菌种甘油保存方法精编WORD版

甘油保藏真菌实验步骤

甘油保藏真菌实验步骤以甘油保藏真菌实验步骤为标题，本文将介绍甘油保藏真菌的实验步骤及其原理。

真菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，不仅在生态系统中起着重要的角色，还对人类的生活和健康产生着重要的影响。

因此，为了研究和保藏真菌的多样性和功能，甘油保藏法成为了一种常用的方法。

甘油保藏真菌是一种简单且有效的方法，它可以延长真菌的保藏时间，并且能够保持真菌的活性和生物学特性。

下面将详细介绍甘油保藏真菌的实验步骤。

实验步骤如下：步骤一：准备所需材料和设备1. 真菌菌株：选择要保藏的真菌菌株，确保其纯度和活力。

2. 甘油溶液：制备一定浓度的甘油溶液，常用的浓度为20%。

3. 培养基：选择适合真菌生长的培养基，如琼脂培养基。

步骤二：培养真菌菌株1. 在琼脂平板上点菌：使用无菌技术，在琼脂平板上点菌，培养真菌菌株。

2. 培养真菌：将琼脂平板放置在适当的温度和湿度条件下，培养真菌，通常在25-30摄氏度下培养。

步骤三：收集真菌菌株1. 真菌生长：观察真菌的生长情况，当真菌菌落达到一定大小时，可以进行下一步操作。

2. 收集真菌菌落：使用无菌的移液管或铲子，将真菌菌落从琼脂平板上收集到无菌试管中。

步骤四：甘油保藏真菌1. 添加甘油溶液：向无菌试管中加入适量的甘油溶液，使真菌菌落完全浸泡在甘油溶液中。

2. 混合均匀：轻轻摇晃试管，使甘油溶液与真菌菌落充分混合。

3. 封闭试管：用无菌瓶塞或铝箔封闭试管，防止外界的污染。

步骤五：保存真菌1. 温度和湿度：将封闭的试管存放在适当的温度和湿度条件下，通常在4摄氏度下保存。

2. 检查真菌：定期检查保存的真菌，观察其菌落的生长情况和活力。

甘油保藏真菌的原理是利用甘油的保湿性和抗冻性，使真菌菌株在低温下长时间保存。

甘油可以增加真菌的渗透压，防止真菌细胞脱水和冻结，从而保持真菌的活性和生物学特性。

总结一下，甘油保藏真菌是一种简单有效的方法，通过将真菌菌株浸泡在甘油溶液中并在低温下保存，可以延长真菌的保藏时间并保持其活性和生物学特性。

甘油保存菌株

甘油保存菌株
甘油保存菌株是一种常见的微生物保存方法，它可以有效地保护微生物的生命活力和遗传信息，使其长期保存并可随时使用。

甘油保存菌株的方法简单易行，适用于各种微生物，是微生物学研究中不可或缺的一种技术手段。

甘油保存菌株的原理是利用甘油的保护作用，将微生物细胞悬液与甘油混合后，冷冻保存在-80℃或液氮中。

甘油可以渗透进入细胞内部，形成一层保护膜，防止细胞在冷冻过程中受到损伤。

同时，甘油还可以降低细胞内水分的含量，减少细胞在冷冻过程中的结晶和破裂，从而保护细胞的完整性和生命活力。

甘油保存菌株的优点是保存时间长，可达数年甚至数十年之久，保存的菌株可以随时使用，不需要频繁传代和培养，可以减少微生物的变异和突变。

此外，甘油保存菌株的方法简单易行，不需要特殊的设备和技术，适用于各种微生物，是一种经济实用的微生物保存方法。

甘油保存菌株的操作步骤如下：首先，将微生物细胞悬液与甘油按照一定比例混合均匀，通常甘油的浓度为15%-20%。

然后，将混合液分装到冷冻管中，标明保存的菌株名称和保存日期，放入-80℃或液氮中保存。

在需要使用时，将冷冻管取出，解冻后进行传代和培养即可。

需要注意的是，甘油保存菌株的成功与否与保存前的细胞状态和保存条件密切相关。

因此，在进行甘油保存前，需要对菌株进行筛选和培养，保证细胞的健康状态和生命活力。

同时，在保存过程中，需要严格控制保存温度和保存时间，避免细胞受到不必要的损伤和死亡。

甘油保存菌株是一种简单易行、经济实用的微生物保存方法，可以有效地保护微生物的生命活力和遗传信息，是微生物学研究中不可或缺的一种技术手段。

甘油冷冻保藏法

甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。

（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。

（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。

（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。

（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。

（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。

冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。

也可用没有球部的管状安瓿管。

塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。

（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。

细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。

一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。

（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。

（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。

将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。

将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。

甘油保藏真菌实验步骤

甘油保藏真菌实验步骤以甘油保藏真菌实验步骤为标题，我们将介绍如何使用甘油来保藏真菌样品。

甘油是一种常用的保存剂，能够有效保护真菌不受环境变化的影响，从而保持其生活活力和保存样品的完整性。

实验步骤如下：1. 准备所需材料和设备- 甘油溶液：将甘油加入蒸馏水中，浓度通常为20%或50%。

- 真菌样品：可以是培养皿上的菌落、孢子悬液或真菌菌丝体等。

- 冻存管或其他合适的保存容器。

- 称量器、移液器、滤纸等实验用具。

2. 准备甘油溶液- 根据需要的浓度，称量适量的甘油和蒸馏水。

- 将甘油加入蒸馏水中，充分搅拌混合，直至甘油完全溶解。

3. 处理真菌样品- 将真菌样品转移到一个干净的培养皿或容器中。

- 使用移液器逐滴加入甘油溶液，将样品浸泡在甘油中。

注意避免气泡的产生。

- 如果样品体积较大，可以使用滤纸轻轻吸去多余的液体。

4. 转移样品至保存容器- 使用移液器或其他合适的工具，将处理好的真菌样品转移到冻存管或其他保存容器中。

- 注意将样品尽量放置在冻存管或容器的中央，避免接触到容器的壁面。

5. 密封保存- 将冻存管或容器盖紧，确保密封性良好，避免甘油溶液的蒸发和外界的污染。

- 可以在容器表面标记保存日期、真菌名称等相关信息，方便后续使用和管理。

6. 存储条件- 根据不同的真菌种类和实验需求，选择适当的存储温度和条件。

- 大多数真菌可以在4摄氏度下长期保存，但某些特殊真菌可能需要更低的温度或其他特殊的存储条件。

通过以上步骤，我们可以使用甘油成功保藏真菌样品。

甘油的作用是降低真菌细胞内部的水分含量，减少细胞膜的冻融损伤，从而保持真菌的活力和保存样品的完整性。

同时，甘油还具有抗菌作用，可以抑制真菌样品的微生物污染。

需要注意的是，甘油保存的真菌样品在使用前需要重新培养，以恢复其生长能力。

此外，在保存过程中，我们还应定期检查样品的状态，确保保存环境的稳定性和样品的健康状态。

总结：甘油保藏真菌是一种常用的方法，可有效保护真菌的完整性和生活活力。

菌种甘油保存方法

菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。

新的菌液就可以划线培养了。

原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。

甘油冷冻保藏法

甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。

（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。

（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。

（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。

（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。

（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。

冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。

也可用没有球部的管状安瓿管。

塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。

（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。

细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。

一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。

（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。

（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。

将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。

将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。

甘油冷冻保藏法

甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。

（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。

（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。

（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL（LB）的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。

（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。

（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。

冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。

也可用没有球部的管状安瓿管。

塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。

（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。

细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。

一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。

（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。

（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。

将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。

将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。

菌种甘油保存方法

菌种甘油保存方法
Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。

新的菌液就可以划线培养了。

原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。