常用电泳技术和电泳方法简介

二、电泳方法简介
2．等电聚焦电泳的特点 ①使用两性载体电解质，在电极之间
形成稳定、连续、线性的pH梯度；②由于 “聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清 晰、鲜明的区带界面；③电泳速度快;④分 辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择；⑥ 可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用 于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶 等）生物组分的分离分析。
它具有机械强度好、弹性大、 透明、化学稳定性高、无电渗 作用、设备简单、样品量小 (1～100μg）、分辨率高等优点。
二、电泳方法简介
（一）等电聚焦电泳
1． 等电聚焦电泳过程 一种利用有pH值 梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的 电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物 加入有pH值梯度的凝胶介质中，在电场内 经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各 自等电点相应的pH值位置上，最后，样品 的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰 而稳定的窄带。
二、电泳方法简介
（二）醋酸纤维素薄膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、
染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。 此电泳的特点是分离速度快、
电泳时间短、样品 用量少。因此三）凝胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳 的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以 凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用 的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。
（一）根据支持物的特点又可分为： ①无阻滞支持物电泳。②高密度的凝胶 电泳。
一、常用电泳技术分类
（二）根据电源控制的不同，一般可分为以下 3类：1. 恒压电泳; 2. 恒流电泳; 3. 恒功 率电泳 。
（一）根据自动化程度的不同，可分为半自动 和全自动型。
一、常用电泳技术分类
（七）根据其功能的不同，可分为制备型、分 析型、转移型、浓缩型等。
二、电泳方法简介
（一）双向凝胶电泳（二维电泳）
第一向采用等电聚焦 根据复杂 的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不 同，将蛋白质进行分离。
第二向采用了十二烷基硫酸钠一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS-PAGE）就 是按蛋白质分子量的大小使其在垂直 方向进行分离。其结果不再是条带状，
而是呈现为斑点状 。
二、电泳方法简介
（八）根据用法的类型可分为：双向电泳、交 叉电泳、连续纸电泳、电泳－层析相结合技 术等。
（九）根据不同的使用目的可分为：核酸电泳、 血清蛋白电泳、制备电泳、DNA测序电泳等。
二、电泳方法简介
（一）纸电泳 指用滤纸作为支持载体的电泳 方法。是最早使用的区带电泳。将滤纸条水平 地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品 点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再 盖上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电 压（100V～1000V）进行电泳。
常用电泳技术和电泳方法简介
济宁市中医院设备科 科室业务学习
一、常用电泳技术和电泳方法
（一）根据工作原理的不同：可分为移 界电泳、区带电泳、等速电泳、等电 聚焦电泳、免疫电泳等。
（二）根据有无固体支持物可分为：自 由电泳和支持物电泳
一、常用电泳技术分类
（三）根据支持载体的位置或形状可分成： 水平电泳、垂直电泳、板状电泳、柱状 电泳、U型管电泳、倒V字形电泳、毛细 管电泳等。
PI 逐渐降低
分子 量逐 渐降 低
二、电泳方法简介
（七）免疫电泳 免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩
散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板 上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁 移率的不同而彼此分开，然后加入抗体做双 相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体 在琼脂中扩散而相遇，在二者比例适当的地 方，形成肉眼可见的沉淀弧。
三、常用电泳设备的基本结构
（一）电泳电源 （二）电泳槽 （三）附加装置
四、电泳仪的主要技术指标
1． 输出电压 2． 输出电流 3． 输出功率 4． 电压稳定度 5． 电流稳定度 6． 功率稳定度 7． 输出组数
8． 连续工作时间 9． 保护措施 10． 显示方式 11． 定时方式 12． 电源电压 13． 电源频率 14． 功耗
二、电泳方法简介
（二）等速电泳 采用两种不同浓度的电解 质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细 管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电 泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品 组分，后者则低于任何样品组分，被分离的 组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场 的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾 随电解 质之间的空隙中移动， 实现分离。
胶性 中电 加解 入质 了溶 双液
PH9 PH3
加上电 场后建 立稳定 PH梯度
蛋白质 溶液加 入，建 立电场
染色后，蛋 白质因PI值 不同，沿PH 梯度分离开
06-07 双向凝胶电泳示意图
第一向 等电聚焦
PI 逐 渐 降 低
等电聚焦胶放在SDS
－聚丙烯酰胺凝胶上
第二向
SDS－聚丙 烯酰胺凝胶 电泳