结核病实验室诊断技术研发进展

广计划。
结核杆菌培养是诊断结核病的金标准，但传统的罗氏培养需要４～６周的培养方能检测到结核菌的生长。目前正在
推广的液体培养系统仅需１ —３周，更加敏感、快速。早期的
ＢＣＥ－６由于具有放射性而限制了其应用。ＭＩＡＴＣ４０法ＧＴ为ｍｃｂｃｒｌｒｔｉｄｃｔｂｙｏａｔｉｏｈｎｉｏｔｅ的简称，ｅａｇｗａｒｕ其原理是Ｊ试管：底部的荧光复合物与氧气结合时处于淬灭状态，当结核菌生长时，氧气逐渐减少，荧光复合物就发出荧光而被检测到。自动化的ＭＧＴ还可加入临界浓度的抗结核药物进行药敏分Ｉ析。ＢＤ公司推出的ＢＣＥ－Ｉ６ＡＴＣＭＧＴ９０全自动分枝杆菌培养／鉴定／药敏系统操作简便；阳性标本检出时间平均为９天；
诊断性能优于标准荧光显微镜。多项研究经ｍｔｅａ分析显示：ＬＤ检查的敏感性比传统镜检方法高约１％… 。同时具备Ｅ０荧光染色的优点，且花费低、可实施性强，可更广泛的常规使用。中国卫生部一茨基金会和中国卫生部一国梅里埃基盖法金会结核病防治项目已准备将ＬＤ显微镜在我国基层实验Ｅ
室推广。二、枝杆菌培养技术研发进展分
扩增反应在等温条件下进行，不需要专门的ＰＲ仪，Ｃ只需一个水浴锅或简单的保温桶和温度计；其结果可以肉眼读值：通过生成的焦磷酸盐置换锰离子，使与之结合的钙黄绿素（ａ— Ｃｌｃｉ）ｅ游离而发出荧光Ｊ也可通过加人核酸燃料ＳＢｒｅｎ，ＹＲＧｅｎＩ或产生白色混浊焦磷酸镁沉淀进行肉眼观察或实时浊度计观察。其对于发展中国家而言是一项分子检测结核杆菌的很有前景的方法。文献报道ＬＭＰ的总特异性为９％Ｊ总敏感性为Ａ９，８．％，中在痰涂片阴性、８２其培养阳性病例中的敏感性只有４．％，在痰涂片阳性、养阳性病例中的敏感性达８８但培９．％。中国卫生部一盖茨基金会和中国卫生部一法国梅里７７埃基金会结核病防治项目已将ＬＭＡＰ列入我国基层实验室推
法采用封闭式系统，明显减少了样品间交叉污染发生的可能；
片镜检、痰结核菌培养及ＰＤ皮试等传统方法。本文介绍近Ｐ十余年来具有代表性的几项结核病实验室诊断新技术的研发
情况。
一
、
显微镜镜检技术研发进展
目前萋一尼氏抗酸染色涂片镜检方法仍是我国传染性结核病人的主要发现手段，但灵敏度仅４％～６％，方法繁００且
ＮＡｓＡＴ是通过高特异性的扩增核酸靶序列来检测结核杆菌，是结核病诊断技术中一种重要而快速的分子诊断工具。美国ＣＣ建议所有结核疑似病人的第一份痰标本均进行ＤＮＡｓＡＴ。一项综合１５项研究的最新文献显示：ＡＴ２ＮＡｓ的总敏感性和总特异性分别为８％和９％，５７然而这些研究结果的差异较大，敏感性在３％一１０，６０％特异性在５％一１０，４０％因此ＮＡｓＡＴ技术的实施受到不同地区技术水平和仪器设备的制约。ＤＡ环介导等温扩增（Ｊｐｍｅｉｅｓｔｅｍｌａｌ — ＮＩｏ－ｄａｄｉｈｒａｍｐｆ０ｔｏｉｉｃｔｎＬＭＰ是一种新型ＮＡｓ技术。此方法便捷、ａｏ，Ａ）ｉＡＴ特异、灵敏、快速。其原理是利用两对不同的特异性内外引物识别靶基因的６个特定区域来扩增结核分枝杆菌的ｇｒｙＢ基因，只有当引物与６个区域严格配对时靶序列才会得到大量的扩增，以该反应具有很高的特异性，易受到非靶序列ＤＡ所不Ｎ存在的影响。且反应快速，因的扩增和产物的检测可一步基完成，扩增效率高，可在１５～６ｉ０ｒｎ扩增１。～ｌ倍。该方ａ０Ｏ
琐，阳性和假阴性较高。以金胺一罗丹明为代表的荧光染假
色提高了镜检的灵敏度，缩短了读片时间，明显降低假阳性和
假阴性，由于荧光显微镜价格昂贵，但不适宜基层应用。最新的ＬＤ显微镜是将低廉的发光二极管与显微镜相结合，Ｅ其价格低于现有的光学显微镜，寿命长，电池供能，可可靠性更强，
张宗德
三、酸扩增检测（Ｎｃｉ核ｕｌｃｅ
ＮＡｓ研发进展ＡＴ）
数居世界第二位。近十余年来，结核病实验室诊断技术突飞
猛进，其中一些技术已经过临床验证并获得一些权威机构的认证，而，国多数地区的结核病实验室诊断仍停留在痰涂然我
临床肺科杂志
２１００年１月第１１５卷第１期１
１０６７
ห้องสมุดไป่ตู้
・
综
述・
结核病实验室诊断技术研发进展
郑晓静
世界卫生组织２００９年全球结核病控制报告显示，全球现
有１７３０万结核病患者，每年发病人数为９７万，国发病人２我

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结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展

目前，结核分枝杆菌检测方法主要包括菌种培养、显微镜检查、分子生物学技术和免疫学技术等。菌种培养是诊断结核病的金标准，但培养周期长、操作繁琐，不适用于早期快速诊断。显微镜检查可观察到痰液中结核分枝杆菌的形态，但灵敏度较低。分子生物学技术如聚合酶链反应（PCR）等具有高灵敏度、快速等优点，但设备昂贵、操作复杂。免疫学技术如酶联免疫吸附试验（ELISA）等具有良好的特异性，但易受交叉反应影响。
3、代谢热谱技术代谢热谱技术是一种通过测定样品代谢过程中产生的热量，实现对目标分子检测的方法。近期，有研究团队利用代谢热谱技术成功检测出结核分枝杆菌，并初步探讨了不同菌种对热谱的影响。该方法具有无损、快速等优点，有望为结核病的早期诊断和耐药性分析提供新途径。
三、结论
结核分枝杆菌快速检测方法在近年来取得了显著进展，但仍存在不足之处。现有的方法在灵敏度、特异性、操作简便性和成本等方面仍需进一步优化。为了有效控制结核病传播，未来的研究应着重以下几个方面：
3.市场应用前景和政策因素对技术发展的影响
随着全球结核病疫情的加剧和对结核病诊断与治疗的需求增加，预计未来将有更多的创新技术在结核分枝杆菌实验室检测领域得到应用和推广。此外，政策因素也将对技术的发展和应用产生重要影响，如政府对相关研究和开发的支持、对新技术的引进和推广的政策倾斜等。
总之，结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展在提高诊断效率和准确性、降低检测下限和提升阳性结果的准确率等方面取得了显著成果。未来，随着传统技术的不断改进和现代技术的不断创新，预计将在结核病的早期诊断、治疗和预防控制等方面发挥更加重要的作用。
2、生物传感器技术生物传感器是一种将生物分子识别元件与转换元件结合，用于检测目标分子的分析装置。在结核分枝杆菌检测方面，生物传感器技术显示出巨大潜力。一种新型的生物传感器可通过电化学信号转换，实现对结核分枝杆菌的高效检测。该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等优点，有望实现结核病的床旁快速诊断。

结核实验室诊断技术研究进展

结核实验室诊断技术研究进展何珍综述，王璞△审校（重庆医科大学附属第一医院呼吸内科，重庆400016）【关键词】基因；分枝杆菌，结核；耐药性；实验室诊断；综述DOI：10.3969/j.issn.1009⁃5519.2018.21.021文献标识码：A文章编号：1009⁃5519（2018）21⁃3336⁃04结核病是结核分枝杆菌感染引起的呼吸道传染病，是全球单一病原体感染导致死亡的第九大原因，位于人类免疫缺陷病毒（HIV）/艾滋病之前。

2016年，全球新发结核病例近1040万例，其中56%在印度、印度尼西亚、中国、菲律宾、巴基斯坦。

约60万新发结核病例对利福平耐药，其中49万例为耐多药结核（MDR⁃TB）。

47%的患者主要分布在印度、中国和俄罗斯；估计有近170万例患者死于结核病[1]。

早期、准确、快速诊断结核是防治的关键。

近年来，结核实验室诊断技术通过不断创新取得了新的进展。

2017年11月新发布的《WS288⁃2017肺结核诊断标准》更对肺结核诊断标准做出重大调整，本文就近年来结核实验室诊断技术的进展作一综述。

1细菌学检测1.1涂片镜检1.1.1改良抗酸染色分枝杆菌抗酸染色法快速、简易、价廉，仍为目前应用最广的结核检测方法。

该方法主要分为7个步骤：玻片处理、标本收集、标本固定、复红染色、酒精脱色、美兰染色、镜检观察。

对任一步骤改进均可提高检测效率。

CHEN等[2]采用粟氏FMMU6型拨片离心沉淀仪处理脑脊液，再用多聚赖酸处理过的玻片收集其中的白细胞并用TritonX⁃100处理，增加了细胞壁对染色剂的通透性，使胞内菌着色更好，显著提高了检出率及敏感性。

邹月丽等[3]采用改良抗酸染色对脑脊液进行检测，将阳性率由10.00%提高至88.57%。

张继萍等[4]采用传统及改良抗酸染色法对菌阴结核支气管肺泡灌洗液进行检测，阳性率分别为38%、82%。

1.1.2荧光染色利用结核分枝杆菌的嗜酸性及对荧光染料的亲和性，以石炭酸为媒染剂加入染色液中，使分枝杆菌染上荧光。

结核病实验室检测技术研究进展

结核病实验室检测技术研究进展发布时间：2021-01-06T15:55:35.297Z 来源：《航空军医》2020年11期作者：赫利丹[导读] 结核病是由肺部吸入结核分枝杆菌造成感染引起的疾病,由于结核分枝杆菌喜欢在相对血液充沛含氧量高的环境中生活繁殖,所以,大多表现为肺结核疾病,具有较强的传染性。

赫利丹陕西咸阳市疾病预防控制中心 712000摘要：结核病是由肺部吸入结核分枝杆菌造成感染引起的疾病,由于结核分枝杆菌喜欢在相对血液充沛含氧量高的环境中生活繁殖,所以,大多表现为肺结核疾病,具有较强的传染性。

通过血液散播到身体其他部位的称为:肺外部结核病。

关键词：结核病；实验室检测技术引言结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染性疾病，我国结核病的疫情尤为严重。

根据世界卫生组织的统计，全世界近三分之一的人口感染了结核病。

目前，全球有2,000万结核病患者，每年新增近870万结核病病人，且死亡人数多达200万例[1]。

我国是世界上二十多个结核病流行严重的国家之一，在最近十年的传染病统计中，结核病的死亡率仅次于艾滋病。

而且，随着结核病的症状变得越来越不典型，肺外结核感染的隐匿性给结核病的诊断和治疗带来了障碍。

因此，早期准确诊断和治疗结核病是控制结核病流行的关键措施之一。

尽管存在多种结核病诊断方法，例如确诊性细菌学检查、分子生物学检测和结核菌素皮肤试验等，但各种诊断方法的局限性和不足使得结核病的诊断更加困难[2]。

因此，为了对结核病进行早期诊断，以及通过判断治疗效果以便于更好地控制结核病，临床上需要一种准确、简单又快速、灵敏的诊断方法。

除此之外，治疗结核病还应具备充足的药物资金和便利的购药渠道。

为此，需要进行结核病诊断治疗的临床分析与经济学评价。

1结核病诊断过程分析在进行结核病的诊断时，首先需要制定检测方案，该方案需要通过具备质量保证的实验室提供药物敏感试验结果和当地耐药检测资料，以此作为药物选择的依据。

与此同时，还需收集该地区获得质量保证实验室提供的药物敏感性测试结果和区域耐药性测试数据，作为制定方案和选择药物的基础。

结核病实验室诊断方法的现状与进展

结核病是由结核杆菌引起的疾病，该致病菌可侵
犯肺组织、淋巴系统。结核病患者可出现胸部疼痛、
咳痰、咳血等临床症状，并且男性发病率明显高于女性 … 。近年结核病的发病率越来越高，每年新发病人
数约１０００万，防治工作十分严峻。国外研究认为，
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５ｌ７・
结核病实验室诊断方法的现状与进展
袁方
【关键词】结核病；实验室诊断；发展【中圈分类号】Ｒ５２【文献标识码】Ａ
【文章编号】１００４－５５１１（２０１７）０５－０５１７－０４取标本，滴入含有２００ｐ．１双蒸水的离心管内，并进行高温灭活。。提取结核分支杆菌ＤＮＡ，再通过使用ＤＮＡ扩增反应、反向杂交膜显色方法进行诊断。涂片
方法检测时间较长，患者需要等待较久方知结果。
对于菌株的耐药性检测，只要将探针固定在基因芯片上，即可进行观察和分析耐药情况。
２．４ＰＣＲ检测法ＰＣＲ检测法又可称为聚合酶链反应检测法，其为通过体外酶合成特异性ＤＮＡ片段的 பைடு நூலகம்
实验室诊断技术是结核病诊断中极为重要的手段，随
着基因芯片、一干扰素释放试验等诊断技术的成熟
运用，极大地促进结核病诊断技术的发展。１传统结核病病原学诊断方法
度快，准确度高。但线性探针法也有不足之处，不能

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诊断 Diagnosis
标准 4. 所有胸部影象学检查可疑肺结核的病人，应该对其痰标本进行微生物学检查。 Standard 4. All persons with chest radiographic findings suggestive of tuberculosis should have sputum specimens submitted for microbiological examination.
15人/年 • 如果不给予治疗涂阳病人更容易死亡
Rouillon A. Tubercle 1976;57:275-99
结核病变在体内的演变和播散
TB和HIV 双重感染 TB and HIV co-infection
• 在没有HIV感染的人群中，结核杆菌感染者在其一生中大约有10%的人会发病
In the absence of HIV, about 10% of people infected with TB will develop TB disease. • 在TB/HIV双重感染者中约50%的感染者会成为结核病患者
In people co-infected with HIV and TB, about 50 % may develop TB disease • TB 加速和恶化 HIV/AIDS的疾病进展 TB accelerates the progression of HIV disease
TB和HIV 双重感染 TB and HIV co-infection (cont’)
卫星DNA、小卫星DNA、微卫星DNA VNTR 2. 散在重复序列 Interpersed Repeats
GC富含重复序列和主要的串联重复序列 Polymorphic GC-Rich Repetitive Sequence & Major

结核病实验室诊断方法研究进展

结核病实验室诊断方法研究进展苗素云作者单位:３００３９３天津,天津市西青区结核病防治所ʌ摘要ɔ肺结核是一种临床常见的呼吸系统传染病,主要由结核杆菌感染引起.我国现已经成为肺结核发病的重灾区,若未能及时得到有效治疗,可导致患者病情进一步发展,甚至发展至难治性肺结核.因此结核病经实验室诊断是非常重要的,也能获得良好的临床效果.目前,结核病的实验室诊断方法主要包括细菌学检测方法㊁免疫学检测技术㊁分子生物学方面的检测技术,现综述如下.ʌ关键词ɔ结核病;实验室;诊断ʌ中图分类号ɔS ８５２．３５㊀㊀㊀㊀㊀㊀ʌ文献标识码ɔB ㊀㊀㊀㊀㊀ʌ文章编号ɔ１００４－５５１１(２０１８)０２－１１１５－０２㊀㊀肺结核是由结核杆菌感染肺部造成的传染性疾病,可累及机体多个脏器及系统,还能够与其他疾病相互影响,进一步加重病情,尤其是对于老年㊁幼儿等特殊患者而言,影响更加严重,不仅病情发展快,复杂多变,而且很容易出现诸多并发症,治疗效果也有限,引发多器官衰竭风险也明显高于普通患者.我国目前已经成为肺结核发病的重灾区,若未能及时得到有效治疗,可导致患者病情进一步发展,甚至发展至难治性肺结核,因此需尽早明确诊断,尤其是实验室诊断[１].１㊀细菌学检测方法肺结核发病早期,并无典型临床表现,而且由于症状复杂多样,很容易被其他疾病所掩盖,出现误诊及漏诊情况,致使病情进一步发展,不利于治疗及预后.肺结核病情一般比较长,通常根据痰菌检测结果判断临床疗效,而准确的检验结果是掌握当前病情㊁调整治疗计划,判断未来病情走向的重要依据.因此,对检验结果的准确率㊁灵敏度要求比较高.通常而言,令人满意的检验需要具备安全性好㊁准确率高㊁经济性优良㊁便于推广等特点.１．１㊀染色镜检㊀结核患者传统痰标本涂片,又被称为萋尼氏抗酸杆菌染色法,具有经济性较好㊁使用范围较广等特点,但存在着准确率低㊁灵敏度不高㊁无法区分活/死菌等缺陷,这导致其临床诊断价值不高,故更新优化亟待解决.(L E D )荧光染色镜检,是指利用金胺O－罗丹明㊁或结合L E D 的镜检方法,具有操作方法便捷㊁读片时间短等优势,在部分配备有荧光显微镜的实验室中可以应用.多项研究证实,经L E D 参与的荧光染色镜检阳性率高于传统镜检方法.而且相对于单纯荧光染色镜检方案而言,因改用成本不高的L E D ,因此推广难度较低,值得在基层医疗机构中推广[２].１．２㊀体液培养㊀痰液等体液培养也是目前临床最常用的金标准检验方法之一,其检验结果对制定临床治疗方案及评估耐药性方面具有非常重要的临床价值,不仅如此,还能判断样本内是否为活菌.根据培养基的不同,可以分为固体培养和液体培养.固体培养中最常用的是罗氏培养法,其优势在于可直接观察菌落的形态并可做分枝杆菌鉴定用,因此常用于临床标本的分离培养㊁鉴定㊁保存菌种及抗结核药物的敏感实验等操作,不足之处是结核分枝杆菌生长速度较缓慢.液体培养法常见的是B DB A C T E C MG I T９６０培养系统,分枝杆菌生长使氧气消耗后,荧光显示剂被激活,而发出荧光,检测仪测试荧光强度来判定结果.其优点是简便㊁快速,分枝杆菌７－１４天即可培养阳性,药敏仅需５－７天,培养阳性率高于罗氏培养法,但该系统依赖进口,价格较贵,因此目前仅在大型医疗机构,或配备相应检验设备的某些实验室中使用,１．３㊀噬菌及扩增㊀噬菌体作为能够在分枝杆菌活菌内存活并生长的病毒,以此为基础发展而来的检验技术被看做是一种能够间接推测结核病的实验室快速诊断措施,其原因在于噬菌体在一定条件作用下,能够感染样本中分枝杆菌活菌,经增殖后从内部裂解分枝杆菌.噬菌体子代被释放后,继续感染其他分枝杆菌,重复增殖及裂解过程中,形成独有的噬菌斑.但若样本中根本没有结核分枝杆菌,则噬菌体在杀灭剂作用下无法存活,而且样本未受到任何感染,正常生长.因利用噬菌体感染㊁增殖及裂解过程仅能够检测活菌,而且可在４８h 内获得结果,准确率较高,无需其他任何特殊试剂㊁设备,因此在全世界发展中国家,或发达国家中部分不太发达地区都非常适合使用,其应用前景非常广阔[４].２㊀免疫学检测方法２．１㊀抗结核抗体㊀检测血清指标是检验结核分枝杆菌的重要途径之一,比如抗结核抗体,特别是对于肺外结核,以及痰培养结核杆菌阴性者.采用酶联免疫法检测抗结核抗体的历史将近半个世纪,因检验过程功能中,操作步骤过多,花费时间较长,因此研究人员常常将很多样本集中检测,但随着检验技术的发展,更多检验技术在临床上的应用,这种检验方案应用率近几年大幅度下降,甚至在某些地区已经完全消失,目前多采用金标免疫斑点法进行检验,而且因该方法无需特殊设备及仪器,花费时间较短,因此其应用率逐渐获得提升.由于抗原在分枝杆菌细胞表面分布较多,而且不同受检者㊁不同病情发展时期,其检验结果均可存在较大的个体化差异.因此需在抗原及检验结果特异性的同时,提高样本检测的敏感性.２．２㊀结核菌素及γ干扰素㊀基于结核菌素特性及机体I V 型变态反应发展而来的一种特异性较高的皮肤试验.受到结核分枝杆菌感染后,感染者体内可产生一种能够识别结核杆菌的特殊淋巴细胞,此类淋巴细胞具有一定的致敏性.因此当经皮向体内注射微量结核菌素时,该淋巴细胞因刺激源相同而在２－３d 内可在局部皮肤出现一定的炎性反应,阳性结果主要表现为局部皮肤红肿,或出现硬结.此方法已经在临床应用百余年,目前多利用结核菌素衍生物,即B C G .我国当前接种B C G 预防结核的做法比较常见.不受到接种B C G 干扰㊁且本身为结核菌素皮试的诱发抗原是目前相关研究的发展方向.γ干扰素是最近十几年以来用于检测结核杆菌感染方案的关键因子.结核分枝杆菌感染者再次接触结核抗原时,其体内T 淋巴细胞可在短时间内迅速合成γ干扰素,因此可通过检测受检者体内γ干扰素浓度从而推测是否受到结核杆菌感染,基于上述实验研制的能够作为商品出售的试剂盒主要分成两种,Q u a n t i F e r o n －G o l d ㊁T－S P O T．T B ,其工作原理基本相同,但后者更灵敏.这种检验方法存在一定的局限性,比如技术过于复杂,在发展中国家临床上推广难度较大,以及无法区分结核杆菌感染后潜伏期与活动性结核之间的差异,但能将结核杆菌感染者与健康人群中既往B C G 接种史者区别开.３㊀分子生物学方法P C R 技术㊁杂交技术,以及基于上述两种技术发展而来的基因芯片技术是目前从分子生物学角度检测结核分枝杆菌的主要技术.P C R 技术具有检测速度快㊁敏感性及特异性均较高等优势,但同样具有容易受到污染,实验中涉及溴化乙锭㊁(下转第１１１８页)５１１１国内外肺癌筛查指南,同时也应重视专家共识,对于指南已经共识等应严格遵循和执行,以保证筛查工作开展的规范性,另外还应基于肺癌研究多学科专家的指导,结合自身经验,并考虑地区特点和实际条件等,适当调整指南或共识的执行方法,使医疗成本降低,减少辐射剂量累积,避免不必要的有创检查,使肺癌筛查效益－成本比提高,进而改善患者预后效果,提高生活质量.参考文献[１]㊀罗海亮,顾禄寿,罗好曾等．低剂量螺旋C T在肺癌门诊机会性筛查中的应用[J]．中国肿瘤,２０１７,２６(０３):１８５－１８９．[２]㊀付金花．早期肺腺癌C T筛查漏误诊的主观因素及对策[J]．国际医学放射学杂志,２０１６,３９(０６):６２５－６２８．[３]㊀柳学国,李坤炜,陈欢等．肺癌低剂量C T筛查中结节的分类与处理[J]．放射学实践,２０１７,３２(０１):２１－２７．[４]㊀黄仁增,宁三江,黄湘平等．高危人群肺癌筛查肺部实性及非实性结节的处理[J]．现代医用影像学,２０１５,２４(０３):３３１－３３３．[５]㊀周清华,范亚光,王颖等．中国肺部结节分类㊁诊断与治疗指南(２０１６年版)[J]．中国肺癌杂志,２０１６,１９(１２):７９３－７９８．[６]㊀华红伟,倪裕丰,王永杰等．低剂量螺旋C T对肺癌高危人群早期筛查的临床研究[J]．实用癌症杂志,２０１６,３１(０４):５５８－５６０,５６３．[７]㊀张春芳,曾强,王维民等．体检人群肺癌筛查低剂量螺旋C T 检出率与成本分析[J]．中华肿瘤防治杂志,２０１５,２２(０４):２４７－２５１．[８]㊀吴道勇．低剂量螺旋C T在肺癌筛查中的应用[J]．医学信息,２０１５,２８(０７):３０８－３０９．[９]㊀李永忠．胸部数字化X线摄影与低剂量螺旋C T在肺癌筛查中的应用价值[J]．中国慢性病预防与控制,２０１５,２３(０６):４６３－４６４．[１０]㊀梁敏群,张杰,林建团等．胸部低剂量螺旋C T扫描在肺癌高危人群筛查中的应用[J]．现代诊断与治疗,２０１７,２８(０７):１３１２－１３１３．[１１]㊀张晓琴,孙德俊,化晓宇等．胸部低剂量螺旋C T在体检者肺癌筛查中的应用[J]．肿瘤研究与临床,２０１７,２９(０５):３１３－３１５,３２１．[１２]㊀金玉晶．低剂量螺旋C T肺癌筛查检出肺结节的处理及进展[J]．癌症进展,２０１７,１５(０４):３４９－３５３．(上接第１１１６页)中也比较常用[９－１０].因而,希望更多医务工作人员参与到化学发光免疫方法的研究当中来,为该技术更广泛的推广和应用提供帮助作用.４㊀小结综上,化学发光免疫技术以灵敏度高㊁特异性强㊁操作方便㊁检测范围广㊁自动化程度高等优点,受到广大研究人员的普遍认可,为临床检验学的发展奠定了重要基础.该技术之所以被广泛应用,还与自身检验准确性高的特征有较大的关系,这些能够为临床疾病诊断提供有力的参考依据,以便为后期治疗和干预提供帮助作用,促使患者尽早接受对症㊁有效的治疗方案,保障生命安全,保障后期生存质量.参考文献[１]㊀魏光伟,魏文康,罗胜军,等．化学发光免疫分析技术及其应用研究进展[J]．动物医学进展,２０１０,３１(０３):９７－１０２．[２]㊀姚彦红,张芳妮妮．化学发光免疫分析技术及其应用研究进展[J]．中国保健营养,２０１４,３(１０):１７８７－１７８８．[３]㊀胡锦霞．化学发光免疫分析技术及其在临床检验中的应用[J]．中国保健营养月刊,２１３,２３(１):４６３－４６４．[４]㊀刘洪玲．临床检验中化学发光免疫分析的应用效果评价[J]．中国医药指南,２０１５,１３(３６):５７－５９．[５]㊀刘爱国．化学发光免疫分析技术在临床检验中的应用分析[J]．内蒙古中医药,２０１３,３２(１４):７５－７６．[６]㊀李平．化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用分析[J]．东方食疗与保健,２０１６,１１(０５):９－１０．[７]㊀程育春．化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用[J]．中国实用医药,２０１６,１１(１５):５３－５５．[８]㊀徐歌,王明芳．在检验中应用化学发光免疫技术的分析[J]．世界最新医学信息文摘,２０１５,１５(０２):１０７－１０９．[９]㊀张燕,杨金易,孙远明,等．化学发光免疫分析技术及其在食品安全检测中的研究进展[J]．食品安全质量检测学报,２０１３,１０(０５):１４２１－１４２７．[１０]㊀邱云清,李凤琴．化学发光免疫分析技术在食品有害因素检测中的应用[J]．环境卫生学杂志,２００９,１０(６):３７１－３７４．(上接第１１１５页)检验操作步骤过于复杂等局限性,因此自问世三十年以来,其检验结果曾经一度受到相关领域研究人员㊁医务工作者的质疑[５].近几年来,在P C R技术基础上,联合D N A增殖㊁杂交,以及光谱检测等多种技术,经整合发展后,形成荧光定量P C R检测技术,能够在特定封闭环境下,经荧光探针杂交,检测结核杆菌D N A,可大幅度提升阳性检出率.经过为时１０个月的严格评估,２０１０年１２月８日,世界卫生组织认可G e n eX p e r tMT B/R I F作为一种全新的结核病快速检测新方法.G e n eX p e r tMT B/R I F检测系统是一种多色巢式实时荧光定量P C R体外诊断技术,针对r o p B基因的８１b p核心区(A㊁B㊁C㊁D㊁E)设计引物和探针,６条荧光探针同时检测,能在２小时内直接从病人痰液得出是否为结核分枝杆菌㊁对利福平的耐药性及带菌量的多少.G e n eX p e r tMT B/R I F系统具有检出阳性率高㊁污染率低㊁操作简单㊁耗时短㊁可准确显示菌量等优点,世卫组织遏制结核病司司长M a r i oR a v i g l i o n e博士评价: X p e r tMT B/R I F检测方法是全球结核病诊断和治疗方面的一个重要里程碑,为面临罹患结核病和耐药结核病危险的数百万人带来了新希望! 参考文献[１]㊀郭赞梅．两种染色方法检测结核分枝杆菌的结果分析[J]．实用医技杂志,２０１６,２３(５):５１９．[２]㊀董玉霞,闫宝环,彭景丽,等．结核病实验室诊断技术研究进展[J]．河北医药,２０１４,３６(３):４２１－４２４．[３]㊀张靖,周兴悦,张厚亮．结核病实验室诊断进展[J]．中国城乡企业卫生,２０１５(６):３４－３６．[４]㊀王静,刘立宾,岳永宁,等．交叉引物扩增技术检测谈样本中结核分支杆菌的应用价值[J]．中国预防医学杂志,２０１６,１７(４):２６５－２６８．[５]㊀R o s s oF,M i c h e l o nC T,S p e r h a c k eR D,e t a l．E v a l u a t i o nO f r e a l －t i m eP c Ro f p a I j e n t p L e u r a l e f h l s i o n f o r d i a o s i sO f t u b e r c uＧl o s i s[J]．B M c r e s e a r c hn o t e s,２０１１(４):２７９．８１１１。

结核分枝杆菌实验室检测方法的研究进展

结核分枝杆菌实验室检测方法的研究进展结核病是由结核分枝杆菌引起的传染病。

它已成为严重危害人民身体健康、发病率及病死率很高的传染病。

由于细菌学检查阳性率低及血清学诊断的敏感性和特异性不高等原因，因此结核病的诊断一直是临床上的难题。

发现和研究对结核分枝杆菌诊断较敏感和特异性且快速、简便的实验室检测方法，对结核病的预防和诊断具有重要的意义。

笔者就目前国内外结核分枝杆菌的检测方法现状及其进展作一综述。

标签：结核分枝杆菌；结核病；检测方法；研究进展近年来，由于人口的剧增、世界范围内大面积的人口大流动、菌株变异和耐药性的产生、HIV感染流行等种种原因，在世界上许多地方结核病发病率出现了回升的现象。

结核分枝杆菌是结核病的主要致病菌，可在人群中传播，对外界环境的抵抗力强，易产生耐药菌株[1]。

传统检测结核分枝杆菌的方法有涂片找结核分枝杆菌法、培养法以及抗原抗体反应法等，但这些方法特异性、敏感度较差，且操作繁琐、耗时。

近年来，实验室研究出了一系列的新技术和方法，对传统的检测技术加以补充，弥补了其不足，取得了很大的进步，现对其研究进展综述如下：1 细菌学诊断技术1.1 涂片法1.1.1 直接厚涂片法直接厚涂片法检出率比普通涂片法高14%～19%，这种方法快速、费用低，是目前国内常用方法，也是《结核病诊断细菌学检验规范》规定的方法。

1.1.2 集菌涂片法通过加大被检标本的体积或通过离心、浮游等方法，富集标本中的抗酸杆菌，与厚涂片法相比，方法操作繁琐、临床应用不多。

涂片抗酸染色法，虽然有简便、快捷、成本低廉的优点，但其敏感性低，为36.8%，特异性为94.3%，且不能区分结核与非结核分枝杆菌[2]。

1.2 培养法1.2.1 BACTEC-TB-460快速检测系统其主要原理是测定结核分枝杆菌的代谢产物。

在米氏7H12培养基中加入含放射性14C的量，用生长指数GI值表示，大于19为阳性[3]。

该法有较高的初代分离率，显著缩短了报告时间，阳性标本最早仅需2 d就能检出，阴性一般1个月可发报告；而传统的改良罗氏法最早检出一般为20 d左右，阴性2个月发报告。

结核病实验室诊断技术研究进展

１２３：５５６－５６２．
１３ＡｍｅｒｉｃａｎＤｉａｂｅｔｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．ｃａｌｃｒｅａｉｎｄｉｂｃａｔｅｓ．２０１０．ＤｉｂｅａｔｅｓＣａｒｅ，２０１０，３３：１１６１－．
１２ＣａｒｎｅｔｈｏｎＭＲ，ＢｉｇｇｓＭＬ，ＢａｒｚｉｌａｙＪ，ｅｔａ１．Ｄｉａｂｅｔｅｓａｎｄｃｏｒｏｎａｒｙｈｅａｔｒｄｉｓｅａｓｅｓａｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｆｏｒｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎｏｌｄｅｒａｄｕｌｔｓ．ＡｍＪＭｅｄ，２０１０，
１５黄春桃，杜万红．糖尿病合并冠心病的研究进展．医学临床研究，
２０１１，２８：７４１－７４３．１６ＳａｔｔａｒＮ，ＰｒｅｉｓｓＤ，ＭｕｒｒａｙＨＭ，ｅｔａ１．Ｓｔａｔｉｎｓａｎｄｉｓｒｋｏｆｉｎｃｉｄｅｎｔｄｉａｂｅ－ｔｅｓ：ａｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅｍｅｔａ — ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｓｔａｔｉｎｔｉａｒｌｓ．Ｌａｎｃｅｔ，２０１０，３７５：７３５－７４２．
业，２０１２，７：１８９ — １９０．

2004-10-10175903结核病实验室诊断技术进展

6、分子生物学检测技术
⑴核酸探针：用于测定待检菌核酸同源性序列的标记核酸片断或序列。结核菌和非结核分枝杆菌的核酸探针有C-DNA探针；全染色体核酸探针；克隆核酸探针和寡核苷酸探针。主要用于分离株的快速鉴定（经培养分离得的菌株），其特异性与敏感性均达到100％，有助于结核病的诊断和鉴别诊断。但核酸探针技术存在检测灵敏度低，在临床技术中有104－105菌体细胞/ml才能呈现杂交阳性反应。
结核病实验室诊断技术进展
一、细菌学方面
1、
荧光镜检法检查抗酸杆菌：
可提高工作效率；提高检出率
镜检观察视野以60视野为宜，避免造成假阴性且可提高工作效率3－5倍，荧光镜检（直接涂片）法优于抗酸镜检（直接涂片及集菌）法。
2、BACTEC460自动检测系统
利用分枝杆菌在液体培养基中能早期微量生长的原理，采用放射技术，在含有14CO2，仪器能自动测定其脉冲数，即结核菌生长指数以GI表示，当GI达到 50－100时进行涂片抗酸染色证实是否抗酸杆菌并观察是否呈索状生长。并以 NAP培养基进行结核菌和非结核分枝杆菌鉴定。
耐药SM菌株中70－85％有核糖体蛋白S12编码基因核S16γ RNA编码基因突变所致。耐INH株50－ 76.2％的过氧化氢酶－过氧化物酶编码基因突变有关，12％在烯酸基还原酶基因，16.6％有烷基过氧化氢酶编码基因突变。72％的耐PZA 菌株有PZA编码基因突变，69％耐EMB结核菌有阿拉伯糖基转移酶编码基因B突变，89％发生 306位氨基酸密码子。耐奎诺酮类时由DNA回旋酶A单位核B亚单位基因突变所致，集中在A亚单位基因的保守区。
与常规方法的符合率为95－100％，但此法存
在放射性环境污染，费用昂贵，不易普及。

结核病实验室诊断技术进展

结核病实验室诊断技术进展结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其发病规律和流行特点决定了在今后相当长的时期内其危害将持续存在。

结核病被列为我国重大传染病之一，是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病。

世界卫生组织的统计资料显示，约三分之一的世界人口曾经感染结核菌，亚洲地区感染者占全世界的三分之二。

据WHO估计，2007年全球约有927万新发结核患者，175万人死于结核病，我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。

目前我国三分之一左右的人口已感染了结核菌，受感染人数超过4亿。

据研究，受结核菌感染的人群中，10%的人会发展为结核病。

我国现有肺结核病人约500万，主要集中在25岁及以上人群；每年约有13万人死于结核病，死亡平均年龄为55.2岁。

如果不采取有效的控制措施，在未来的10年，我国可能有近5000万的感染者发生结核病。

历年来全国结核病流行病学调查结果显示，全国肺结核患病率继续呈现下降趋势。

特别是传染性肺结核患病率下降尤为明显，由2000年的122/10万下降到66/10万，十年降幅近50%。

结核分枝杆菌从分类上看是分枝杆菌科、分枝杆菌属中引起人类患病最多的致病菌。

结核病实验室检查，尤其是细菌学检查是结核病诊断的最主要和最基本技术，也是选择治疗方案、考核疗效、评价防治效果的主要指标。

目前结核病实验室检查技术包括：全菌体为基础的病原微生物学检测、细菌核酸为靶标的分子生物学检测和机体免疫相关反应及其产物的检测。

一、全菌体为基础的病原微生物学检查技术与其它传染性疾病相同，从检测原理和临床检验目的上，结核病的病原微生物学检查，分为基于形态学的显微镜镜检、基于微生物表型的分离培养、药物敏感性实验和菌种鉴定实验。

1. 分枝杆菌形态学检查——抗酸染色镜检：是结核病临床诊断最基本的方法之一，简单快速，在不考虑生物安全防护的前提下，２-４小时即可发报告，对于结核病的诊断、指导和评价临床用药具有重要意义。

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