细胞房管理规章制度培训课件
细胞房管理规章制度
细胞房管理规章制度细胞房就是进行各种细胞培养得净化级实验室,所有进入实验室得人员都必须遵守实验室有关得规章制度.第一章总则第一条细胞房主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其她人员如确实需使用细胞房必须预先征得实验室负责人与细胞房负责人同意。
第二条新养细胞得同学,需先跟随由负责人指定得人员学习,同时学习并熟记细胞房管理条例,最后通过细胞操作考核后，方可进入细胞房进行实验。
严禁未经许可擅自进入细胞房或使用相关设备.第三条细胞房正常使用过程中，进出实验室得器械与样品需通过传递窗，严禁随身带入。
实验用品应尽量一次带入,严禁将与实验无关得物品带入实验室,在细胞房内不得进行微生物等其它易污染物得培养，禁止从事任何高危生化实验。
第二章条例第一条常规操作穿着专用隔离服，实验人员必须在细胞房缓冲间内更换细胞房专用隔离服并戴上口罩，严禁不穿隔离服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞房。
穿着专用拖鞋.在准备间换下自己得鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。
细胞房最多可4个人同时使用。
实验过程中严禁喧哗，闲聊,反复进出培养室。
离开细胞房时应在缓冲室填写使用登记.１、从培养箱取放物品前,开门次数。
ﻫ注:繁开关培养箱，容易造成污染。
２、从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。
未经允许，禁止翻瞧、移动她人细胞或样品,如有特殊需要得，请联系实验室负责人协调。
3、培养瓶/皿放入培养箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
4、普通培养中得细胞,若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用得细胞，可约好时间一起观察.ﻫ注：频繁将细胞拿出观察,容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件得恒定。
第三条显微镜使用规则1、倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2、短时间内需再次使用显微镜时,为避免频繁开关显微镜电源，可不必关闭显微镜电源,但须将亮度旋钮调到最低；较长时间不需使用或离开细胞房时，须按规定关闭显微镜电源。
细胞房工作守则新
细胞房工作守则一、常规1.细胞房最多可4个人同时使用。
尽量避免在内长时间逗留、交谈，最好戴口罩。
2.为保持无菌状态，经常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2h）或打开空气消毒机消毒1-1.5h，人员在30-45min以后才能进入房间。
每个细胞房一个组长，组长安排好该细胞房的值日表，值日生要负责当天细胞房内的所有清洁问题。
组长每周安排一次彻底大扫除，包括墙面，地板，桌面，培养箱。
每月过氧乙酸熏蒸（2h）的方式进行消毒。
3.细胞房实验耗材、仪器、药品等均不可随意带出。
4.培养基分瓶，各用自己的培养基，以免交叉污染。
5.血清56度，30min灭活，冷却后分装，-20度保存。
要经常使用的放在4度保存。
6.新配好的培养基和血清等混合后需要试培养，即先用一瓶正常细胞培养一天以上或者不加细胞放瓶中三天以上，如未出现污染才可以拿来继续培养细胞。
7.一旦出现污染，被污染的细胞先用新洁尔灭喷一下再全部扔掉；同一批的培养基、使用的细胞清洗液等等全部重新滤过消毒；打开培养箱，用75%酒精擦洗，然后用新洁尔灭擦洗（重复2次，隔天），用紫外照射4小时以上；清扫培养室，紫外照4小时以上，重复一次。
8．清洁液的配方有三种：按重铬酸钾：浓硫酸：蒸馏水排列强液：63g:1000ml:200ml次强液：120g:200ml:200ml 弱液：100g:100ml:1000ml 最常用的是次强液。
配制的时候应选用防酸、耐热、开口较大的容器盛清洁液。
先将需要量的重铬酸钾和水加到容器里，最好是完全溶解。
然后，缓慢、分次加入浓硫酸。
配制时，注意做好自我防护。
新配制的的清洁液(泡酸液)一般呈棕红色,经长时间使用后因有机溶剂和水分增多逐渐变成绿色,表明已经失效,应该重新配制.二、培养箱使用规则1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
* 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。
长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。
细胞房注意事项和管理
细胞房注意事项和管理一、常规操作1. 穿着专用实验服。
自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。
2. 穿着专用拖鞋。
先在入室间换下自己的鞋子，穿着绿色拖鞋进入缓冲间；再在缓冲间换红色拖鞋。
尽量避免在缓冲间走动、停留。
3. 细胞房最多可4个人同时使用。
尽量避免在内长时间逗留、交谈。
4．离开细胞房前，要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头（离心机、水浴锅、日光灯），超净台开启紫外灯照射2h后关闭。
二、值日生工作职责1. 每周值日生时间从周一开始，至周日结束。
2. 值日周开始时需做的事情：配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够的95%工业乙醇供酒精灯使用。
* 75%的酒精可用750ml95%的酒精加去离子水至950ml配制而成。
3. 值日周内每天需做的事情：开大紫外灯消毒细胞房15-30min后才能投入一天的使用，晚上开启紫外灯灭菌，第二天及时关闭；检查灭菌物品的储备情况，以便及时补充；及时安排人员清洗回收培养器皿；检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况；至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检查培养箱内水量是否足够。
4. 值日周结束前需完成的事情：星期五全方位打扫细胞房。
包括拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。
更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液是否需要更换（一个月更换一次）！5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞可以暂存于其他细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。
2014.6.9培养箱使用注意事项1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
细胞房管理规章制度
细胞房管理规章制度细胞房是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度。
第一章总则第一条细胞房主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其他人员如确实需使用细胞房必须预先征得实验室负责人和细胞房负责人同意。
第二条新养细胞的同学，需先跟随由负责人指定的人员学习，同时学习并熟记细胞房管理条例，最后通过细胞操作考核后，方可进入细胞房进行实验。
严禁未经许可擅自进入细胞房或使用相关设备。
第三条细胞房正常使用过程中，进出实验室的器械和样品需通过传递窗，严禁随身带入。
实验用品应尽量一次带入，严禁将与实验无关的物品带入实验室，在细胞房内不得进行微生物等其它易污染物的培养，禁止从事任何高危生化实验。
第二章条例第一条常规操作穿着专用隔离服，实验人员必须在细胞房缓冲间内更换细胞房专用隔离服并戴上口罩，严禁不穿隔离服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞房。
穿着专用拖鞋。
在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。
细胞房最多可4个人同时使用。
实验过程中严禁喧哗，闲聊，反复进出培养室。
离开细胞房时应在缓冲室填写使用登记。
第二条培养箱使用规则1.注：容易造成污染。
2.从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。
未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。
3.培养瓶/皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
4.普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。
注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。
第三条显微镜使用规则1.倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2.短时间内需再次使用显微镜时，为避免频繁开关显微镜电源，可不必关闭显微镜电源，但须将亮度旋钮调到最低；较长时间不需使用或离开细胞房时，须按规定关闭显微镜电源。
细胞室管理
细胞培养室管理规则
1．实验人员进入本实验室进行各种细胞培养都必须按管理规则操作；
对独立操作人员必须持有操作上岗证，需在指导者的指导下操作。
2．实验人员必须更换、穿戴好专用的工作服和鞋后方可进入该实验室；严禁带入有害及其它易污染物的物品。
3. 实验人员在进行实验前必须熟悉实验内容、操作步骤及各类仪器
的性能和操作方法，严格执行操作规程。
4. 实验人员必须严格按无菌操作程序，在生物安全柜里进行有关细
胞分离和培养操作，并且常用酒精擦拭手套消毒；生物安全柜内的常用无菌物品严禁带出柜外。
5．培养室必须定期清洁消毒，一旦有污染的迹象，必须对室内所有部位作污染测试鉴定，并登记记录检测日期，被检测的物品，结果，检测人等。
6. 存放于冰箱内的培养液要注明内容、姓名、配制日期，不得随意
使用他人的培养液，以免交叉污染。
7. 实验完毕后，清理生物安全柜里所用的实验器材，酒精清洁工作台面，关闭安全柜风机和电源，打开柜内紫外线及实验室消毒。
8.离开实验室前，脱去工作衣和拖鞋。
关好水、电、门、窗，方可离开实验室。
9.实验室的使用须登记预约，在实验室使用出现任何问题时，请及时与该室负责人联系。
细胞房房管理规章制度及细则
细胞房房管理规章制度及细则第一项、所有使用人员要严格按照无菌标准进行操作。
第一条使用人员要严格执行无菌操作，保持实验室清洁。
①每日第一个开门者，必须将开门时间记录在《细胞房预约登记表》上。
②使用细胞房者，统一从604门口进入。
一更处换鞋，脱外套。
二更处穿隔离衣、戴口罩，手套和帽子（头发必须全部进入帽子）。
③进入风淋间，必须吹满10s，不允许急停。
不可携带物品进入风淋间。
④所有进出细胞房的物品，必须由传递口出入。
洁净物品和污物各有一个传递口，不允许污物放置于洁净物传递口内。
洁净物、废液桶进入传递口必须先紫外照射10min。
⑤废弃物不可留滞于细胞房。
⑥超净台使用结束后，打开紫外灯15分钟，然后关闭。
⑦气瓶间房门如无特殊情况，完全关闭，不允许随意打开。
⑧如需观察气瓶供气和更换气瓶时，可打开602门，平时不允许随意打开。
⑨每周日晚8点半之后停止使用细胞房，安排值日生打扫卫生。
如有特殊情况需要使用细胞房者，请提前向管理老师报备，并通知值日生。
第二条未培养过细胞的人员，不可独立使用细胞房。
①必须在管理老师或者高年级研究生指导下进行操作。
②考试合格后，方能独立使用细胞房。
考试不合格者，不得独立使用细胞房。
③如发现擅自使用细胞房，将追究其责任。
第三条未经管理老师许可，不得私自带外来人员使用细胞房和细胞房内仪器设备。
不得在细胞房做任何与细胞培养无关试验。
第二项、细胞房使用实行预约制，使用人员必须提前预约。
使用人员须在《细胞房预约登记表》上预约使用房间、使用人员姓名、使用时间等信息。
严格按照预约登记使用细胞房。
第一条如预约取消，必须及时将预约信息删除。
第二条未登记预约使用细胞房；或在预约时间内，无人使用细胞房等行为将视为违规。
第三项、细胞房主要划分为三个区域和安全柜专区。
第一条 A间主要供朱俐组使用；B间主要供高永静组使用； C间主要供姜正林组使用。
第二条每一小间均配有一台培养箱供各组使用，分层请各组自己分配。
未经本人允许，不得随意查看、移动他人培养的细胞。
细胞培养室使用规则.ppt
work in the hood
D. prevention of cellular crosscontamination
1. Eliminate aerosol or cell suspension aerosol
with 70% EtOH
C. Additional considerations for good sterile techniques
1. avoid f bottle, tubes, and flasks
2. never pour from a culture dish or flask 3. do not over fill culture flask or dish 4. never invert caps or lids 5. never work directly over an open
PBS, culture medium 3. Sterilization of equipments
• volumetric pipette • glass bottle for medium and reagent • disposable centrifuges 4. 75% ETOH
D-PBSA g/L
5.酒精燈使用須知 : (1)確定瓶外無酒精殘留或溢出 (2)確定內含酒精（95﹪）不超過 六分滿 (3)確定酒精燈無玻璃裂痕
6.瓦斯使用須知 :
(1)本生燈及瓦斯罐,在使用後記得關好
(2)瓦斯用盡時,需請陳小姐通知瓦斯公司
善後處理相關事宜： 1.將桌面清理乾淨，所有使用品歸位 2.操作台以70﹪酒精擦拭乾淨
细胞培养技术（CellCulture）及细胞培养室使用规则培训
细胞培养技术（CellCulture）及细胞培养室使用规则培训
安徽医科大学（Anhui Medical University）
细胞培养技术（Cell Culture）
及细胞培养室使用规则培训
演讲人：钱成
汇报时间：2018.5.27
Contents
目
录第一部分细胞培养的基本知识
第二部分细胞生存的环境条件
第三部分细胞培养的基本技术（见视频）
第一部分基本知识
摘要?细胞培养的基本概念
细胞培养的类型及特点
What is cell culture？传代细胞培养室
传代细胞培养室
传代细胞培养室
（一）贴壁型细胞：
大多数细胞属此类型。
如成纤维细胞、上皮细胞、多形型、游走型细胞等。
成纤维细胞肾小管上皮细胞多形型黄色瘤细胞游走型巨噬细胞
（二）悬浮型细胞：
悬浮生长，单个分散或成团。
如各种源自血液中的细胞、骨髓和脾细胞。
传代细胞培养室。
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细胞房管理规章制度
细胞房是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度。
第一章总则
第一条细胞房主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其他人员如确实需使用细胞房必须预先征得实验室负责人和细胞房负责人同意。
第二条新养细胞的同学，需先跟随由负责人指定的人员学习，同时学习并熟记细胞房管理条例，最后通过细胞操作考核后，方可进入细胞房进行实验。
严禁未经许可擅自进入细胞房或使用相关设备。
第三条细胞房正常使用过程中，进出实验室的器械和样品需通过传递窗，严禁随身带入。
实验用品应尽量一次带入，严禁将与实验无关的物品带入实验室，在细胞房内不得进行微生物等其它易污染物的培养，禁止从事任何高危生化实验。
第二章条例
第一条常规操作
穿着专用隔离服，实验人员必须在细胞房缓冲间内更换细胞房专用隔离服并戴上口罩，严禁不穿隔离服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞房。
穿着专用拖鞋。
在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。
细胞房最多可4个人同时使用。
实验过程中严禁喧哗，闲聊，反复进出培养室。
离开细胞房时应在缓冲室填写使用登记。
第二条培养箱使用规则
1.从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。
长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。
2.从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。
未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。
3.培养瓶/皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
4.普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。
注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。
第三条显微镜使用规则
1.倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2.短时间内需再次使用显微镜时，为避免频繁开关显微镜电源，可不必关闭显微镜电源，但须将亮度旋钮调到最低；较长时间不需使用或离开细胞房时，须按规定关闭显微镜电源。
第四条超净台相关操作规则
1.超净台使用遵循预约原则。
在细胞房入口处预约，细胞房内填写使用登记。
a：无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。
b：预约内容请包括：预约时间、姓名、使用日期、使用时间段、实验内容。
2.使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒，超净台内严禁堆放过多物品影响风路平衡，不同超净台内物品严禁频繁交换使用。
3.点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。
注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。
4.超净台中应摆放废液缸，用于暂时存放废弃物，实验结束后将废液缸带走，废液垃圾倒入水池并同时用水冲释，固体垃圾倒入垃圾桶中
注：液缸应及时处理，严禁长时间放置，以免留有大量培养液滋生细菌。
5. 细胞实验后任何含有细胞培养污物的培养瓶，离心管，移液管等必须及时带出细胞房。
第五条 器具的清洗规则
1.可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有碱液的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的水以没过浸泡物品。
注：保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。
2.器具经碱液侵泡过夜，冲洗干净并烘干后，放入酸缸浸泡过夜，冲洗干净并烘干。
洗涤程序：清水冲10次，然后再用纯水冲5次，倒置于烘箱中晾干。
并及时包装灭菌。
第六条 冰箱、试剂等相关操作规则
1.从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好。
按类别存放试剂。
严禁长时间敞开冰箱门。
2.各人存放于冰箱内的培养液、生化试剂、样品要注明姓名、配制日期、样品名称，特殊试剂需获得细胞房管理人员同意后方能放置。
不得使用他人的培养液或其他生化试剂。
3．分装好的血清长时间保存于-20℃，使用前放于4
℃预解冻。
原则上解冻好的
血清应全部配成含血清的培养基备用，若有剩余，则暂存于4℃并尽快使用。
尽量不要使用他人开过的血清，以免交叉污染。
4. 细胞房的冰箱空间有限，尽量仅放置使用频率较高的试剂。
请勿将一些闲置试剂，污染试剂长期放置在此冰箱。
5.负责人会定期对冰箱进行清理，发现无标记，过期试剂等违规物品将全部清除出去，并且查找试剂配置人给予警告。
第七条进入细胞房物品控制
1.所有进入细胞房的物品需经过传递窗，尽量经过紫外照射，酒精表面消毒。
2.严禁将可能含有污染物或病原菌的实验物品带入细胞房。
第八条细胞房清洁守则
1. 值日时间：每周周一开始，至周日结束。
2.日常工作：准备75%和95%乙醇及棉球供细胞房使用，倒废液，维持细胞房的清洁与整洁，主持细胞房塑料耗材的灭菌工作，购买、分装双抗，检查培水浴锅、养箱内水量是否足够。
3.每周大清洁：每周一和周四用新洁尔灭打扫细胞房。
清洁顺序：0.1%新洁尔灭擦拭超净台，桌面，传递窗，超净台在用新洁尔灭擦拭后还需用75%乙醇擦一遍；用0.1%新洁尔灭拖地，紫外消毒细胞房30分钟或过夜。
注：值日期间，值日生需给水浴锅、培养箱水槽换水一次，给细胞房内的隔离服灭菌一次。
4. 在没有出现问题的情况下，每2个月清洁一次培养箱（由细胞房负责人主持）。
第九条制度的实施与处罚
1.细胞房负责人密切关注细胞房的使用情况，发现违反规章操作者首先给予提醒，并做记录。
2.对于一周内违反3次以内者予以警告，3-5次者罚做细胞房清洁1周，超过5次者停止其对细胞房使用权限，需重新参加培训后才能再次使用。
第三章附则
本规章制度从公布之日起开始执行。
本实验室追求不断地进步，各位老师及使用人员若有良好的建议可与细胞房负责人沟通，我们会及时协调，旨在为团队提供和谐，高效的实验条件。