总蛋白性能验证
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价吴文钦（广东医学院医学检验学院广东-东莞 523808）摘要：目的对双缩尿法测定血清总蛋白进行方法性能评价，达到提高分析方法质量的目的。
方法配制双缩脲试剂，并用所配制的双缩脲试剂与标准血清总蛋白进行批内重复性试验、回收试验以及线性范围评价试验，从而评价双缩尿法测定血清总蛋白的精密度、准确度和线性范围。
结果用分光光度计测定波540nm 处的吸光度A，进行相关数据分析，双缩脲法测定血清总蛋白的批内重复性试验的变异系数 CV%为2.36%，回收试验平均回收率为105%，线性范围评价试验R2为0.9980。
结论在严格规范操作下，双缩脲法测定血清总蛋白的精密度高，准确度以及线性范围较好，满足临床对血清总蛋白定量测定要求，是临床测定血清总蛋白的常规方法。
关键词：双缩脲法；血清总蛋白；方法学评价Biuret method was developed for the determination of protein evaluation methodologyAbstract Objective The purpose of the double reduction of urine protein determination of serum total performance evaluation methods, to improve the quality of analytical methods.Methods Biuret test preparation, and formulated with the biuret test standard serum total protein in the assay reproducibility test, recovery test and linear range of evaluation test to evaluate the double reduction of urine assay precision of serum total protein, accuracy and linear range.Results A spectrophotometer absorbance at 540nm wave, the associated data analysis, determination of intra-assay coefficient of variation of total serum protein test reproducibility CV% was 2.36%, the average recovery recovery test 105% biuret method, linear evaluation test range R2 is 0.9980.Conclusion In the strictly regulate the operation, biuret serum total protein, high precision, accuracy and linearity better meet the clinical requirements for quantitative determination of total serum protein, serum total protein conventional methods of clinical measurement.Key words Biuret method; Total serum protein; Evaluation Methodology为满足临床医疗对实验室检验的不断要求，实验室需要不断引进新方法或者改进原有的方法。
检验科生化总蛋白测定的标准规程
总蛋白测定的标准规程【目的】体外检测血清中总蛋白（TP ）的含量。
【职责】1. 实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。
2. 本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】 1. 受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况。
孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。
此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2. 静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机 一、检测原理本试剂采用双缩脲反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物。
反应中生成的蓝紫色络合物与样本中总蛋白浓度成正比。
通过在540nm 处测定吸光度值的变化值，即可测得样本中总蛋白的浓度。
二、试剂 1. 试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司TP 试剂盒，为液体单试剂，其各组分如下：硫酸铜12 mmol/L 酒石酸钾钠64 mmol/L 6 mmol/L2 mmol/L碘化钾 氢氧化钠测定：酒石酸钾钠＞5g/L试剂：硫酸铜＞2g/L 、碘化钾》1g/L 、NaOH ＞30g/L 2. 校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号: 449 5 0/4 5 9 5 0对测定进行校准。
2. 2校准间隔2. 2. 1试剂批号变更时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
2. 2. 2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。
总蛋白的测定
总蛋白的测定1.原理；在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽链与铜离子络合形成紫红色化合物。
2.标本采集与处理：2.1受检者准备：病人必须空腹12小时，不饮酒24小时后采集血样。
2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般采血取坐位，从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带；2.3标本拒收：标本应无溶血，对不符合要求的标本，应重新采集。
2.4采血管要求:采血时要求使用一次性无菌注射器，一人一管，用后毁形，用500mg/L有效氯浸泡消毒３０分钟，回收、焚烧、做好登记。
3.试剂：3.1试剂组成：（柏定生物工程（北京）有限公司）NaoH 0.6 mol/L酒石酸钾钠32mmol/L碘化钾20mmol/L硫酸铜12mmol/L3.2标准液：70g/L3.3质控血清：应在测量未知样本的同时检测质控物并确保质控在可接受的范围内，并且结果必须在三个标准差范围内。
3.3.1质控品批号及范围:批号022431，范围*±2st和*±3s。
3.3.2保存环境:在2—8℃保存，有效期内稳定。
3.4试剂的贮存与稳定性：试剂在2—8℃保存，有效期内稳定。
4.仪器：上海迅达公司的半自动生化分析仪XD811。
5.操作程序：5.1分析参数：温度：20—25℃比色杯光径：1cm5.2操作步骤：6.计算方法：样品中总蛋白浓度A样品C= ×C标准（g/L）A标准7.操作性能：线性范围100g/L，如超出此范围，可用生理盐水稀释样品，结果乘以稀释乘倍数。
8、参考值：66——87g/L9、结果审核：9．1室内质控结果的判断：对质控结果进行分析是否在控。
9．2对检验结果进行审核，包括检验项目是否漏项，打印是否清楚。
10．临床意义：高热、腹泻、呕吐、休克各种因素引起钠潴留，营养不良、肝脏疾病中华人民共和国卫生部医政司。
总蛋白测定试剂(盒)产品技术审查规范
总蛋白测定试剂（盒）产品技术审查规范（2016版）本规范旨在指导注册申请人对总蛋白测定试剂（盒）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本规范是对总蛋白测定试剂（盒）的一般要求，申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，并依据产品特性确定其中的具体内容是否适用。
本规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料。
应在遵循相关法规的前提下使用本规范。
本规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本规范相关内容也将进行适时调整。
一、适用范围总蛋白测定试剂（盒）用于体外定量测定人血清或血浆中总蛋白的浓度。
从方法学考虑，本规范主要指基于分光光度法原理，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学实验室采用双缩脲法进行总蛋白定量检验所使用的临床化学体外诊断试剂。
本文不适用于干式总蛋白测定试剂。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号）总蛋白测定试剂（盒）管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。
二、注册申报资料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性方面说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（以下简称《办法》）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）相关要求。
下面着重介绍与总蛋白测定试剂（盒）预期用途有关的临床背景情况。
总蛋白（TP）是血清固体成分中含量最多的一类物质。
在机体中具有重要的生理功能。
Microtech 648 ISO型电泳分析仪测定血清蛋白的性能验证研究及应用
Microtech 648 ISO型电泳分析仪测定血清蛋白的性能验证研究及应用苗玉发;马犇;潘东升;刘芳;汪巨峰;李波【摘要】目的验证Microtech 648 ISO型电泳分析仪的性能,并建立实验动物的血清蛋白电泳参考值.方法用商业质控血清作为测试物,分别测定日内精密度、日间精密度、灵敏度和准确性.结果Alb、α1、α2、β、γ区带的日间CV分别为2.5％、7.4％、7.6％、7.1％、9.9％；在同一膜片上的日内CV值分别为1.6％、8.9％、4.9％、4.6％、5.4％；在不同膜片上的日内CV值分别为3.5％、8.7％、9.3％、9.3％、5.8％；准确度在可接受的范围内；白蛋白和球蛋白的裣测灵敏度分别为1.1g/L和1.2g/L.用验证后的仪器建立了常用实验动物的血清蛋白电泳参考值.结论Microtech 648 ISO型电泳分析仪的性能良好,可以用于实验研究.%Objective To qualify the performance to measure serum protein with Microtech 648 ISO electrophoresis analyzer,and establish reference ranges for serum protein electrophoresis of laboratory animals. Methods Precision, sensitivity and accuracy were analyzed using commercial quality control serum. Results The day to day CV of Alb,α1,α2,β,γ was 2-5%,7.4%,7.6%,7. 1% and 9. 9%, respectively. The within-day CV of Alb,α1,α2,β,γ on the same film was1.6%,8. 9%,4. 9%,4, 6%,5.4%, respectively.The within-day CV ofAlb,α1,α2,β,γ on diff erent films was 3.5%,8.7%,9.3%,9.3%,5.8%, respectively. Accuracy was acceptable, and sensitivity of album and globulin was 1.1g/L and 1. 2g/L. Reference ranges of laboratory animals were established using the qualified electrophoresis analyzer. Conclusion Performance ofMicrotech 648 ISO electrophoresis analyzer is good, and can be used in scientific studies.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2012(041)009【总页数】3页(P37-39)【关键词】电泳;精密度;灵敏度;准确性;参考值【作者】苗玉发;马犇;潘东升;刘芳;汪巨峰;李波【作者单位】100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院【正文语种】中文血清蛋白电泳是根据蛋白质的物理特性对蛋白进行分离的一种方法。
基层医院中生化分析仪的性能验证方法
基层医院中生化分析仪的性能验证方法何乐春;陈福军【摘要】Objective To establish an active and reliable performance verification method for automatic chemistry analyzer. Methods By referring to industry standards, this paper verified tow automatic chemistry analyzers for accuracy, repeatability, linearity range and the sample carry-over. Results Analyzer with slow testing speed was failed in testing accuracy, repeatability; analyzer with high testing speed met all standard requirements. Conclusion Because of the long period of absorbance observation, analyzer with slow testing speed was worse than the high speed analyzer, and performance verification for automatic chemistry analyzer should be carried out by using kinetic assay kit.%目的为基层医院建立一种可行性强、结果可靠的全自动生化分析仪性能验证方法.方法参考全自动生化分析仪行业标准,对两台国产生化仪的准确性、重复性、线性范围和样品污染携带进行检测.结果低测速生化仪在使用速率法试剂时,检测结果的准确性和重复性为不合格;高测速生化仪各项检测结果均合格.结论由于检测周期过长,低速生化仪在同样的时间内监测反应过程吸光度的次数少于高速生化仪,因此参照本文的验证方法时应多使用速率法试剂盒.【期刊名称】《中国医疗设备》【年(卷),期】2018(033)005【总页数】4页(P100-103)【关键词】生化分析仪;准确性;重复性;线性范围;污染携带【作者】何乐春;陈福军【作者单位】重庆医疗器械质量检验中心&重庆市医疗器械质量与安全控制工程技术研究中心,重庆 401147;辽宁省药械审评与监测中心,辽宁沈阳 110006【正文语种】中文【中图分类】R197.39引言生化分析仪对于所有医院的检验科都属于最基本和必不可少的诊断分析仪器。
开放检测系统中检测血清总蛋白的性能验证
开放检测系统中检测血清总蛋白的性能验证摘要】目的：建立自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在开放检测系统中的性能验证和实验方法。
方法：参考美国临床和实验室标准化协会系列文件和相关文献[1]，结合实际工作，设计实验方案[2]。
对在Roche公司的 Modular P的开放检测系统中测定血清总蛋白的精密度、准确度、线性范围、回收试验等进行性能验证[3]。
结果：自配总蛋白试剂在检测低、高浓度质控血清的变异系数均符合原配试剂的相关标准；准确度试验结果在允许范围内；线性范围试验中实测值与理论值呈高度相关；回收率在90%～110%范围内。
结论：在Roche公司的 Modular P中利用开放检测系统使用自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量达到质量要求的标准，对降低检测成本有重要意义。
【关键词】自配总蛋白试剂；开放检测系统；性能验证【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）20-0367-02Roche公司的 Modular P生化分析仪操作简便、检测快速、试剂稳定性好、重复性佳，无污染等优点，是实验室重中之重的仪器之一。
而Roche公司的Modular P除了封闭系统必须使用配套的原装试剂以外，其还设置了少量开放系统可以使用其他厂家的试剂。
这对与一般实验室来说无疑也是一大优点，因为这就意味着可以降低检测成本。
可是其他的试剂能否符合质量的要求还有待实验来验证。
国际标准化组织于2003年颁布的《医学实验室质量和能力的专用要求》作为医学实验室认可的标准，该标准要求申请的实验室应对检测系统的主要分析性能进行验证，证实其能够达到所要求的性能标准。
因此我们结合工作的实际，对自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在Roche公司的 Modular P生化分析仪的开放检测系统中进行精密度、准确度、线性范围、回收试验等性能验证。
1.材料与方法1.1 材料1.1.1仪器 Roche公司的 Modular P生化分析仪。
总蛋白检测验证方案
总蛋白检验方法验证方案编制: 日期：审核: 日期：批准：日期：1.概述验证总蛋白含量测定试验检测方法2.验证目的通过实验验证总蛋白检验检测方法的重复性、中间精密度、重现性、线性、耐用性，确认该检测方法是否适用于本公司生产的产品检验，确保检验结果的准确可靠。
3.验证环境3.1环境洁净度不应低于C级，洁净工作台洁净度为A级。
3.2操作间应保持负压，低于-15Pa。
4.样品信息中农威特猪口蹄疫O、A二价灭活疫苗；生产管理部中间产品5.验证内容（1）重复性（2）中间精密度（3）重现性（4）线性（5）耐用性（6）试验设备及器材6. 试验设备及器材酶标仪（全波长），“M”型96孔板，卡介苗注射器，单通道和多通道移液器，涡旋震荡仪，酶标板振荡器，商品化Lowry法改良试剂盒 7.验证步骤（1）重复性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用同一批次的试剂盒，在同一环境，同一设备，同一操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作用酶标仪完成6次试验，计算样品含量及其标准差。
（2）中间精密度取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用同一批次的试剂盒，在同一环境，同一设备，不同操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作用酶标仪完成6次试验，计算样品含量及其标准差。
（3）重现性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用同一批次的试剂盒，在不同实验室，同一设备，同一操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作完成试验，计算样品含量及其标准差。
（4）线性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶，用同一批次的试剂盒，在相同实验室，同一设备，同一操作者对样品进行1:1、1:2、1:3、1:4、1:5稀释，按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作完成试验，计算样品含量及其标准差。
（5）耐用性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用不同批次的试剂盒，在相同实验室，同一设备，同一操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作完成试验，计算样品含量及其标准差表1 样品中待测成分含量和精密度RSD可接受范围样品成分含量重复性（RDS%）重现性（RDS%）中间精密度（RDS%）100%122 8.验证结果（1）重复性实验结果第二次试验结果第五次试验结果（2）中间精密度实验结果第四次试验结果（3）重现性实验结果（4）线性实验结果（5）耐用性实验结果9.验证结果分析参考公式：标准差=（1）卢志强完成试验，检测结果如下：(2)中间精密度结果分析（3）重现性结果分析（4）线性结果分析依照数据绘制出线形图，列出回归方程。
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总蛋白(TP) 检测方法学性能验证评价报告
验证内容：正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员：
一检测系统信息
项目：TP
仪器名称: 强生Vitros
仪器型号:V350
试剂及厂商：Ortho-Clinical Diagnostics公司
检测方法：速率法
二厂商提供的相关参数
三验证过程
1 正确度
1.1 目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准，最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式：<1/2 CLIA’88
正确度验证试验数据记录表
2 精密度
2.1 重复精密度
2.1.1 目的：考察仪器检测方法的随机误差
2.1.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的
一致程度
2.1.3 方法：选择新鲜混合血清标本（病人高值、低值）各20份，测量前先定标，再做质控，
质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，计算SD，CV，得到重复性精密度。
2.1.4 标本来源：高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式：<1/4CLIA’ 88 2.5%
重复性精密度验证试验数据记录表
2.2 中间精密度：
2.2.1 目的：考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个
独立结果间的一致程度。
2.2.3 方法：取一个月的室内质控值（高值、低值）计算CV、SD，得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式：<1/3 CLIA’ 88
3.33%
中间精密度验证试验数据记录表
3 线性范围（Linearity range, AMR）
3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围
检测结果的准确性。
3.2 标本要求：
高值标本可使用病人混合血清。
一般地样本的高值推荐在AMR上限的90％，低值推荐在AMR下限的10％，但这不是绝对的规则。
最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，数据点数不得低于4个，浓度范围遍布整个预期可报告范围。
3.3 方法：
a)以50ul为一个体积单位，将高值标本与低值标本以3：1、2：2、1：3的体积比例混合，
加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定，记录结果。
b)线性统计：以直接测定结果计算得出的相应浓度为X，以通过稀释测定结果为Y，回归方法
学统计，得到a、b及r值。
c)结果判断：
①若b在0.97-1.03范围内，r2>0.95，作a与0有无显著性差异的t检验，如果P>0.05，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。
②若b不在0.97-1.03范围内，a较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计，直至缩小
的分析范围其回归方程的a 和b 的判断符合要求，则该范围为线性范围。
线性范围验证试验数据记录表
项目名称/单位 总蛋白（TP ）/ g/L
检测设备/编号 强生Vitros350/ DC-VITROS-1 检测试剂/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 校准品/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 质控品/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 检测方法 速率法
厂家声明线性范围：20.0-110.0g/L ，线性方程：Y=bX+a ，R 2>0.975
样本编号
配制比例
测定值1 测定值2 测定均值 预期值 差值 1 4L 1.82 1.80 1.81 1.81 0 2 3L+1H 288.6 288.8 288.7 279.11 -9.59 3 2L+2H 645.8 645.7 646.0 556.41 -89.59 4 L+3H 872.7 873 872.4 833.7 -38.7 5 4H
1110.9
1110.8
1111
1111
平均斜率b
采用线性回归，以预期值为X ，以按比例稀释的实测均值为Y ，得线性方程：
Y= X+
线性回归散点图：
计算每一稀释度测定均值和预期值的差值。
以预期值为横轴，差值为纵轴，制作线性差异图。
-100
-500
200
400
600
800
1000
1200
线性差异图
残
差
预期值
4 临床可报告范围（Clinical reportable range ,CRR）
4.1 目的: 分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数，从而确保高值样本报告的准确
性。
4.2 原理：未经过任何处理的病人检验标本，通过检测系统检测得到的可靠结果范围。
4.3 方法：结合本实验室制定的TP的可报告范围（CRR）及该项目的检测范围，从而确定该项
目的最大稀释倍数，予以验证。
临床可报告范围试验数据记录表
4.4 结论：
TP临床可报告范围20.0-110.0g/L，最大稀释倍数50倍，当结果>110g/L时，用生理盐水试剂级别的水进行稀释，结果乘以稀释倍数，若 50倍稀释结果仍超出报告>110g/L。
5 灵敏度:
6 干扰物质
干扰物质对本项目的影响大小沿用厂商参数，详细内容见本项目SOP。
7 参考区间（Reference intervals）:
7.1 目的：选择20份体检合格的健康人标本，在检测系统上进行测定，对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。
7.2 原理：收集20 例正常健康人血清标本及时检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对参考范围进行验证，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。
验证范围：63-82g/L
7.3 标本的要求
1)体检合格健康的筛选者
2)脂血、溶血均勿用
7.4 结果判断方式：R= ≥90%即合格
生物参考区间数据及验证记录表
7.5 结论：
若本实验室所检测的20个标本其检测结果19个均在验证区间63-82g/L内，故本实验室参考区间验证通过。
四总结(Summary)
总蛋白试剂盒在强生V350分析仪检测系统的精密度、正确度、线性范围、可报告范围及生物参考区间通过验证。
通过以上各项性能验证室验的结论，强生V350分析仪检测系统达到检测要求，保证检验结果准确可靠，可以满足临床需求。