碧云天 细胞凋亡-一步法TUNEL检测试剂盒
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒显色法-碧云天
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
tunel法检测细胞凋亡实验步骤
tunel法检测细胞凋亡实验步骤细胞凋亡是一种重要的生物学过程，它在多种生理和病理情况下发挥着关键作用。
为了研究细胞凋亡的机制和调控，科学家们发展了多种方法来检测细胞凋亡。
其中一种常用的方法是使用tunel法。
本文将介绍tunel法检测细胞凋亡的实验步骤。
实验步骤如下：1. 细胞培养和处理我们需要选择一种适合的细胞系进行实验。
常用的细胞系有HEK293、HeLa和Jurkat等。
将细胞培养在含有适当培养基和补充物的培养皿中，并在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中培养至细胞密度适当。
在进行实验之前，需要根据实验设计的需要处理细胞。
例如，可以给予细胞不同的处理，如药物刺激、放射线照射或感染病毒等。
2. 固定细胞将处理后的细胞用适当的缓冲液进行固定。
常用的缓冲液有4%的乙醛或4%的甲醛等。
将缓冲液加入培养皿中，使细胞完全覆盖，并在室温下固定15分钟。
3. 洗涤细胞将固定的细胞用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次，每次5分钟。
洗涤的目的是去除固定液中的残留物质，以减少后续步骤中的非特异性背景。
4. 使细胞透膜使用蛋白酶K或蛋白酶XXIV等酶将细胞膜上的蛋白质降解，使细胞透膜。
将适量的酶加入细胞中，根据实验的需要，可以调整酶的浓度和作用时间。
一般来说，酶的浓度为20μg/ml，作用时间为30分钟。
5. tunel反应使用tunel试剂盒进行细胞凋亡检测。
tunel试剂盒中含有标记有荧光物质的dUTP，可以与DNA断裂的末端结合。
按照试剂盒说明书的要求，将tunel试剂加入细胞中，与细胞中的DNA断裂末端发生连接反应。
反应时间一般为1-2小时。
6. 洗涤和染色将反应结束后的细胞用PBS洗涤3次，每次5分钟。
然后，可以选择使用荧光染料（如DAPI）染色，以标记细胞核。
将染色液加入细胞中，孵育15分钟后再次用PBS洗涤。
7. 显微镜观察和图像获取将处理后的细胞放置在显微镜载玻片上，并使用合适的显微镜观察细胞。
可以调整显微镜的放大倍数和焦距，以获得清晰的图像。
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤--------------------------------------------------------------------------------凋亡细胞的原位末断转移酶标记法（TUNEL法）细胞凋亡的多步骤机制作用的最终环节是；细胞内源性核酸内切酶的激活而导致核染色质DNA双链的断裂。
大量DNA片段暴露出的3 羟基在末断转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT)或DNA多聚酶的作用下，与生物素或地高辛标记的核苷酸结合，最终借助与卵白素或抗地高辛抗体结合的荧光素或HRP，使凋亡细胞被特异性地标记和显示出来。
TUNEL细胞凋亡试剂盒由美国罗氏公司提供试剂1：酶浓缩溶液（Enzyme Solution）试剂2：标记溶液（Lable Solution）试剂3：转化剂-POD（Converter-POD）酶标记抗荧光素抗体（即用型）试验所需其它试剂：非石蜡切片:·冲洗缓冲液:磷酸盐缓冲液（PBS）·阻断溶液:0.3%H2O2甲醇溶液·固定溶液:4%多聚甲醛（溶剂pH7.4新鲜配制的PBS溶液）·渗透液:0.1%Triton甔-100（溶于新鲜配制的0.1%枸橼酸钠溶液）Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)名：曲拉通X-100，乳化剂OP分子式：C34H62O11石蜡切片:·二甲苯和乙醇（100%、95%、90%、80%、70%用蒸馏水稀释）·冲洗缓冲液:磷酸盐缓冲液（PBS）·蛋白酶K 工作液10~20mg/ml溶于10mM Tris/HCl（pH7.4~7.8）根据需要选择:·渗透液:0.1%TritonX-100（溶于新鲜配制的0.1%枸橼酸钠溶液）·胃酶溶液（0.25%-0.5%溶于HCl ，pH2）或胰酶·0.1M枸橼酸缓冲液，pH6，微波修复材料：微波炉，微波输出功率850W-2000W2 .选用中性甲醇固定的活检及实验动物标本，常规脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤精
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤精TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling）细胞凋亡试剂盒是一种常用的检测细胞凋亡的方法。
本文将介绍TUNEL细胞凋亡试剂盒的内容及操作步骤。
1.引物溶液：含有dUTP（脱氧尿苷三磷酸）的荧光标记的核苷酸。
2.终止缓冲液：用于停止反应和洗涤。
3. TUNEL酶溶液：含有DNA连接酶（terminal deoxynucleotidyl transferase），用于在DNA断裂的末端添加dUTP标记。
4.正对照组：包括经过DNA内切酶处理的组织切片或细胞，用于确定试剂盒的反应情况。
步骤一：取材将需要检测的组织切片或细胞标本取出，放入离心管或培养皿中。
步骤二：固定用4%的冷乙醇或4%的帕拉醛对组织切片或细胞标本进行固定，固定时间为10-30分钟。
步骤三：洗涤用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤固定的样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤四：蛋白酶消化对组织切片或细胞标本进行蛋白酶消化，以去除背景蛋白质干扰。
消化时间和消化酶的浓度需要根据实验条件进行优化。
步骤五：洗涤用PBS洗涤样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤六：加入TUNEL酶溶液将TUNEL酶溶液滴加到样本上，保持湿润。
反应时间为1-2小时，可以根据实验需要进行优化。
步骤七：终止反应加入终止液停止反应，并用PBS洗涤样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤八：显微镜观察将样本用荧光或显色试剂染色，然后用荧光显微镜或普通显微镜观察，并拍摄照片。
步骤九：分析数据使用图像分析软件对显微镜拍摄的照片进行图像分析，在感兴趣区域计算标记的细胞数量，并计算相对细胞凋亡率。
值得注意的是，在进行TUNEL细胞凋亡试剂盒检测时，需要根据实验需要进行优化，如反应时间、荧光染色时间、荧光强度测量等。
此外，为了准确地判断细胞中的凋亡现象，可以与其他细胞凋亡指标一起使用，如Annexin V染色、Caspase活性检测等。
TUNEL法检测细胞凋亡
TUNEL法检测细胞凋亡细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
基因组DNA 断裂时，暴露的3'-0H 可以在末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deox yn ucleotidyl Tran sferase,TdT）的催化下加上荧光素（FITC）标记的dUTP （fluorescein-dUTP），从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL 法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂（和细胞凋亡时的断裂方式不同）。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
针对问题2（TUNEL法的实验原理是什么？）：基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让rTDT和bio标记的dUTP进入细胞内，在rTDT的辅助下dUTP与核断裂的DNA 3 -0H结合，再用HRP标记的链霉亲和素与dUTP 上的biot in 结合（每个链霉亲和素至少可以再结合3个biot in 分子），最后用DAB过氧化氢与SP上的辣根过氧化物酶HRP发生氧化、环化反应，形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色，最终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。
■1. TUNEL工作原理：简单说就是一一TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是；生物素（biot in ）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（T dT En zyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3' - 0H末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP ）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-0H形成，很少能够被染色。
TUNEL细胞凋亡检测(荧光标记)操作流程
一、TUNEL实验试剂(1)DeadEnd™Fluorometric TUNEL System试剂盒购自Promega公司(产品编号G3250)(2)二甲苯购自国药集团化学试剂有限公司（产品编号80139118，CAS号108-38-3，500ml）(3)无水乙醇购自中国上海生工生物有限公司（产品编号ET0737-500ml）(4) 过氧化氢购自上海生工生物有限公司(产品编号H1976-500ml)(5) Proteinase K购自上海生工生物工程技术服务公司(产品编号BSP169-2ml)(6)多聚甲醛购自上海生工生物有限公司（产品编号PB0684-500g）(7) Propidium iodide购自Sigma（产品编号P4170-10MG）(8) SlowFade® Gold antifade reagent购自Life Technologies（产品编号36936）二、具体实验步骤A. 石蜡包埋组织预处理：1.二甲苯5min (500ml二甲苯)2.二甲苯5min（500ml二甲苯）3.无水乙醇5min（500ml无水乙醇）4.无水乙醇5min（500ml无水乙醇）5.80%乙醇5min（500x0.8=400ml无水乙醇）6.70%乙醇5min（500x0.7=350ml无水乙醇）7.PBS 5min（500ml）8.PBS 5min（500ml）9.PBS 5min（500ml）10.4%多聚甲醛in PBS，15min11.PBS 5min（500ml）12.PBS 5min（500ml）13.Proteinase K in PBS (100ul每个样品，共6ml), 8-10min14.PBS 5min（500ml）15.PBS 5min（500ml）16.4%多聚甲醛in PBS，5min17.PBS 5min18.PBS 5min共105分钟，实际约2个小时B. 凋亡检测1.每个样品，100ul平衡缓冲液覆盖细胞，室温5-10分钟2.在平衡细胞的同时，在冰上解冻核苷混合物，并且依照表1，准备足够量的用于所有实验的和可选阳性对照反应（见4.E节）的rTdT孵育缓冲液。
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒产品简介：碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
注：FITC是fluorescein isothiocyanate的缩写，实际上大多数情况下所谓的FITC即为fluorescein。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约1-2个小时即可完成。
(4) 方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。
(5) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
细胞凋亡-DNA Ladder抽提试剂盒
细胞凋亡－DNA Ladder抽提试剂盒产品简介：碧云天生产的细胞凋亡－DNA Ladder抽提试剂盒，是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。
可以非常有效地抽提最小片断为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。
DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。
通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
10M 醋酸铵和TE也可以室温保存。
注意事项：需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 样品收集a) 对于组织样品：切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。
或直接冰浴上匀浆。
b) 对于贴壁细胞：胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
c) 对于悬浮细胞：1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
2. DNA ladder抽提a) 每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。
b) 对于上述收集好的样品，每5毫克组织或者106个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，V ortex混匀，充分裂解组织或细胞。
c) 50℃水浴消化过夜(通常12-20小时皆可)。
d) 加入500微升Tris平衡苯酚。
e) V ortex剧烈混匀，使有机相和水相充分混合，以达到抽提效果。
4℃，12,000g离心5分钟。
f) 缓慢吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次(同步骤e)。
g) 缓慢吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次(同步骤e)。
h) 慢慢吸出约300微升上清液，加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。
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一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒产品简介：碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
注：FITC是fluorescein isothiocyanate的缩写，实际上大多数情况下所谓的FITC即为fluorescein。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约1-2个小时即可完成。
(4) 方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。
(5) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。
在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。
在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。
本试剂盒足够检测20个样品。
保存条件：-20℃保存，荧光标记液需避光保存。
注意事项：需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)，用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1％ Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。
如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K，二甲苯。
蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.对于贴壁细胞或细胞涂片：a.PBS或HBSS洗涤一次。
b.如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。
c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
d.用PBS或HBSS洗涤一次。
e.加入含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。
f.转步骤5。
2.对于悬浮细胞或细胞悬液：a.收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。
b.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
为防止细胞聚集成团，宜在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。
c.用PBS或HBSS洗涤一次。
d.用含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)重悬细胞，冰浴孵育2分钟。
e.转步骤5。
3.对于石蜡切片：a.二甲苯中脱蜡5-10分钟。
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。
b.滴加20 g/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自行摸索)。
c.PBS或HBSS洗涤3次。
注意：这一步必须把蛋白酶K洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。
d.转步骤5。
4.对于冷冻切片：a.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
b.PBS或HBSS洗涤2次，每次10分钟。
c.加入含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。
d.转步骤5。
5.配制TUNEL检测液：6.a.用PBS或HBSS洗涤2次。
b.在样品上加50μl TUNEL检测液，37℃避光孵育60分钟。
注意：孵育时需注意在周围用浸足水的纸或药棉等保持湿润，以尽量减少TUNEL检测液的蒸发。
c.PBS或HBSS洗涤3次。
d.用抗荧光淬灭封片液封片后荧光显微镜下观察。
可以使用的激发波长范围为450-500nm，发射波长范围为515-565nm(绿色荧光)。
7. 对于悬浮细胞或细胞悬液：a.用PBS或HBSS洗涤2次。
b.加入50μl TUNEL检测液，37℃避光孵育60分钟。
c.PBS或HBSS洗涤2次。
d.用250-500μl PBS或HBSS悬浮。
e.此时可以用流式细胞仪进行检测或涂片后在荧光显微镜下观察。
可以使用的激发波长范围为450-500nm，发射波长范围为515-565nm(绿色荧光)。
常见问题：1.出现非特异性荧光标记。
a.有些细胞或组织，例如平滑肌细胞或组织，nuclease或polymerase的酶活性水平较高，易导致出现非特异性的荧光标记。
解决方法是，取细胞或组织后立即固定并且要充分固定，以阻止这些酶导致假阳性。
b.使用了不适当的固定液，例如一些酸性固定液，导致出现假阳性。
建议采用推荐的固定液。
c.TUNEL检测反应时间过长，或TUNEL检测反应过程中反应液渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润，也可能出现非特异性荧光。
注意控制反应时间，并确保TUNEL检测反应液能很好地覆盖样品。
2.荧光背景很高。
a.支原体污染。
请使用支原体染色检测试剂盒检测是否为支原体污染。
支原体染色检测试剂盒(C0296)可以向碧云天订购。
b.高速分裂和增殖的细胞，有时也会出现细胞核中的DNA断裂。
c.TUNEL反应过强。
可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液稀释TdT酶2-5倍后再按照说明书操作。
稀释后的TdT酶需当日使用。
d.红细胞中血红蛋白导致的自发荧光产生严重干扰。
此时宜选择其它细胞凋亡检测试剂盒。
3.标记效率低。
a.使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。
b.固定时间过长，导致交联程度过高。
此时宜减少固定时间。
c.荧光淬灭。
Fluorescence在普通光照10分钟就会严重淬灭。
解决方法是需注意避光操作。
d.碘化丙啶双染时，如果碘化丙啶染色过深会导致观察到的本试剂盒的TUNEL染色效果减弱。
碘化丙啶可以接受fluorescein激发产生的荧光，从而起到淬灭作用。
解决方法是用较低浓度的碘化丙啶染色，例如0.5μg/ml碘化丙啶。
使用本产品的文献：1. Wang Z, Tang X, Li Y, Leu C, Guo L, Zheng X, Zhu D.20-Hydroxyeicosatetraenoic acid inhibits the apoptotic responses in pulmonary artery smooth muscle cells.Eur J Pharmacol. 2008 Jun 24;588(1):9-17.2. Li Y, Li Q, Wang Z, Liang D, Liang S, Tang X, Guo L, Zhang R, Zhu D.15-HETE suppresses K(+) channel activity and inhibits apoptosis in pulmonary artery smooth muscle cells.Apoptosis. 2009 Jan;14(1):42-51.3. Zhang YE, Wang JN, Tang JM, Guo L Y, Yang JY, Huang YZ, Tan Y, Fu SZ, Kong X, Zheng F.In vivo protein transduction: delivery of PEP-1-SOD1 fusion protein into myocardium efficiently protects against ischemic insult.Mol Cells. 2009 Feb;27(2):159-66. Epub 2009 Feb 20.4. Li Q, Zhou Y, Yao C, Ma X, Wang L, Xu W, Wang Z, Qiao Z.Apoptosis caused by Hsp90 inhibitor geldanamycin in Leishmania donovani during promastigote-to-amastigote transformation stage.Parasitol Res. 2009 Nov;105(6):1539-48. Epub 2009 Aug 19.5. Zhang L, Ma J, Li Y, Guo L, Ran Y, Liu S, Jiang C, Zhu D.15-Hydroxyeicosatetraenoic acid (15-HETE) protects pulmonary artery smooth muscle cells against apoptosis via HSP90.Life Sci. 2010;87(7-8):223-31. Epub 2010 Jul 6.6. Bai F, Sun B, Woo NY, Zhang XH.Vibrio harveyi hemolysin induces ultrastructural changes and apoptosis in flounder (Paralichthys olivaceus) cells.Biochem Biophys Res Commun. 2010;395(1):70-5. Epub 2010 Mar 27.7. Ma Y, Wang B, Li W, Ying G, Fu L, Niu R, Gu F.Reduction of intersectin1-s induced apoptosis of human glioblastoma cells.Brain Res. 2010;1351:222-8. Epub 2010 May 21.8. Wang H, Zhao H, Ye Y, Xiong N, Huang J, Yao D, Shen Y, Zhao X.Focal cerebral ischemia induces Alzheimer's disease-like pathological change in rats.J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2010;30(1):29-36. Epub 2010 Feb 14.9. Ma J, Zhang L, Li S, Liu S, Ma C, Li W, Falck JR, Manthati VL, Reddy DS, Medhora M, Jacobs ER, Zhu D.8,9-Epoxyeicosatrienoic acid analog protects pulmonary artery smooth muscle cells from apoptosis via ROCK pathway.Exp Cell Res. 2010;316(14):2340-53. Epub 2010 May 21.10.Wang S, Wang Y, Jiang J, Wang R, Li L, Qiu Z, Wu H, Zhu D.15-HETE protects rat pulmonary arterial smooth muscle cells from apoptosis via the PI3K/Akt pathway.Prostaglandins Other Lipid Mediat. 2010;91(1-2):51-60. Epub 2010 Jan 8.11.Yin Z, Chen X, Chen JL, Shen WL, Hieu Nguyen TM, Gao L, Ouyang HW.The regulation of tendon stem cell differentiation by the alignment of nanofibers.Biomaterials. 2010;31(8):2163-75. Epub 2009 Dec 7.12.Zhang L, Liang Y, Liu Y, Xiong CL.The role of brain-derived neurotrophic factor in mouse oocyte maturation in vitro involves activation of protein kinase B.Theriogenology. 2010;73(8):1096-103. Epub 2010 Feb 19.13.Zhou Q, Xiong Y, Cheng Y, Du Y, Zhang J, Mu J, Guo Q, Wang H, Ma D, Li X.Effects of Tissue Factor Pathway Inhibitor-2 Expression on Biological Behavior of BeWo and JEG-3Cell Lines.Clin Appl Thromb Hemost. 2011 Dec 26.14.Li XY, Jing CQ, Lei WL, Li J, Wang JJApoptosis caused by imidazolium-based ionic liquids in PC12 cells.Ecotoxicol Environ Saf. 2012 Jul 6.15.Hu J, Cheng D, Gao X, Bao J, Ma X, Wang HVitamin C Enhances the In vitro Development of Porcine Pre-implantation Embryos by ReducingOxidative Stress.Reprod Domest Anim. 2012 Jan 13.16.Cui Z, Ren S, Lu J, Wang F, Xu W, Sun Y, Wei M, Chen J, Gao X, Xu C, Mao JH, Sun Y.The prostate cancer-up-regulated long noncoding RNA PlncRNA-1 modulates apoptosis andproliferation through reciprocal regulation of androgen receptor. Urol Oncol. 2012 Jan 19. [Epub ahead of print]。