菌种甘油管保藏法
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。
甘油管冷冻保藏方法总结
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏,保藏时间一般为2-4年左右。
(1)用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
(2)平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱,培养24-48小时,至单菌落的大小为3mm左右。
(3)挑取一个单菌落,接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时,至菌密度OD600为1.0-1.5。
(4)用火焰灭菌的接种环取少量种子液,涂片后,作革兰氏染色,在显微镜下观察菌体的形态,及是否有杂菌。
(5)按30%甘油:种子液为1:1(V/V)的量加入无菌甘油,混合后分装至事先灭菌的菌种保存管(1-2mL/管),-70℃或液氮保存。
用甘油保存过细菌,酵母,霉菌和放线菌,40%-50%的甘油是它的最终浓度。
甘油浓度过低低温保存易结冰,使菌死亡。
我同学有直接将菌液-20保存的,不加任何保护剂,但保存的时间很短,他们保存过一年的,但很多有死掉的。
我们做大肠杆菌感受态,最终甘油是15%的浓度,有时结冰也会使菌死掉。
我用40%-50%的甘油最终浓度一直很好,也不结冰。
甘油一般是用那种蓝盖的小管(1毫升)灭菌,放0.7毫升左右的甘油,然后加菌悬液0.1至0.2毫升即可。
甘油菌种比列为7:1.甘油管保藏与活化:在做一丝状真菌的甘油管保藏(-80度超低温保存,以甘油做保护剂),大家提点建议。
是将菌在液体摇瓶中培养后将菌液与甘油混合、将固体培养的菌块捣碎成菌液再与甘油混合,还是直接将菌块挑至甘油中甘油与菌液的比值多少最合适,等等。
用该法保藏过的菌种,如何活化?保种的菌先接种在培养液里活化好;配置50%的甘油溶液,灭菌;1:1加入,直接放入-80度;复苏的时候,冰上融化,直接接入培养液中。
除了可以用液体培养基菌丝保藏外。
要是你要保藏的丝状真菌能产孢子的话,还可以制成孢子悬浮液保藏,这样保藏的时间能长了些,到时活化的几率也大。
制备过程大致如下:用无菌的蒸馏水将丝状真菌斜面孢子洗出,接着用带脱脂棉的漏斗过滤制备孢子悬浮,.该悬浮液与40-50%甘油溶液按1:1混合均匀后,即可。
食用菌菌种保藏的方法
食用菌菌种保藏的方法
食用菌是一种广泛使用的食品，如何保存食用菌的菌种是非常重要的。
下面介绍几种常用的菌种保藏方法。
一、冷冻法
冷冻法是将菌种置于低温下，使其处于冷冻状态以达到保藏的目的。
将菌丝均匀地涂于平板上，置于-80℃的低温冷冻柜中冷冻，或将菌丝混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保藏时间较长。
二、干燥法
将菌丝培养在无菌环境下，培养到菌丝生长至顶部时，用无菌石英砂或无菌滤纸吸干培养皿内的水分，再将石英砂或滤纸中的菌种置于无菌条件下进行干燥，然后密封保存。
这种方法使用简单，保存时间较长，但保存的菌种易受到氧气、温度和湿度等因素的影响。
三、冷藏法
冷藏法是将培养好的菌种置于低温环境下进行保存。
将培养好的菌种涂于平板上，进行初步培养，再将平板用无菌纸包好，置于4℃的冰箱中保存。
这种方法保存的菌种质量较好，但保存时间较短。
四、液氮保存法
将培养好的菌种混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要液氮存储设备。
五、糖分保藏法
将培养好的菌种混入10%蔗糖水溶液中，用常温保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要注意保藏容器的密封性。
不同的菌种保藏方法适用于不同的情况，我们需要根据实际情况选择合适的方法。
同时，在进行菌种保藏时，需要注意保藏容器的密封性、温度、湿度等因素，以确保保存的菌种质量。
食用菌菌种保藏的6种方法
食用菌菌种保藏的6种方法
菌种保藏的目的是通过降低菌种的代谢活力，使其处于休眠状态，减缓衰亡速度，保持菌种原有优良性状，防止杂菌污染；当恢复生活条件时，菌种能在很短时间内恢复生机，迅速生长繁殖。
母种的保藏有如下方法：
1.斜面冰箱保藏法：把生长丰满健壮的斜面母种，把棉塞在管口剪平，用蜜蜡封口或换用胶塞，存放于摄氏4度冰箱内保存。
高温菌在16摄氏度为宜。
有效期3—6个月。
2.石蜡油保藏法：斜面母种注入经二次灭菌后，在摄氏40度温箱2天蒸发水分而冷却了的石蜡油至斜面顶尖1—1.5厘米处，再用蜜蜡封管口或换用胶塞，直立于摄氏4度冰箱或室温存放。
保存期可1—2年。
3.孢子保藏法：用2×0.5×0.8厘米经灭菌的滤纸条吸附上孢子，可参考孢子分离法，然后把带孢子的纸条放入无菌试管内，置干燥器内2—3天吸干水分，再改用胶塞。
在冰箱或室温内可保存多年。
4.菌丝球保藏法：常用经灭菌的生理盐水、无菌水、蒸馏水、营养液等装入试管约5毫升作媒介，把经过液体培养至对数生长期的菌丝球4—5个，移入媒介内，用胶塞封口，冰箱摄氏4度或室温可保存1—2年。
5.液氮保藏法：常用经灭菌10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水为保护剂，注入斜面母种管，刮下菌丝体成悬浮液或孢子液，吸取菌液0.5—0.8毫升注入已灭菌安瓿管，
熔封管口，置液氮冷冻器内，每分钟降摄氏1度，1小时内使其温度降至摄氏负35度，其后迅速降至气相摄氏负150度，液相摄氏负196度保存。
保存期可超过10年。
6.自然基质保藏法：此法多用于原种保藏。
在一些欠设备的地区，也可作母种保藏法。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
甘油保藏菌种活化步骤
甘油保藏菌种活化步骤
嘿，你问甘油保藏菌种活化步骤？那咱就来好好聊聊。
要活化甘油保藏的菌种啊，首先得准备好东西。
得有干净的培养皿、培养基啥的，就像做饭得先把锅碗瓢盆准备好一样。
然后呢，从冰箱里把保藏的菌种拿出来。
这时候可不能太着急，得慢慢拿，别把菌种给弄坏了。
就像拿宝贝一样，小心翼翼的。
接着，在无菌操作台上进行操作。
把菌种轻轻地取一点，放到培养基上。
这就像给小种子找个家一样。
放好菌种后，把培养皿放在合适的温度下培养。
不能太热也不能太冷，就像人睡觉要找个舒服的温度一样。
在培养的过程中，要经常观察菌种的生长情况。
看看有没有长出来，长得好不好。
就像照顾小婴儿一样，得时刻关注着。
如果菌种长得不好，就得找找原因。
是不是温度不合适
啊，是不是培养基有问题啊。
就像医生看病一样，得找到病根才能治好。
我给你讲个事儿吧。
我有个朋友，他在实验室里做菌种活化。
一开始他不太会，弄得手忙脚乱的。
后来他按照正确的步骤来，先准备好东西，然后小心地取出菌种，放到培养基上，再放在合适的温度下培养。
他每天都认真观察，最后菌种长得可好了。
他可高兴了，觉得自己的努力都没有白费。
所以啊，甘油保藏菌种活化要准备好东西，小心取出菌种，放在培养基上培养，经常观察。
只要你认真做，肯定能活化出好的菌种。
加油吧！。
菌种保藏方法
一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。
保藏温度要求在-4～4℃下。
液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。
具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。
将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。
取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。
-20℃保存时间较短。
或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。
甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。
冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。
为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。