实验室常用灭菌法
实验室六大常用消毒灭菌方法
实验室六大常用消毒灭菌方法实验室六大常用消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。
1、湿热灭菌法湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
分为三种:（1）流通蒸气灭菌法：是指在常压条件下，采用100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。
该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。
（2）间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。
方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。
若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。
适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。
（3）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。
2、干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120oC～150oC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。
用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。
酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
3、射线灭菌法利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。
紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。
紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。
实验室常见的灭菌消毒方法总结
实验室常见的灭菌消毒方法总结
一、消毒和灭菌的区别
1、消毒（disinfectioninhospital）：杀灭或消除医院环境中媒介物上污染的病原微生物的过程.
2、灭菌(sterilization)：杀灭或去除外环境中媒介物携带的一切微生物的过程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括细菌芽胞和真菌孢子.灭菌是个绝对的概念,灭菌后物品必须是完全无菌的.即灭菌保证水平为106.
二、高温灭菌法
高温灭菌法是利用高温使微生物的蛋白质及酶发生凝固或变性而死亡，是应用最广泛且有效的灭菌方法。
主要用于器械、容器、试剂等灭菌。
（一）高压蒸气灭菌法
用高温加高压灭菌，不仅可杀死一般的细菌，对细菌芽胞也有杀灭效果，是最可靠、应用最普遍的物理灭菌法。
主要用于能耐高温的物品，如金属器械、玻璃、橡胶、耐高温塑料制品及试剂的灭菌。
高压蒸气灭菌器的类型和样式较多，如：①下排气式压力蒸气灭菌器是普遍应用的灭菌设备，压力升至102.9kPa，温度达121～126℃，维持20～30分钟，可达到灭菌目的。
②脉动真空压力蒸气灭菌器已成为目前最先进的灭菌设备。
灭菌条件要求：蒸气压力205.8kPa，温度达132℃以上并维持10分钟，即可杀死包括具有顽强抵抗力的细菌芽胞在内的一切微生物。
湿热灭菌是目前实验室使用最为广泛，灭菌效果最佳的方法。
目前湿热灭菌的仪器技术上也非常成熟，安全系数较高。
高压蒸气灭菌的注意事项：
包裹的物品不宜太大，一般应小于30cm×30cm×50cm，大于该尺寸需要酌情延长灭菌时间；
1.高压锅内的包裹不要排得太密，以免妨碍蒸气透入，影响灭菌效果；
2.对塑料制品不宜放置过于拥挤，以免发生形变；。
实验室常用物理消毒及适用范围
实验室常用物理消毒及适用范围一、紫外线消毒紫外线消毒是一种利用紫外线照射来杀灭病菌和微生物的消毒方法。
其原理是紫外线能够破坏微生物的DNA结构，导致微生物无法繁殖和生存。
紫外线消毒常用于实验室设备、表面和空气的消毒。
适用范围包括实验室环境、生产车间、办公场所等。
二、干热灭菌干热灭菌是一种利用高温干燥的环境杀灭微生物的消毒方法。
其原理是高温环境下，微生物的蛋白质会变性，从而失去生物活性。
干热灭菌常用于实验室玻璃器皿、金属器械等物品的消毒。
适用范围包括实验室、医疗、食品加工等领域。
三、压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌是一种利用高温高压的蒸汽杀灭微生物的消毒方法。
其原理是高温高压的蒸汽能够破坏微生物的细胞结构和蛋白质，导致微生物死亡。
压力蒸汽灭菌常用于实验室器材、手术器械等物品的消毒。
适用范围包括实验室、医院、生物制品厂等。
四、射线消毒射线消毒是一种利用放射性射线照射来杀灭微生物的消毒方法。
其原理是放射性射线能够破坏微生物的DNA结构和蛋白质，导致微生物死亡。
射线消毒常用于食品加工、水处理等领域。
适用范围包括食品厂、水厂、游泳池等。
五、超声波消毒超声波消毒是一种利用超声波的振动能量杀灭微生物的消毒方法。
其原理是超声波的振动能量可以破坏微生物的细胞结构，导致微生物死亡。
超声波消毒常用于实验室表面、医疗器械等物品的消毒。
适用范围包括实验室、医疗、牙科诊所等。
六、等离子消毒等离子消毒是一种利用等离子体的物理和化学作用杀灭微生物的消毒方法。
其原理是等离子体能够产生高能电子和活性粒子，这些粒子能够破坏微生物的细胞结构和DNA，导致微生物死亡。
等离子消毒常用于医院、实验室、食品加工等领域。
适用范围包括医院病房、手术室、实验室、食品厂等。
七、过滤除菌过滤除菌是一种利用过滤器过滤去除微生物的消毒方法。
其原理是过滤器能够阻挡微生物通过，从而去除空气或液体中的微生物。
过滤除菌常用于医院、实验室、工业生产等领域。
适用范围包括医院手术室、实验室无菌室、工业生产线等。
实验室灭菌指南
实验室灭菌指南消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。
1干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120ºC～150ºC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。
用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。
酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2湿热灭菌法压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min即可达到灭菌效果。
3射线灭菌法利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。
紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。
紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。
适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。
灭菌时间为30min。
用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。
4过滤除菌法是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。
过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。
目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。
滤膜孔径应在0.22～0.45μm范围内或用更小的细菌滤膜，溶液通过滤膜后，细菌和孢子等因大于滤膜孔径而被阻，并利用滤膜的吸附作用，阻制小于滤膜孔径的细菌透过。
常用6种灭菌方法有哪些
常用6种灭菌方法有哪些灭菌是指通过一定的物理或化学方法，将物体中的微生物杀灭或去除，以达到无菌状态的过程。
在医疗、食品加工、实验室等领域，灭菌是非常重要的环节。
本文将介绍常用的6种灭菌方法，包括高温蒸汽灭菌、干热灭菌、紫外线辐射灭菌、化学消毒、滤过灭菌和辐射灭菌。
首先，高温蒸汽灭菌是指利用高温高压的蒸汽对物品进行灭菌。
这种方法适用于各种耐热物品，如玻璃器皿、金属器皿等。
其原理是高温蒸汽能够迅速渗透物品表面，将微生物迅速杀灭。
在医疗设备灭菌中，高温蒸汽灭菌是一种常见的方法。
其次，干热灭菌是指利用高温干热对物品进行灭菌。
这种方法适用于一些耐热但不耐潮湿的物品，如玻璃器皿、金属器皿等。
其原理是高温干热能够将微生物的蛋白质凝固，达到灭菌的效果。
在实验室中常常使用干热灭菌对器皿进行消毒。
紫外线辐射灭菌是指利用紫外线的辐射对物品进行灭菌。
这种方法适用于一些不耐热的物品，如实验室的工作台面、空气中的微生物等。
其原理是紫外线能够破坏微生物的DNA结构，使其失去生殖能力，达到灭菌的效果。
化学消毒是指利用化学药剂对物品进行消毒。
这种方法适用于一些不耐高温、不耐紫外线的物品，如一次性使用的医疗器械、实验室的工作台面等。
常见的化学消毒药剂包括酒精、过氧化氢、次氯酸钠等。
其原理是化学药剂能够破坏微生物的细胞膜，达到杀灭微生物的效果。
滤过灭菌是指利用微孔滤膜对物品进行灭菌。
这种方法适用于一些液体物品，如药品、培养基等。
其原理是微孔滤膜能够阻隔微生物，使其无法通过，达到灭菌的效果。
在生物制药领域，滤过灭菌是一种常见的方法。
最后，辐射灭菌是指利用辐射对物品进行灭菌。
这种方法适用于一些特殊的物品，如一次性使用的医疗器械、某些食品等。
常见的辐射包括γ射线、X射线等。
其原理是辐射能够破坏微生物的DNA结构，达到灭菌的效果。
总的来说，不同的灭菌方法适用于不同的物品和场景。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的灭菌方法，以确保物品达到无菌状态，保障人们的健康和安全。
几种无菌技术操作方法
几种无菌技术操作方法
无菌技术是一种重要的实验室操作方法，用于防止细菌、病毒和其他微生物的污染。
以下是几种常用的无菌技术操作方法：
1. 灭菌：将实验室器具、培养基、培养皿等物品暴露在高温或化学物质中，以杀灭所有微生物。
常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌（autoclaving）和干热灭菌（dry heat sterilization）。
2. 空气净化：使用高效过滤器（例如HEPA过滤器）过滤空气中的微生物，以减少实验环境中的微生物数量。
3. 灭火：使用火焰对实验器具进行灭菌处理，例如对培养皿盖进行灭菌，或在实验过程中将工具头置于火焰中。
4. 剥离、涂气体或固体培养基：在无菌环境下，使用微量吸球将微生物转移到培养基上，或使用无菌棉签涂抹在固体培养基上。
5. 消毒擦拭：使用消毒剂润湿无菌纸巾，轻轻擦拭实验台面、操作区域和实验仪器，以消除表面的微生物。
6. 无菌操作罩：在无菌操作罩中进行实验操作，通过过滤器过滤空气中的微生物，以防止实验材料受到污染。
这些无菌技术操作方法的选择和使用取决于实验的特定要求和所处理材料的性质。
无论采用哪种方法，都需要注意操作过程的无菌操作和实验环境的清洁，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验室对培养基灭菌的常用方法
实验室对培养基灭菌的常用方法常用的灭菌方法主要是湿热灭菌和过滤除菌。
1、湿热灭菌：
蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。
湿热灭菌的效果，取决于致死温度和致死时间。
致死温度是杀灭微生物的极限温度。
致死时间是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。
分装后应立即灭菌，应在当天内完成灭菌工作，不可过夜。
消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。
2、过滤除菌：
一些抗生素及有机物等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌，例如含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基。
过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在凝固之前(50-60℃)加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
常见的灭菌方法
常见灭菌方法有物理方法，化学方法及生物方法，但生物方法利用生物因子去除病原体，作用缓慢，而且灭菌不彻底，一般不用于传染疫源地消毒，故消毒主要应用物理及化学方法。
（一）物理消毒法1．机械消毒一般应用肥皂刷洗，流水冲净，可消除手上绝大部分甚至全部细菌，使用多层口罩可防止病原体自呼吸道排出或侵入。
应用通风装置过滤器可使手术室、实验室及隔离病室的空气，保护无菌状态。
2．热力消毒包括火烧、煮沸、流动蒸气、高热蒸气、干热灭菌等。
能使病原体蛋白凝固变性，失去正常代谢机能。
（1）火烧凡经济价值小的污染物，金属器械和尸体等均可用此法。
简便经济、效果稳定。
（车间的一些金属器皿可以用此法进行消毒灭菌。
咱们涂抹的时候剪刀要在酒精灯上灼烧就是要达到灭菌的目的。
）（2）煮沸耐煮物品及一般金属器械均用本法，100℃1～2分钟即完成消毒，但芽胞则须较长时间。
炭疽杆菌芽胞须煮沸30分钟，破伤风芽胞需3小时，肉毒杆菌芽胞需6小时。
金属器械消毒，加1～2%碳酸钠或0.5%软肥皂等碱性剂，可溶解脂肪，增强杀菌力。
（可以适用于车间的金属器械消毒杀菌）棉织物加1%肥皂水15L/kg，有消毒去污之功效。
物品煮沸消毒时，不可超过容积3/4，应浸于水面下。
注意留空隙，以利对流。
备注：车间最常用的消毒方法是用90℃以上的沸水进行消毒。
（3）流动蒸气消毒相对湿度80～100%，温度近100℃，利用水蒸气在物何等表面凝聚，放出热能，杀灭病原体。
并当蒸气凝聚收缩产生负压时，促进外层热蒸气进入补充，穿至物品深处，加速热量，促进消毒。
（4）高压蒸气灭菌（微生物室使用的灭菌方法）通常压力为98.066kPa，温度121～126℃，15～20分钟即能彻底杀灭细菌芽胞，适用于耐热、潮物品。
（5）干热灭菌干热空气传导差，热容量小，穿透力弱，物体受热较慢。
需160～170℃，1～2小时才能灭菌。
适用于不能带水份的玻璃容器，金属器械等。
不同病原体的热耐受力，以热死亡时间表达。
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繁殖型微生物1um，芽孢约0.5um或以下
0.45um可滤去大多数细菌，0.15um可滤 去热原
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物理灭菌法
方法
主要技术参数
应用特点
干热灭菌
药典规定 180℃，1h 或 160-170℃， 穿透力弱，温度不易均匀，温度高，不
2-4h
适于大部分药品
湿热 灭菌
热压 灭菌 流通 蒸汽
98kPa(1kg/cm2),15-20min 100℃，30-60min
气态过氧化氢灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子 数为1×106～5×106个/片 )
过滤除菌法：缺陷假单胞菌（ ATCC19146等）
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7
灭菌方法
• 方法：湿热灭菌法、干热灭菌法、辐射灭
菌法、气体灭菌法、过滤除菌法。
• 根据灭菌物品特性选择一种或几种方法组
合灭菌。只要产品允许，尽可能选用最终 灭菌法。
40min 或其他可以保证灭菌效果的程序条 件。
×
• 过度杀灭法 • 灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有
效均一
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灭菌容器操作注意
• 使用前认真检查设备的完好性
• 灭菌时须先将灭菌器中冷空气排出，以保
证最佳灭菌效果
• 灭菌时间应从待灭菌物品到达预定温度时
算起
• 灭菌完毕后停止加热，待压力表降至0，放
• 适用范围：耐高温但不宜使热灭菌法灭菌
的物品，如玻璃物品、金属物品、纤维制 品、固体试药、液体石蜡等。
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干热灭菌条件和效果
• 160～170℃× 120min、 170～180℃×
60min、250 ℃× 45min以上
• 灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有
效均一
• 效果：
繁殖型细菌100℃ /1h可杀灭
受辐射破坏的原料药及成品等。
• 参数：辐射剂量
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辐射灭菌特点
• γ射线
60Co
穿透力强
• β射线
由电子加速器产生
穿透力弱，灭菌效果差
• 不升高温度
• 设备费用高
• 辐射能引起一些药物pH值、含量、活性等改变，
某些制品不宜选用
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气体灭菌法
• 用化学消毒剂形成的气体杀灭微生物的方
汽、开启灭菌器，物品温度降至80℃ 以下 时才能将灭菌器门全部开启
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影响湿热灭菌的因素
• 微生物种类和数量
• 灭菌物品特性
• 蒸汽的性质
饱和蒸汽 热含量高 潜热大 穿透力强
湿饱和蒸汽
低
过热蒸汽
穿透力差
• 灭菌时间等
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干热灭菌法
• 利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原
的方法。
• 干热灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为5×105～
5×106个/片 )
• 辐射灭菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为5×107～
5×108个/片 )
• 气体灭菌：
环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为 ppt课件
1
灭菌法定义
• 用适当的物理或化学手段将物品中活的微
生物杀灭或除去的方法。适用于制剂、原 料、辅料、医疗器械等的灭菌。
• 灭菌是指将物品中污染的微生物残存概率
下降至一定水平，以无菌保证水平 SAL(Sterility Assurance Level)表示。
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2
灭菌程序验证内容
法，常用环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛、 臭氧等。
• 适用于医疗器械、塑料制品等，能吸附环
氧乙烷的物品不宜采用。
• 控制参数：温度、相对湿度、灭菌压力、
灭菌时间等
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过滤除菌法
• 利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理除
去气体或液体中的微生物。
• 用于热不稳定的药品或原料除菌
• 滤膜材料确定
• 滤膜孔径要求
穿透力强，效果可靠，适用广 不能杀灭细菌芽胞
低温 60-80℃，1h + 室温 24h，重复操作 适于必须加热灭菌而又不耐高温者；时
间歇
3 次以上
间长，效果不理想；须加抑菌剂
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20
化学灭菌法
40%甲醛溶液（福尔马林） 20ml/m3 加热蒸发,6～12h
粘膜强烈刺激
乳酸
1ml/m3 加热蒸发 0.5～1h
• 撰写验证方案及制定评估标准。 • 确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确，
并能处于正常运行。
• 确认关键设备控制仪表在规定的参数范围
内能正常运行。
• 采用被灭菌物品或模拟物品进行重复实验
确认灭菌效果符合规定。
• 完善文件记录，撰写验证报告。
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3
灭菌程序运行监控
• 关键参数应在验证确定的范围内：温度、
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8
湿热灭菌法
• 在高温高压条件下利用沸水、蒸气变性微生物菌
体中的蛋白质、核酸而达到灭菌效果的方法。
• 效果可靠、操作简便 • 应用广泛：容器、培养基、无菌衣、胶塞等 • 包括
– 热压灭菌 – 流通蒸汽灭菌 – 煮沸灭菌 – 低温间歇灭菌
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湿热灭菌条件
• 121℃× 15min、 121℃× 30min 、116 ×
耐热细菌: 120℃ 长时间不死亡,140 ℃ 杀菌率剧增
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火焰灭菌
置于火焰上直接灼烧 简便、可靠
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15
辐射灭菌法
• 将灭菌物品置于适宜放射源辐射的射线或
适意的电子加速其发生的电子束中进行电 离辐射而达到杀灭微生物的方法。
• 常用60Co-γ射线
• 用于医疗器械、容器、生产辅助用品、不
无毒
丙二醇
1ml/m3 加热蒸发
不挥发，不易燃
无色醚样臭味气体，沸点 10.8 扩散穿透能力强，属广谱杀菌
环氧乙烷
℃，沸点以下为无色透明液 剂；用于对热敏感的药物等的
体，比重 0.882，溶于水。 灭菌；时间长，费用贵。
压力、时间、湿度、灭菌气体浓度、辐照 剂量等
• 灭菌程序定期验证，时效不超过半年。 • 灭菌设备或程序发生变更重新进行验证。
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4
灭菌保证
• 灭菌效果与灭菌前产品污染程度及污染菌
特性有关，把握微生物污染水平及污染菌
耐受性，注意各个环节降低污染程度。
• 灭菌冷却阶段防止已灭菌物品再次污染。
• 适用生物指示剂、化学指示剂等监控灭菌
结果
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5
生物指示剂
• 基本要求：
菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有 可能污染菌的耐受性。
菌种应无致病性。
菌株应稳定，存活期长，易于保存。
易于培养。若使用休眠孢子，孢子含量 在90%以上。
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6
常用生物指示剂
• 湿热灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为
5×105～5×106个/片 )