薄层层析(TLC)实验方法
最全的TLC经验薄层层析显色剂
最全的TLC经验薄层层析显色剂
一、TLC经验简介
TLC（Thin Layer Chromatography，薄层层析）是一种常用的分离技术，它是一种物理分离方法，用于分离从未接触过的化学混合物。
它主要利用不溶于固定相的物质在一定的有机溶剂/挥发溶剂系统中的互相溶解性，从而将混合物分离成不同组分。
TLC可以大量分离未知物质、识别未知物质、鉴定物质的纯度、测定物质的比例、比较不同批次的物质、测定固体液体及气体的组成等。
二、TLC实验步骤：
1.准备薄层层析膜：TLC膜一般用玻璃或石英板，平板制成，一般涂有活性炭、白土、石英砂、铝粉等。
2.准备支持介质：需要选择的是盐酸和醇溶液，如85%乙醇-盐酸、苯甲酸-乙酸-乙醇和砒霜-乙醇等。
3.准备液体样品：需要用适当的溶剂溶解样品，然后将溶解后的液体样品用滤纸过滤，去除杂质后，备用。
4.加载樣品：将液体样品加入到提前准备的膜上。
5.洗膜：在膜上加入支持介质，移动膜直至支持介质溶解样品，使样品在膜上分离成几个不同的区域。
6.显色：用显色剂溶液浸泡膜，以使样品呈现出特定颜色。
薄层色谱分析步骤及注意事项
薄层色谱分析步骤及注意事项薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。
薄层色谱分析步骤完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。
⑴制板在一平面支持物（通常玻璃）上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。
一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。
常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm ×20cm、20cm×20cm等。
称取适量硅胶,加入0。
2％～0。
5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC —Na),充分搅拌均匀，进行制板。
一般来说10cm×20cm的玻璃板,3～5g硅胶/块;硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1:2～1:4。
制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。
在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉,并将其放于紫外光灯（254nm)下检视,薄层板应无花斑、水印,方可备用。
⑵点样用微量进样器进行点样。
点样，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样,一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样,以免点样斑点过。
一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右,样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。
⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用,展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后,取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和。
为达到饱和效果,可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。
②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂,并且临用时新配为宜。
薄层色谱层析操作规程
薄层色谱层析操作规程1. 引言薄层色谱（TLC）是一种常用的分离和分析技术，适用于有机物和天然产物的检测、纯化和鉴定。
本操作规程旨在提供一种标准化的TLC操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。
2. 实验材料和仪器设备•薄层色谱板：选择合适的固定相和基底材料的薄层色谱板。
•检测溶剂：根据需要选择合适的溶剂，常用的有乙醚、醋酸乙酯、甲醇、正己烷等。
•样品：准备待测物的溶液或提取液。
•试剂：例如显色剂、定位剂等。
•色谱槽：用于放置色谱板的槽状容器。
•喷雾开发箱：用于显色和可视化样品。
3. 操作步骤3.1 准备工作1.检查薄层色谱板是否完整，如有损坏需更换。
2.在色谱板上使用铅笔标记出样品和参比物的位置。
3.2 样品处理1.准备待测物的溶液或提取液，并将其过滤以去除杂质。
2.如需测定混合物中的成分，可先进行分离提取。
3.3 上样1.使用微量锥或玻璃管在标记位置上均匀地涂抹样品。
2.上样后务必避免接触色谱板其他区域。
3.4 开发1.将色谱板放置在色谱槽中，加入适当的检测溶剂。
注意溶剂的选择应根据待测物的性质和溶解性来确定。
2.等待溶剂上升至足够高度，将色谱板取出并迅速标记并扫描涂点位置。
3.5 显色和观察1.将色谱板放入喷雾开发箱中，并加入适当的显色剂。
2.等待显色剂完全插入后，将色谱板取出并进行观察。
3.6 数据处理1.使用适当的测量工具，如图像分析软件，测量色谱带的迁移距离和Rf值。
2.进行定性和定量分析，根据需要绘制色谱图。
4. 安全注意事项1.使用化学品和有机溶剂时必须戴上防护手套和防护眼镜，以防止溅入眼睛或与皮肤接触。
2.所有操作需在通风良好的实验室中进行，避免吸入有害气体。
3.注意操作时避免产生火源，如禁止吸烟和使用明火。
4.做好废弃物的处理工作，避免对环境造成污染。
5. 结论本操作规程提供了一套标准化的薄层色谱层析操作步骤，涵盖了样品准备、上样、开发、显色和观察、数据处理等关键步骤。
通过遵守操作规程和安全注意事项，可以准确、高效地进行薄层色谱层析实验，并获得可靠的结果。
最全的TLC经验 薄层层析
最全的TLC经验薄层色谱（TLC）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。
薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。
流动相则是一种极性待选的溶剂。
在5.301中以及大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。
将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。
根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。
极性强的化合物会“粘”在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。
而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。
化合物移动的距离大小用Rf值来表达。
这是一个位于0～1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。
薄层色谱（TLC）实验步骤：1) 切割薄板。
通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。
在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。
借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。
当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。
（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。
）2) 选取合适的溶剂体系。
化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。
在戊烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。
相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。
一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.15~0.85之间。
虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。
那么，应该选取哪些溶剂呢？一些标准溶剂和他们的相对极性（从LLP中摘录）列于如下：强极性溶剂：甲醇〉乙醇〉异丙醇中等极性溶剂：乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯非极性溶剂：环己烷，石油醚，己烷，戊烷常用混合溶剂：乙酸乙酯/己烷：常用浓度0~30%。
TLC薄层色谱法
TLC薄层色谱法TLC（thin layer chromatography）是一种常用的薄层色谱法。
它是一种简单快速的分离技术，常用于分析和鉴定不同化合物的组分。
TLC的原理是在经过修饰的硅胶或氧化铝等固定相上进行分离。
样品溶液在薄层板上涂抹成薄层，然后将薄层板放入溶剂中进行运动。
溶剂沿薄层板上升，样品组分因吸附和流动速度差异而分离。
最后通过观察薄层板上的斑点，可以确定样品中的化合物。
TLC的操作简单，常用的仪器设备较少，所以被广泛应用于化学、药学、生物学等领域中。
下面我将详细介绍TLC的步骤和应用。
TLC操作步骤：1.准备薄层板：选择合适的固定相薄层板，如硅胶或氧化铝薄层板。
将薄层板根据需要切割为适当大小，并在板的底端画一个起始线。
2.准备样品溶液：将待分析的样品溶解在合适的溶剂中，经过充分的溶解后，可以使用微量移液管或吸管将样品溶液涂抹在起始线上。
3.运行：将涂有样品溶液的薄层板放入含有适当溶剂的槽中，使溶剂沿薄层板上升。
在运行过程中，在合适的距离上标记溶剂的前移距离，以保证足够的分离效果。
4.上样和开发：在溶剂前移到标记线附近时，将薄层板从溶剂槽中取出。
使用暗室或紫外灯观察薄层板上的斑点。
可以通过对比标准物质的斑点位置来确认化合物。
5.测量和分析：使用尺子或色谱扫描仪测量TLC板上各斑点的Rf值（移动度）。
Rf值是化合物移动距离与溶剂前行距离的比值，可以用于定量或比较分析。
TLC的应用：1.分析和鉴定化合物：TLC广泛应用于分析和鉴定化合物，通过观察斑点的颜色、形状和位置来确定化合物的组分。
2.纯化化合物：TLC也可用于纯化化合物。
当溶剂前移到一定位置时，可以用吸管垂直吸取斑点，将其转移到其他试管中，然后通过进一步的分离过程来分离纯化化合物。
3.制备层析：TLC还可以用于制备层析，即使用溶剂系统分离多个化合物，然后通过抽吸器或预柱收集纯化化合物。
4.检测杂质：TLC也可以用于检测杂质的存在，通过对比分析样品与标准溶液的斑点位置和Rf值，可以检测样品中的杂质。
TLC（薄层层析色谱）技巧[资料]
![TLC（薄层层析色谱）技巧[资料]](https://img.taocdn.com/s3/m/d2d054aa970590c69ec3d5bbfd0a79563d1ed444.png)
TLC（薄层层析色谱）技术原理与应用一、薄层层析（TLC）简介薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。
把欲分离的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展开，使混合物得以分离的方法。
由于层析在薄层上进行故而得名。
薄层层析是一种微量、快速的层析方法。
它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。
还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。
根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。
吸附TLC→固定相为吸附剂→氧化铝、硅胶。
（较多用）TLC→分配TLC→固定相为液态（通常为水）→固定相吸附在支持剂上。
（一）吸附薄层的基本原理：吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。
吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。
吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。
1.吸附薄层层析：在硅胶薄层板上，样品中的两成分是两种结构近似的染料，在展开剂四氯化碳的作用下。
在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸，再吸附，再解吸，……。
由于对氨基偶氮苯的极性比偶氮苯的极性稍强一些，层析的结果，对氨基偶氮苯受到的吸附作用稍强于偶氮苯，从而将两者分离。
展开结束以后，会在薄层板上形成两个斑点，混合物中的成分得以分离。
中药中的有效成分复杂多样，结构近似者不少。
特别是对未知结构的成分分析，设计并摸索出合理的层析条件是首要任务。
只有先设计出可用的层析条件，再经摸索改进，才可能对未知或者已知成分进行成功地分离。
然后才能谈得上进一步的分析研究。
要设计出合理有效的层析条件，必须熟悉薄层层析条件的选择的基本要领。
下面对薄层层析条件的选择做一初步介绍。
氨基酸的薄层层析(TLC)
氨基酸的薄层层析（TLC）【实验原理】聚酰胺薄膜层析是60年代以后发展起来的一种新的层析方法，特别适用于氨基酸及其衍生物的分析。
具有灵敏度高、分辨率强、操作方便快捷等特点。
聚酰胺是一类化学纤维素原料，即锦纶（尼龙）。
由乙二酸和乙二胺聚合而成的，称锦纶66。
由于分子中含有大量的酰胺基团，故称聚酰胺。
聚酰胺薄膜是在涤纶片基上涂上一层锦纶制成的。
聚酰胺对许多极性物质有吸附作用，这是由于聚酰胺的-C=O和 -NH- 能与被分离物质的一定基团形成H键。
如酚类（黄酮类、鞣质）和酸类（氨基酸、核苷酸）能以其羟基与酰胺键的羰基形成H键。
在层析过程中，当样品随流动相通过聚酰胺薄膜时，由于聚酰胺与各极性分子产生H键吸附能力的强弱不同，从而可将样品中各成分分离。
物质分离后，层析点在图谱上的位置，即在滤纸上的移动速率，用Rf来表示。
在一定条件下，每个物质都有特定的Rf值，因此，用Rf可鉴定不同的物质。
无色物质的层析图谱可用光谱法（紫外照射）或显色法鉴定。
氨基酸层析图谱常用茚三酮作显色剂。
本实验利用单向上行层析法鉴定氨基酸。
【实验试剂和器材】(一) 试剂1. 氨基酸标准液(10mg/ml)：三种氨基酸是赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸，分别配成上述浓度的溶液。
2. 氨基酸混合液（每种氨基酸5mg/ml）3. 展层剂：正丁醇：12％氨水：95％乙醇＝13: 3: 3（V/ V）4. 0.1%茚三酮－正丁醇液。
(二) 器材聚酰胺薄膜，毛细管，层析装置，电吹风机，喷雾器，塑料手套等。
【实验方法】(一) 薄膜的剪裁取薄膜（7cm×10cm）一张，在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一直线，在此直线上每隔1厘米作一记号为点样处（外侧两点距边缘2c m）。
(二) 点样氨基酸的点样量以5ul为宜。
点样时，用毛细管吸取氨基酸样品，与薄膜垂直方向轻轻碰点样处，每点在纸上扩散的直径最大不超过2mm。
点样过程中，必须在第一点样品干后再点第二滴。
薄层层析操作步骤
TLC操作步骤
1、配制展开剂
氯仿：甲醇：水=75: 35: 10
倒入层析缸≤1 cm，盖上盖子让层析缸饱和
2、准备薄层板
距离底边2 cm处用铅笔画线，间距1 cm标点，放烘箱30 min烘干
3、点样
拿出薄层板放到层析缸里没有展开剂的一侧，30 min，让板充分饱和；
用毛细管在铅笔标点处点一次样，用洗耳球迅速吹干，多次重复，样品直径不要超过3 mm 4、进行分离
放层析缸，盖盖子，分离约10 min，至顶端约4 cm处，拿出，用铅笔画出前沿线，吹干溶剂
5、显色
荧光板在试样展开后，在紫外灯下观察，背底发荧光，而试样组分点由于吸收了紫外光，就不发荧光或荧光较弱
6、计算Rf值
原点至斑点中心距离
原点至展开剂前沿距离。
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薄层层析（TLC）实验方法
1、实验材料
样品:适当浓缩（使用毛细管点样）
展开剂：正己烷：乙酸乙酯=5：3（v/v）
暗箱紫外分析仪
碘缸配置：单质碘：硅胶=1:25（质量比）
层析板：薄层色谱硅胶预制板
展开时间約1.5h
结束层析后，标记展开剂在层析板上位置，测量点样点与其的距离，记为D.
吹干层析板（挥发展开剂）后，将其放入暗箱紫外分析仪，标记有紫外显色的点(铅笔画的圈)；再将其放入碘缸（显色1-3分钟），标记出碘反应的显色点，分别测量其于点样点的距离，记为d1与d2。
见下图
计算迁移率Rf=dn/D.
D=15.5cm ; d1=13.7cm; d2=12.5cm
Rf1=d1/D=13.7/15.5=88.39% Rf2=d2/D=12.5/15.5=80.64%。