《薄层色谱法》PPT课件
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薄层色谱讲义ppt课件
氧化铝、离子交换纤维素、硅藻土、乙酰 化纤维素及聚酰胺等。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
16
2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
16
2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
经典色谱法分析技术—薄层色谱法(分析化学课件)
小
极性
大
薄层色谱固定相和流动相选择
2. 流动相展开剂的选择要求
薄层色谱分离中一般要求各斑点的Rf值在0.2～0.8之间，Rf值之 间应相差0.05以上.
3. 流动相展开剂的选择方法
如果单一展开剂分离效果不好，可用两种或两种以上的单一溶剂按 照一定比例混合而成的溶剂展开,可以达到较好的分离效果.
薄层色谱固定相和流动相选择 被测组分、吸附剂和展开剂的选择原则
常用溶剂的极性顺序为：
常用吸附剂的极性顺序为：
增
增
大
大
薄层色谱固定相和流动相选择
多糖、蛋白质等大分子、生物碱盐
极 性
苷类（皂苷、黄酮苷、蒽醌苷）
渐 黄酮、蒽醌等苷元、有机酸
小
香豆素、萜类、挥发油等亲脂性成分
烷烃＜烯烃
＜二甲胺＜酯类＜酮
＜醚＜硝基化合物
类＜醛类＜硫醇＜胺 类
＜酰胺类＜醇 类＜酚类＜羧 酸类
分离原理
吸附薄层色谱分离原理
展开（分离）
分离过程：
制板→点样→展开→显色→定性定量分析
固定相--吸附剂
薄层色谱的固定相所用的吸附剂
流动相---展开剂
薄板的底端浸入到适当的流动相溶剂
吸附薄层色谱分离原理
薄 层 色 谱
点样
展开剂
吸附薄层色谱分离原理
分离原理：
展开剂在毛细管的 浸润作用下，带着 各组分沿着薄板向
薄层色谱固定相和流动相的选择
薄层色谱固定相和流动相选择
一、固定相（吸附剂）的选择
1. 选择原则 根据被分离组分的极性选择吸附剂：
被分离组分的极性强——弱极性吸附剂； 被分离组分的极性弱——强极性吸附剂；
薄层色谱固定相和流动相选择
《项目五TLC技术》PPT课件
– 采用多次点样法，第二次点加样应待前一次点样的溶剂 挥发后再进行。
– 同一快硅胶板上同时点多个样时，每个样需点在同一高 度
– 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）。
精选ppt
10
• 展开
– 多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以75 为最佳。展开距离一般为10-15cm。
直立式层析缸示意图 1-层析缸； 精2选-薄pp层t 板 3-展开剂饱和蒸气；4-展开剂11
标注明其激发光波长。例 硅胶HF254
精选ppt
7
三 、TLC操作步骤
• 薄层板活化（可直接用商品TLC，不需活化）
– 涂布后的薄层先在室温下晒干，在使用前置适当
温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备
用。不同薄层活化条件略有不同，如：
• 硅胶
110℃
1h
• 氧化铝
110℃
30min
精选ppt
8
精选ppt
19
❖杂质检查方法 • 杂质对照品法（A） • 供试品自身对照法（高低浓度法）（B） • 对照物质法（C）
样对 A
样对 B
精选ppt
样对 C
20
精选ppt
21
任务1、检验某样品的纯度
样品1：溶解少量样品1进行薄层检测并计算Rf值
溶剂：乙醇
展开剂：石油醚：乙酸乙酯=4：6 （体积比）
任务2、混合物的分离
样品2：溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂：95%乙醇
展开剂：石油醚：乙酸乙酯=3：7（体积比）
任务3、 选择最佳Rf值（0.3－0.7）
样品3：溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂：95%乙醇展开剂：自己配置Fra bibliotek精选ppt
– 同一快硅胶板上同时点多个样时，每个样需点在同一高 度
– 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）。
精选ppt
10
• 展开
– 多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以75 为最佳。展开距离一般为10-15cm。
直立式层析缸示意图 1-层析缸； 精2选-薄pp层t 板 3-展开剂饱和蒸气；4-展开剂11
标注明其激发光波长。例 硅胶HF254
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7
三 、TLC操作步骤
• 薄层板活化（可直接用商品TLC，不需活化）
– 涂布后的薄层先在室温下晒干，在使用前置适当
温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备
用。不同薄层活化条件略有不同，如：
• 硅胶
110℃
1h
• 氧化铝
110℃
30min
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8
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19
❖杂质检查方法 • 杂质对照品法（A） • 供试品自身对照法（高低浓度法）（B） • 对照物质法（C）
样对 A
样对 B
精选ppt
样对 C
20
精选ppt
21
任务1、检验某样品的纯度
样品1：溶解少量样品1进行薄层检测并计算Rf值
溶剂：乙醇
展开剂：石油醚：乙酸乙酯=4：6 （体积比）
任务2、混合物的分离
样品2：溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂：95%乙醇
展开剂：石油醚：乙酸乙酯=3：7（体积比）
任务3、 选择最佳Rf值（0.3－0.7）
样品3：溶解少量样品2进行薄层检测并计算Rf值 溶剂：95%乙醇展开剂：自己配置Fra bibliotek精选ppt
第五章 薄层色谱法(共84张PPT)
荧光;银激活的ZnS和CdS, ZnS• CdS •Ag在366nm
的紫外线照射下能够产生荧光。 硅胶即可以进行吸附层析，又可以进行分配层
析，主要的区别是在于活化程度不同，前者活化程 度高，后者活化程度低。 （3）纤维素
可在实验室制备，取脱脂棉或滤纸剪成小
11/20/2022
12
块加适量的5％的盐酸，加热煮沸3小时，冷却
要于150－160度干燥1－3小时，备用。
（3）薄层板的活化
硅胶、氧化铝的活性与其含水量有关，
11/20/2022
25
含水量越低，吸附能力越强，其活度越高。 因此层析板在使用之前必须经过活化。对于硅胶 薄层其活化温度为105~110°C，氧化铝薄层的活
化温度为150~200°C，活化后的薄层板在使用 之前应放在干燥器中备用。
薄层层析中的吸附剂和柱层析相似，首先 应该考虑应如何层析，一般的讲，非极性或弱极 性的组分的分离用吸附层析，水溶性组分的分离 用分配层析。
常用的吸附剂：
（1） 氧化铝
氧化铝铺层时一般不加粘合剂，直接用干
11/20/2022
8
粉铺层，得到的层析板称为“干板” 或“软 板”，但也可以加煅石膏作粘合剂，这种混有 煅石膏的吸附剂称为氧化铝G，用氧化铝G加水，
3.各种特制薄层
由于工作需要，各种特制薄层相继出现，
这里介绍数种：
11/20/2022
29
（1）混合薄层 有两种吸附剂混合制成。例如，
为了降低硅胶的活度，可在其中加入一定量的硅藻
土铺层，也可以用硅胶：氧化铝（1：1）铺层，
对糖和醇具有较好的分离效果。 （2）酸碱薄层和pH缓冲薄层 在分离生物碱和氨基酸时，为了得到更好的
(2) 1958年斯塔尔对薄层层析的吸附剂和 涂铺工具进行了改革并使之标准化，克服了 技术上的困难，从此以后，薄层层析法得到 了迅速的发展。
的紫外线照射下能够产生荧光。 硅胶即可以进行吸附层析，又可以进行分配层
析，主要的区别是在于活化程度不同，前者活化程 度高，后者活化程度低。 （3）纤维素
可在实验室制备，取脱脂棉或滤纸剪成小
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12
块加适量的5％的盐酸，加热煮沸3小时，冷却
要于150－160度干燥1－3小时，备用。
（3）薄层板的活化
硅胶、氧化铝的活性与其含水量有关，
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含水量越低，吸附能力越强，其活度越高。 因此层析板在使用之前必须经过活化。对于硅胶 薄层其活化温度为105~110°C，氧化铝薄层的活
化温度为150~200°C，活化后的薄层板在使用 之前应放在干燥器中备用。
薄层层析中的吸附剂和柱层析相似，首先 应该考虑应如何层析，一般的讲，非极性或弱极 性的组分的分离用吸附层析，水溶性组分的分离 用分配层析。
常用的吸附剂：
（1） 氧化铝
氧化铝铺层时一般不加粘合剂，直接用干
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粉铺层，得到的层析板称为“干板” 或“软 板”，但也可以加煅石膏作粘合剂，这种混有 煅石膏的吸附剂称为氧化铝G，用氧化铝G加水，
3.各种特制薄层
由于工作需要，各种特制薄层相继出现，
这里介绍数种：
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29
（1）混合薄层 有两种吸附剂混合制成。例如，
为了降低硅胶的活度，可在其中加入一定量的硅藻
土铺层，也可以用硅胶：氧化铝（1：1）铺层，
对糖和醇具有较好的分离效果。 （2）酸碱薄层和pH缓冲薄层 在分离生物碱和氨基酸时，为了得到更好的
(2) 1958年斯塔尔对薄层层析的吸附剂和 涂铺工具进行了改革并使之标准化，克服了 技术上的困难，从此以后，薄层层析法得到 了迅速的发展。
薄层色谱法PPT参考课件
17
②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
18
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。
②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
18
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。
薄层色谱法PPT精选文档
– 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离 度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。
– 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）， 微量注射器。
37
展开
• 展开方式：上行展开 • 展开过程： • 展开缸预先用展开剂饱和，平衡系统，
薄层板浸入展开剂展开（距边缘0.51cm），挥干展开剂
38
• 检测
塑料或铝基片上，成一均匀薄层。干燥后 进行点样，展开，斑点定位；或与适宜的 对照物随行对照比较，或用薄层扫描仪扫 描，用于药物或其他化合物的分离，鉴别， 检查或含量测定等。
2
• TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特 别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变 化的物质的分离。
• 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样 和展开剂用量少，展开速度快。
0.75
Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降
0.5
0.25
0 0.1 0.3
Rf
0.5 0.7 0.9 1
13
流动相与固定相
• 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留 和分离选择性决定于三个因素：
流动相
溶 解 能 力
竞争
吸附 剂
溶质 相互作用
14
固定相
要求：纯度高，含杂质少； 粒度，结构均匀一致，有一定的比表
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
24
• 流动相选择时需考虑溶剂的下列情况
– 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护剂， 有时需重蒸除去乙醇。
– 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致，导致实 验难以重现。
– 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注意出厂 日期。
– 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相互作用。 – 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流动相。
– 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）， 微量注射器。
37
展开
• 展开方式：上行展开 • 展开过程： • 展开缸预先用展开剂饱和，平衡系统，
薄层板浸入展开剂展开（距边缘0.51cm），挥干展开剂
38
• 检测
塑料或铝基片上，成一均匀薄层。干燥后 进行点样，展开，斑点定位；或与适宜的 对照物随行对照比较，或用薄层扫描仪扫 描，用于药物或其他化合物的分离，鉴别， 检查或含量测定等。
2
• TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特 别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变 化的物质的分离。
• 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样 和展开剂用量少，展开速度快。
0.75
Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降
0.5
0.25
0 0.1 0.3
Rf
0.5 0.7 0.9 1
13
流动相与固定相
• 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留 和分离选择性决定于三个因素：
流动相
溶 解 能 力
竞争
吸附 剂
溶质 相互作用
14
固定相
要求：纯度高，含杂质少； 粒度，结构均匀一致，有一定的比表
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
24
• 流动相选择时需考虑溶剂的下列情况
– 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护剂， 有时需重蒸除去乙醇。
– 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致，导致实 验难以重现。
– 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注意出厂 日期。
– 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相互作用。 – 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流动相。
薄层色谱法概述PPT课件【共52张PPT】
*
k 反映了两种溶质的平均迁移速度，其由流动相溶剂强度 决定 I0 -（ IR + IT ）=差为被介质吸收并转换为热的光强 4 丙酮 0. 氧化铝—有碱性、中性、酸性 放置时间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信噪比降低。 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 归一化法、内标法、外标法 这种影响一般使分配系数变小。 此外还有：化学键合相反相展开、化学键合相正相展开、离子交换、离子对色谱、凝胶、胶束、手性展开。 这类扫描仪技术上一些问题还未解决。 51 / 二氧六环 0. 展开距离一般为10-15cm。 单光束双波长——对背景不均匀引起的干扰有补偿作用，选择的两个波长应接近些。 HPLC一次只能分离一个样品，通常采用反相色谱，色谱后衍生化受限制。
*
*
点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul），微量注射器。
*
*
自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为cm。
*
薄层色谱参数
保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。，
中药材薄层层析ppt课件
3）对照品和对照药材同时对照(“双对照”) 为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照
品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。 例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品
来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
2）薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3）吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
中药材的薄层色谱法鉴别
薄层色谱法：在中药材及其制剂的定性鉴 别中得到广泛的应用，这主要是由于其具有分 离分析双重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏 度和专属性，成为中药鉴别的重要方法。
薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含 量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法， 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝薄层色谱
3、对照物的选择
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单体， 也包括对照提取物）和对照药材两种。
对照物的设置有以下三种方式： 1）对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制成 对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一颜 色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置一 种或数种对照品。 2）对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
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含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示，
并以下标注明其激发光波长。例 硅胶
HF254
2020/3/13
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4.薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例：
硅胶板（粒度10～40um）
硅胶G—将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)， 迅速研磨均匀，立即涂铺。
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7.3 薄层色谱系统及其操作技术
一. 薄层色谱系统组成 1. 薄层板
(1)未改性固定相 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能 形成氢键的物质有特别的选择性。
硅胶或硅胶G ——以CMC为黏合剂。配 制0.2% ～ 0.7% CMC水溶液,放置过夜, 使悬浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附 剂匀浆。
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反相薄层板制备——以不同链长的正构烷 烃为固定液, 配制成适当浓度的溶液(如5% 硅酮油乙醚溶液),浸渍硅胶板。
5.薄层板活化
涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前 置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后 置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有 不同，如：
HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、 不可逆吸附物质均有大的影响。
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7.2 薄层色谱法的基本原理
1.保留参数（Rf值）
用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，
通常称作比移值，用Rf表示。
Rf=Ls/L。，
L。
样品
Lr
原
W
点
原 点
参 比
前 沿
RS
Ls
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2.分离效能参数
理论塔板数 n=16[Ls/W] 2 ，考虑静 态扩散引起的起始斑点半峰宽的影 响引入真实塔板数（n真实 ）
n真实 =5.54[Ls/（b0.5 - b0 ）] 2
b0.5为样品斑点半峰宽， b0样品起始斑点 半峰宽。
塔板高度h真实= Ls/ n真实
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3.70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年 代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各 步操作的仪器化，并实现了计算机化。
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4.薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）
固定相和流动相
TLC——流动相流动靠毛细作用力， 流动相选择较少受限制，固定相不用 再生。而 HPLC是在封闭的系统内， 流动相流量靠泵控制，溶剂选择受检 测器限制，固定相需再生。
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(2)表面改性固定相
疏水改性硅胶——化学键合烷基
亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二 羟基等，薄层板极性介于极性吸附剂和 疏水改性剂之间（极性次序：硅胶﹥氨 基﹥氰基﹥二羟基﹥ 反相）。
表面改性纤维素——乙酰化纤维素
(3)药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土 类、氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直 径一般要求10 – 40 um。
7.薄 层 色 谱 法
(Thin layer chromatography, TLC)
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7.1 概 述
1.1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
2.因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。
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2.载板——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中 浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后 充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。 要求光滑、平整、洗净后不附水珠。
3.黏结剂
(1)无机黏结剂——石膏（硫酸钙），添加 石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏 结剂的吸附剂以字母“H”表示。无机黏 结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂 铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄 层强度差。
则R 2L0Rf L0Rf n Rf
W1 W2 W
4 Rf
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R 2L0Rf L0Rf n Rf
W1 W2 W
4 Rf
R 1.00 0.75 0.5 0.25 0
0.1 0.3
Rf=0.3,R最高 Rf在0.2-0.5,R变化不大 Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降
样品处理
TLC要求没有HPLC严格。
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色谱分离
TLC可同时分离多个样品，并可采用相同或 不同溶剂进行同向或双相多次展开，通常采 用正相色谱，色谱后衍生化方便。
HPLC一次只能分离一个样品，通常采用 反相色谱，色谱后衍生化受限制。
对污染物抗受力强
TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不 可逆吸附物质均无影响。
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(2)有机黏结剂——羧甲基纤维素钠 （CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合 物等。其特点是薄层强度高、使用方便， 但不能用浓硫酸作显色剂。
(3)荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光 指示剂，常用的荧光指示剂
在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光 素、硫化镉、阴极绿等。
在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。
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3. 容量因子（K’）
容量因子: 分配达到平衡后，组分在固定相的量（WS) 与流动相中的量（Wm)之比。
K’ = WS / Wm = (cS / cm )（Vs/ Vm） =K（Vs/ Vm）
其中K = cS / cm ，表示分配系数，即分离达到平衡时， 组分在固定相和流动相的浓度之比。
4.分离度
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注意：
a.同一物质在不同展开方式中得到的比移 值是不相同的。
b.在同样溶剂的重复n次的多次展开后的 比移值(Rf)n=1-(1-Rf)n 。
相对比移值（Rx） Rf测量中一个重要的误差来源是难以确 定溶剂前沿的位置，因此，引入相对比 移值（Rx）。 Rx=Ls/Lr
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两个斑点中心距离
两峰顶距离
R 两个斑点宽度的平均值 两峰底宽度的平均值
2d 2(LS2 LS1 ) 2L0Rf W1 W2 W1 W2 W1 W2
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假定W1 W2 W 则R 2L0Rf L0Rf
W1 W2 W
另有n=16[Ls/W] 2