氨酶水平、减少肝细胞脂肪变性和炎性细胞的浸润及肝细胞的凋亡，有较好的护肝作用［3］。
这为研究 ybx1 转录调控肝纤维化的机制提供了新的研究方向。
这为研究ybx1 转录调控肝纤维化的机制提供了新的研究方向。
YBX1（Y-box binding protein 1）是一种转录调控因子，广泛存在于人体各种细胞中。
它在多个生物学过程中发挥重要作用，包括转录调控、RNA稳定性、传递RNA到细胞质、翻译调控和DNA修复等。
最近的研究发现，YBX1在肝纤维化的发生和发展中可能起到重要的调控作用，为研究肝纤维化的机制提供了新的研究方向。
肝纤维化是一种由多种肝脏损伤因素引起的病理过程，其特点是肝细胞受损后组织胶原沉积增加，最终导致肝组织纤维化和功能不全。
目前已知，肝纤维化的发生涉及多种信号通路和分子机制，如TGF-β（转化生长因子-β）信号通路、CTGF（结缔组织生长因子）等。
最近的研究表明，YBX1在这些信号通路中起到重要的调控作用。
研究发现，YBX1可通过与TGF-β信号通路相互作用来调控纤维化相关基因的表达。
TGF-β是肝纤维化过程中的一个关键因子，它通过调控细胞外基质合成和降解来参与肝纤维化的发生和发展。
研究结果显示，YBX1与TGF-β信号通路中的SMAD蛋白相互作用，并调控TGF-β信号通路下游基因的表达。
YBX1的过表达增加了肝星状细胞中COL1A1（胶原α1链）和α-SMA（平滑肌肌动蛋白）等纤维化相关基因的表达，从而促进了肝纤维化的发生。
此外，YBX1还可以通过调控转录因子的表达来参与肝纤维化的发生。
研究发现，YBX1过表达可以上调CTGF的表达，并通过CTGF调控了COL1A1的表达。
CTGF是TGF-β信号通路下游的一个重要调节因子，其参与了细胞外基质的合成和降解。
YBX1通过调控CTGF的表达，进而影响细胞外基质的合成和纤维化相关基因的表达。
除了在信号通路中的作用外，YBX1还参与了肝纤维化中细胞外基质合成和稳定性的调控。
研究结果显示，YBX1过表达可以促进肝星状细胞中COL1A1 mRNA的稳定性，从而增加胶原沉积。
此外，YBX1还可通过调控转录因子SNAI1的表达来影响基质合成和肝纤维化。
PNPLA3 I148M变异通过影响脂质代谢增加肝病及全因死亡率
0'$)2(2/2=#>,%,?@"8,;*!"!#"1,%*!$"8,*## 前沿 探索与争鸣A 8A &.%E #*)3变异通过影响脂质代谢增加肝病及全因死亡率文夏杰 顾智强 鲁凤民作者单位!#""#&# 北京大学医学部基础医学院病原生物学系暨感染病中心#文夏杰"顾智强"鲁凤民$'北京大学人民医院肝病研究所#鲁凤民$通信作者!鲁凤民"!"#$%!%H *F 2)"$)!'(+*=R H *2:H *+) 摘要 非酒精性脂肪性肝病#8.S &4$是一种受到遗传&行为习惯等多因素影响&多通路参与的复杂的全身性代谢疾病%脂质异位沉积及胰岛素抵抗是公认的8.S &4两大病因"但具体发病机制仍不明确%在个体遗传易感性方面"有众多文献支持=#>#>$)样磷酯酶结构域蛋白%#A 8A &.%$基因的B ('%)*"&位点C +0单碱基多态性#-8A $多态性与8.S &4的发病相关%近期研究结果显示"B ('%)*"&对应的A 8A &.%6#*)3变异与肝病相关死亡风险及全因死亡风险具有相关性%本文就A 8A &.%在8.S &4的发生&发展中的作用及机制作一综述"旨在为8.S &4的防控提供思路%关键词 非酒精性脂肪性肝病'=#>#>$)样磷酯酶结构域蛋白%'脂质代谢 非酒精性脂肪性肝病#8.S &4$又称代谢性脂肪性肝病#3.S &4$"是一种以肝脏甘油三酯异常堆积为主要特点的疾病%随着经济发展及人们生活方式的改变"8.S &4的发病率逐年升高%!""'2!"#$年"我国8.S &4的年发病率从**!5上升至(*!5"到!"%"年"我国预计患病人口将达%*#*亿(#)%8.S &4已日渐成为影响我国人民健康的重大卫生问题"控制8.S &4的发生&防止或延缓其进展为肝硬化及肝癌是目前亟需解决的科学问题%目前"脂质异位沉积及胰岛素抵抗是公认的8.S &4两大病因"但具体发病机制仍不明确%在个体遗传易感性方面"有众多文献支持=#>#>$)样磷酯酶结构域蛋白%#A 8A &.%$基因的B ('%)*"&位点C +0单碱基多态性#-8A $多态性与8.S &4的发病相关%近期"美国的一项基于国民健康与营养调查#7*-*8#>$,)#%/2#%>'#):8H >B $>$,)!M #"$)#>$,)-H B ;2@$的结果分析再次显示"B ('%)*"&对应的A 8A &.%6#*)3变异与肝病相关死亡风险及全因死亡风险具有相关性"可使肝脏相关死亡风险升高#)倍之多(!6%)%本文阐述了A 8A &.%在8.S &4的发生及发展中的作用及机制"以期有关A 8A &.%多态性临床及机制的深入研究能够为8.S &4的防控及疾病进展的控制提供思路%一&A 8A &.%基因概述人类的A 8A &.%基因位于染色体的!!U #%*%#"属于A 8A &.家族成员%该家族基因编码蛋白在8端含有高度保守的=#>#>$)结构域C %@6X 6-2B 6X 6C %@"使其具有非特异酰基水解酶活性"促进甘油三酯水解%人A 8A &.%主要在肝细胞表达"其次是皮肤和脂肪组织%在亚细胞水平"主要定位于细胞膜及胞内脂滴%A 8A &.%具有调节胞内脂质的作用"在正常情况下A 8A &.%主要发挥脂肪水解酶的功能"在脂质合成受到抑制时如敲除甘油三酯脂肪酶后"A 8A &.%能利用三油酸甘油酯合成甘油三酯%虽然A 8A &.%也具有部分酰基转移酶活性"但甘油三酯水解酶活性是其主要功能(*)%二&A 8A &.%E #*)3变异与8.S &4的相关性!"")年"D ,"2,等(()通过全基因组关联分析#C N .-$发现A 8A &.%基因-8A 位点B ('%)*"&的0+C 变异#对应的A 8A &.%蛋白第#*)位氨基酸分别为#*)E &#*)3$与肝脏脂肪沉积相关"33基因型人群肝脏脂肪水平是其他人群的!倍"在调整体质指数#<3E $&糖尿病&饮酒因素等干扰因子后该差异仍然存在%另外一项纳入!#项研究共#*!$$例研究对象的荟萃分析结果也显示"33型人群患8.S &4的风险是E E 型的**"#倍#!*&%"(**&$"进一步的亚组分析显示"在亚洲人群中33型及3E 型是E E 型8.S &4发病风险的!**%及#*%%倍($)%随着疾病进展"8.S &4患者可进一步发展为非酒精性脂肪性肝炎#8.-/$&肝硬化甚至肝癌%有研究显示"A 8A &.%基因对应#*)位氨基酸为#*)3者发生8.-/&肝纤维化和肝细胞癌的风险分别是#*)E 者的%**倍&%*!倍和#"倍"这些结果肯定了A 8A &.%E #*)3变异与8.S &4&8.-/及肝硬化的发生密切相关(')%我国曾是/<1感染高流行区%随着国民生活水平的提高"慢性/<1感染者中合并8.S &4的患者越来越多%一项纳入*项研究共##%(例/<1感染者的荟萃分析显示"在/<1感染者中B ('%)*"&多态性也与脂肪肝发生相关"与野生E E 型相比"33及3E 基因型脂肪变性发生的风险比为#*)*##**%"!*%$$())%可见即使是在/<1感染者中"A 8A &.%基因多态性与8.S &4的相关性仍然存在%三&A 8A &.%与8.S &4发病相关的机制研究#一$A 8A &.%6#*)3变异降低了A 8A &.%的水解酶活性 结构预测显示"相较于野生型"含#*)3变异的A 8A &.%蛋白催化双反应中心#-2B 6*'和.(=6#$$$的空间取向未受到影响"但甲硫氨酸较长的侧链可能会堵塞底物到反应中心的通*)"!#*. All Rights Reserved.肝脏!"!#年##月第!$卷第##期道"从而降低A8A&.%对甘油三脂的水解活性%因此在过量游离脂肪酸存在的情况下"过表达A8A&.%6#*)3变异蛋白能减缓细胞内甘油三酯的水解速率"促进甘油三酯在肝内沉积"导致脂肪肝的发生%A8A&.%6#*)3变异蛋白还增强了对磷脂的转酰酶活性"从而促进胆固醇生成"以上两种效应使得A8A&.%6#*)3变异蛋白具有促进脂质沉积的作用(*)% #二$A8A&.%6#*)3变异蛋白泛素化降解减少至其在脂滴表面堆积 研究显示"敲入A8A&.%E#*)3序列变异能使小鼠的肝脏脂肪含量明显增加"同时肝细胞内脂滴上的A8A&.%蛋白明显堆积"这是由于A8A&.%第#*)位氨基酸变异为甲硫氨酸后A8A&.%泛素化降解途径被抑制"使得稳定的变异蛋白在脂滴上积累"这种过度积累导致脂滴中甘油三酯的动员受损"促进了脂肪堆积(*)%进一步的研究发现"在/H/6'肝癌细胞系中过表达脂肪甘油三酯脂肪酶#.I C&$能耗竭胞内脂滴"但与.I C&共同过表达A8A&.%6#*)3蛋白"能抑制.I C&脂肪降解%该结果进一步提示A8A&.%6#*)3能在脂滴中聚集"进而影响脂质代谢酶的活性"从而促进脂肪堆积(&)%#三$A8A&.%6#*)3变异影响载脂蛋白<的分泌 0#B%, A$B#P P$等(#")研究显示"在肝脏脂肪同等数量的情况下"与#*)E 纯合子基因型人群相比"#*)3携带者中富含甘油三酯的极低密度脂蛋白分泌量相对较低%而在#*)3变异蛋白过表达的3+.6D/''''细胞系"载脂蛋白<#.=,<$分泌量和脂肪酸流出量均较低%证明A8A&.%可影响.=,<的分泌"而#*)3是一个功能缺失变异"提示A8A&.%6#*)3通过降低极低密度脂蛋白的脂质化来促进肝细胞内的脂质积聚%四&A8A&.%与肝脏相关死亡及全死因死亡的相关性前面提到的对美国国民健康与营养调查所纳入的#%!&)例非肝炎病毒携带者的肝脏脂肪指数&肝脏纤维化程度及A8A&.%E#*)3变异与肝病相关死亡及全因死亡情况进行了相关性分析(!6%)%结果显示"脂肪含量评分中等及较高人群的肝脏相关死亡风险分别约为低评分组的%倍和)倍%肝纤维化也是影响肝脏相关死亡风险的重要原因"基于年龄&<3E&血糖&.&I&.-I等指标的纤维化评分模型显示"高评分者肝脏相关死亡风险约为低评分者的'倍%同样"肝脏脂肪含量及纤维化程度与心血管疾病死亡和全死因死亡也具有相关性%对A8A&.%E#*)3变异与肝病相关死亡风险及全死因死亡风险相关性的分析显示"在纳入研究的人群中#E E$纯合子占比(!5" %$5为杂合子#E3$"#!5为变异纯合子#33$%其中33人群肝脏相关死亡风险分别为E3及E E型的!*&和#)*!倍%五&总结及展望关于8.S&4的发病机制"目前比较经典的学说是0二次打击1学说%0初次打击1主要是肝细胞内甘油三酯过度堆积"胰岛素信号通路受损"而胰岛素敏感性降低会导致脂肪细胞甘油三酯储存降低"血液脂质成分含量升高"进而肝细胞摄入更多的脂质成分加重脂质沉积%0二次打击1是在0初次打击1的基础上由于氧化应激及炎症因子作用导致肝细胞的坏死及纤维化%8.S&4是一种受到遗传&行为习惯等多因素影响&多通路参与的复杂的全身性代谢疾病%目前并没有将-8A位点作为疾病判断及预后预测指标的临床运用"主要原因在于一般-8A 位点优势比#9D$较低"对疾病判断能力较弱%近期研究结果显示"A8A&.%B('%)*"&C C型变异携带者的肝脏相关死亡风险是野生型的#)*!倍"其肝细胞癌发生风险是对照组的约#"倍"这在单-8A位点与疾病相关性中是极为罕见的(!)%因此"为提高肝癌的发病风险预测能力"建议通过纳入A8A&.% B('%)*"&及其他相关基因-8A分析"并结合具体临床检查结果"建立更加精确的8.S&4疾病进展及相关肝细胞癌的预测评估模型"并深入探索发病机制及更加全面的队列研究%参 考 文 献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收稿日期!!"!#6##6"#$#本文编辑!赖荣陶$*&"!#*. 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酒精性肝纤维化中Smad4的表达情况研究(一)
作者:吴凌康王小奇任自立叶尉
摘要：目的为了探讨Smad4在酒精性肝病肝组织中的表达和分布情况，揭示酒精性肝病的部分发病机制。
方法采用肝纤维化Masson染色考察酒精肝纤维化程度，用免疫组化考察Smad4分子在酒精性肝病肝组织中的表达，用RT-PCR方法考察Smad4在核酸水平的表达和分布情况。
结果正常肝组织和酒精肝早期，Smad4表达为阴性，酒精肝纤维化阶段Smad4表达显著阳性，主要分布在汇管区，壁周隙，纤维间隔等非实质细胞，进一步以PCR方法考察，发现正常组和酒精肝晚期组相比较，其Smad4的表达量有显著差异。
结论Smad4参与了酒精性肝纤维化。
关键词]酒精性肝病；肝纤维化；Smad4；TGF-betaAbstract]ObjectiveToinvestigatetheexpressionandroleofSmad4inALD.Methodsimumnohi stochemistryandreversetranscriptionpolymerasechainreactionwasused.ResultsThereisnoexpressi onofSmad4innormalliverandliverofearlierperiodALD.Smad4significantlyincreaseinliveroflateperio dALD.Theymainlydistributedinportalarea,perisinusoidalspaceandfibroussepta.Conclusion:Smad4 mightbeaimportantfactoroffibrogenesisinlateperiodofAlcoholicLiverDisease.
Keywords]AlcoholicLiverDiseasSmad4liverfabrosisTGF-beta近年来随着酒精消耗量的增加，酒精性肝病的发病率呈上升的趋势，酒精性肝病包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化肝硬化，该病的发病机制尚不明了，但肝纤维化无疑是该病后期的一个重要的病理改变。
已有研究表明TGF-beta是肝纤维化的一个极重要的启动因子，而在TGF-beta下游存在一个复杂的Smads信息传导网络，Smad4是其中一个重要的信号分子，为了探察，Smad4是否参与酒精性肝病的发生发展，本实验以酒精灌胃制作大鼠酒精肝模型，以免疫组织化学和RT-PCR的方法考察了酒精肝组织中Smad4的表达和分布情况。
材料与方法
1、实验动物采用健康，性成熟，一级质量标准的S-D大鼠34只，雌雄各半，体重180-210g，分笼喂养。
大鼠由浙大医学院动物中心提供。
2、主要试剂:苏木素染料，丽春红染料，亮绿染料，兔抗大鼠Smad4多抗（一抗），辣根过氧化酶标记羊抗兔多抗（二抗），Trizol试剂，M-MLV逆转录酶，Tag酶，10mM/LdNTP PCR仪等。
3、酒精肝模型以上实验动物在浙大医学院动物中心以清洁二级喂养，随机分为两组，均为雌雄各半，白酒灌胃24只，三个月后处死10只取得肝脏标本，部分浸泡于10%福尔马林中留于病理检查，部分置于液氮中再保存于-80度冰箱中用于RT-PCR。
六个月后再处死另一批11只老鼠处理同前。
实验过程中死亡3只，原因不明。
另10只免白酒灌胃，以等量生理盐水灌胃，6个月后全部处死，标本处理如上。
因此大鼠肝脏标本分为：A组10只正常对照组织；B组10只酒精灌胃3个月组；C组10只酒精灌胃六个月组。
4肝组织Masson染色观察切片脱蜡脱水后苏木酸染色8分钟酒精分化水洗，1%丽春红酸性品红染色8分钟，水洗后1%磷钼酸染色6分钟，0.2%亮绿5分钟，水洗，封片。
5、免疫组织化学检测用invision法，探测各组模型肝组织中Smad4的分布和表达强度，阳性对照由武汉博士德公司提供，另以动物羊血清代替一抗制作阴性对照，结果判定：镜下组织切片出现棕黄色染色则判为为阳性片。
6、RT-PCR检测（1）引物设计：从基因BANK检索Smad4基因的全序列（基因号AB010954），设计正链引物序列为5’ATCCTGGACATTACTGGCCGGTTCA3’反义链引物序列为5’TGCCGCCTGGGCAGCAGCTGCGGCT3’。
扩增片段为大小为500BP（2）内对照基因使用GAPDH，设计正义链为5’-TGCACCCACGACAGAAGGGGA-3’反义链为5’GGCTAAGCAGTTGGTGGTGC-3’扩增片段为大小为349BP（3）标本总RNA提取：从-80度冰箱里取黄豆大小酒精肝组织，加液
氮用研钵研磨，加1mlTrizol试剂，再加氯仿提取总RNA，无水乙醇沉淀，溶解于DEPC水处理过的蒸馏水中，提取的RNA经过分光光度计测定OD值，要求OD260/OD280>2.(4)逆转录参照上海生工MMLV逆转录试剂盒说明书，合成cDNA，取总RNA稀释至浓度为50ug/ul取10ul总RNA加入1uloligodT放入70摄氏度5分钟后冰置，加入4ul5*缓冲液2ul4dNTPMix2ul 用双蒸水加至19ul，37摄氏度5分钟后再加入200uMMLV（1ul）42摄氏度孵育60分钟后转入70度水浴，获得cDNA低温冰箱保存（5）PCR反应模板cDNA2ul各引物1ulTag酶0.2ul 加入4ulPCRMIX（含10mM4dNTP0.8ul，25mmol/LMgCL21.2ul，10*buffle2ul）加水至20ul反应体系。
按以下程序进行基因扩增，95C5’-(95C1’-61C1’-72C2’)35循环-72C10’(5)取10ulPCR 反应产物与2ul
溴酚兰混合加样于电泳槽以5v/cm进行电泳，行荧光扫描。
（5）各个标本CDNA循以上方法进行扩增内对照GAPDH，并电泳，行荧光扫描。
（6）经荧光扫描获得两组各个标本的Smad4/GAPDH值。
7、统计学处理用SPSS11.5进行分析，组间均数比较采用Independent-SampleTTest，并进行Spearman相关性分析。
结果
1、肝组织纤维化染色（Masson染色）发现C组标本的汇管区，纤维间隔，血管壁均被染为墨绿色。
A组织和B组只有少量血管壁被染为墨绿色。
说明C组酒精肝模型归属典型的酒精性肝纤维化期。
A组和B组无纤维化表现。
2、酒精肝肝组织中Smad4蛋白的表达（定性）免疫组织化学染色发现C组所有切片组织切片中多区域明显染为棕黄色，说明这些区域中Smad4表达强度较高。
这些区域主要是汇管区非实质细胞，肝小叶周围，窦壁周围，纤维间隔。
A组和B组基本上无棕黄色染色，说明A组和B组标本基本上无Smad4表达。