凋亡抵抗与人肝癌细胞对紫杉醇耐药关系的研究
细胞凋亡和抗凋亡机制的研究及其在肿瘤治疗中的应用
细胞凋亡和抗凋亡机制的研究及其在肿瘤治疗中的应用细胞凋亡是一种体内细胞自主死亡的过程，是机体为了保持内环境稳定而采取的一种重要性状。
细胞凋亡可以通过特定的信号传导途径调节和实现，其过程包括形态变化、核小体碎裂以及噬菌体形成等。
细胞凋亡在机体的很多生理过程中都发挥着重要的作用，例如胚胎发育、生殖细胞分化以及免疫系统调节等。
同时，细胞凋亡也是一种控制肿瘤细胞生长的机制。
一些癌症细胞对细胞凋亡的控制失去了平衡，导致这些细胞在体内过度增殖、形成肿瘤。
因此，控制癌细胞的凋亡是肿瘤治疗的重要手段之一。
在控制细胞凋亡的调节机制中，参与的信号通路主要包括内源性和外源性两类。
内源性通路由于细胞的生理过程和受到的压力而发挥作用，主要包括线粒体相关通路、内隐凋亡途径等。
而外部刺激，例如细胞的激素变化、药物治疗等，都会影响细胞凋亡的发生和进程。
研究发现，肿瘤细胞通常具有减少细胞凋亡的特点，这是癌细胞能够在体内长期存留的重要原因之一。
因此，控制肿瘤细胞凋亡的机制，可以有效地治疗肿瘤。
抗凋亡机制是细胞针对环境压力产生的一种应激反应，主要包括促进细胞增殖、迟延细胞凋亡等。
在癌症治疗中，抗凋亡机制的研究也受到了关注。
未来的肿瘤治疗策略可能会结合控制细胞凋亡和干扰抗凋亡机制，来更有效地治疗肿瘤。
通过对细胞凋亡和抗凋亡机制的研究，在肿瘤治疗中可以采取多种策略。
例如，通过特定的药物治疗激活细胞凋亡通路，来促进肿瘤细胞的死亡。
又例如，通过细胞免疫疗法激活机体免疫系统，抑制肿瘤细胞的增殖和生长等。
总的来说，细胞凋亡和抗凋亡机制的研究，不仅有助于我们理解生命过程中的一些基本规律，还可以为肿瘤治疗提供有效的思路和方法。
未来，我们期待更多科学家的加入，为细胞凋亡和抗凋亡机制的研究提供更加深入的探索和解释。
细胞凋亡与癌细胞耐药性研究
细胞凋亡与癌细胞耐药性研究细胞凋亡是一个重要的细胞死亡机制，它在维持组织稳态、预防癌症发展和抵抗病原体感染等方面起着关键作用。
然而，癌细胞对细胞凋亡的逃逸是导致癌症发展和治疗失败的重要原因之一。
近年来，研究人员致力于探索细胞凋亡与癌细胞耐药性之间的关系，并寻求新的治疗策略以克服耐药性问题。
一、细胞凋亡的机制细胞凋亡，又称程序性细胞死亡，是一种高度调控的自杀程序。
在正常情况下，细胞凋亡通过激活信号通路或遗传调控来实现。
这些调控因子包括凋亡相关蛋白（如Bax、Bcl-2等）、半胱氨酸蛋白酶（如caspase家族成员）以及DNA损伤传感器等。
细胞凋亡过程中，细胞核出现DNA断裂和染色质凝集的特征，细胞膜发生变化并最终破裂。
二、癌细胞耐药性的机制癌细胞耐药性指的是癌症患者在接受化疗或放疗时，癌细胞对抗治疗药物的能力增强，导致治疗效果降低或失效。
癌细胞耐药性可以通过多种途径获得，包括多药耐药转运蛋白的表达增加、细胞凋亡通路的改变、DNA修复能力的提高以及肿瘤微环境的影响等。
这些因素共同作用，使癌细胞克服治疗的压力，生存下来并继续扩增。
三、细胞凋亡与癌细胞耐药性之间的关系细胞凋亡的抑制和癌细胞耐药性之间存在紧密联系。
研究发现，细胞凋亡途径的异常激活或变异可以导致肿瘤细胞对化疗药物的耐药性增加。
例如，Bcl-2家族蛋白的过度表达会抑制细胞凋亡的发生，从而使癌细胞对化疗药物产生耐药性。
此外，一些细胞凋亡途径的调控因子在癌细胞中发生突变，也会使癌细胞对治疗产生抗性。
四、克服癌细胞耐药性的策略针对癌细胞耐药性的挑战，研究人员提出了多种新的治疗策略。
1. 多靶点联合治疗：通过联合使用多种药物或靶向剂，同时作用于细胞凋亡途径的不同环节，以增加治疗的有效性。
2. 调亡原基因治疗：通过基因编辑技术或基因传递技术，修复或激活细胞凋亡途径中的异常基因，恢复细胞对治疗的敏感性。
3. 免疫疗法：利用免疫系统识别和攻击癌细胞，增强机体对癌细胞的抗肿瘤免疫反应。
凋亡抵抗在人肺腺癌SPC-A1／多西紫杉醇细胞系耐药机制中的作用
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１ ２１ ・
第２卷 １
第 ２期
医 学 研 究 生 学 报
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论
著 ・
凋 亡抵 抗在 人 肺 腺 癌 Ｓ Ｃ． ／ Ｐ Ａ１ 多西 紫杉 醇 细 胞 系耐 药机 制 中 的作 用
细胞凋亡机制在肺癌中的研究进展
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Cell癌细胞“凋而不亡”，科学家揭示耐药持久性癌细胞产生的新机制！
Cell癌细胞“凋而不亡”，科学家揭示耐药持久性癌细胞产生的新机制！抗癌治疗产生耐药性的原因除了遗传性改变，另一个主要原因是持久性耐药细胞的产生。
持久性细胞（PS）获得非突变的瞬时药物耐受表型，在靶向和常规治疗过程中逃避凋亡。
PS在功能上可定义为细胞死亡诱导处理后没有发生耐药突变仍存活的细胞，其表型特征已基本研究清楚，包括：1）瞬时性耐药；2）对脂质过氧化物酶GPX4的依赖性；3）减少细胞周期动力学；4）相似的基因表达谱，统称为EMT（上皮间质转化）特征。
但是，PS在促凋亡的抗癌药物中存活的分子机制还不清楚。
FOREWORD2022年9月，圣裘德儿童研究医院的Douglas R.Green团队在《Cell》上发表了题为“Sublethal cytochrome c release generates drug-tolerant persister cells”的文章。
该研究发现使用促凋亡BH3类似物处理后仍存活的癌细胞是通过亚致死性线粒体外膜通透（MOMP）和细胞色素c诱导产生应激反应而存活下来的，但这种应激反应与caspases无关。
癌细胞因此获得一种持久性状态，能够促进体内转移。
原文链接：/10.1016/j.cell.2022.07.025文章中用于荧光辅助细胞筛选分析的GFP-Booster Alexa Fluor®488、RFP-Booster Alexa Fluor® 568，以及用于免疫沉淀的GFP-Trap® Magnetic Agarose均来源于Proteintech旗下品牌Chromotek。
研究内容细胞凋亡可被外在死亡受体途径和内在线粒体途径诱导。
其中内在线粒体途径的关键步骤是线粒体外膜通透性改变，该过程由BCL2家族效应蛋白BAX、BAK、BOX负责。
线粒体外膜渗透（MOMP）发生后，线粒体蛋白（如细胞色素c）被释放到胞质，激活caspase启动细胞凋亡。
紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响
EGCG联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响作者：王江红， 徐莉， 董扬， 郭述良， WANG Jianghong， XU Li， DONG Yang， GUOShuliang作者单位：重庆医科大学附属第一医院呼吸内科,重庆,400016刊名：重庆医科大学学报英文刊名：Journal of Chongqing Medical University年，卷(期)：2012,37(4)被引用次数：1次参考文献(15条)1.Sarcevi(c) B Apoptosis in tumors 2009(z2)2.Burz C;Berindan-Neagoe I;Balacescu O Apoptosis in cancer:key molecular signaling pathways and therapy targets 2009(06)3.Khan N;Mukhtar H Multitargeted therapy of cancer by green tea polyphenols 2008(02)4.Wu A H;Tsenq C C;Van Den Berq D Tea intake,COMT genotype and breast cancer in Asian-American women 2003(21)5.Luo T;Wang J;Yin Y(-)-Epigallocatechin gallate sensitizes breast cancer cells to paclitaxel in a murine model of breast carcinoma[外文期刊] 2010(01)6.Sarkadi B;Homolya L;Szakács G Human mutidrug resistance ABCB and ABCG transporters:participationin a chemoimnunity defense system 2006(04)7.Khan N;Adhami V M;Mukhtar H Renew:grcen tea polyphenols in chemoprevention of prostatecancer:preclinical and clinical studies 2009(06)8.潘宏铭;吴金民;郑树茶多酚对二甲基肼诱发小鼠大肠肿瘤的抑制作用 2005(06)9.Shimizu M;Deguchi A;Joe A K EGCG inhibits activation of HER3 and expression of cyclooxygenase-2 in human colon cancer cells 2005(01)10.Jung Y D;Kim M S;Shin B A EGCG,a major component of green tea,inhibits tumour growth byinhibiting VEGF induction in human colon carcinoma cells 2001(06)11.唐旭东;周新;李刚绿茶提取物EGCG对肺癌细胞HIF-Iα和VEGF表达的影响 2009(02)12.Fabregat I Dysregulation of apoptosis in hepatocellular carcinoma cells[期刊论文]-World Journal of Gastroenterology 2009(05)13.Schr(o)der M;Sutcliffe L Consequences of stress in the secretary pathway:the ER stress response and its role in the metabolic syndrome 201014.Meares G P;Zmijewska A A;Jope R S HSP105 interacts with GRP78 and GSK3 and promotes ER stress-induced caspase-3 activation 2008(02)15.Ermakova S P;Kang B S;Choi B Y(-)-Epigallocatechin gallate ovcrcomes resistance to etoposide-induced cell death by targeting the molecular chaperone glucose-regulated protein 78 2006(18)引证文献(1条)1.罗居东.薜姣.葛欣.葛杨杨.曹建平.张舒羽PPARα活化增加肿瘤细胞对EGCG的敏感性的机制[期刊论文]-科技导报 2013(27)本文链接：/Periodical_cqykdxxb201204005.aspx。
多烯紫杉醇对人胆管癌细胞和胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响
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介 入 放 射学 杂 志 ２ １ ０ ０年 １月 第 ｌ ９卷 第 １期
ＪＩｔｒｅ ｔ ａ ｉｌ ０ ０ ｏ．９ ｏ１ ｎｅｖ ｎ ｄｏ ２ １ ，Ｖ １ ，Ｎ ． Ｒ １
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实验 研究
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多烯紫杉醇对人胆管癌细胞和胰腺癌细胞 增 殖 和凋亡 的影 响
的凋 亡 （ ＣＣ： ０ ００ ＨＣ ｘ ＝３ ．５，Ｐ＜００ ；ＢＸ Ｃ一 ： ＝２ ．２，Ｐ＜０叭 ） 结 论 多 烯 紫 杉 醇有 抑 制 Ｂ Ｃ ３ ．１ Ｐ ３ｘ ５２ ． 。 ＸＰ 一
Hale Waihona Puke 和 Ｈ Ｃ ． ８ ０的增殖 并 诱 导 肿 瘤细 胞 凋 亡 的作 用 。 Ｃ Ｃ９ １
【 键 词 】 胰 腺 癌 ； 管 细胞 癌 ； 烯 紫杉 醇 ； 殖 ； 亡 关 胆 多 增 凋
ｐ ｎ ｒ ａｉ ｃ ｎ ｅ ｅ ｎ Ｓ Ａ ｎ －ｉ Ｈ Ｎ ａ ，Ｇ ０ Ｘ ａ — ｎ ，Ｔ ＮＧ Ｊ ｎ ｕ ，Ｘ ， ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｃ ｒｃ ｌ ｌ ｅ Ｈ ＮＧ Ｍｉ ｙ ，Ｚ Ａ Ｇ Ｙ ｎ Ａ ｉ ｌ ｇ Ａ ｕ － ｎ Ｉｐ 册 ｃ ｌｉ ｇ ｏｏ ｊ
尚鸣异 ， 张 岩 ， 高晓龙 ， 唐俊 军 ， 席 芊 ， 黄 宗 良， 胡 美玉 ， 王培 军
【 要 】 目的 摘
评 价 多 烯 紫杉 醇 对 人 胆 管 癌 细胞 ＨＣ Ｃ９ １ Ｃ 一８０和胰 腺 癌 细 胞 Ｂ Ｐ 一 增 殖 和凋 亡 Ｘ Ｃ３的
影响， 为药 物 涂 层支 架 治 疗恶 性 梗 阻 性黄 疸 的 应用 提 供 实 验 基础 。方 法 应 用 四硝 基 偶 氮 唑蓝 法 测定 紫
细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展
争议焦点
2、细胞凋亡是否是治疗肿瘤的有效途径？虽然一些药物可以通过诱导细胞凋 亡来治疗肿瘤，但并非所有肿瘤都对细胞凋亡敏感。因此，研究新的药物作用机 制和治疗策略是必要的。
未来展望
未来展望
未来关于细胞凋亡和肿瘤关系的研究，可能集中在以下几个方向： 1、深入探究细胞凋亡和肿瘤发生的内在，以及各种影响因素的作用机制。这 有助于更准确地预测和预防肿瘤的发生，为早期诊断和治疗提供新思路。
PI3K/Akt信号通路与肿瘤细胞凋亡关系的研究进展
PI3K/Akt信号通路在正常细胞中起着重要的生理作用，如调节细胞生长、增 殖和存活。然而，在许多肿瘤细胞中，这条通路的异常激活往往会导致细胞的异 常增殖和生存，从而促进肿瘤的发生和发展。
PI3K/Akt信号通路与肿瘤细胞凋亡关系的研究进展
近年来，对于PI3K/Akt信号通路与肿瘤细胞凋亡关系的研究已经成为肿瘤研 究的一个重要方向。一方面，研究者们正在寻找直接针对PI3K/Akt信号通路的药 物，以期能够阻断或逆转肿瘤细胞的异常增殖和生存。另一方面，研究者们也在 尝试通过调控PI3K/Akt信号通路来激活肿瘤细胞的自噬和凋亡，从而达到治疗肿 瘤的目的。
PI3K/Akt信号通路与肿瘤细胞凋亡关系的研究进展
PI3K（Phosphatidylinositol 3-kinase）是一种在细胞内合成代谢中起关 键作用的酶，它能将磷脂酰肌醇转化为磷脂酰肌醇-3-磷酸。而Akt（也被称为蛋 白激酶B）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，它可以被PI3K激活，并进一步影响下 游分子的活性，从而影响细胞的生命周期和生存。
四、结论
四、结论
细胞凋亡、细胞程序性坏死和细胞焦亡是细胞死亡的三种主要形式，它们在 疾病的发生发展和治疗中扮演着重要角色。然而，目前这三种细胞死亡方式的研 究仍面临许多挑战和问题。例如，它们的具体机制仍有许多未知、缺乏特异性的 调控手段以及在临床应用中的局限性等。因此，未来需要进一步深入研究这些细 胞死亡方式的分子机制和调控网络，以期发现新的治疗靶点和策略，为人类健康 提供更好的保障。
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浙江中医药大学学报２０１５年２月第３９卷第２期JOURNAL OF ZHEJIANG CHINESE MEDICAL UNIVERSITY VOL. 39 NO .２Feb.２０１５凋亡抵抗与人肝癌细胞对紫杉醇耐药关系的研究周明杰韩子午范春雷钱颖田男浙江中医药大学生命科学学院杭州310053摘要：[目的]体外建立紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）耐药的人肝癌细胞株Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ，并以此为模型对凋亡抵抗现象与紫杉醇耐药的相关性进行研究。
[方法]采用浓度梯度间歇刺激法建立Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ耐药细胞株，ＭＴＴ法检测Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ对紫杉醇的耐药性，流式细胞术检测Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ的细胞凋亡水平，荧光定量ＰＣＲ检测Ｈｅｐ３Ｂ和Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ细胞株中Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８和ｃａｓｐａｓｅ９基因的表达水平，蛋白质免疫印迹（Wｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）检测Ｈｅｐ３Ｂ、Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ细胞株中Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８和ｃａｓｐａｓｅ９的蛋白表达。
[结果]Ｈｅｐ３Ｂ细胞对紫杉醇的ＩＣ５０为０．２ｍΜ，而耐药细胞株Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ对紫杉醇的ＩＣ５０升为４．３３μＭ。
耐药指数（ＲＩ）为２１．６５。
流式细胞术结果显示，０．１μＭ、０．２μＭ紫杉醇处理２４ｈ后，亲本细胞Ｈｅｐ３Ｂ的凋亡率显著高于耐药细胞株Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ。
ＲＴ－ＰＣＲ结果显示，与Ｈｅｐ３Ｂ细胞株相比，Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ细胞株中Ｂｃｌ－２ｍＲＮA的表达量显著升高（P<０．０１），而ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８、ｃａｓｐａｓｅ９和ＢａｘｍＲＮA的表达量显著降低（P<０．０１）。
Wｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ实验结果显示，与Ｈｅｐ３Ｂ细胞株相比，Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ耐药细胞株的抗凋亡蛋白Ｂｃｌ－２的表达量显著升高，相关促凋亡蛋白ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８、ｃａｓｐａｓｅ９和Ｂａｘ的表达量降低。
[结论]成功建立紫杉醇耐药的人肝癌细胞株Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ，人肝癌细胞株Ｈｅｐ３Ｂ对紫杉醇耐药的产生与改变凋亡相关因子的表达而导致的凋亡抵抗现象有关。
关键词：凋亡抵抗；原发性肝癌；紫杉醇耐药；线粒体中图分类号：R331文献标识码：Ａ文章编号：1005－5509（2015）02－0128－05DOI:10.16466/j.iｓｓｎ1005－5509.2015.02.015Ｔhe RelatioｎｓhiｐｂetweeｎＡｐoｐtoｓiｓReｓiｓtaｎce aｎdＰaclitaｘel－reｓiｓtaｎt iｎHｕｍaｎHeｐatoｍaＣell Liｎe Heｐ3BＺｈｏｕＭｉｎｇｊｉｅ,ＨａｎＺｉｗｕ,ＦａｎＣｈｕｎｌｅｉ,ｅｔａｌCollege of Life Science,Zhejiang Traditional Chinese Medical University,Hangzhou(310053),ChinaＡｂｓtract:[Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ]Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｔａｘｏｌ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔａｘｏｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．[Ｍｅｔｈｏｄｓ]ＴｈｅｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐ３ＢｗａｓｃｕｌｔｕｒｅｄｂｙｇｒａｄｕａｌｌｙｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｄｏｓｅｏｆｔａｘｏｌｔｏｇｅｎｅｒａｔｅｉｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸ．ＴｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｎｄｅｘｏｆＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸｔｏｔａｘｏｌｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ，ａｎｄｉｔｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｅｒｓ，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｍＲＮAｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＢｃｌ－２,ｃａｓｐａｓｅ３,ｃａｓｐａｓｅ８,ｃａｓｐａｓｅ９ａｎｄＢａｘｉｎＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸａｎｄＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｓ，ａｎｄWｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｏｆＢｃｌ－２,ｃａｓｐａｓｅ３,ｃａｓｐａｓｅ８,ｃａｓｐａｓｅ９ａｎｄＢａｘｉｎＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸａｎｄＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｓ．[Ｒｅｓｕｌｔｓ]ＴｈｅＩＣ５０ｏｆｔｈｅｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐ３Ｂｔｏｔａｘｏｌｉｓ０．２ｍＭ，ｂｕｔｔｈｅｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸｒｏｓｅｔｏ４．３３μＭ，ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｎｄｅｘｏｆｔａｘｏｌ（ＲＩ）ｗａｓ２１．６５．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｅｒｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｏｆＨｅｐ３ＢｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸ，ａｆｔｅｒｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｔａｘｏｌ（０．１μＭ，０．２μＭ）ｆｏｒ２４ｈ．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｅｌｌｏｆＨｅｐ３Ｂ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃｌ－２ｈａｄ,ａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｉｎＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸ(P<０．０１),ｗｈｉｌｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｓｐａｓｅ３,ｃａｓｐａｓｅ８,ｃａｓｐａｓｅ９ａｎｄＢａｘｉｎＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸｗａｓｒｅｄｕｃｅｄ(P<０．０１)．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｔｈｅWｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇａｓｓａｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＢｃｌ－２ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｓｕｃｈａｓｃａｓｐａｓｅ３,ｃａｓｐａｓｅ８,ｃａｓｐａｓｅ９ａｎｄＢａｘｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｉｎＨｅｐ３Ｂ/ＴAＸ．[Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ]Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸｃｅｌｌｌｉｎｅｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＴｈｅｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆＨｅｐ３Ｂｃｅｌｌｌｉｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｔａｘｏｌｗａｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｓｉｓｗｈｉｃｈｃａｕｓｅｄｂｙｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ．Keｙwordｓ:ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ;ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ;ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ;ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ肝癌是临床上常见的恶性肿瘤，据最新统计，全世界新发肝癌患者每年约６０万，居恶性肿瘤的第５位，肝癌因此被称为“肿瘤之王”[１－２]。
紫杉醇（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ，又名Ｔａｘｏｌ）是近年来发现的一种纯天然抗肿瘤的化合物，紫杉醇对乳腺癌、肺癌、卵巢癌等作用显著，对原发性肝癌却没有明显疗效，经研究发现此现象是由于肝癌的耐药性使其对紫杉醇并不敏感，严重影响治疗效果[３－５]。
在导致肿瘤细胞耐药的诸多因素中，抗凋亡机制是近年来的研究热点[６－８]。
ＳＵＮＦｅｉ等的研究表明细胞凋亡抵抗与肿瘤多药耐药（ＭＤＲ）的形成具有重要联系。
凋亡抵抗即细胞抗凋亡能力提高的现象，如抗凋亡基因过表达或促凋亡基因丢失等[９]。
为了探讨凋亡抵抗在人肝癌细胞对紫杉醇耐药中的作用，本研究通过体外逐步增加紫杉醇浓度法，建立了人肝癌紫杉醇耐药细胞株Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ并对其生物学特征作了初步探讨。
通过比较紫杉醇耐药细胞株Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ与亲本细胞株Ｈｅｐ３Ｂ中凋亡相关蛋白Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８和ｃａｓｐａｓｅ９的表达量的差异，探讨凋亡抵抗与人肝癌细胞对紫杉醇耐药的关系。
1材料和方法1.1试剂及药物ＤＭＥＭ高糖培养基、胎牛血清以———————————————基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（２０１３３３２２１２０００２）；浙江中医药大学校级重点项目（２０１３２２０８）Ｆｕｎｄｐｒｏｊｅｃｔｓ：ＳｐｅｃｉａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｏｃｔｏｒａｌＰｒｏｇｒａｍｏｆＣｏｌｌｅｇｅｓａｎｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ(２０１３３３２２１２０００２)；KｅｙＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＺｈｅｊｉａｎｇＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ(２０１３２２０８)通讯作者：田男，Ｅ－ｍａｉｌ:ｔｉａｎｎａｎｌｕｘ＠１２６．ｃｏｍ浙江中医药大学学报２０１５年２月第３９卷第２期及胰酶购于南京凯基生物科技发展有限公司；化疗药物紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）购于天津一方科技有限公司；凯基ＭＴＴ细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒、凯基AｎｎｅｘｉｎV－ＦＩＴＣ细胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司；ＨｉＦｉ－ＭＭＬVｃＤＮA第一链合成试剂盒、ＵｌｔｒａＳＹＢＲＭｉｘｔｕｒｅ、Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮA提取试剂购自北京康为世纪生物科技有限公司；ＨＲＰ标记山羊抗兔ＩｇＧ二抗、ＨＲＰ标记山羊抗鼠ＩｇＧ二抗；Ｂａｘ兔ＩｇＧ抗体、ｃａｓｐａｓｅ９兔ＩｇＧ抗体和ｃａｓｐａｓｅ３兔ＩｇＧ抗体购于杭州华安生物技术有限公司，ｃａｓｐａｓｅ８兔ＩｇＧ抗体、Ｂｃｌ－２兔ＩｇＧ抗体和β－ａｃｔｉｎ鼠ＩｇＧ抗体购于武汉博士德生物工程有限公司；牛血清白蛋白、细胞总蛋白抽提试剂盒、ＢＣA蛋白浓度测定试剂盒和超敏ＥＣＬ化学发光试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司；ＰVＤＦ膜购于杭州昊天生物技术有限公司；ＧｕａｖａＮｅｘｉｎＲｅａｇｅｎｔ细胞凋亡试剂购自Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司。
1.2Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ耐药细胞系的建立人肝癌Ｈｅｐ３Ｂ细胞株购自杭州昊天生物技术有限公司；Ｈｅｐ３Ｂ细胞用ＤＭＥＭ培养基（含１０%胎牛血清、青霉素１００Ｕ·ｍＬ－１、链霉素１００μｇ·ｍＬ－１）于二氧化碳培养箱３７℃、５%ＣＯ２中进行培养。
采用浓度梯度间歇刺激法诱导Ｈｅｐ３Ｂ细胞，使其对紫杉醇产生耐药性。
具体方法如下：取对数生长期的Ｈｅｐ３Ｂ细胞培养在含有紫杉醇的ＤＭＥＭ培养基中，从低浓度０．０５μＭ开始筛选。
作用２４ｈ后去除含药培养基，用Ｄ－ｈａｎｋｓ液洗３次后加入新鲜培养基继续培养，期间反复换液、传代，待细胞恢复对数生长后再次使用０．０５μＭ筛选１次。
之后逐步提高作用药物浓度，逐次用０．１、０．１５、０．２μＭ各筛选３次，筛选１０个月后，获得人肝癌紫杉醇耐药细胞系Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ。
筛选成功后，Ｈｅｐ３Ｂ/ＴAＸ细胞一直培养在含低浓度紫杉醇（０．０２μＭ）的ＤＭＥＭ培养基中。