(完整版)OMEGAdna提取说明书
质粒中提中文版(Omega)
中提质粒步骤材料准备：灭菌250或500mL三角瓶，托盘天平，5mL移液枪及枪头，卫生纸，废液缸，记号笔，50mL 圆底离心管，15mL尖底离心管步骤：1.集菌将100mL菌液分批倒入50mL圆底离心管中，室温12000rpm离心1min，弃流出液体，打开盖倒置吸水纸上控干。
2.加入2.5mL solution I（提前加入RNase，4℃保存），重悬细菌沉淀（可使用5mL移液枪吹打）。
3.加入2.5mL solution II，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），以获得清亮的裂解物，室温静置3-5min。
（此步主要是碱裂解细菌，使其中的蛋白质和DNA变性，反应时间不能太长，否则容易使大肠杆菌的基因组DNA断裂成小片段，污染质粒DNA）4.加入1.25mL Buffer N3，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），直至形成白色沉淀，室温静置2-3min。
5.4℃12000rpm离心10min，使白色沉淀沉于底部。
6.取出一个Lysate Clearance Filter Syringe，抽出活塞，小心将5中液体全部转移至注射器中（注射器可不放活塞直接直立于4中的离心管中，液体不会出来），室温静置2min。
7.将6中注射器放置于一新的15mL离心管，轻推注射器活塞，使液体流入离心管中。
8.加入0.1倍体积的ETR（约600uL）至过滤后的液体中，混匀（颠倒离心管7-10次），冰浴20min，期间颠倒离心管几次。
（此期间准备一个Hind-Bind DNA midi Column加入2mL GPS Buffer，室温静置10min，4000rpm离心5min）9.42℃温浴5min，溶菌液变浑浊，室温4000rpm离心5min，则ETR沉入底部。
10.小心将上层液体转移至一新的15或10mL离心管中，加入0.5倍体积的EtOH（约2.5mL），轻柔混颠倒5-6次，室温静置2min。
11.将10中液体加入柱子中，室温4000rpm离心5min，弃液体，重新装好柱子，直至液体全部滤过。
Omega DNA提取操作规程
4 标准操作程序4.1实验前准备4.1.1 55-60°C水浴；70°C水浴。
4.1.2. OB蛋白酶加入1.5ml Protease Storage Buffer溶解后，分装保存于-20℃。
4.1.3. DNA Wash Buffer中加入80ml无水乙醇，并于室温保存。
4.2实验操作4.2.1 刮取切片上组织部分的样品至1.5ml离心管，加入1ml二甲苯，剧烈涡旋10s 混匀。
4.2.2 10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。
4.2.3 加入1ml 无水乙醇涡旋混匀，10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。
4.2.4 打开盖子放置15min或直到乙醇挥发。
4.2.5 加入200μL Buffer T1和20μL OB蛋白酶。
4.2.6 55℃水浴3h或至组织消化，每隔20-30min混匀一次。
如果有需要也可消化过夜。
4.2.7 90℃处理60min。
4.2.8 室温静置10-30min，室温10,000×g离心5min去除杂质，小心转移上清至一新1.5ml 离心管中。
4.2.9 加入220ul Buffer BL涡旋混匀。
4.2.10 加入250ul的无水乙醇，高速涡旋15秒混匀。
4.2.11 转移混合液至套有收集管HiBind DNA柱子中，室温下8,000×g离心1 min，弃去滤液。
4.2.12 把柱子装在收集管，加入500ul HB Buffer，室温下8,000×g 离心1min，弃去滤液。
4.2.13 把柱子装在新收集管，加入500ul DNA Wash Buffer，室温8,000×g离心1min。
注意：浓缩的DNA Wash Buffer在使用之前必须按标签的提示用乙醇稀释。
4.2.14 弃去滤液，重复步骤4.2.13一次。
倒弃滤液后将柱子重新套回收集管，10,000×g 离心3min。
DNA提取操作规程-石蜡切片Omega试剂盒方法
1 目的依据《EZAN.FFPE DNA KIT D3399-01》使用说明书及实际使用情况制定标准操作规程，确保正确、安全操作。
2 适用范围适用于石蜡切片中DNA提取的规范操作。
3 职责实验操作人员负责本程序的进行，实验室负责人负责该程序的监控。
4 标准操作程序4.1实验前准备4.1.1 55-60°C水浴；70°C水浴。
4.1.2. OB蛋白酶加入1.5ml Protease Storage Buffer溶解后，分装保存于-20℃。
4.1.3. DNA Wash Buffer中加入80ml无水乙醇，并于室温保存。
4.2实验操作4.2.1 刮取切片上组织部分的样品至1.5ml离心管，加入1ml二甲苯，剧烈涡旋10s 混匀。
4.2.2 10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。
4.2.3 加入1ml 无水乙醇涡旋混匀，10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。
4.2.4 打开盖子放置15min或直到乙醇挥发。
4.2.5 加入200μL Buffer T1和20μL OB蛋白酶。
4.2.6 55℃水浴3h或至组织消化，每隔20-30min混匀一次。
如果有需要也可消化过夜。
4.2.7 90℃处理60min。
4.2.8 室温静置10-30min，室温10,000×g离心5min去除杂质，小心转移上清至一新1.5ml 离心管中。
4.2.9 加入220ul Buffer BL涡旋混匀。
4.2.10 加入250ul的无水乙醇，高速涡旋15秒混匀。
4.2.11 转移混合液至套有收集管HiBind DNA柱子中，室温下8,000×g离心1 min，弃去滤液。
4.2.12 把柱子装在收集管，加入500ul HB Buffer，室温下8,000×g 离心1min，弃去滤液。
4.2.13 把柱子装在新收集管，加入500ul DNA Wash Buffer，室温8,000×g离心1min。
基因组DNA提取：Omega公司SQ Blood DNA Kitll ,
基因组DNA提取：Omega公司SQ Blood DNA Kitll ，
1)将1mL全血加入到15mL离心管中，加入2.5mL的Buffer NL（血样体积
的2.5倍），上下颠倒混匀；
2)室温下2000g/min离心5min；
3)倒去上层液体，将离心管倒置于干净的滤纸上静置；
4)将Buffer XL和OB蛋白酶以100：1的体积比混合；
5)每个离心管中加入1mL的混合液④,充分震荡；
6)65℃水浴中孵育15-30min，至溶液变为墨绿色，且沉淀完全溶解；
7)从水浴中取出离心管，待其恢复至室温，想每管中加入0.5ml的异丙醇
（血样体积的0.5倍），混合后有白色沉淀析出；
注：混合时要轻柔，避免DNA链断裂
8)室温下2000g/min离心5min，此时DNA为白色沉淀，倒去上清，将离
心管倒置于干净的滤纸上静置；
9)取15mL双纯水与35mL无水乙醇混合，配置70%的乙醇；
10)向每个离心管中加入1mL 70%的乙醇，充分震荡洗涤DNA；
11)室温下2000g/min离心3min，小心倒掉乙醇；
12)重复步骤10）和11）；
13)为便于除去残留乙醇，调到乙醇之后再次室温下2000g/min离心3min，
用200μL的移液器吸出残留乙醇，并将离心管倒置于干净的滤纸上静
置，直至乙醇完全挥发；
14)向每个离心管中加入EB Buffer 200μL(加入EB Buffer的量可视情况而
定)；
15)65℃温浴4-6h（或孵育过夜）；
16)待沉淀完全溶解后，将DNA溶液转移至1.5mL 的EP管中；
17)核酸分析仪测定DNA浓度，将DNA于-20℃保存。
omga质粒提取试剂盒_说明书_翻译
omgaE.Z.N.A.质粒试剂盒操作规程说明书（译版）1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的2-5ml的LB或YT培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm）孵育20-24h。
使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml细菌菌液室温13,000 g离心3min。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入200μl 的溶液Buffer T 1/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。
4. 加入200μl溶液Buffer T 2，倒置、转动试管5-10次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
室温孵育5min。
不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min。
溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入200μl溶液Buffer T 3，立即倒置试管15-20次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
冰上孵育5min。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。
6. 4℃13,000 g离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼的吸取上清液，加入到新的1.5ml离心管（不是试剂盒提供的）中。
加入200ul 用异丙醇稀释的BAC 结合液（缓冲液），颠倒3-5次充分混匀。
BAC 结合液使用前必须用96%-100%的异丙醇稀释，详细的说明见瓶壁或第三页说明书8.加入样本DNA（HiBind DNA MicroElute）到提供的2ml收集管中。
9. 室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
10. 将收集柱放回收集管并加入750ul SPM buffer（用乙醇稀释），室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
omega DNA 提取试剂盒 说明书
Materials to Be Provided by User ! Tabletop microcentrifuge and nuclease-free 1.5 ml tubes ! Water bath set to 30oC ! Shaking water bath set to 55oC ! Incubator or waterbath set to 65oC ! Absolute ethanol (96%-100%) - Do not use other alcohols
Add 8 ml absolute (96%-100%) ethanol Add 80 ml absolute (96%-100%) ethanol Add 80 ml absolute (96%-100%) ethanol per bottle
Store the diluted DNA Wash Buffer at room temperature.
乙醇
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Before Starting
! Please read the entire booklet to become familiar with the E.Z.N.A.® Bacterial DNA Kit procedure.
! Prepare a lysozyme stock solution at 50 mg/ml and aliquot into adequate portions. Store each aliquot at -20oC and thaw before use. Each sample will require 20 ìl of this solution.
Kit Contents
Product Purification times HiBind® DNA Mini Columns 2 ml Collection Tubes Buffer BTL Buffer BDL Buffer HB DNA Wash Buffer concentrate Glass Powder Lysozyme Elution Buffer Proteinase K RNase A User Manual
无内毒素质粒大提取试剂盒中文操作指南
无内毒素质粒大提取试剂盒中文操作指南（omega）详细内容：E.Z.N.A. ® Fastfiler Endo-free Plasmid MaxiprepProtocol(无内毒素质粒大抽提)1. 在1-4升的培养瓶中加入200-500ml LB培养基,然后加入菌种于37℃摇床培养12-16小时；Tip:为获得最好的结果，请接种1ml培养过夜的菌种（12-16hr）。
并强烈推荐使用E.coli(endA-)品系用于常规的质粒提取，如DH5a和JM109。
注意：菌液的培养时间不能超过16小时；2. 收集200ml培养基至适当的离心管，室温下，3,500-5,000×g离心10分钟沉淀；3. 吸尽并去除培养基，用干净的吸水纸吸尽壁上多余的液体。
加12.0ml Solution I/RNase A到细菌培养物中，涡旋和枪头抽打细菌以重悬细胞；注：充分重悬细菌沉淀物对获得高产量的质粒是相当关键的。
充分重悬后溶液是均匀的，不存在小块物质；请尽量吸弃残余的培养基以防止稀释加入的溶液；4. 加入12.0ml SolutionII，轻轻颠倒旋转混匀7-10次至获得澄清的裂解液；室温放置3-5分钟可以有是必须的。
避免剧烈振荡混匀而打断染色体DNA，降低质粒的纯度。
（Solution II使用后请盖紧盖子且于室温保存）；5. 将取出Lysate Clearance Filter Syrine活塞，将其放置于架子上；6. 加入12 ml Neutralization Buffer，轻轻颠倒混匀几次至出现絮状沉淀。
这可能需要放置2-3分钟并间断颠倒混匀；7. 立即将裂解液转移到lysate Clearance Filter Syrine中，垂直放置5分钟。
这时白色的絮状沉淀物会漂上溶液的上层，裂解液可能开始流出过滤器，用新的50ml管子收集细菌裂解液，并将活塞轻轻插入过滤器中；8. 握住过滤器，轻轻推动活塞将裂解液打到收集管中；注意不要将任何杂质打到收集管中；9. 加入0.1体积的ETR Solution（蓝色）到收集液中，轻轻颠倒旋转混匀7-10次，冰浴放置20分钟；注意：加入ERT Solution后，溶液应变得浑浊，但冰浴静置后溶液应是澄清的。
Omega DNA提取操作规程
4 标准操作程序4.1实验前准备4.1.1 55-60°C水浴；70°C水浴。
4.1.2. OB蛋白酶加入1.5ml Protease Storage Buffer溶解后，分装保存于-20℃。
4.1.3. DNA Wash Buffer中加入80ml无水乙醇，并于室温保存。
4.2实验操作4.2.1 刮取切片上组织部分的样品至1.5ml离心管，加入1ml二甲苯，剧烈涡旋10s 混匀。
4.2.2 10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。
4.2.3 加入1ml 无水乙醇涡旋混匀，10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。
4.2.4 打开盖子放置15min或直到乙醇挥发。
4.2.5 加入200μL Buffer T1和20μL OB蛋白酶。
4.2.6 55℃水浴3h或至组织消化，每隔20-30min混匀一次。
如果有需要也可消化过夜。
4.2.7 90℃处理60min。
4.2.8 室温静置10-30min，室温10,000×g离心5min去除杂质，小心转移上清至一新1.5ml 离心管中。
4.2.9 加入220ul Buffer BL涡旋混匀。
4.2.10 加入250ul的无水乙醇，高速涡旋15秒混匀。
4.2.11 转移混合液至套有收集管HiBind DNA柱子中，室温下8,000×g离心1 min，弃去滤液。
4.2.12 把柱子装在收集管，加入500ul HB Buffer，室温下8,000×g 离心1min，弃去滤液。
4.2.13 把柱子装在新收集管，加入500ul DNA Wash Buffer，室温8,000×g离心1min。
注意：浓缩的DNA Wash Buffer在使用之前必须按标签的提示用乙醇稀释。
4.2.14 弃去滤液，重复步骤4.2.13一次。
倒弃滤液后将柱子重新套回收集管，10,000×g 离心3min。
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材料与仪器：离心机（至少14000g）、1.5ml或2ml无核酸酶离心管、水浴锅、无水乙醇、氯仿、异戊醇、无酶水。
试验之前：先用absolute ethanol稀释DNA Wash Buffer Concentrate,每瓶DNA Wash Buffer Concentrate加80ml（200份装）
试验步骤：
1.使用mortar和pestle在liquid nitrogen中研磨样品（不超过50毫克），放入1.5ml microcentrifuge tube。
2.加350ulBuffer ML1和25ul Proteinase K,涡旋混匀，60℃孵育（最少30分钟），大多数孵育不超过4小时或者37℃孵育1晚。
3.裂解产物加350ul氯仿和异戊醇的混合溶液（24:1），涡旋混匀。
10000g室温离心2min，转移上清液到1.5ml microcentrifuge tube，避免含有污染物和抑制剂的乳白色界面。
4.估计步骤3 supernatant体积，加等集体的Buffer MBL，涡旋15s混匀，70℃孵育10min。
5.加步骤3等体积的无水乙醇，涡旋15s混匀。
（tips:300ul上清液+300ul Buffer MBL+300ul absolute ethanol）
6.把柱子和提供的2ml收集管装配好，加步骤5的溶液750ul，10000g 室内离心1min,倒掉被离心的液体，重复利用提供的2ml收集管。
7.把步骤5剩余的混合物按照步骤6的方法离心，但抛弃提供的2ml 收集管。
8.把柱子放在新的2ml收集管，加500ul HB Buffer,10000g，30s，第一次洗柱子。
9.重复利用2ml收集管，加700ul DNA Wash Buffer,10000g,1min,抛弃被离心的液体，重新利用2ml收集管。
10.重复步骤9，加700ul DNA Wash Buffer,室温15000g,2min（这一步关键是去除微量的乙醇，以防其感染下游的实验）。
11.把柱子放入1.5ml离心管，预热Elution Buffer60-70℃,加50-100ul到柱子内，室温下浸泡2min，10000g，1min离心。
12.使用50-100ul Elution Buffer,重复洗脱步骤，再次收集DNA样品。