高纯度质粒小提中量试剂盒说明书天根
高纯质粒小量提取试剂盒(柱离心型)
高纯质粒小量提取试剂盒（柱离心型）(Plasmid Minispin HP Kit Ver.2)产品说明：本试剂盒在常规柱离心质粒提取技术的基础上，改进了硅基质膜材料和试剂配方，使质粒DNA获得高效、专一吸附。
经过两步洗涤，可清除蛋白质、基因组DNA、RNA和其他杂质。
新增基质平衡液处理步骤，可进一步提高硅胶膜的DNA吸附能力，获得稳定的质粒产量。
适合于从1~3 ml培养液中提取质粒DNA。
高拷贝菌液可获得质粒DNA约5~30 μg，可应用于各种常规实验如酶切、PCR、测序、连接、转化和体外转录等操作，并可用于细胞转染工作。
产品内容与储存方法：名称数量保存条件Buffer P1（重悬液）20 ml RTBuffer P2（裂解液）20 ml RTBuffer P3（结合液）30 ml RTBuffer PE（平衡液）30 ml RTBuffer PWT （洗涤液T）* 30 ml RTBuffer PW （洗涤液）** 20 ml RTElution Buffer（洗脱液）10 ml RT离心柱及套管100套RTRNase A 20 mg/ml 0.1 ml -20℃试剂盒可作100次质粒小量提取。
常温运输，室温保存。
RNase A于-20℃保存，首次使用时加入Buffer P1中混匀，置4℃保存。
*Buffer PWT（洗涤液T）在首次使用时加入异丙醇30 ml混匀。
**Buffer PW（洗涤液）在首次使用时加入无水乙醇80 ml混匀。
有效期1年。
所需其它试剂：使用者需准备加入洗涤液的无水乙醇和异丙醇。
操作方法：1)收菌：取过夜培养菌1~3 ml菌液，装入1.5ml 或2ml离心管中，12,000 x g于室温离心2 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2)重悬：加入200 µl Buffer P1，充分混悬震荡菌体沉淀10~15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3)裂解：加入200 µl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3~5次，室温放置2~3 min，使细菌完全裂解，溶液透明。
高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://HighPure Plasmid Maxi Kit高纯度质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL12试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1201)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml去蛋白液PE 室温63 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。
有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根
高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）加入500 μL的平衡液BL, 12000rpm（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2.取5-15ml 过夜培养的菌液加入离心管中，12000 rpm (~13400g ）离心1 min，尽量吸除上清。
注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μL溶液Pl （请先检查是否已加入RNaseA ) ，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
质粒4.向离心管中加入500μL溶液P2 ，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。
此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。
如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5.向离心管中加入700 μL溶液P3 ，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm ( ~13400g ）离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。
注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs （过滤柱放入收集管中）, 12000rpm（~13400g ）离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）, （如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5 吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。
7.12000rpm (~13400g）离心l min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。
天根 快速定点突变试剂盒说明书
KM101 （20 rxn）
30 μl 200 μl 20 μl 40 μl 80 μl 20×50 μl
储存条件
收到本产品后， 请立即将FDM competent cells置于-70℃条件下保存，试剂盒其他组分 置于-20℃条件下保存。感受态细胞可在-70℃条件下保存3个月，试剂盒其他组分可在-20℃ 条件下保存1年。
50 μl 体系 2 μl 4 μl 10 μl 1.5 μl
至50 μl
终浓度 0.2 ng/μl 400 nM
1× 0.075 U/μl
－
4、将实验组及对照组按照如下PCR反应程序进行PCR反应。
PCR反应程序： 注：下表中PCR程序按照对照组实验条件设置，客户可根据自身实验进行相应调整。
阶段 预变性
■ PCR、RT-PCR系列 ■ 核酸DNA、RNA分离纯化系列 ■ DNA分子量标准 ■ 克隆载体、感受态细胞 ■ 细胞生物学产品 ■ 蛋白分子量标准 ■ 蛋白质染色、检测及定量相关产品
版本号: KM131204
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
PCR反应
补充延伸
循环 1×
18×
1×
温度 95℃ 94℃ 55℃ 68℃ 68℃
时间 2 min 20 sec 10 sec 2.5 min 5 min
二、质粒模板的消化
1、按照下表所述配制酶切体系： 组成成分
PCR产物 Dpn I restriction enzyme （20 U/μl） Total Volume 2、充分混匀后，将上述酶切体系于37℃条件下消化1 h。
质粒小量提取试剂盒说明书
质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。
（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
TaKaRa 质粒DNA小量纯化试剂盒说明书
● 使用例
使用本试剂盒纯化1.5 ml 的 TB 培养基的菌液（菌体 JM109），得到约16 μg 的质粒 DNA（OD260/OD280 ≥1.8），此质粒为 pUC119，用 Hind Ⅲ酶切1 小时（电泳结果见图2）。
会影响吸光度值的测定，此时建议使用琼脂糖凝胶电泳法进行定量。 ② 质粒 DNA 纯度不好。请严格遵守实验操作要求，使用新鲜菌体培养液提取质粒。 ③ 进行 DNA 洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。 ④ DNA 插入片段本身立体结构复杂。有些 DNA 立体结构复杂（如 GC rich、重复序列等）时难以测
序，应改进测序方法。 Q6. 质粒 DNA 的最小洗脱体积是多少？ A6. 我们建议的洗脱体积为 30-100 μl，此种洗脱体积下收率最佳（但要注意洗脱液需直接加至膜中心），
● 制品说明
本试剂盒是用于质粒（Plasmid）DNA 小量纯化的试剂盒。试剂盒采用了传统的 SDS 碱裂解法，结合硅 胶膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需 1 小时便可完成。使用本试剂盒可从 1～4 ml LB 培养基过夜培养的菌液中纯化得到 1～20 μg 的高纯度质粒 DNA（OD260/OD280 = 1.8～2.0），制备过 程无需苯酚抽提、乙醇沉淀等步骤，所得质粒 DNA 溶解于 Tris Buffer 或水中，纯度较高，可直接用于 转化、DNA 序列分析、体外转录、限制酶切以及其他各种酶促反应。
2. 加入 Solution Ⅱ和 Solution Ⅲ后，不要剧烈混合（Vortex 等），剧烈混合会导致基因组 DNA 的污染。 3. 加入 Solution Ⅲ后，应充分混合使蛋白质、基因组 DNA 等形成白色沉淀，离心后沉降于离心管底部。
高纯度质粒小量提取试剂盒 说明书
大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。
2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。
2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。
2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。
2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。
2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。
3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。
2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。
3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。
学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。
3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。
3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。
4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。
同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。
在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。
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高纯度质粒小提中量试剂盒说明书天根
SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#
1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入
500μL的平衡液BL,12000rpm（~13400g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）
2.取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm(~13400g）离心1min，
尽量吸除上清。
3.注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌
体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效
率。
4.向留有菌体沉淀的离心管中加入500μL溶液Pl（请先检查是否已加入
RNaseA)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
5.注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，
导致提取量和纯度偏低。
质粒
6.向离心管中加入500μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。
此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。
如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
7.向离心管中加入700μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，
此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm(~13400g）离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
8.注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白
色沉淀，可再次离心后取上清。
9.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs（过滤柱放入收集管
中）,12000rpm（~13400g）离心2min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）,（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。
10.12000rpm(~13400g）离心lmin，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入
收集管中。
11.向吸附柱CP4中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm（~13400g）离心
lmin，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
12.向吸附柱CP4中加入600μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），
12000rpm（~13400g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5min，有助于更好地去除杂质。
13.向吸附柱CP4中加入600μL漂洗液PW,12000rpm（13400g）离心lmin，倒
掉收集管中的废液。
14.将吸附柱CP4重新放回收集管中置于12000rpm（~13400g）离心2min，目
的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
15.注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
为
确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4开盖，置于室温放置数min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
16.将吸附柱自科置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加
100-300μL洗脱缓冲液TB，室温放置2min，12000rpm（~13400g）离心lmin将质粒溶液收集到离心管中。
17.注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱
中．重复步骤12。
洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。
若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
洗脱缓冲液体积不应少于100μL，体积过小影响回收效率。
且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
质粒DNA浓度及纯度检测:
得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
电泳可能为单一条带，也可能为2到3条DNA条带，这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。
OD260值为l相当于大约50μg/ml双链DNA。
OD260/0D28。
比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。