高效液相色谱法的应用
高效液相色谱仪的原理及应用
2024/2/6
二、液相色谱中常用术语和参数
只针对HPLC特有的，其余术语与第三章同 。 粒间体积（V0）：色谱柱填充剂颗粒间隙中 流动相所占有的体积。
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四、正相高效液相色谱
是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动 相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是 改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正 己烷。吸附色谱也属正相HPLC。 溶剂洗脱强度近似地随溶剂的介电常数增加 而增大，洗脱能力越弱，溶质在柱上保留时 间越长。
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主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。μL/min~几千mL/min 应具有压力平稳、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
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(4) 梯度淋洗装置
高效液相色谱仪的原理 及应用
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第一节 高效液相色谱法原理
一、高效液相色谱法的定义和分类
流动相是液体的色谱称为液相色谱（ LC）。 在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效 固定相，并采用高压泵输送流动相，全 部工作通过仪器完成，这种色谱称为高
效液相色谱（HPLC） 。
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一、高效液相色谱法的定义和分类
孔体积（Vp） ：色谱柱中多孔填充剂的所
有孔洞中流动相所占有的体积。
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高效液相色谱方法及应用
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专属型检测器
它对不同组成的物质响应差别极大，因此只能选 择性的检测某些物质，如紫外检测器、荧光检测 器和电导检测器。
通用型检测器
它对大多数物质的响应相差不大几乎适用于所有 物质，如示差折光化学检测器 。但它的灵敏度低， 受温度影响波动大、使用时有一定局限性。
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紫外吸收检测器
简称紫外检测器（ ultraviolet absorption detector ， UV），是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测 器。 因为大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外吸 收性质，所以该检测器是液相色谱中应用最广泛的检测 器，几乎所有液相色谱仪都配置了这种检测器。 它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度，而且对环境温 度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此既可用 于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。
1、适用于分离几乎所有类型的化合物。一方面通过控制化学键合反应， 可以把不同的有机基团键合到硅胶表面上，从而大大提高了分离的选 择性；另一方面可以通过改变流动相的组成合乎种类来有效地分离非 极性、极性和离子型化合物。 2、由于键合到载体上的基团不易被剪切而流失，这不仅解决了由于固定 液流失所带来的困扰，还特别适合于梯度洗脱，为复杂体系的分离创 造了条件。 3、键合固定相对不太强的酸及各种极性的溶剂都有很好的化学稳定性和 热稳定性。 4、固定相柱效高，使用寿命长，分析重现性好。
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HPLC与GC差别
相同：兼具分离和分析功能 均可以在线检测 不同：
1．分析对象的区别 2．流动相的区别 3．操作条件区别
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HPLC与GC差别
1．分析对象的区别 GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但 对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样 品，尤其对大多数生化样品不可检测，占有机物的20% HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶 液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、 难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均 可检测，用途广泛，占有机物的80%
高效液相色谱方法在农药残留检测中的应用
高效液相色谱方法在农药残留检测中的应用章节一：引言农药作为农业生产中常用的化学品，在提高农作物产量和控制农作物病虫害方面起到了重要作用。
然而，长期、过量使用农药可能会导致农产品中残留的农药对人体健康产生潜在风险。
章节二：农药残留检测的重要性农药残留检测是确保农产品安全，保护消费者权益的重要手段。
目前，检测手段主要包括气相色谱法、液相色谱法和质谱法等。
其中，液相色谱法由于其高效、灵敏度高、选择性好等优点，在农药残留检测中得到广泛应用。
章节三：高效液相色谱法的原理高效液相色谱法（HPLC）是以液相为媒介、在高压条件下进行溶液传动的色谱方法。
其主要由流动相、进样系统、固定相和检测系统组成。
高效液相色谱法可以通过调节流动相成分、调整流速和选择合适的固定相来实现农药残留的检测。
章节四：高效液相色谱法在农药残留检测中的应用4.1 农产品中农药残留的检测方法高效液相色谱法可以通过提取样品中的农药残留物，并通过标准品与样品中残留物的保留时间、吸收峰面积等进行比对，从而实现农药残留的检测。
该方法不仅可以检测单一农药的残留，还可以同时检测多种农药的残留情况。
4.2 高效液相色谱法的优点相比于其他农药残留检测方法，高效液相色谱法具有以下优点：（1）高效液相色谱法具有灵敏度高的特点，可以检测到极小浓度的农药残留物；（2）高效液相色谱法的选择性好，可以区分不同农药的残留物，减少误判的可能性；（3）高效液相色谱法的分离效果好，峰形对称，分离程度高，有利于准确测定农药残留物的含量。
章节五：高效液相色谱法在农药残留检测中的应用案例以某一农产品为研究对象，通过高效液相色谱法，对其农药残留进行分析。
实验结果表明，某农产品中含有A农药和B农药的残留物，残留量均在安全标准之内，证实其符合国家农产品质量安全标准。
章节六：结论与展望高效液相色谱法作为一种有效的农药残留检测方法，具有广泛的应用前景。
然而，随着农药种类的增多和检测要求的提高，需要继续进行方法的改进和优化，以提高检测的灵敏度和准确性。
高效液相色谱技术在药物分析中的应用
高效液相色谱技术在药物分析中的应用第一章：引言高效液相色谱技术（HPLC）是一种目前常用的分离和分析药物的技术。
药物分析是药学领域一个重要的研究方向，药物的治疗作用和副作用是药物研究的重要内容。
因此，对药物分析技术的研究是药学研究的重要组成部分。
在本文中，我们将介绍HPLC技术在药物分析中的应用。
第二章：HPLC技术的原理HPLC技术是一种高效的分离和分析技术，其原理是将样品通过高压力泵加入进样口，然后经过固定相柱，移动相将不同成分分离出来，最终通过检测器检测分离出的成分。
HPLC技术相比传统的分离技术，具有分离速度快、分离效率高、灵敏度高等优点。
第三章：HPLC技术在药物分析中的应用3.1 药物成分的分离使用HPLC技术可以很好地分离药物中不同的成分。
药物常常含有多种成分，这些成分之间的分离十分复杂。
HPLC技术可以通过对移动相和固定相的优化，将药物中的不同成分分离出来。
这对于了解药物的成分组成和副作用很重要。
3.2 药物代谢产物的检测HPLC技术可以检测到药物代谢产物，这对于了解药物的代谢过程和药物在体内的作用也很重要。
药物代谢产物是药物在体内代谢后的物质，有时会比药物本身更具有生物活性。
因此，药物代谢产物的检测对药物研究有着重要的意义。
3.3 药物含量的测定使用HPLC技术可以准确地测定药物中活性成分的含量，这对于药物的质量控制和药物治疗效果的评估都很重要。
HPLC技术可以通过对移动相、固定相等操作的优化，准确地测量药物中活性成分的含量。
3.4 药物安全性评估药物的安全性评估是药物研究中的重要内容，使用HPLC技术可以对药物的代谢产物、副作用产物等进行检测和分析，对药物在体内的安全性进行评估。
这是药物研究中不可或缺的环节。
第四章：总结本文简要介绍了HPLC技术在药物分析中的应用。
HPLC技术在药物分析中具有分离速度快、分离效率高、灵敏度高等优点。
使用HPLC技术可以对药物成分分离、代谢产物检测、药物含量测定、药物安全性评估等进行检测和分析，对药物研究有着重要的意义。
高效液相色谱法的应用
在药品分析鉴定的作用
3 在西药鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中 国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品 主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以 及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别. 4.在体内药物分析中的应用 HPLC由于测定迅速准确，流动相选择范围广，灵敏度高(10-12 g／mL以上)，填充柱种 类多，且可供选择的检测器也多。所以是实验室研究中一种很好的体内分析方法。在 国内外都很受重视．大多数药物都有紫外吸收，所以最常用的检测器是紫外检测器。 多数药物及内源性物质极性均较大，利用其极性差，可以采用RP-HPLC色谱柱，可获 得良好分离效果。
在药品分析鉴定的作用
1.天然药物分析 天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成 分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标 准来说比较困难，HPLC可通过对天然药物的有效成分进行式，可以判定药材的质量高低。 2..天然药物及复方成药分析 复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。增免扶正片系由当 归、党参、黄芪（图3）等十几味天然药物精制而成，具有益气生津、活血养血、滋 补肝肾、健脾开胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老，长期服用可扶正祛邪 ，提高机体免疫功能，健身强体，益寿延年。该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑 血管疾病、神经衰弱、慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。 由于化学药品的开发费用昂贵，而且毒副作用大，近年来人们已把目光转向自然、民 族传统医药、草药、植物药等天然药物，据世界卫生组织统计，当前全世界60多亿人 口中80％的人使用过天然医药。在全世界药品市场中，天然物质制成的药品已占30％ ，国际上植物药市场份额已达300亿美元，且每年以20％ 以上的速度增长。HPLC分析 必定能为我国传统中医药实现现代化，走向世界提供强有力的技术支持。
高效液相色谱方法及应用
高压输液泵及梯度洗脱装置
一、高压输液泵 高压输液泵可以分为以下两类： 1．恒流泵：可输出恒定体积流量的流
动相。 （1）注射式泵（又称注射式螺杆泵） （2）往复型泵 2．恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，
一类是选择性检测器，如紫外一可 见分光光度检测器；
另一类是通用型检测器，如示差折 光检测器。
(1)紫外一可见分光光度检测器。
如今此技术已在分析咖啡中的黄嘌泠、调料中的核苷酸及核苷、果汁中的有机酸、米中的维生素、牛奶中的维生素D等都对食品营养价 值提供有效数据。 热不稳定物、离子型化合物及高聚物的分离及测量有困难，致使其应用受到了很大的限制。 又如止痛药或退烧药也可用此法分离并测得各组分的含量。 染料厂排出废水中的苯胺等。 用液相色谱分析简便迅速。 分析食品中的有毒成分，如苹果中农药萘乙酸、稻米中的黄曲霉素、鱼体中的有机汞等。是输出恒定压来自的泵。二、梯度洗脱装置
1．梯度洗脱（gradient elution）又称 停流进样是在高压泵停止供液、体系压力下降的情况下，将样品直接加到柱头。
一、与经典液相色谱法比较
为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析 用离子交换柱和缓冲游泳梯度淋洗。
多种不同性能的配位体键联在固相基体上 分析食品中的有毒成分，如苹果中农药萘乙酸、稻米中的黄曲霉素、鱼体中的有机汞等。
高效液相色谱法的特点
一、与经典液相色谱法比较 经典液相（柱）色谱法使用粗粒多孔固定相，装
填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经 色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱 入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。
高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填 在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵 进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散 速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效 和高分离能力。
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展一、概述高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于药物分析的重要技术，具有快速、高效、灵敏度高和分辨率高等特点。
自20世纪70年代以来，随着色谱理论和仪器技术的不断发展，HPLC已成为药物分析领域中不可或缺的工具。
其利用不同物质在固定相和流动相之间的分配差异，通过高压泵将流动相推动通过装有固定相的色谱柱，实现样品中各组分的分离。
随后，通过检测器对分离后的组分进行检测，从而实现对药物成分的定性和定量分析。
近年来，随着药物分析需求的不断提高，HPLC在药物分析中的应用研究也取得了显著的进展。
在药物质量控制方面，HPLC可用于药物有效成分的含量测定、杂质含量的检测以及药物制剂中各组分的分离分析等。
HPLC还可应用于药物代谢产物的分析，为药物研发提供重要的参考信息。
在药品检验中，HPLC的应用不仅提高了检验的准确性和效率，还有助于实现药品检验的自动化和智能化。
同时，随着HPLC技术的不断发展，其在药物分析中的应用也将不断拓展和完善。
本文旨在综述HPLC在药物分析中的应用研究进展，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴。
1. 高效液相色谱技术简介高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的色谱分析技术，广泛应用于化学、医学、工业、农学、商检和法检等多个学科领域。
作为色谱法的一个重要分支，HPLC以液体为流动相，通过高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱。
在柱内，各成分因与固定相发生作用的大小、强弱不同，而在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，进入检测器进行检测，实现对试样的分析。
HPLC具有“四高一广”的特点，即高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。
高压是因为流动相为液体，流经色谱柱时受到的阻力较大，需要高压泵来推动流动相通过色谱柱。
高效液相色谱法在药物分析中的应用
其质量控制较难，故药典上很少收载。近 年来高效液相色谱在这方面的工作报道较 多。例如，复方鱼腥草片中的黄芩苷含量 的测定［ １ ７ ］ ，牙周康胶囊中的甲硝哇和芬 布芬的同时测定［ １ ８ ］ ，烧烫灵软膏中磺胺 醋酞钠和磺胺的含量的快速测定［ １ ９ ］ ，复 方感冒片中那可汀的含量测定［ ２ ０ ］ ，均取
联用、高效液相色谱 － 质谱联用，还有柱
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天然药物的化学成分复杂， 其有效成 分可能有一个， 也可以有多个， 这对于控制 药品质量， 建立质量标准来说比较困难。 例如，罗汉果种类较多， 结构相似， 其定量 分析方法现普遍应用的仍主要为比色法， 但误差较大、结果不准确。陈维军等［ １ ４ ］ 建立了罗汉果皂苷的 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 分析方法，可
（４）∶２１１－２１４ ［ ４ ］ 周莹，程海燕．高效液相色谱法鉴别南
定含量这一质量指标时有困难，而 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 法可以解决这方面的难题。但每一种分析 技术均有其使用范围和方法的局限性，现
［１８］ 徐淑贞， 吴丽萍高效液相色谱法测定烧 烫灵软膏中磺胺醋铣钠和磺胺含量．色谱，１ ９ ９ ９ ， １ ７ （２ ）∶２ ０ ６
在主要是色谱 － 色谱联用、色谱 － 光谱
［ １ ５ ］ 谭生健，王文明．反相高效液相色谱 定丹七片中丹参酮Ⅱ Ａ 的含量．分析仪器，１ ９ ９ ９ （３ ）∶３ ９
［ １ ６ ］ 李长新，元效鹏．高效液相色谱法测 定复方鱼腥草片中黄芩苷的含量．黑
龙江医药，２ ０ ０ ５ ，１ ８ （５ ）∶３ ２ ０ － ３ ２ １ 。 ［１７］ 杜兴．ＨＰＬＣ 法法测定牙周康胶囊中各 组分的含量药物．药物分析杂志，１ ９ ９ ９ （５ ）∶２ ４ ４
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高效液相色谱法的应用
高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。
它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。
一.在食品分析中的应用
1．食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；
2．食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等；
食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。
二.在环境分析中的应用
多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。
三.在生命科学中的应用
HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。
其在生化领域的应用主要集中于两个方面：
1.低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。
2.高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。
过去对这些生物大分子的分离主要依赖于等速电泳、经典离子交换色谱等技术，但都有一定的局限性，远远不能满足生物化学研究的需要。
因为在生化领域中经常要求从复杂的混合物基质，如培养基、发酵液、体液、组织中对感性趣的物质进行有效而又特异的分离，通常要求检测限达ng级或pg级，或pmol，fmol，并要求重复性好、快速、自动检测；制备分离、回收率高且不失活。
在这些方面，HPLC 具有明显的优势。
四.在医学检验中的应用
体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测：
1.合成药物：抗生素、抗忧郁药物（冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等）、黄胺类药等。
2.天然药物生物碱（吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙）等
五．在无机分析中的应用
阳、阴离子的分析等。