实验五染色体Ag-染色法
实验五染色体Ag-染色法
❖ 1、实验原理 ❖ 应用银染色技术，哺乳动物的核仁组织者
(NOR)特异性染为黑色， ❖ 这种银染色阳性的NOR称为Ag-NOR ❖ 即18S+28S核糖体基因的分布区，
图15-1
❖ 银染色的是与rDNA转录有关的一种酸性蛋白。 因此，银染的是有转录活性的NOR。
❖ 一般NOR位于次缢痕的位置。
❖ (3)玻片标本细胞面朝上平放其上，加4滴50 %AgNO3溶液和2滴明胶显影液，
复以盖片(或擦镜纸)直到玻片标本呈金褐色为 快速漂洗，晾干。
❖ (5)用Giemsa染色液(磷酸缓冲液：Giemsa原 液=10：1)染色8～10 min，用自来水冲洗。
2、实验材料
❖ 水浴锅、试剂瓶、镊子、滤纸、擦镜纸等 ❖ 硝酸银溶液、明胶显影液、Giemsa原液
3、实验方法
❖ (1)按常规方法制备染色体标本片（见实验一）
❖ (2)在培养皿底部放一用蒸馏水润湿的滤纸， 上放2根玻棒(或火柴棒)，置水浴锅保温至 56～60℃(一般采用60℃)。
此过程可不放在水浴锅内，直接将常规染色体标 本片放在56～60℃的电热板上亦可。
❖ (6)蒸馏水冲洗后，空气干燥，镜检。
5、实验结果与分析讨论
❖ 仔细观察．Ag-NOR分布， ❖ 并计数10个细胞分裂相Ag-NOR数目
【精品】实验五植物细胞染色体组型分析
【精品】实验五植物细胞染色体组型分析一、实验目的1.了解植物细胞的染色体结构与组型。
2.掌握显微镜下植物细胞染色体组型的观察与分析方法。
3.了解植物中一些重要的基因的遗传规律。
二、实验原理染色体组型是指染色体在减数分裂过程中的排布方式。
植物细胞有异型体和同型体两种染色体组型。
异型体为一对完全同源染色体，又称同源染色体，一般为一条父源染色体和一条母源染色体。
同型体为有两个或多个富有染色质的染色体，其形状、大小和基因数目都不相同。
所有染色体的组型称为染色体组。
1.显性基因（Dominant Gene）:对表现型起主导作用的基因称为显性基因，表现为显性表型。
3.等位基因（Allele）：处于同一位点上的两个或几个相同或不同的基因，互称等位基因。
4.杂合子（Heterozygote）：由不同的二个等位基因组成的个体，称为杂合子。
三、实验材料与设备材料：豌豆播种板、绿豆胚芽、韭菜根尖、镜片、盐酸凝胶、盐酸、无菌棉签。
设备：光学显微镜、活组织切片技术装置。
四、实验步骤1.绿豆胚芽根尖染色体制片法（1）提前准备好盐酸和盐酸凝胶。
（2）取绿豆胚芽，将其根尖植片加入好的盐酸溶液中，使其在40℃恒温水浴中加热5分钟以上。
（注意观察植片是否干燥）（3）将加热过的绿豆胚芽根尖植片用盐酸凝胶润湿，放到盐酸凝胶中的一个角落，加上盖片，用无菌棉棒挤压均匀。
（4）在其他角落加上无水乙醇75℃圆形滴底片，使其自然流至植片上，并迅速用滤纸吸掉超出的溶液。
（5）将制片好的绿豆胚芽根尖植片放在显微镜下进行观察和染色体组型的分析。
（1）提前取好豌豆播种板，选择两个完全不同的豌豆品种研究。
豌豆花朵打开后，取开放的花萼、两个雄蕊，并把大多数花粉用无菌棉棒擦去，保留少量未受损的花粉。
（2）将花药破开，取出雄蕊，并用剪刀将半个雄蕊放在一张透明胶带上。
（3）将豆荚壳破裂后，能看到裂口处有许多半透明的粘状液体，用透明胶带轻轻地沾取三次，每次用新的胶带。
实验五骨髓细胞染色体的制备及组型分析
实验五骨髓细胞染色体的制备及组型分析一、实验目的初步掌握骨髓细胞染色体的制片及染色技术，学习染色体组型分析方法，观察动物细胞染色体的数目和形态。
二、实验原理真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。
利用骨髓的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。
另外，在骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养。
主要的中期相来自成红细胞系统，也来自各种骨髓母细胞。
单核细胞和淋巴细胞的分裂相是较少的。
不过，在染色体制片上已无法区别上述来源。
多倍体的中期相（4n、8n和16n）往往来自于巨核细胞。
对大型动物通常采用对骨骼、脊柱或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。
通过骨髓得到的染色体是比较简便的，一般也无需无菌操作。
在临床上多用于白血病的研究。
在实验条件下，这种染色体是机体内真实情况的反映，因此在药品检验、环境监测、食品检验等工作以及致畸、致癌、致突变等研究中，利用骨髓制片的方法易于观察毒性物质在体内对细胞和染色体的影响。
不过，在有些情况下，穿刺取骨髓较困难，或者希望对同一个体材料进行连续的对比取材，以观察药物或环境因素对人类或动物的影响及染色体的动态变化。
这时，采用外周血细胞而不伤害供血者直接制备染色体的技术就十分有利了。
在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素。
秋水仙素是从百合科秋水仙属的一个种——秋水仙的器官和种子内提炼出来的一种植物碱。
因有剧毒，故使用时要特别注意，切勿使药液进入眼内或口中。
《医学微生物学》实验五-抗酸染色与墨汁负染实验
二、墨汁负染色法
步骤
1.滴半滴墨汁于载玻片,取菌并混匀。 2.盖盖玻片(覆盖于菌液上，注意先将盖 玻片一边接触菌液缓缓斜放下，以免产 生气泡)。 3.先以低倍镜找好视野，再换高倍镜观 察。
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二、墨汁负染色法
结果观察
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二、墨汁负染色法
临床意义
新型隐球菌可引起全身各组织器官 炎症，最易侵犯的是中枢神经系统，引 起慢性脑膜炎。
集菌法涂片应按“发现细菌”或“未发现细菌”报告
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二、墨汁负染色法 目的
墨汁负染色法观察新型隐球菌的 形态。
目 录 末页二、墨汁Fra bibliotek染色法原理
新型隐球菌的荚膜较厚，一般不 易着色，同时菌体折光性较强，用墨 汁负染色法可在黑色背景下看到透亮 的菌体。
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二、墨汁负染色法
材料
1.菌种 新型隐球菌 2.试剂 优质墨汁 3.其他 载玻片、盖玻片、镊子、普通 光学显微镜
《医学微生物学》实验五
一、抗酸染色法 二、墨汁负染色法
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一、抗酸染色法 目的
抗酸染色观察结核分枝杆菌的形态。
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一、抗酸染色法
原理
分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量 较高，特别是其中大量分枝菌酸可影响 染料穿入。一旦着色后不易被盐酸酒精 脱色。
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一、抗酸染色法 材料
结核病人的痰液标本、抗酸染色液 试剂盒、试管夹、玻片等。
墨汁负染色法可鉴别新型隐球菌。
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方法
一、抗酸染色法
1.涂片制备
挑取痰液→在玻片上涂成痰膜(厚膜 片:取标本2-3次)
→干燥→固定。
实验五 细胞染色体数目分析
中，置55℃～60℃水浴1.5h～2h后，加甲醇50mL， 静置24h以上，过滤即成姬姆萨染色液原液，装于 棕色瓶内保存备用。 10% Giemsa染液：取原液1份加入9份 0.01mol/L pH7.2 PBS中混匀。
6、细胞：Marc-145细胞
7、载玻片：4℃预冷
三、操作方法
秋水仙素处理，使细胞停止分裂 取对数生长期的Marc-145细胞一瓶，加入秋 水仙素到培养液内使终浓度为0.4μg/ml。 37℃温箱中继续培养2.5-3h。 收集处理的细胞 倾出秋水仙素处理液，用0.25%胰酶溶液消 化细胞，细胞消化好后加入DMEM培养液将细 胞吹下。 1600r/min离心5min收集细胞。
实验五
细胞染色体分析
(秋水仙素裂解法)
一、原理
细胞处于分裂中期时染色体的长短和大小恰
到好处，是研究染色体最好时期。
秋水仙素能破坏细胞纺锤体,并阻止其形成, 使分裂的细胞停留在分裂中期。 秋水仙素使染色体收缩，形成清晰的轮廓。 低渗液处理可使细胞肿胀，染色体分散 空气干燥使细胞和染色体展平。
二、实验材料
1、有丝分裂抑制剂 100×浓缩的秋水仙素（20μg/ml）：将0.1mg
秋水仙素溶于5ml重蒸水中，分装后冰冻保存。
2、细胞消化液：0.25%胰蛋白酶溶液
3、低渗溶液：0.075mol/L KCl
4、固定液：甲醇∶冰乙酸（3∶1混合）
5、染液(Giemsa 吉姆萨染液)
姬姆萨染色液原液：姬姆萨染料0.6g加于50mL甘油
再 次 加 入 固 定 液 800μl ， 轻 轻 混 匀 ， 静 置 2030min或4℃过夜，1600r/min离心5min，弃l固定液，混匀。 吸取50μl细胞悬液于4℃预冷的干净载玻片上， 轻吹液滴，使细胞悬液铺展于玻片上，室温下自 然干燥。（在显微镜下观察，如果细胞均匀地铺 开，细胞不重叠，则用同样细胞浓度制备细胞样
实验五-人类染色体标本制备
实验五-人类染色体标本制备实验目的了解人类染色体的结构和形态，学习制备人类染色体标本的方法。
实验原理人类染色体是由DNA和蛋白质组成的细胞核内生物大分子。
它们是非常细小的、线性的、染色体形态因不同的染色体而异。
人的细胞内共有46条染色体，其中，44条是自动对应的配对染色体，男性有一对性染色体（XY），女性有两条同源性的性染色体（XX）。
制备人类染色体标本需要对细胞进行处理，使其在显微镜下展示出明显的染色体结构。
常用的制备方法是细胞悬液滴落法，即将细胞悬液滴于载片上，在经过一系列的处理后，使其形成明显的染色体结构。
实验步骤1.取合适数量的细胞悬液，滴在已经清洗干净的载片上；2.将载片在干燥器中干燥1小时左右；3.取三瓶试剂，分别为80%乙醇、95%乙醇、细胞色素，放置在洁净的台面上备用；4.将载片沉于80%乙醇中，浸泡5分钟；5.将载片取出，去除乙醇，挥干后，再将载片沉于95%乙醇中，浸泡5分钟；6.将载片取出，去除乙醇，挥干后，将其浸泡在细胞色素溶液中15-30秒；7.将载片在流动自来水下快速漂洗干净，挥干，然后在100%乙醇中固定3-5分钟；8.将载片气干（可用酒精灯），涂两三滴甘油，再覆盖薄玻璃片即可。
实验结果制备好的人类染色体标本可以用显微镜观察到细胞核内的染色体。
成品的标本应该能够清晰地显示出染色体的结构和形态，如下图所示：chromosome1.jpg实验注意事项1.操作时要注意卫生和安全；2.选择细胞悬液的质量对制备染色体标本的质量会有影响；3.操作中需要用到一次性手套；4.操作时尽可能避免离心过度，避免对细胞造成破坏。
实验通过本次实验，我们学习了制备人类染色体标本的方法，掌握相关的操作技巧，对人类染色体的结构和形态有了更深入的了解。
在实验过程中，需要注意卫生和安全，避免对实验者本身和实验环境造成不必要的伤害。
实验五家猪染色体核型分析
按照染色体的数目、大小和着丝粒位 置、臂比、次缢痕、随体等形态特征，对 生物核内的染色体进行配对、分组、归类、 编号等分析过程称为染色体的核型分析。
牛核型（Y染色体端着丝粒） 牛核型（Y染色体中着丝粒）
母牛核型（60,XX） 牛核型（原始图片，中着丝粒Y染色体）
家猪染色体的分组
参照第一届国际家养动物分带核型标准化会 议提出家猪染色体核型分类标准，并根据染色 体的测量数值（染色体相对长度、臂比指数） 将猪的染色体分为A、B、C、D组，然后按照组 内染色体的相对长度由长到短的顺序依次递减 排列，分别标记以1-18的标号，性染色体不编 号，以X和Y表示。
实验五 家猪染色体核型分析
学 院： 动物科技学院 课程名称： 动物遗传学实验课 主 讲 人： 蓝贤勇 博士、副教授
陈 宏 博士、教授 雷初朝 博士、教授
一、实验目的
通过家猪染色体核型分析，了解 染色体的特征及其进行分组的方法和 技术，为今后研究分析家畜染色体核 型奠定基础。
二、原理
核型是指染色体组在有丝分裂中期的 表型，包括染色体的数目、大小、形态特 征等。
家猪染色体的特征
A组：第1-5号染色体，亚中着丝粒染色体（sm),其中第1 号染色体最长，最易识别。
B组：第6-7号染色体，亚端着丝粒染色体（st），其形 态容易识别；
C组：第8-12对染色体，为中着丝粒染色体（M),其中， 第8、10对染色体短臂靠着次缢痕；
D组：第13-18号染色体，为端着丝粒染色体（T)，其中 第13号染色体的相对长度仅次于第1号而位列第二。
三、实验步骤
1、每人一份家猪的染色体标本； 2、剪下染色体，参照模式图，进行分组、配对； 3、将染色体贴在实验报告上； 4、表明染色体组别及其性染色体，写明核型式并写
实验五.革兰氏染色.细菌大小测定.细胞计数
举例
计算公式： 目镜尺每一小格的长度(单位: m)=镜台尺重叠格
数×10m(每一小格的长度)÷目镜尺重叠格数 • 例如：目镜测微尺上的第五小格与镜台测微尺上
的第八格重叠 则目镜测微尺上的每小格= 8×10 ÷ 5 = 16 m
• 测量菌体时不再用镜台测微尺，如改变显微镜的 放大倍数，则需对目镜测微尺重新进行标定
革兰氏染色步骤
• 初染:结晶紫使菌体着上紫色 • 媒染:碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物，
分子大，能被细胞壁阻留在细胞内 • 脱色：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，
出现不同的反应 • 复染：沙黄复染，增加脱色菌与背景的反
差并区别于脱色菌
革 兰 氏 染 色 机 制
细菌大小的测量方法
• 在显微镜下使用显微测微尺测定
菌数(个/ml) x1 x2 x3 x4 x5 25(或1指引手册》p34-35
– 通过镜台测微尺标定目镜测微尺的长度 – 用目镜测微尺测量细菌的大小 – 根据显微镜放大倍数进行换算
菌体的大小=目镜测微尺下菌占的格数目镜测微尺每格的标定值
镜台测微尺
目镜测微尺
A.目镜测微尺 和 镜台测微尺 不平行 B.旋转目镜筒，让 目镜测微尺 和 镜台测微尺 两者平行
C.移动 镜台测微尺（如何操作？） 让 镜台测微尺 和 目镜测微尺 最左边 的第一条刻度线互相重合 从左往右找两把尺子再重合的刻度线
• （思考题：为什么？）
细胞计数
血球计数板是一块特制的载玻 片，其上四条纵槽构成了三个平 台，中间的平台又被一短横槽隔 成两半，每一边的平台上各刻有 一个方格网，每个方格网共分成 9个大方格，中央的大方格为计 数室。计数室边长1mm，共有 400个小方格，加盖玻片于突起 部分上时，即形成一个体积为 0.1mm3的计数室。
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❖ (3)玻片标本细胞面朝上平放其上，加4滴50 %AgNO3溶液和2滴明胶显影液，
复以盖片(或擦镜纸)直到玻片标本呈金褐色为 止，一般为3 min。
❖ (4)移ห้องสมุดไป่ตู้盖片，并用蒸馏水快速漂洗，晾干。
❖ (5)用Giemsa染色液(磷酸缓冲液：Giemsa原 液=10：1)染色8～10 min，用自来水冲洗。
实验五 染色体Ag-染色法
❖ 1、实验原理 ❖ 应用银染色技术，哺乳动物的核仁组织者
(NOR)特异性染为黑色， ❖ 这种银染色阳性的NOR称为Ag-NOR ❖ 即18S+28S核糖体基因的分布区，
图15-1
❖ 银染色的是与rDNA转录有关的一种酸性蛋白。 因此，银染的是有转录活性的NOR。
❖ 一般NOR位于次缢痕的位置。
❖ (6)蒸馏水冲洗后，空气干燥，镜检。
5、实验结果与分析讨论
❖ 仔细观察．Ag-NOR分布， ❖ 并计数10个细胞分裂相Ag-NOR数目
2、实验材料
❖ 水浴锅、试剂瓶、镊子、滤纸、擦镜纸等 ❖ 硝酸银溶液、明胶显影液、Giemsa原液
3、实验方法
❖ (1)按常规方法制备染色体标本片（见实验一）
❖ (2)在培养皿底部放一用蒸馏水润湿的滤纸， 上放2根玻棒(或火柴棒)，置水浴锅保温至 56～60℃(一般采用60℃)。
此过程可不放在水浴锅内，直接将常规染色体标 本片放在56～60℃的电热板上亦可。