ABI7500校正步骤
PCR实验室7500SOP
分子生物操作手册版本号：B修订号：0发布日期：文件标题：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序文件编号：LAB-SOP-FZSW-011 生效日期：编写人：审核人：发布部门：中心主任：批准人：其他：页码：第1 页，共4页【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.目的：确保ABI7500仪器的正确使用及正常运行2.适用范围：美国应用生物系统公司生产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运行环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。
通风：仪器的通风应该没有阻挡。
温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。
湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。
空间：易于操作，安全。
4.操作程序：4.1开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进行实验。
关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。
4.2 创建绝对定量反应板文件：4.2.1依次选择Start > Programs > Applied Biosystems 7500>Applied Biosystems 7500 SDS Software( )，以启动SDS 软件;或在桌面双击Applied Biosystems 7500 SDSSoftware( )图标。
4.2.2选择File （文件）> New （新建）。
4.2.3在New Document Wizard （新建文件向导）窗口中，从Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。
接受Container （反应板类型）和Template （模板）字段中的默认设置（即分别为96-Well Clear（空白96 孔板）和Blank Document（空白反应板））。
(完整版)ABI7500仪器验证方案
编号：ABI 7500验证方案方案制定：日期：方案审核：日期：方案批准：日期：上海＊*生物技术有限责任公司1、简介ABI7500实时荧光定量PCR仪，是美国应用生物系统公司推出的基于微孔板的高通量实时定量PCR系统，其反应速度及准确性、操作实用性和使用灵活性均有较好的提高，能满足科研工作者对于定量PCR系统高通量方面的要求，是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。
它主要有一台ABI 7500 Block kit 96和PC计算机及显示器组成。
2、验证内容ABI7500实时荧光定量PCR仪的验证，主要从以下几个方面进行：PC计算机运行环境的确认、ABI7500运行软件及分析软件的确认、ABI7500 PCR扩增及荧光检测系统的确认。
3、验证目的通过用HBV荧光PCR检测试剂盒来确认ABI7500实时荧光定量PCR仪的扩增和检测体系精密度、线性、准确度等，验证仪器能否正常准确运行,给出可靠的分析结果，以及96孔孔间差异是否在允许范围内。
4、验证内容4。
1 PC计算机运行环境确认4。
1.1 运行环境确认内容检查配套计算机能否正常开机运行，是否有中病毒等现象,能否为ABI7500运行软件和分析软件提供安装平台和运行平台。
4.1。
1.2 结果记录4.2 ABI7500运行软件及分析软件的确认4.2.1 软件确认内容双击电脑桌面上的ABI7500运行软件及分析软件的图标，看应用软件能否打开，能否正常使用.4。
2。
2 结果记录4。
3 ABI7500 PCR扩增及荧光检测系统的确认4。
3。
1 灵敏度和线性4.3.1。
1 方法利用HBV荧光PCR检测试剂盒，配制20支HBV-PCR Mix，并分别加入HBV 企业灵敏度质控品（3。
0E2，3.0E3，3。
0E4，3。
0E5，3.0E6，3。
0E7)、阴性对照、空白对照,均做复管，按照说明书的操作步骤进行。
4.3.1。
2 合格标准（1)空白对照和阴性对照无起跳(2）经标化的企业灵敏度质线性相关系数R≥0.98,复管重复性良好。
ABI 7500 FAST荧光定量PCR仪 操作规程
ABI 7500 FAST荧光定量PCR仪简明操作规程1.双击桌面图标，或从 Start >All Programs > Applied Biosystems >7500 Software > 7500 V2.0 开启软件。
进入主界面后选择Advanced Setup 。
2.默认进入 Setup 下的Experiment Properties 界面2.1输入实验名称（Experiment Name）2.2确认仪器型号2.3在实验类型中，选择 Quantitation-Comparative CT (△△CT)2.4选择试剂种类2.5确认运行模式3.进入 Setup 下的Plate Setup 界面，编辑基因（Target）及样本（Sample）；3.1在“define targets and samples”界面中设置基因3.2在“assign targets and samples”中进行样品板的排布。
4.在“Select relative quantitation setting”中设置内参基因及对照样本。
5.进入 Run Method 界面，设定反应条件及反应体积。
6.点击“save”按钮，文件储存成 Experiment Document Single Files（*.eds）格式，然后在 Run 界面按下按钮，反应即开始进行。
7.实验结束后，点击界面右上角的 Analyze 按钮，软件将会显示实验结果：7.1在扩增图中（见上图），可通过更改Plot Settings 来改变扩增图的显示方式。
如果想查看阈值线或基线，请将Threshold 及Baseline 打勾。
7.2查看相对表达量结果时，利用Plot Settings 选项，可以以不同方式显示相对表达量的结果。
7.3对于 SYBR Green 法实验，可以在Melt Curve 界面中查看熔解曲线。
7.4检测 QC Summary 结果，可以快速查看实验中是否有反应孔存在异常情况。
ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程
ABI7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程1. 目的：使ABI 7500 型核酸扩增荧光检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2. 范围：适用于ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用操作。
3. 职责：操作人按照规程进行仪器的操作使用。
4. 程序：4.1 开机。
连接好所有连线，打开接线板开关，然后依次打开主机开关（在主机侧面），电脑显示器开关（按屏幕下方开关按钮），电脑开关（主机前面按钮）。
使用鼠标双击桌面上一体化仪3.2图标，连机后打开应用程序。
4.2 编辑样品板。
在区域选择界面中进行样品板编辑，同时输入待检样品的相关信息。
4.3 编辑实验程序。
在温度控制界面中进行程序编辑。
4.4 进行实验。
设定完成样品板和实验程序后，将实验样品按样品板设定的位置放入样品槽内，然后将样品槽放入主机内，在程序主界面下点击开始读图标开始运行实验。
实验过程中屏幕的下半部分同步显示实验的运行状态。
4.5 实验中仪器将实时显示每次的样品检测结果：在实验进行中间或实验结束后，均可组合界面中查看实时的检测结果：4.6 定量分析：实验结束后，可以点击定量图标进入定量分析功能。
4.7 打印报告单：定量完毕后，用鼠标单击文件（F）菜单中的刷新病历数据信息，用鼠标单击文件（F）菜单中的打印，系统将自动生成检测报告单，并进行打印。
4.8 关机。
实验全部结束后，可先点击Files菜单Save Data File保存实验结果，然后关闭Opticon Monitor。
依次关闭计算机主机，显示器，ABI 7500主机。
5. 相关文件：无6.相关记录：仪器设备使用、维护保养和清洁记录。
ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
1. 目的为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪，保证扩增及结果分析的标准化、规范化，特制定本规程。
2. 适用范围适用于本公司ABI7500荧光定量PCR仪的操作。
3. 职责3.1使用人员负责本规程的实施。
3.2 设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。
3.3 质量监督员负责监督本规程的实施。
4.内容4.1 程序设置4.1.1 打开电脑及仪器电源，待仪器电源项显示power绿色状态。
4.1.2 双击电脑桌面上的7500 software V2.3 图标打开程序，打开程序单击OK，待软件连接仪器并测试校准状态后（若有出现连接失败可尝试重启电脑，检查USB线接口），出现如下界面，单击Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。
下拉菜单中有一个Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：点击这个选项，可以进入下面这个界面，①②③如上图所示，红色箭头从上到下指示的分别是①实验名称、②仪器型号和③反应程序类型。
（带*号的必需填）此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全），红色箭头从上到下指示的分别是①Plate Setup 选项、②探针类型和③程序应用速度类型，一般使用的探针就是TaqMan 探针，速度类型选择默认就可以了（如果是7500fast 的话则有快速模式可以选择）。
下一步我们可以看到左上角的红色箭头指示的一个Plate Setup 选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。
红色箭头①和②指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头③处可以填写反应探针名称（如P1,HBV ,HCV ）。
箭头⑤是选择报告荧光，一般使用的发光基团是FAM ，箭头⑥是选择粹灭荧光，达安现在使用的是TAMRA 荧光，科华现在使用的是BHQ ，在这个仪器中无此选择项，那么就选择none 。
箭头⑧处可以填写样品名称。
点击箭头④和箭头⑨处可以添加反应探针体系名称和样品名称。
ABI7500 Fast PCR作业指导书
1、目的规范该型号ABI7500Fast荧光定量PCR仪操作程序，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行，操作人员人身安全和设备安全。
2、适用范围适用于ABI7500Fast荧光定量PCR仪的使用操作与维护。
3、职责3.1 操作人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护。
3.2 保管人员负责对仪器进行定期维护、保养。
3.3 科室负责人监督检查本操作程序的执行。
4、操作程序4.1启动笔记本电脑，进入Windows XP系统。
4.2待电脑桌面图标出现后，打开ABI7500Fast荧光定量PCR仪主机电源。
4.3待主机电源指示灯亮后，双击电脑桌面7500 SDS图标，打开软件。
4.4新建文件：在Quick Startup document窗口点击Create New Document 按钮，出现New Document Wizard窗口，在Assay菜单中选择Standard Curve （Absolute Quantification），点击Finish按钮后打开一个空白96孔板文件。
4．5探针设置：双击任意一个孔打开Well Inspector窗口。
4．6点击Add Detector按钮，打开Detector Manager窗口，选择Detector List中的探针，例如用的是TaqMan-FAM标记探针，在列表中选择Reporter：FAM，Quencher：TAMRA；如果用的是SYBR Green I，则在列表中选择Reporter：SYBR，Quencher：（none）。
选择所需探针，按住Ctrl键可选择多个探针，再点击Add To Plate Document 按钮，最后点击Done按钮关闭Detector Manager窗口。
此时Well Inspector窗口仍然是打开的。
填样品表：在96孔表中选择有样品的一个或者多个孔，然后在Well Inspector窗口的Sample Name输入样品的名称，在探针列表中的Use项下的方框中打钩选择要用的探针，在Task栏中选择指定样品类型：未知样品选择Unknown，阴性对照选择NTC，标准品选择Standard。
ABI7500型荧光定量PCR仪标准操作及维护保养规程
●目的建立ABI7500型荧光定量PCR仪的标准操作及维护保养规程，为本设备的操作提供标准依据。
●适用范围ABI7500型荧荧光定量PCR仪的操作、维护保养、清洁过程。
●责任与要求质量部人员必须遵照本规程。
●培训对象质量部●内容1.设备信息2.操作流程示意图3.3.1 开机自检3.1.1 按下配套电脑的开机键打开电脑。
3.1.2 按下ABI7500开关，打开仪器，仪器自动进行自检。
待仅有“power”指示灯（绿色）亮时，自检结束。
3.2 样品上机3.2.1 按下托盘按钮，弹出96孔管架托盘，确定所需的96孔管架。
3.2.2 将加好样品的八连管或96孔板放入相应的孔位。
3.2.3 将托盘推入原来位置。
3.3 编辑运行参数3.3.1 双击桌面上7500 Software v2.3软件图标，打开7500 Software v2.3软件。
3.3.2 在弹出的窗口点击“New Experiment”新建实验程序，并对实验参数进行设置：3.3.2.1 在Experiment Name（实验名称）字段中，可以自定义实验名称。
3.3.2.2 在Barcode（条形码）字段中，输入反应板条码。
3.3.2.3 在User Name（使用者姓名）字段中，输入您的姓名。
3.3.2.4 在Comments（备注）字段中，输入您想保存到文件中的任何附加信息。
3.3.2.5 默认选择instrument（仪器）-----7500(96 wells)。
3.3.2.6 默认选择Experiment type（实验类型）----- Quantitation-Standard Curve。
3.3.2.7 默认选择Reagents （试剂）----- TaqMan® Reagents（TaqMan® 试剂）。
3.3.2.8 默认选择Ramp speed（升降温速度）-----Standard（～2 hours to complete a run）。
荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程及日常维护
荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程及日常维护曹蕾马扬光施小明【摘要】介绍了荧光定量PCR仪（ABI7500）操作规程，总结了其日常维护和注意事项，为其使用提供指导。
【关键词】荧光定量PCR仪操作规程维护荧光定量PCR仪将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可以动态观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物逐渐增加的情况。
1原理介绍实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[1]。
荧光染料法：荧光染料能特异性掺人DNA双链，发出荧光信号，而不掺入双链中的染料分子不发出荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物增加完全同步[1]。
荧光探针法：探针的5端标记荧光报告基团（reporter R）3端标记淬灭基团（quencher Q），探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步[1][2]。
通常，荧光擴增曲线可分为三个阶段，即荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段和平台期。
在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，因此可以在该阶段进行定量分析。
为了便于对所检测样本进行比较，在指数期需要设定一个荧光信号的阈值。
荧光信号由本底进入指数增长阶段的阈值所对应的循环次数称为ct值。
模板的ct值与其起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，则ct值越小。
利用已知起始拷贝数的标准品及其相应的ct值可绘制出标准曲线，测得未知样品的Ct值后，根据标准曲线便可准确计算出该样品的起始拷贝数[3]。
2操作规程2.1开机2.1.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。
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ABI7500校正步骤
ABI7500是一款常用的实时荧光定量PCR仪，用于对DNA、RNA等生物分子进行定量检测。
为了确保测量结果的准确性和可靠性，使用该仪器前需要进行校正。
下面是ABI7500校正的一般步骤，包括仪器准备、光源校正、温控系统校正、定量准确性校正等。
1.仪器准备：
首先需要检查ABI7500仪器的外观是否完好。
检查电源、通风系统和连接线是否正常，确保仪器工作环境安全可靠。
同时，检查仪器的工作液位是否在标准范围内，如需添加液体，应按照仪器使用说明进行操作。
2.光源校正：
打开ABI7500仪器，进入软件界面。
选择“光源校正”功能，按照软件提示进行操作。
通常包括背景校正和通道校正两个步骤。
在背景校正过程中，仪器会自动测量背景信号，并根据结果进行修正。
在通道校正过程中，需要使用标准样品进行比对，以确保不同通道的荧光信号一致。
校正完成后，保存校正结果。
3.温控系统校正：
选择“温控系统校正”功能，按照仪器提供的温度校正盒进行操作。
校正过程中，仪器会自动调整温度控制系统，以确保设定温度与实际温度一致。
校正完成后，保存校正结果。
4.定量准确性校正：
首先选择适当的标准样品，以确保其浓度在仪器检测范围内。
将标准样品分别按照一定比例稀释，再进行定量PCR反应。
测量得到的荧光信号
随标准品浓度变化的趋势应与理论值一致。
根据测量结果，对不同浓度的样品进行定量分析，绘制标曲。
通过标曲可以将实际样品的荧光信号转化为待测物质的浓度。
5.数据分析和校正结果的保存：
将校正结果以及样品测量结果进行记录，并将其保存。
可以通过软件对测量数据进行进一步处理和分析，比如计算标准曲线、确定待测样品中物质的浓度等。
保存校正结果和测量数据可以方便后续的数据比对和结果验证。
值得注意的是，校正过程中要严格按照仪器说明书的要求进行操作，确保校正的准确性和可靠性。
在操作过程中，应注意操作规范，避免引入误差。
另外，校正的频率应根据实际需要进行合理调整，以保证测量结果的准确性。
总结起来，ABI7500的校正步骤主要包括仪器准备、光源校正、温控系统校正和定量准确性校正等。
通过这些步骤，可以确保ABI7500仪器的准确性和可靠性，提高实验结果的可重复性和可靠性。