电泳技术的应用

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电泳技术在生物医学中的应用

电泳技术在生物医学中的应用

电泳技术在生物医学中的应用生物医学在人类健康事业中扮演着越来越重要的角色,而电泳技术则是生物医学领域中常用的实验手段之一。

电泳技术是一种将带电粒子或分子聚集并定向移动的实验方法,因此在DNA序列分析、蛋白质研究等方面有着广泛的应用。

本文将从原理、种类、应用等方面分析电泳技术在生物医学中的应用及其未来发展前景。

一、电泳技术的原理电泳技术是利用电场对带电粒子或分子进行定向移动,从而对样品进行分离或纯化的实验方法。

其基本原理是根据物体的电荷性质在电场中的不同运动迁移距离来实现分离。

其过程可分为两个步骤:第一步是将待分离的样品进行电荷化处理,这通常是通过静电作用或酸碱中和来完成的;第二步是在一个强电场中将电荷化后的样品组分进行迁移分离,经过适当的处理后可得到相应的分离产物。

电泳技术不仅受到电场强度、电荷量、电泳介质等影响,还要考虑到分子大小、分子形状和分子电荷的影响,因为它们对分离的速率和方向都有着重要的影响。

二、电泳技术的分类根据其原理和应用,电泳技术可以分为几类。

1.凝胶电泳凝胶电泳是利用凝胶的空隙效应,将DNA和蛋白质根据分子大小进行分离的一种电泳技术。

凝胶电泳分为乳胶糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种,其中乳胶糖凝胶电泳主要用于分离小分子DNA,而聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于分离大分子DNA和蛋白质。

凝胶电泳由于具有操作简单、分辨率高、成本低等优势,因此在DNA和蛋白质分子量测定、DNA测序和蛋白质纯化等方面得到广泛应用。

2.毛细管电泳毛细管电泳是利用毛细管内部液体的流动速度和分子电荷的影响,将分子分离的一种电泳技术。

毛细管电泳具有操作简单、灵敏度高、分离速度快等优势,且不需要大量试剂和样品,因此在DNA序列分析、蛋白质质谱分析等方面得到广泛应用。

3.等温电泳等温电泳是利用DNA双链和单链在电场中迁移速度的不同,将DNA分离的一种电泳技术。

它是一种基于形状和大小进行DNA分离的技术,可用于快速筛查某个基因特定序列的突变与否。

电泳的应用

电泳的应用

电泳的应用
电泳是一种重要的技术,在多个领域都有广泛的应用。

以下是一些电泳的具体应用:
1.在生物化学、临床化学、毒剂学、药理学、免疫学、微生物学、食品化学等科学研究中,利用电泳技术对各种生物大分子如蛋白质、核酸、酶,甚至病毒与细胞进行研究和分析。

2.在农业生产领域,电泳技术用于土壤改良和植物生长的刺激,以及用于病虫害的防治。

3.在工业生产中,电泳涂装是一种常见的电泳应用,它能够用于对各类产品进行涂层,如汽车、电器、船只和机械部件等。

4.在汽车工业中,电泳漆是使用最广泛的汽车涂装材料,电泳涂装在汽车行业的应用是最为广泛的。

5.在食品行业,电泳技术用于对食品成分的分析和质量控制。

6.在环保领域,电泳技术用于废水处理和有害物质的分离和回收。

7.在医疗领域,电泳技术被用于疾病诊断和生物医学研究。

例如,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于蛋白质纯度的鉴定,这使得它成为医学检验中常用的技术。

电泳技术的临床应用-完整版

电泳技术的临床应用-完整版

电泳技术的临床应用-完整版电泳技术的临床应用简介电泳技术是一种用电场对带电粒子进行排序的技术,包括凝胶电泳、毛细管电泳等多种方法。

这些技术在临床应用中具有重要意义,可以用于基因检测、蛋白质分析、药物筛选等领域。

章节一、凝胶电泳在临床基因检测中的应用1.1 基本原理凝胶电泳是将DNA分子或RNA分子按照大小和电荷在聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶中进行排序的方法。

利用电荷作用力和凝胶孔径可以实现DNA分子的分离和检测。

1.2 检测方法通过对DNA分子进行各种特定的处理,如限制性内切酶切割、PCR扩增等,然后进行凝胶电泳,可以检测基因变异、突变等。

1.3 实际应用凝胶电泳在临床基因检测中应用广泛,可以用于遗传病的诊断、个体基因分型等。

章节二、毛细管电泳在临床蛋白质分析中的应用2.1 基本原理毛细管电泳是利用毛细管的小孔径和电场作用力对蛋白质进行分离和分析的方法。

根据蛋白质的电荷和大小的不同,可以实现蛋白质的分离。

2.2 分析方法通过对蛋白质进行化学修饰和标记,然后进行毛细管电泳分析,可以获得蛋白质的分子量、等电点等信息。

2.3 实际应用毛细管电泳在临床蛋白质分析中被广泛运用,可以用于疾病标志物的检测、药物代谢产物的分析等。

章节三、电泳技术在药物筛选中的应用3.1 基本原理电泳技术在药物筛选中的应用主要是通过分析化合物的电荷、极性等性质,来确定药物的分子特征。

3.2 筛选方法通过对化合物进行毛细管电泳分析,可以确定其在电场下的迁移率,从而进一步进行相关的筛选实验。

3.3 实际应用电泳技术在药物筛选中具有广泛的应用前景,可以用于药物新品种的开发和质量控制。

附件:本文档涉及附件见附件部分。

法律名词及注释:1、限制性内切酶:指一类能够识别DNA的特定序列并在该序列的特定位点上切割DNA分子的酶。

2、PCR扩增:聚合酶链式反应,是一种体外生物分子复制技术,通过循环反应过程,可以扩增出特定的DNA片断。

3、药物代谢产物:指药物在人体内发生代谢反应后形成的新的化学物质。

生物医学中的电泳技术应用

生物医学中的电泳技术应用

生物医学中的电泳技术应用电泳技术是生物医学领域中非常重要的分析手段之一,其应用广泛而深远。

本文将从几个方面介绍电泳技术在生物医学中的应用。

一、基础研究在生物医学研究中,电泳技术被广泛应用于基础研究中。

例如,研究生物分子之间的相互作用、研究蛋白质水平的变化和研究基因序列的变化等。

其中,凝胶电泳和毛细管电泳是最常见的电泳技术。

在凝胶电泳中,生物分子被加入到凝胶中,然后通过电场进行分离,进而研究其分子量、电荷、结构等信息。

毛细管电泳则是利用毛细管中的微小空间,通过不同的能级让生物分子逐一通过,达到分离的目的。

二、疾病诊断电泳技术在疾病诊断中也有广泛的应用。

例如,血浆蛋白电泳可以用于肿瘤、免疫缺陷和炎症等疾病的诊断。

通过对血浆中的蛋白质进行电泳分离,可以确定不同种类的蛋白质浓度和比例的变化,进而判断某一疾病的进展和治疗效果。

另外,DNA电泳也是诊断遗传性疾病的重要手段。

例如,PCR-amplified DNA可以通过凝胶电泳分离,在分离的过程中可以诊断出某些疾病所需的特定位点。

这些信息有助于医生更加准确地判断患者的疾病类型和疾病进程的状态。

三、新型药物开发电泳技术在新型药物开发中也有重要的应用。

例如,蛋白质色谱技术就是利用毛细管电泳技术对蛋白质进行分离和分析,多用于新药的筛选和鉴定。

通过蛋白质色谱技术可以快速筛选大量的药物分子,以确定最具有潜力的药物分子,进而研制出治疗某些疾病的新型药物。

四、肿瘤治疗最后,电泳技术在肿瘤治疗中也有着广泛的应用。

例如,电泳技术可以将药物直接引入肿瘤细胞,从而提高治疗效果。

另外,电泳技术也可以用于寄生虫和细菌的治疗,利用电场生物学技术破坏病原体的细胞膜或细胞壁,达到抗病的效果。

总之,电泳技术在生物医学中的应用非常广泛,包括基础研究、疾病诊断、新型药物开发和肿瘤治疗等方面。

未来,电泳技术还有广泛的发展前景,在医学研究和临床治疗中都将发挥更为重要的作用。

药物分析中的电泳技术应用研究

药物分析中的电泳技术应用研究

药物分析中的电泳技术应用研究电泳技术作为一种常用的分离和检测方法,在药物分析领域中得到了广泛应用。

本文将探讨电泳技术在药物分析中的应用,并介绍一些相关研究进展。

一、电泳技术概述电泳技术是一种基于电场作用下粒子的迁移速度差异来实现分离的方法。

它根据样品成分的电荷、大小、形状等特性,通过施加电场使其在电解质溶液中产生迁移,从而实现对混合物的分离和定量分析。

二、电泳技术在药物分析中的应用1. 药物的分析与定量电泳技术在药物分析中广泛用于药物成分的检测和定量。

通过电泳技术可以对药物的离子特性进行分析,确定药物成分的电荷性质和相对浓度,有助于药物的质量控制和安全性评估。

2. 药物代谢产物的研究药物在体内常常会发生代谢,产生不同的代谢产物。

电泳技术可以通过对不同代谢产物的迁移速度进行分析,帮助研究人员了解药物的代谢途径及代谢产物在生物体内的转化情况,为药物的研发和毒理学评估提供重要数据。

3. 药物的纯化与提纯电泳技术在药物分析中还可以用于药物的纯化与提纯。

通过电泳技术对药物样品进行分离,可以有效去除杂质,提高纯度,为后续的研究和制剂提供高质量的样品。

三、电泳技术在药物分析中的研究进展1. 毛细管电泳的应用毛细管电泳是目前药物分析中常用的电泳技术之一。

它具有分离速度快、分辨率高、使用样品量少等优点,在药物分析领域得到了广泛应用。

研究者们通过对毛细管电泳的优化,提高了其在药物分析中的应用效果。

2. 电泳质谱联用技术电泳质谱联用技术将电泳技术与质谱技术相结合,能够同时对样品进行分离和分析,具有更高的检测灵敏度和分析能力。

电泳质谱联用技术在药物分析中的应用研究取得了重要进展,为药物分析提供了更加精准的定量结果。

四、结语电泳技术作为一种快速、高效的分离和检测方法,在药物分析中具有重要的应用价值。

随着技术的不断发展和改进,电泳技术在药物分析中的应用将进一步拓展,为药物研究和生产提供更多的支持。

(字数:520字)。

电泳技术的原理及应用总结报告

电泳技术的原理及应用总结报告

电泳技术的原理及应用总结报告一、电泳技术的原理电泳是一种利用电场作用力将带电粒子分离的技术。

其基本原理是通过施加电场,使带电粒子在电场中运动,根据粒子的电荷量和电荷性质的不同,使粒子在电场中以不同的速度迁移,从而实现分离。

电泳技术的原理主要包括以下几个方面:1.高分子链带电:电泳分离的主要对象是带电的高分子。

在电场作用下,带电高分子链受到电场力的作用,发生迁移运动。

2.裂解动力:带电高分子链在空间中受电场力的作用下,随着电场力的增大,高分子链发生裂解,形成不同长度的分子片段。

3.正向、反向电泳:根据高分子链的目标分离要素的电荷性质,可以选择正向电泳还是反向电泳。

正向电泳指的是目标分离要素的迁移方向与电场方向一致,利于正带电粒子分离;反向电泳指的是目标分离要素的迁移方向与电场方向相反,利于负带电粒子分离。

4.分离效应:基于带电高分子链裂解的速度和不同长度带电链片段的移动速度差异,实现粒子的分离。

二、电泳技术的应用电泳技术是生物化学、医学、环境科学等领域中广泛应用的分析和分离方法。

以下是电泳技术的一些常见应用:1.DNA分析:电泳技术可以用于DNA序列分析、DNA片段长度测定、DNA芯片检测等。

通过电泳,能够分离检测到的DNA片段,并得到其长度和浓度信息。

2.蛋白质分离:电泳技术常用于蛋白质的分离和定量。

通过电泳,可以将不同大小、不同电荷的蛋白质分离开来,获取蛋白质的特征信息。

3.药物分析:电泳技术在药物分析中有着广泛的应用,可以用于药物成分的指纹图谱分析、药物的纯度检测等。

电泳可以快速、准确地分离和检测药物的组分。

4.环境监测:电泳技术可以用于分析环境样品中的各种离子和有机物质。

通过电泳,可以快速检测水质、大气污染物、土壤污染物等。

5.口腔医学:电泳技术在口腔医学中的应用主要是分离和分析不同牙体质地、牙釉质及牙本质的特征和成分。

总之,电泳技术的原理是通过施加电场,利用电荷性质和粒子大小的差异,实现带电粒子的分离。

电泳技术在蛋白质分离及鉴定中的应用

电泳技术在蛋白质分离及鉴定中的应用

电泳技术在蛋白质分离及鉴定中的应用蛋白质分离与鉴定是生化学领域中的重要课题。

为了深入了解蛋白质的结构、功能和生理特性,必须先将蛋白质从混杂的样品中分离出来,并进行鉴定。

而电泳技术则是其中最常用的一种方法。

一、电泳的基本原理电泳是利用电场的作用对电荷带异的物质进行分离的技术。

通过将电压加在带电颗粒或分子中,可以使它们在电场内运动。

根据电荷性质和分子量的不同,它们在电场中的迁移速度也不同,从而达到分离的目的。

二、电泳技术在蛋白质分离中的应用1. 凝胶电泳凝胶电泳是一种通过将蛋白质样品注入凝胶中进行分离的电泳技术。

这种方法主要根据蛋白质的大小、电荷和空间构型进行分离。

常见的凝胶电泳包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和聚丙烯酰胺-SDS凝胶电泳(SDS-PAGE)等。

PAGE是一种单一组分凝胶,主要用于分离大分子的蛋白质。

而SDS-PAGE则是将表面电荷中性化的蛋白质经过聚合物相互作用后变得一致的技术,主要用于分离分子量较小的蛋白质。

2. 等电聚焦电泳等电聚焦电泳是一种利用电荷性质进行分离的电泳技术。

它能根据蛋白质分子的等电点进行分离,是分离酸性和碱性异构体最有效的手段之一。

该技术将蛋白质悬浮于 pH 梯度中,使之在电场中运移,当蛋白质的电荷与 pH 值相等时,蛋白质不再继续运动,因而被分离。

三、电泳技术在蛋白质鉴定中的应用电泳技术可以不仅可以将蛋白质分离出来,还可以进行蛋白质的鉴定。

其中一种应用较多的方法是Western blotting,又称免疫印迹或免疫北半球印迹。

该技术利用酶联免疫吸附法和电泳原理,鉴定蛋白质中的特定抗原。

该技术需要先将样品经过SDS-PAGE电泳分离,然后将其转移至含有对应抗体的膜上。

接着,膜上的抗原和抗体发生特异性结合,添加显色底物后出现颜色变化,从而可以检测抗原的存在与否。

四、电泳技术的发展趋势随着科技的不断进步,电泳技术的应用也不断扩展。

例如,多维电泳(2-D PAGE)技术能更加准确地分离复杂蛋白质混合物并进行鉴定;并联微滴式电泳系统(parallel-droplet array)通过微流控技术可以对大规模蛋白质样品进行快速分离。

电泳的应用

电泳的应用

电泳的应用电泳是一种常用的生物分离技术,广泛应用于生物医学、生物工程、食品安全等领域。

它通过利用分子在电场中的迁移速度差异,实现对混合溶液中生物大分子的分离和纯化。

本文将介绍电泳的应用及其在不同领域的重要性。

电泳在基因测序中起到了至关重要的作用。

基因测序是研究基因序列的重要手段,而电泳则是测序仪器中不可或缺的核心技术。

通过电泳技术,可以将DNA分子按照大小进行分离,从而得到DNA序列信息。

这项技术的突破使得人们能够更好地理解基因组的结构与功能,对疾病的发生机理有了更深入的认识。

电泳在蛋白质分析中也发挥着重要作用。

蛋白质是生物体中最基本的功能性分子,其结构和功能的研究对于理解生命活动具有重要意义。

电泳技术可以将蛋白质按照电荷、分子量进行分离,从而实现对蛋白质的纯化和鉴定。

通过电泳技术,科学家们可以研究蛋白质的结构、功能和相互作用,为药物研发和疾病治疗提供重要依据。

除了基因测序和蛋白质分析,电泳在医学诊断领域也有重要应用。

例如,在遗传病的筛查中,电泳技术可以对DNA样本进行分析,找出携带有致病基因的个体。

此外,电泳还可以用于病毒和细菌的检测,通过检测其DNA或RNA的特征带电荷,实现对病原体的快速鉴定和定量。

电泳的应用不仅限于生物医学领域,它在食品安全领域也发挥着重要作用。

食品中的添加剂和污染物对人体健康构成潜在威胁,因此对食品中的成分进行准确分析和检测至关重要。

电泳技术可以快速、准确地分析食品中的蛋白质、核酸和多种有机物,从而帮助监管部门确保食品质量和安全。

电泳还在农业科学、环境科学等领域发挥着重要作用。

在农业科学中,电泳可以用于检测作物的基因型、筛选优良品种;在环境科学中,电泳可以用于检测水体和土壤中的污染物,为环境保护和治理提供科学依据。

电泳作为一种重要的生物分离技术,在基因测序、蛋白质分析、医学诊断、食品安全等领域都有广泛应用。

它不仅提高了科学研究的效率和准确性,也为人类健康和生活的改善做出了重要贡献。

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电泳技术的应用在直流电场中,带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳(electropho-resis)。

1809年俄国物理学家Peнce首先发现了电泳现象,但直到1937年瑞典的Tiselius建立了分离蛋白质的界面电泳(boundary electrophoresis)之后,电泳技术才开始应用。

本世纪60-70年代,当滤纸、聚丙烯酰胺凝胶等介质相继引入电泳以来,电泳技术得以迅速发展。

丰富多彩的电泳形式使其应用十分广泛。

电泳技术除了用于小分子物质的分离分析外,最主要用于蛋白质、核酸、酶,甚至病毒与细胞的研究。

由于某些电泳法设备简单,操作方便,具有高分辨率及选择性特点,已成为医学检验中常用的技术。

一、电泳技术的基本原理和分类在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积。

F=QE质点的前移同样要受到阻力(F)的影响,对于一个球形质点,服从Stoke定律,即:F′=6πrην式中r为质点半径,η为介质粘度,ν为质点移动速度,当质点在电场中作稳定运动时:F=F′即QE=6πrην上式交换后可写成ν/E的含意为单位电场强度下的移动速度,这里可用迁移率μ表示,即从上式可见,球形质点的迁移率,首先取决于自身状态,即与所带电量成正比,与其半径及介质粘度成反比。

除了自身状态的因素外,电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。

电泳法可分为自由电泳(无支持体)及区带电泳(有支持体)两大类。

前者包括Tise-leas 式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。

区带电泳则包括滤纸电泳(常压及高压)、薄层电泳(薄膜及薄板)、凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶)等。

自由电泳法的发展并不迅速,因为其电泳仪构造复杂、体积庞大,操作要求严格,价格昂贵等。

而区带电泳可用各种类型的物质作支持体,其应用比较广泛。

本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。

二、影响电泳迁移率的因素⒈电场强度电场强度是指单位长度(cm)的电位降,也称电势梯度。

如以滤纸作支持物,其两端浸入到电极液中,电极液与滤纸交界面的纸长为20cm,测得的电位降为200V,那么电场强度为200V/20cm=10V/cm。

当电压在500V以下,电场强度在2-10v/cm时为常压电泳。

电压在500V以上,电场强度在20-200V/cm时为高压电泳。

电场强度大,带电质点的迁移率加速,因此省时,但因产生大量热量,应配备冷却装置以维持恒温。

⒉溶液的pH值溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。

例如蛋白质分子,它是既有酸性基团(-COOH),又有碱性基团(-NH2)的两性电解质,在某一溶液中所带正负电荷相等,即分子的净电荷等于零,此时,蛋白质在电场中不再移动,溶液的这一pH值为该蛋白质的等电点(isoelctric point,pI)。

若溶液pH处于等电点酸侧,即pH<pl,则蛋白质带正电荷,在电场中向负极移动。

若溶液pH处于等电点碱侧,即pH>pl,则蛋白质带负电荷,向正极移动。

溶液的pH离pl越远,质点所带净电荷越多,电泳迁移率越大。

因此在电泳时,应根据样品性质,选择合适的pH值缓冲液。

⒊溶液的离子强度电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。

其原因是带电质点吸引相反符合的离子聚集其周围,形成一个与运动质点符合相反的离子氛(ionic atmosphere),离子氛不仅降低质点的带电量,同时增加质点前移的阻力,甚至使其不能泳动。

然而离子浓度过低,会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量,不易维持溶液的pH值,影响质点的带电量,改变泳动速度。

离子的这种障碍效应与其浓度和价数相关。

可用离子强度I 表示。

式中S表示溶液中离子种类,Ci和Zi分别表示每种离子的摩尔浓度与化合价。

最常用I值在0.02-0.2之间。

⒋电渗在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗(electro-osmosis)。

其产生的原因是固体支持物多孔,且带有可解离的化学基团,因此常吸附溶液中的正离子或负离子,使溶液相对带负电或正电。

如以滤纸作支持物时,纸上纤维素吸附OH-带负电荷,与纸接触的水溶液因产生H3O+,带正电荷移向负极,若质点原来在电场中移向负极,结果质点的表现速度比其固有速度要快,若质点原来移向正极,表现速度比其固有速度要慢,可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。

三、电泳分析常用方法(一)醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。

由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。

这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少,5μg的蛋白质可得到满意的分离效果。

因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。

醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。

⒈材料与试剂醋酸纤维素膜一般使用市售商品,常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液,浓度在0.05-0.09mol/L。

⒉操作要点⑴膜的预处理:必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液,浸透后,取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液,不可吸得过干。

⑵加样:样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。

对血清蛋白质的常规电泳分析,每cm加样线不超过1μl,相当于60-80μg的蛋白质。

⑶电泳:可在室温下进行。

电压为25V/cm,电流为0.4-0.6mA/cm宽。

⑷染色:一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红,糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂,脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。

⑸脱色与透明:对水溶性染料最普遍应用的脱色剂是5%醋酸水溶液。

为了长期保存或进行光吸收扫描测定,可浸入冰醋酸:无水乙醇=30:70(V/V)的透明液中。

(二)凝胶电泳以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。

其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。

琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广,介绍如下:⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。

其结构单元是D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。

许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型凝胶。

因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。

在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。

⒉琼脂糖凝胶电泳分离核酸的基本技术在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中,DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比;分子构型也对迁移率有影响,如共价闭环DNA >直线DNA>开环双链DNA。

当凝胶浓度太高时,凝胶孔径变小,环状DNA(球形)不能进入胶中,相对迁移率为0,而同等大小的直线DNA(刚性棒状)可以按长轴方向前移,相对迁移率大于0。

⑴设备与试剂:琼脂糖凝胶电泳分为垂直及水平型两种。

其中水平型可制备低浓度琼脂糖凝胶,而且制胶与加样都比较方便,故应用比较广泛。

核酸分离一般用连续缓冲体系,常用的有TBE(0.08mol/l Tris·HCl,pH8.5,0.08mol/L硼酸,0.0024mol/l EDTA)和THE(0.04mol/l Tris·HCl。

pH7.8,0.2mol/L醋酸钠,0.0018mol/l EDTA)。

⑵凝胶制备:用上述缓冲液配制0.5%-0.8%琼脂糖凝胶溶液,沸水浴或微波炉加热使之融化,冷至55℃时加入溴化乙锭(EB)至终浓度为0.5μg/ml,然后将其注入玻璃板或有机玻璃板组装好的模子中,厚度依样品浓度而定。

注胶时,梳齿下端距玻璃板0.5-1.0mm,待脱凝固后,取出梳子,加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm处。

⑶样品制备与加样:溶解于TBE或THE内的样品应含指示染料(0.025%溴酚蓝或桔黄橙)、蔗糖(10%-15%)或甘油(5%-10%),也可使用2.5%Fico Ⅱ增加比重,使样品集中,每齿孔可加样5-10μg。

⑷电泳:一般电压为5-15V/cm。

对大分子的分离可用电压5V/cm。

电泳过程最好在低温条件下进行。

⑸样品回收:电泳结束后在紫外灯下观察样品的分离情况,对需要的DNA分子或特殊片段可从电泳后的凝胶中以不同的方法进行回收,如电泳洗脱法:在紫外灯下切取含核酸区带的凝胶,将其装入透析袋(内含适量新鲜电泳缓冲液),扎紧透析袋后,平放在水平型电泳槽两电极之间的浅层缓冲液中,100V电泳2-3小时,然后正负电极交换,反向电泳2分钟,使透析袋上的DNA释放出来。

吸出含DNA的溶液,进行酚抽提、乙醇沉淀等步骤即可完成样品的回收。

其它还有低融点琼脂糖法、醋酸铵溶液浸出法、冷冻挤压法等,但各种方法都仅仅有利于小分子量DNA片段(<1kb)的回收,随着DNA分子量的增大,回收量显著下降。

(三)等电聚焦电泳技术等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。

由于其分辨率可达0.01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。

⒈IEF的基本原理在IEF的电泳中,具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极,pH值逐渐增大。

如前所述,蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征,这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动,直至某一pH位点时失去电荷而停止移动,此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电点(pl)。

同理,位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动,直到它们的等电点上聚焦为止。

可见在该方法中,等电点是蛋白质组分的特性量度,将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH梯度的凝胶介质中,在电场内经过一定时间后,各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH位置上,形成分离的蛋白质区带。

⒉pH梯度的组成pH梯度的组成方式有二种,一种是人工pH梯度,由于其不稳定,重复性差,现已不再使用。

另一种是天然pH梯度。

天然pH梯度的建立是在水平板或电泳管正负极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物,在正极端吸入酸液,如硫酸、磷酸或醋酸等,在负极端引入碱液,如氢氧化钠、氨水等。

电泳开始前两性电解质的混合物pH为一均值,即各段介质中的pH相等,用pH0表示。

电泳开始后,混合物中pH最低的分子,带负电荷最多,pI1为其等电点,向正极移动速度最快,当移动到正极附近的酸液界面时,pH突然下降,甚至接近或稍低于PI1,这一分子不再向前移动而停留在此区域内。

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