_紫外-可见分光光度法
紫外 可见分光光度法
12
例子：
1）乙醛分子在160, 180,290nm处产生吸收，它们对应的电子跃迁类型分别是：
2）环戊烯（190nm）、甲醚（185nm）、三乙胺（195nm）分别对应的跃迁类型是： 3）一化合物可能是=N-CH2-CH2-CH3或=N-CH=CH2其紫外吸收光谱为： 该化合物是何种化合物？
<100
吸收带的划分：落在200-780 nm的紫外-可见光区的吸收可以用紫外可见吸收光谱测定，在有机化合物的结构解析以及定量分析中常用。
18
电荷转移吸收谱带
电荷转移吸收谱带涉及的是给予体的一个电子向接受体的一个电子轨道上 的跃迁，激发态是这一内氧化还原过程的产物。电荷转移过程可表示如下：
hv CO R
光的粒子性是指光可以看成是由一系列量子化的能量子（即光子）组成。 光子能量为E＝h= hc/n。h 为Plank常数，h=6.626×10-34Js。
3
➢电磁辐射与光谱分析法
物质具有能量，是诱电体。物质与光的作用可看成是光子对能量的授受，即 h=E1-E0,该原理广泛应用于光谱解析。电磁辐射与物质的作用本质是物质吸 收光能后发生跃迁。跃迁是指物质吸收光能后自身能量的改变。因这种改变 是量子化的，故称为跃迁。不同波长的光,能量不同，跃迁形式也不同，因 此有不同的光谱分析法。
190
280
CO
190
160
COOH
204
9000 20
2000
41
*
n
*
n
*
*
n
*
COOR
205
50
紫外可见分光光度法简介
紫外-可见分光光度法简介紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS)，它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析, 所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。
按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。
紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。
操作简单、准确度高、重现性好。
波长长（频率小）的光线能量小，波长短（频率大）的光线能量大。
分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。
吸收光谱描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而变的函数关系曲线，称为吸收光谱或吸收曲线。
紫外-可见吸收光谱通常由一个或几个宽吸收谱带组成。
最大吸收波长（λmax）表示物质对辐射的特征吸收或选择吸收，它与分子中外层电子或价电子的结构（或成键、非键和反键电子）有关。
朗伯-比尔定律是分光光度法和比色法的基础。
这个定律表示：当一束具有I0强度的单色辐射照射到吸收层厚度为b，浓度为c的吸光物质时，辐射能的吸收依赖于该物质的浓度与吸收层的厚度。
其数学表达式为：式中的A 叫做吸光度；I0为入射辐射强度；I为透过吸收层的辐射强度；（I/I0）称紫藤为透射率T；ε是一个常数，叫做摩尔吸光系数，ε值愈大，分光光度法测定的灵敏度愈高。
紫外-可见分光光度计有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。
②单色器[1]。
它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。
紫外——可见分光光度法
检测器（detector）： 作用 透射光信号转换成电讯号。 要求 灵敏度高、响应时间短、响应的线 性关系好等，不同波长的光具有相同响应 类型 光电管、光电倍增管 显示器（display）： 作用 显示和记录检测器的电信号 类型 微安表、数码显示管 标尺 透射比（T）、吸光度（A）
2、常用的分光光度计
光学分析法 的类型
光谱法 分子光谱、原子光谱 发射光谱、吸收光谱、荧光光谱、拉曼 光谱等 非光谱法
§1 基本原理
一、分子能级(量)与电磁辐射 二、光的性质 三、物质的颜色与光的关系 四、物质吸收光的定律
一、分子能级(量)与电磁辐射
分子的能量包括： 价电子能量（Ee） 1～20eV 分子内原子在平衡位置的振动能量（Ev） 0.025～1eV 分子绕重心转动的能量（Er） 小于 0.025eV E = Ee + Ev + Er 分子吸收光谱的特点：带状光谱
二 光的性质
单色光 ：只有一种波长的光 复合光 ：由两种及两种以上波长的光组成 的光 白光：红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等颜 色的光按一定比例混合而成 互补色光 ：两种颜色的光按这一比例混合 也可得到白光
绿 黄 青
橙
白光
青蓝
红
蓝
紫
物质的颜色 黄绿
吸 收 光 颜色 紫 波长/nm 400～450
光源 单色光器 吸收池 检测器 显示器
光源（light source）： 钨灯（ 6 ～ 12V ），产生 320 ～ 3200nm 的 连续光谱，其适宜的波长是360～1000nm。 氢灯发射 150 ～ 400nm 波长的光，适用于 200～400nm波长范围。 辅助设备 聚光透镜、稳压电源
第3章-紫外-可见分光光度法
第3章 紫外-可见分光光度法一、内容提要1、电子跃迁类型 σ→σ*跃迁、π→π*跃迁、n →π*跃迁、n →σ*跃迁、电荷迁移跃迁、配位场跃迁。
2、常用术语1）最大吸收波长：曲线上的峰(吸收峰)所对应的波长，以m ax λ表示。
2）最小吸收波长：曲线上的谷(吸收谷)所对应的波长，以m in λ表示。
3）肩峰：在吸收峰旁边存在一个曲折，对应的波长以sh λ表示。
4）末端吸收：在200nm 附近，吸收曲线呈现强吸收却不成峰形的部分。
5）生色团：分子中可以吸收光子而产生电子跃迁的原子基团。
有机化合物的生色团主要是含有π→π*或n →π*跃迁的基团（＞C ＝C ＜、＞C ＝O 、＞C ＝S 、—N ＝N —、—N ＝O 等）。
6）助色团：含有非键电子的杂原子饱和基团（如—OH 、—SH 、—OR 、—SR 、—NH 2、—Cl 、—Br 、—I 等），它们本身不能吸收波长大于200nm 的光，但当它们与生色团相连时，能使该生色团的吸收峰向长波长方向移动，并使吸收强度增强。
7）红移和蓝移：化合物常因结构的变化（发生共轭作用、引入助色团等）或溶剂的改变而导致吸收峰的最大吸收波长m ax λ发生移动。
m ax λ向长波长方向移动称为红移；m ax λ向短波长方向移动称为蓝移。
8）增色效应和减色效应：因化合物的结构改变或其他原因而导致吸收强度增强的现象称为增色效应，有时也称为浓色效应；反之，导致吸收强度减弱的现象称为减色效应，有时也称为淡色效应。
9）吸收带：不同类型的电子跃迁在紫外-可见光谱中呈现的不同特征的吸收峰。
10）强带和弱带：摩尔吸收系数大于104的吸收带为强带；摩尔吸收系数小于102的吸收带为弱带。
3、吸收带1）R 带：跃迁类型为n →π*，波长范围为250～500nm ，吸收强度ε<102。
溶剂极性增大时蓝移。
R 带是杂原子的不饱和基团（＞C ＝O 、－NO 、－NO 2、－N ＝N －等）的特征。
紫外-可见分光光度法
一、分光光度计的主要部件 1. 光源
对光源基本要求：足够光强、稳定、 连续辐射且强度随波长变化小。
钨及碘钨灯：340～2500 nm，多 用在可见光区；
氢灯和氘灯：160～375 nm，多用 在紫外区。
2. 单色器
单色器的用途就是把混合光变成 单色光，由入射狭缝、准直镜、色散 元件、聚焦元件和出口狭缝组成。常 用的色散元件有棱镜和光栅。
对于光谱分析，可测量的最小分析信 号xL为
xL xb ksb
空白试验 多次测量 的平均值
根据一定 置信度确 定的系数
空白试验 多次测量 的标准差
与 xL xb ksb 相对应的浓
度或量即为检出限L
L xL xb ksb
S
S
方法的灵敏度
2. 标准比较法
该法是标准曲线法的简化，即只
配制一个浓度为cs的标准溶液，并测量 其吸 光度 ， 求 出吸 收系 数 k， 然 后 由
Aa2
Ab2
a
2
lca
b
2
lcb
cb
Aa2b
a
2
lca
l
b
2
1. 解方程组
Aa1b
Aa1
Ab1
a
1
lca
b
1
lcb
Aa2b
Aa2
Ab2
a
2
lca
b
2
lcb
2. 双波长法—等吸收点法
测定b组分时，选择b组分的最大吸收波长作测定波长 1，由b的峰顶向横坐标作垂线与a吸收曲线的一侧相 交，从相交点作横坐标的平行线与a吸收曲线的另一 侧相交，交点所对应的波长为参比波长2 。在1和2 处分别测量吸光度 A1ab与 ，然后相减求 Aab 。
紫外-可见分光光度法(Ultraviolet-Visibl
实验注意事项
确保分光光度计的波长准确性和稳定性，定期进行校准。
在测量过程中，避免强光直接照射样品池，以免影响测 量结果。
选择合适的空白溶液，以消除干扰物质的影响。
对于不同浓度的待测溶液，应进行适当稀释或浓缩，以 适应样品池的容量和分光光度计的测量范围。
03 实验结果分析
数据处理与分析
数据整理
绘制光谱图
环境因素等。
误差传递
02
对实验数据进行误差传递分析，了解误差对实验结果的影响程
度。
提高精度措施
03
提出提高实验精度的方法和措施，如选用高精度仪器、规范操
作流程、多次测量取平均值等。
04 应用领域
化学分析
01
02
03
物质定性分析
通过紫外-可见光谱的特征 峰，可以确定物质的结构 和组成，有助于对未知物 质进行鉴定。
物质定量分析
通过测量物质在紫外-可见 光谱特定波长下的吸光度， 可以计算出物质的浓度， 实现定量分析。
络合物组成分析
络合物在紫外-可见光谱中 表现出特殊的吸收峰，通 过分析这些吸收峰可以推 断络合物的组成和结构。
生物分析
生物大分子分析
如蛋白质、核酸等，可 以通过紫外-可见光谱研 究其构象变化和相互作 用。
紫外-可见分光光度计
用于测量物质在紫外-可见光谱区的吸收光 谱，确定物质的特征波长和吸光度。
移液管和吸管
用于准确移取一定量的待测溶液。
样品池
用于盛放待测溶液，通常有石英和玻璃两种 材质。
滤纸、试纸或离心管
用于过滤或分离待测物质。
实验操作流程
2. 设置分光光度计
打开分光光度计，预热30分钟， 设置测量波长范围、扫描速度等 参数。
第一章 紫外-可见分光光度法
➢ *跃迁：可以发生在任何具有不饱和键的 有机化合物分子中，其最大摩尔吸光系数max 很大。
➢ n*跃迁：发生在含有杂原子（O、N、S、P 、卤素等）的不饱和化合物中，其最大摩尔吸 光系数max 比较小。
二、常用术语
➢ *生色团：分子中可以吸收光子产生电子跃迁的基团 。含有键的不饱和基团
➢ *助色团：有些基团本身没有生色作用，但却能增强 生色团的生色能力，即它们与生色团相连时，会使其 吸收带最大吸收波长发生红移，并且增加其强度。通 常是带有非键电子对的杂原子的饱和基团，如-OH、 -NH2、-OR、-SH、-SR、-Cl、-Br、-I等。
不需参比液(消除了由于参比池的不同和制备空白溶液等产生 的误差)、克服了电源不稳而产生的误差，灵敏度高。
（4）光多道二极管阵列检测分光光度计
具有快速扫描的特点
可在0.1秒内获得190～ 820nm范围的全光光谱。 用于追踪化学反应的反应 动力学研究。 操作简单，只需将样品放 入无盖开放式样品室，并 点击“开始”即可。
音：
1 暗噪音：检测器与放大电路等各部件不确定性引起。
2 讯号噪音：亦称讯号散粒噪音 电子跃迁的不相等性
测量光强的不确定性
c 0.434K 1 1 c lgT T
➢ 当相对误差 c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.4343。即当 A=0.4343 时，误差最小！
➢ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程l 来控制 A 的读数在 0.2~0.7 范围内。
2. 杂散光 从单色器得到的单色光中与所需波长相 隔较远的光。
3. 散射光与反射光 使透光强度减弱 ，吸光度值偏高。
4. 非平行光 使l 增大影响测量值
（三）透光率测量误差T
由于光源不稳定性、读数不准等带来的误差。
紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法1 简述紫外-可见分光光度法是在190-800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和含量测定的方法。
定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若该物质本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查。
物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200〜400nm）或可见光区（400〜850nm）产生吸收。
通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190~900nm。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外-可见分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为:A=log -1=ECL式中A为吸光度；T为透光率；E为吸收系数；C为溶液浓度；L为光路长度。
如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为lcm，相应的吸光度即为吸收系数以E1%表示。
如溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为lcm 1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以表示。
2仪器紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。
单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件，聚焦透镜或反射镜等组成。
色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200〜400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。
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用不加显色剂的溶液作为参比溶液。
多组分的测定
对朗伯—比尔定律的偏离
I 01 I 02 I 01 I 02 A lg lg I t1 I t 2 I 01 10 λ1bc I 02 10 λ 2bc
λ1 λ 2
A 1bc或 A 2bc
λ1 λ 2
A 1bc或 A 2bc
κ相差越大，对比尔定律的偏离越严重。
对朗伯—比尔定律的偏离
使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的 “单色 光”，使标准曲线有较宽的线性范围。 入射光波长选择在被测物质的最大吸收处，保证测定 有较高的灵敏度，此处的吸收曲线较为平坦，在此最 大吸收波长附近各波长的光的κ值大体相等，由于非单 色光引起的偏离要比在其他波长处小得多。 测定时应选择适当的浓度范围，使吸光度读数在标准 曲线的线性范围内。
光吸收曲线
测定某种物质对不同波长单 色光的吸收程度，以波长为横坐 标，吸光度为纵坐标作图。 KMnO4溶液对波长525nm 附近的绿色光吸收最强，而对紫 色光吸收最弱。光吸收程度最大 处的叫做最大吸收波长，用max 表示。不同浓度的KMnO4溶液 所得的吸收曲线都相似，其最大 吸收波长不变，只是相应的吸光 度大小不同。
黄
橙
紫 紫红
物质对光的选择性吸收
溶液有颜色的原因
当一束白光照射都某一溶液上时，如果溶液不吸收任何波长 的可见光，则组成白色的各色光将全部透过溶液，此时溶液 无色。 如果溶液选择性的吸收了某一颜色的可见光，则只有其余颜 色的光透过溶液，透射光中除了仍然两两互补组成的白光外， 还有未配对的被吸收光的互补光，于是溶液呈现该互补光的 颜色。 例：当白光通过CuSO4溶液时，Cu2+选择性地吸收了黄色光， 使透射光中的蓝色光失去了其互补色，于是溶液呈现蓝色。
分光光度计的基本部件
单色器
作用：将光源发出的连续光谱分解为单色光，并提供 所需波长的光。 单色器是由色散元件、入射狭缝、出射狭缝、准射镜 组成。色散元件是关键性元件，主要有棱镜和光栅两 类。
分光光度计的基本部件
吸收池
即比色皿，是由无色透明、能耐腐蚀的光学玻璃或石英制成， 能透过所需光谱范围的光线。
常用的光电转换器有光电池和光电管。
检测系统应具有灵敏度高、对透过光的响应时间短、且 响应的线性关系好，对不同波长的光具有相同的响应可 靠性。光电倍增管其灵敏度要比光电管约高200倍。
分光光度计的基本部件
读数显示器
作用：把光电流或放大的信号以适当方式显示或记 录下来。检流计的标尺上有两种刻度，等刻度的标 尺是百分透光度T，对数刻度是吸光度A。 透光度和吸光度两者间可互相换算。
朗伯—比尔定律
摩尔吸收系数
当液层厚度l以cm为单位，吸光物质的浓度c以mol/L为单位时, 系数K就以κ表示，称为摩尔吸收系数，单位为L/mol.cm，此 时，朗伯-比尔定律表示为A =κlc. κ的物理意义：当吸光物质的浓度是1 mol/L，液层厚度为1cm 时，某溶液对特定波长的光的吸光度。
κ反映了光度法的灵敏度：κ越大，说明物质对光的吸收能力 越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。
Δc/c
误差的消除
在透光度T为36.8%时，浓度的相对误差有极小值。
为了减小浓度的相对误差，提高测量的准确度，一般 应控制被测液的吸光度A在0.2 ~ 0.7（透光度为65% ~ 20%）。 当溶液的吸光度不在此范围时，可以通过改变称样量、 稀释溶液以及选择不同厚度的比色皿来控制吸光度。
实际测定中选用参比的重要性
物质对光的选择性吸收
光谱名称 X射线 远紫外光 近紫外光 可见光 近红外光 中红外光 远红外光 微波 波长范围 10-1~100nm 10~200nm 200~400nm 400~750nm 0.75~2.5m 2.5~5.0m 5.0~1000m 0.1~100cm 跃迁类型 K和L层电子 中层电子 外层电子 外层电子 分子振动 分子振动 分子转动 分析方法 X射线光谱法 真空紫外光度法 紫外光度法 比色及可见光度法 近红外光谱法 中红外光谱法 微波光谱法
对朗伯—比尔定律的偏离
由于溶液本身的化学反应引起的偏离
溶液中的吸光物质常因解离、缔合、形成新化合物或互变异 构等化学变化而改变其浓度，因而导致偏离朗伯—比尔定律。 解离：大部分有机酸碱的酸式、碱式对光有不同的吸收性质， 溶液的酸度不同，酸(碱)解离程度不同，导致酸式与碱式的比 例改变，使溶液的吸光度发生改变。 络合：显色剂与金属离子生成的是多级络合物，且各级络合物 对 光 的 吸 收 性 质 不 同 ， 例 如 在 Fe(Ⅲ) 与 SCN- 的 络 合 物 中 ， Fe(SCN)3 颜色最深， Fe(SCN)2+ 颜色最浅，故 SCN- 浓度越大， 溶液颜色越深，即吸光度越大。 缔合：例如在酸性条件下，CrO42-会缔合生成Cr2O72-，而它们 对光的吸收有很大的不同。
A lg T lg
I0 Tt
lg100 lg It
常见的几种分光光度计
单波长单光束分光光度计
紫外—可见分光光度测定的方法
工作曲线法
标准溶液的显色和待测试样 的显色要在同一条件下，采 用同等型号的吸收池。
通过参比溶液调零以后，标准曲线经过原点。
紫外—可见分光光度测定的方法
比较法
吸光度的加和性
多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其 吸光度具有加合性，即
A Ai i bci b i ci
i i i
吸光度的加和性定律可用于多组分的分析。
对朗伯—比尔定律的偏离
比尔定律的局限性
比尔定律假设吸收粒子间没有相互作用，因此仅适 用于稀溶液。 高浓度(>0.01 mol/L)情况下，吸收物质分子或离子间 的平均距离缩小，使相邻的吸光微粒的电荷分布相 互影响，从而改变了它对光的吸收能力。从而使吸 光度和浓度之间的线性关系发生偏离。
I0 A lg K 'b It A为吸光度(absorbance);I0为入射光强度; I t为透射光强度;K '为比例常数; b为液层厚度
朗伯—比尔定律
1852年，德国物理学家比尔研究证明了光的吸收程 度与吸光物质的浓度成正比，即
I0 A lg K ''c It K ''为比例常数;c为溶液浓度
朗伯—比尔定律
透光率T（透射比）
入射光 I0 透射光 It
透光率定义：
It T I0
T 取值为0.0 % ~ 100.0 % 全部吸收 T = 0.0 %
全部透射
T = 100.0 %
朗伯—比尔定律
1729年，德国物理学家波格发现物质对光的吸收与吸 光物质的厚度有关。 1760年，朗伯通过实验发现：一束单色光通过吸光物 质后，光的吸收程度与光通过介质的光程(即溶液液 层的厚度)成正比。
根据吸收曲线，入射波长的选择应以溶液的最大吸 收波长为宜。
在此波长处，摩尔吸光系数κ最大，测定的灵敏度最 高。
若干扰物在λmax处也有吸收，在干扰最小的条件下选 择吸光度最大的波长。有时为了消除其它离子的干 扰，也常常加入掩蔽剂。
误差的消除
光度计读数范围的选择
透光度读数误差 ΔT是一个常数，但在 不同的读数范围内所引 起的浓度的相对误差却 是不同的。
将朗伯和比尔的研究成果合并为朗伯—比尔定律， 其数学表达式为
I0 1 A lg Kbc lg It T K为比例常数；c为溶液浓度；b为溶液厚度
朗伯—比尔定律
I0 1 A lg Klc lg It T K为比例常数；c为溶液浓度；l为溶液厚度
物理意义：一束单色光通过含有吸光物质的溶液后，溶液的 吸光度与吸收物质的浓度及吸收层厚度成正比。这是吸光光度 法定量测定的依据。 比例常数K与吸光物质的性质，入射光的波长及温度等因素有 关。当c的单位为g· L-1，b的单位为cm时，K以a表示，称为吸光 系数，其单位为L· g-1· cm-1，该常数称为吸光系数。
紫外—可见 分光光度法
岳阳职业技术学院 黎玄哲
第九章 紫外—可见分光光度法
概述 光吸收的基本定律 紫外—可见分光光度计 紫外—可见分光光度测定的方法 紫外—可见分光光度法的误差和测量条件的选择 紫外—可见分光光度法应用实例
分光光度法概述
基于物质吸收紫外或可见光引起分子中价电子 跃迁、产生分子吸收光谱与物质组分之间的关 系建立起来的分析方法，称为紫外可见分光光 度法
可见光区用玻璃吸收池，紫外光区用石英吸收池。
每台仪器配有液层厚度为0.5 cm、1.0 cm、2.0 cm、3.0 cm等一 套规格的比色皿。 使用时注意吸收池放置位置，使其透光面垂直于光束方向。 保持吸收池的光洁，并要注意透光面不受磨损。
分光光度计的基本部件
检测系统
是一种光电转换元件，利用光电效应使透过光强度转换 为电流进行测量。
对朗伯—比尔定律的偏离
非单色光引起的偏离
设入射光由 1 和 2 两种波长的光组成，溶液的吸光质点 对两种波长的光的吸收均遵从吸收定律。 1 2 1 + 2
I 01 A1 lg 1bc I t1 I 01 10 λ1bc I t1 I 02 A2 lg λ 2bc I t 2 I 02 10 λ 2bc It 2 I 01 I 02 I 01 I 02 A lg lg λ1bc λ 2bc I t1 I t 2 I 01 10 I 02 10
A a样 样品含量 100% c b 100% a标 a标
分光光度法仪器测量误差
入射光源的不稳定
吸收池玻璃的厚薄不均匀
池壁不够平行 表面有水迹、油污或划痕等 光电池不灵敏、疲劳现象和检流计的刻度不准确等 以上因素造成的测量误差的总和，最后表现为产生 透光度读数误差ΔT