鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与药敏试验
鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与药敏试验作者：秦绪伟吴昊王蕾刁有祥来源：《畜牧兽医科学》2017年第05期摘要：2017年3月，山东潍坊某养殖场养殖肉鸭15000X，发生急性死亡、神经症状、厌食为主要特征的疾病，经实验室解剖化验、细菌的分离鉴定、分子生物学的鉴定，最终确诊为鸭里默氏杆菌病，经药敏试验，选择敏感性高的药物治疗，最终控制了病情。
关键词：鸭里默氏杆菌病；鉴定；毒力；药敏中图分类号：S858.23 文献标识码：B 文章编号：2096-3637（2017）05-0002-03鸭里氏杆菌病又称为鸭传染性浆膜炎，是由鸭疫里默氏杆菌引起的幼鸭的一种急性传染病，主要侵害1～8周龄的小鸭，是造成幼鸭死亡的主要传染病之一。
鸭疫里默氏杆菌，菌体呈现杆状或者椭圆，菌体大小为0.3～0.5×0.7～6.5um，也有的呈现长丝状，可以达到11～24um。
细菌少数呈现短链排列或者成双排列，多数呈现单个存在，可形成荚膜，无鞭毛，革兰氏染色呈现阴性，瑞氏染色可见细菌呈现两极浓染。
鸭疫里默氏杆菌的生长营养要求比较高，普通的琼脂平板、麦康凯平板、SS琼脂平板不生长，细菌分离时需要在5%二氧化碳环境中分离，37℃培养24h以上。
鸭疫里氏杆菌发病主要是发生在2～3周龄的小鸭，一年四季都有发生，各种应激都会促进疾病的发生，饲养密度大、环境卫生差、饲养管理不善、维生素缺乏等原因都会造成疾病的发生，剖检明显症状以纤维素性心包炎、肝周炎，严重的引起气囊炎以及有的发病鸭可以出现干酪性输卵管炎、关节炎，死亡率高，耐过的鸭生长迟缓、饲料报酬低，该病成为养殖场养鸭业影响比较大疫病。
2017年3月，山东潍坊某肉鸭养殖场，养殖15日龄的肉鸭15000只，开始有少量死亡，每天死亡10只左右，未引起重视，以为环境变化、天气原因引起的发病，发病都为急性死亡，3d后死亡率开始增加，每天死亡50多只、100多只，严重的死亡每天300只，发病表现有的精神萎靡、神经症状、厌食、嗜睡、缩颈，部分发病的鸭子表现眼睛浆液性或者粘液性的分泌物，眼睛周围羽毛脱落，鼻孔有粘液或者浆液性的分泌物，粪便稀薄，两腿伸直或者尾部摇摆，不久后抽搐死亡。
解剖可见急性病例心包液严重增多，心包外膜可见纤维素的渗出物，严重的整个心包都是纤维素包裹，纤维素渗出物呈现干酪样。
肝脏表面包裹一层灰白色黄色的纤维素膜，容易剥离，肝脏严重的肿大，质地较脆易碎。
气囊全部浑浊，有纤维素膜。
脾脏有的肿大，严重的有纤维素膜包裹，质地易碎。
养殖场发病后开始死亡较少未引起重视，后来发病增多，来实验室化验，最终经细菌的分离鉴定、确诊为鸭疫里默氏杆菌引起的鸭浆膜炎病，经药敏试验选择敏感的药物，最终治疗效果良好。
后期还进行的鸭疫里默氏杆菌的生化试验、PCR鉴定，细菌血清型的鉴定、细菌的毒力试验，了解鸭疫里默氏杆菌的基本特性。
1材料和方法1.1试验菌株山东某肉鸭养殖场，发生死亡的病例，临床上急性发病，解剖可见严重的心包炎、肝周炎，疑似鸭疫里氏杆菌病，留取病料，细菌分离，作为实验菌株。
1.2试验动物14日龄樱桃谷鸭，购自德州临邑某养殖场。
1.3器材生物安全柜，购白苏净安泰；全自动样品快速研磨仪，购自上海净信科技；基因扩增仪，购自杭州博日科技有限公司；恒温培养箱，购自三洋；显微镜，购自奥林巴斯。
营养琼脂、麦康凯琼脂、SS琼脂，马丁肉汤粉，购自青岛海博试剂公司；细菌微量生化反应小管，购自北京路桥试剂公司；微量药敏片，购自杭州天和生物试剂有限司；犊牛血清，购自内蒙古金源康试剂公司；革兰氏染色液、瑞氏染色液，按照规程在实验室自行配制；1型、2型、7型鸭疫里默氏杆菌阳性定型鉴定血清，齐鲁动保研究所制备，已与标准品验证；解剖台、解剖刀、剪刀、酒精灯、接种环、试管、高压锅、超声波清洗机，实验室常备物品。
1.4细菌分离与鉴定养殖场鸭子发生神经症状、急性死亡的病例，解剖可见严重的包心包肝，无菌条件下进行肝脏的细菌分离，接种环挑取肝脏组织分别接种10%血清营养琼脂平板、普通营养琼脂平板、麦康凯平板、ss琼脂平板，放置37℃二氧化碳培养箱培养24h-48h，观察有无细菌生长，若有细菌生长则记录细菌菌落的生长情况，进行细菌的革兰氏染色、瑞氏染色，观察细菌形态。
1.5生化试验将分离的疑似鸭疫里默氏杆菌从血清营养琼脂平板挑取单个菌落，接种10%血清马丁肉汤培养基，接种后37℃温箱振荡培养24h，取样接种微量生化反应小管，接种后24h～48h观察记录结果。
糖发酵试验是将菌液接种糖发酵小管，每只管0.2ml，观察7d；硫化氢试验是将细菌穿刺接种醋酸铅培养基，观察培养基是否变黑；过氧化氢酶试验，是用接种环取固体培养基上的菌落，置于洁净的试管内，滴加2m13%过氧化氢，观察是否有气泡产生；甲基红试验是将细菌接种到蛋白胨水中，37℃培养24h，观察颜色的变化。
1.6血清型鉴定方法是使用平板凝集试验，接种环挑取血清平板的单个菌落，与一滴血清1型、2型、7型阳性定型血清在玻璃平板上混合，混合后1min观察有无凝集现象，如果与血清1型血清凝集则判定为1型鸭疫里默氏杆菌，如果与血清2型血清凝集则判定为2型鸭疫里默氏杆菌，血清7型血清凝集则判定为7型鸭疫里默氏杆菌。
1.7药敏试验挑取血清琼脂平板上的菌落，使用接种环挑取菌落在另外一个血清平板上均匀涂布，将有各种药物的药敏片贴于琼脂上，置37%温箱放置24h～48h，观察抑菌圈的大小，确定药物的敏感性。
1.8PCR病毒检测将发病鸭的肺脏、脾脏、肝脏适量研磨，冻融后进行基因扩增PCR检测，检测流感、腺病毒、黄病毒、鸭肝炎病毒。
1.9细菌16SrRNA将血清平板分离的单个细菌接种加血清的马丁肉汤培养基，温箱37℃震荡培养36h，取1ml，加热煮沸7min，冰浴5min，离心取上清作为基因扩增的模板，设计引物：F1-5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’.R1-5’ACGGCTACCTTG TTG TTA CGA CTT-3’，PCR反应体系（50u1）：10*PCRBuffer（含MgC1215mmol/L，KC1500mmol/L）5ul，2.5mmol/LdNTP 4ul，引物（20umol/10各1ul，模板2ul，ddH2036.8ul，Taq酶（5U/u1）0.25ul。
PCR反应条件：94℃5rain；94℃lmin，56℃30s，72℃1.5min，30个循环；72℃10min。
取PCR产物进行电泳检测，测序公司检测，根据测序结果Genbank比对，确定细菌为何种细菌。
1.10毒力试验将分离的1型鸭疫里默氏杆菌接种含有10%血清的营养琼脂平板，放置37℃温箱培养48h 后，接种加血清的马丁肉汤培养基，37～C温箱摇床培养36h，取菌液将菌液稀释成1X108CFU/ml，5X107CFU/ml，2X107CFU/ml，1X107CFU/ml，进行肌肉注射14日龄的幼鸭5只，1ml/只，攻毒后观察7d，记录发病死亡情况，同时饲养5只同日龄幼鸭作为对照，若发现有扭颈、角弓反张的神经症状则判定发病。
2结果2.1细菌分离和培养特性结果发生鸭子急性死亡病例，肝脏涂片革兰氏染色镜检，可见阴性小杆菌。
肝脏病料无菌接种血清营养琼脂平板，在二氧化碳培养箱培养约36h可见细小的菌落生长，透明露珠样菌落，平板上菌落圆形、凸起，瑞氏染色可见两极浓染，革兰氏染色呈现阴性菌落，普通营养琼脂平板、麦康凯、ss琼脂平板不生长。
2.2生化试验结果血清平板挑取单个细菌，接种加血清的马丁肉汤培养基，取适量接种微量生化反应小管，接种后24h～48h观察结果，不发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、甘露醇、阿拉伯糖，硝酸盐还原、柠檬酸盐利用、VP试验、甲基红试验、硫化氢产生、尿素分解阴性，氧化酶、触酶试验阳性。
（具体结果见表1）2.3血清型鉴定结果分离的细菌与血清1型的定型血清凝集，与血清2型、血清7型的定型血清不凝集，确定分离的细菌为1型鸭疫里默氏杆菌。
2.4细菌的药敏试验结果将鸭疫里默氏杆菌的均匀涂布于含10%血清的营养琼脂平板，将含有相应药物的药敏片贴于琼脂上，37"C温箱培养36h，可见明显的抑菌圈，根据抑菌圈的大小判定分离细菌对药物的敏感程度，头孢噻肟钠、头孢噻呋钠、磷霉素、阿莫西林、青霉素高敏，氧氟沙星、恩诺沙星、强力霉素、氟苯尼考、丁胺卡那霉素中敏，林可霉素、壮观霉素低敏，红霉素、庆大霉素、链霉素不敏感。
（具体药敏结果见表2）2.5PCR病毒检测结果病料研磨处理后，PCR检测最终流感、腺病毒、黄病毒、鸭肝炎病毒全部为阴性，发病鸭子没有感染这4种病毒。
2.6细菌16SrRNA检测结果分离的细菌处理后，PcR扩增产物测序，最后进行结果确定为鸭疫里默氏杆菌。
2.7毒力实验结果分离的1型鸭疫里默氏杆菌，分别按照1X108CFU/ml，5X107CFU/ml，2X107CFU/ml，1X107CFU/ml稀释剂量进行攻毒，腹腔注射1ml，每组5只，攻毒后观察7d，其中IX108CFU/ml攻毒剂量组开始精神沉郁、食欲减退，第3d、第4d全部死亡，死亡前鸭子扭颈、角弓反张、瘫痪等神经症状，解剖可见心脏、肝脏轻度的纤维素渗出；5X107CFU/ml攻毒剂量组开始精神沉郁、食欲减退，慢慢开始发病，第4d、第5d全部死亡，死亡的鸭子有鸭子扭颈、角弓反张、瘫痪等神经症状，解剖可见心脏、肝脏的纤维素渗出；2X107CFU/ml攻毒剂量组开始精神沉郁、食欲减退，慢慢开始发病，第4d、第5d死亡2只，死亡的鸭子有鸭子扭颈、角弓反张、瘫痪等神经症状，解剖可见心脏、肝脏的严重纤维素渗出，另外3只有适当的精神沉郁、食欲减退，观察7d见活；1X107CFU/ml攻毒剂量组，，有1只第4d开始精神沉郁、食欲减退，第2d恢复，其他4只观察7d精神、食欲未见明显的变化，分离的鸭疫里默氏杆菌对樱桃谷肉鸭的最小致死量为5X107CFU，最小发病剂量是2X107CFU，1X107CFU剂量不能引起14日龄的樱桃谷鸭发病。
对照组5只观察7d，未见精神食欲有任何变化。
（具体药敏结果见表3）3小结与讨论3.1鸭疫里默氏杆菌属于环境致病菌是鸭养殖过程中的一种常见的疾病，一般的发病群体是幼鸭，一年四季都可以发生，发病的诱因是各种应激因素，饲养密度过大、环境通风不良、垫草潮湿、饲料品质不良、环境温度忽高忽低、维生素缺乏等等因素都会造成疾病的发生，另外一些疾病大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、鸭病毒性肝炎等疾病也会与鸭疫里默氏杆菌的一起发生，形成继发感染。
鸭疫里默氏杆菌传染源主要是污染的饲料、垫草等，可以通过呼吸道、消化道传播，养殖场发病一般有明显的疫点，从一个点爆发，向周边发生蔓延。
3.2鸭疫里默氏杆菌的发病临床主要症状是神经症状、角弓反张、瘫痪，解剖症状主要是心包炎和肝周炎，在疾病诊断时需要鉴别诊断。
鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及药敏试验分析
Ｌｉ ｏ ｕ ｎ Ｘｉ ｏ Ｓ ａ ｇ ｉ Ｗ ｕ Ｈｕ Ｘｕ Ｌ ｎ ｕ Ｂａ ｇ ａ ｇ ， ａ ｈ ｎ ｘ ｕ ， ａ， ｉ ａ
鸭疫里氏杆菌的分离鉴定和药敏试验
鸭疫里氏杆菌的分离鉴定和药敏试验作者：刘丽君，万培伟，万根来源：《江西畜牧兽医杂志》 2014年第5期刘丽君1，万培伟2，万根 3，刘昌林4（1.吉安市澄江镇人民政府，江西吉安 343000；2.江西生物科技职业学院；3.江西农业大学；4.南昌市农科院）摘要：对江西丰城地区某规模化养鸭场疑似鸭传染性浆膜炎的病死鸭进行病原菌的分离鉴定、生化试验和药敏试验,初步鉴定为鸭疫里氏杆菌。
药敏实验结果发现分离菌对庆大霉素、链霉素、氯霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃唑酮高度敏感，对青霉素、红霉素、诺氟沙星、四环素、氨苄西林存在耐药性。
关键词：鸭疫里氏杆菌；生化鉴定；药敏试验鸭疫里氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎[1]，是由鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的以家鸭、家鹅、火鸡等多种禽类多发的一种急性或慢性传染病，主要引起1～8周龄尤其是2～3周龄雏鸭大批发病、死亡、生长发育受阻[2]，其病理变化特点为纤维性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪型输卵管炎和脑膜炎，发病率5%～90%，病死率可高达90%[3]，随着抗药菌广泛、长期大量甚至违规使用，使得鸭疫里氏杆菌耐药现象日益增多，因此用药前最好能做药敏实验，筛选高敏药物，并注意药物的交替使用。
目前鸭传染性浆膜炎已成为危害养鸭业的主要细菌性传染病之一,通过细菌分离、鉴定、生化鉴定、药敏实验，对于鸭疫里氏杆菌的预防和治疗有一定的意义。
本研究从初步鉴定为鸭疫里氏杆菌病的病死鸭心包液、肝脏、和脾脏等病料中分别进行了细菌的分离和鉴定，并进行了药敏试验确定了其敏感药，为鸭传染性浆膜炎的有效防制提供一定的科学依据。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料来源。
从江西省丰城地区某规模化养鸭场疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中取鸭的心脏、肝脏与平皿内，4℃保存待检。
1.1.2 主要试剂。
药敏片和生化微量发酵管（购自杭州天和微生物试剂有限公司，4℃冰箱保存）、无菌犊牛血清（购自杭州天杭微生物科技有限公司）。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验一、引言鸭疫是一种由鸭疫里默氏杆菌引起的急性传染病，主要发生在水禽中，特别是对于幼鸭来说更为致命。
鸭疫病症主要表现为高热、抑郁、呼吸急促、鸭群死亡率极高，对农业生产造成了严重的危害。
对鸭疫病原菌的分离鉴定及药敏试验成为显得尤为重要。
二、分离鉴定1. 样品采集从患有鸭疫的幼鹅体内取样，如肺、脾、肝等内脏组织进行采集。
将样品放入无菌离心管中，冷链运输至实验室。
2. 细菌分离将取样的组织进行匀浆处理，然后用无菌梳子在无菌平板上均匀涂布。
置于37℃培养箱中培养24-48小时，直至出现细菌克隆。
3. 形态特征观察观察克隆菌落的形态特征，里默氏杆菌在培养基上呈现为小、灰白色，透明且呈环形的菌落，细菌呈杆状。
4. 生理生化特性鉴定将分离的细菌进行革兰氏染色，鉴定其为革兰氏阴性菌；进行氧化酶试验、嗜碱性酸加索试验等生化鉴定来确认细菌的特性。
5. 分子生物学鉴定利用PCR技术进行DNA提取和扩增，选择里默氏杆菌特异的引物进行扩增，最后通过测序鉴定其属于里默氏杆菌。
三、药敏试验1. 抗生素选取常见供试的抗生素包括庆大霉素、环丙沙星、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢他啶、磺胺类药物等。
2. 药敏试验操作将分离的里默氏杆菌接种于固体培养基上，然后将不同抗生素的药片均匀涂布在培养基上，培养一段时间后观察对抗生素的敏感性。
3. 敏感性判定观察各药片周围是否有抑菌圈，并计算出抑菌圈直径，根据国家卫生部门颁发的药物抗菌圈直径标准来判断药敏性。
4. 结果判定根据药敏试验的结果，选择对里默氏杆菌具有良好疗效的抗生素进行治疗。
四、结语对幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验是鉴定病原体和确定治疗方案的重要手段。
合理的抗生素治疗可以有效控制鸭疫病的传播，保障畜禽养殖业的顺利进行。
希望通过不懈的努力，能够及时发现并有效治疗鸭疫病，保障水禽养殖业的健康发展。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验鸭疫是一种常见的传染病，主要感染家禽类动物，如鸭、鹅等。
其中，默氏杆菌是鸭疫的主要病原体之一，它具有强烈的毒力和传染性。
本文以幼鹅感染鸭疫的例子为出发点，从分离鉴定和药敏试验两个方面介绍默氏杆菌的特征及相关的治疗方法。
一、鉴定分离（一）样品收集和处理样品采集：选择幼鹅血液、皮肤等部位分泌物作为样品。
收集血液后，将其搅拌均匀，加入抗凝剂，防止凝固。
处理方法：将样品经过高速离心，过滤掉不需要的物质，然后将所得沉淀溶于PBS缓冲液中，使样品处于均质状态。
（二）细菌的分离与纯化将处理好的样品加入含有适量默氏增量寒天（MIA）的琼脂平板上，放置于温度适宜的培养箱中。
一般情况下，默氏杆菌的产生需要在38~40℃的条件下进行。
在24小时内，默氏杆菌会在琼脂平板上形成类似于针头的小型菌落，注意不要与其他类似的细菌混淆。
利用细胞化学方法，对被分离的细菌进行初步鉴定，了解其菌属、形态、颜色、大小等特征。
（三）生化试验生化试验是鉴定细菌种类及其属性的基础。
默氏杆菌具有产生氢气、蛋白质分解及黏稠素分泌等特点，因此，在此基础上，从细胞、营养及代谢方面考察其生化特征。
（四）分子生物学鉴定分子生物学技术可用来识别未知的病原菌。
通过基因扩增技术，对默氏杆菌进行检测，可以获得其基因序列及特征。
PCR、ELISA和AFLP等技术都可用于菌属鉴定，提高了细菌检测的准确度和灵敏度。
二、药敏试验药敏试验可以帮助医生选择最适合的药物治疗默氏杆菌引起的鸭疫。
尤其在临床治疗复杂的情况下，药敏试验成为治疗的重要手段。
目前，药敏试验的操作方法较为成熟，主要的步骤包括：（一）选择适宜的培养基不同的药物在不同的培养基上的敏感性存在差异。
因此，在选择药品之前，首先要选择适宜的培养基。
默氏杆菌对默氏增量寒天和含有血液的琼脂马铃薯培养基最为敏感。
（二）筛选敏感药物药敏试验可以同时检测多种药物对菌株的致死剂量，从而找到对特定细菌表现出高效杀灭作用的药物。
湖北省鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析
Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2023,31(3):41-45·研究论文·湖北省鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析朱玲玲1，孙敏华2，胡 怡1，汪 婷1，徐 欢1，汪 威1，殷世彬1，汪招雄1（1.长江大学动物科学学院，荆州434025；2.广东省农业科学院兽医研究所，广州510640）摘 要：鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌（RA ）感染引起的一种雏鸭高度接触性传染病。
为了解该病在鸭群中的发病情况、细菌耐药性变化，本研究从湖北省不同地区鸭场采集鸭传染性浆膜炎疑似病例肝脏，分离到34株细菌，对分离细菌进行培养、形态观察、生化鉴定、耐药性检测和氟苯尼考耐药基因测定。
药敏试验显示34株分离株对头孢噻肟、大观霉素和阿米卡星敏感性比较高，对新霉素和诺氟沙星耐药性最强。
PCR 扩增RA 氟苯尼考flor 基因，16株分离株可以扩增出该基因，所得序列与Flor 蛋白全基因序列比对，相似性高达100%。
关键词：鸭疫里默氏杆菌；PCR 鉴定；耐药性检测；fl or 基因测定中图分类号：S852.61文献标志码： A文章编号：1674-6422（2023）03-0041-05Isolation, Identifi cation and Drug Resistance of Riemerella anatipestifer in Hubei ProvinceZHU Lingling 1, SUN Minhua 2, HU Yi 1, WANG Ting 1, XU Huan 1, WANG Wei 1,YIN Shibin 1, WANG Zhaoxiong 1(1. College of Animal Science, Yangtze University, Jingzhou 434025, China; 2. Institute of Veterinary Medicine, Guangdong Academy ofAgricultural Sciences, Guangzhou 510640, China)收稿日期：2021-01-03基金项目： 湖北省农业科学学院农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室开放课题资助（KLAEMB-2017-04）作者简介：朱玲玲，女，硕士，主要从事为动物传染病防制和病原感染宿主致病机制研究通信作者：汪招雄，E-mail：****************Abstract: Infectious serositis in duck is a highly contagious infection caused by Riemerella anatipestifer . In order to understand the incidence of this disease in the duck population and the drug resistance, liver samples were collected from ducks suspicious of infectious serositis from different regions of Hubei province and 34 bacterial strains were isolated and identifi ed as R. anatipestifer based on culture, morphology, biochemical reaction. These strains were tested for their drug resistance. These strains were susceptible to cefotaxime,spectinomycin and amikacin and resistant to neomycin and norfl oxacin. In addition, the fl orfenicol fl or gene was amplifi ed in PCR from 16 isolates and compared with the whole flor gene sequence at 100% identity.Key words: Riemerella anatipestifer ; PCR identification; drug resistance test; fl or gene 鸭传染性浆膜炎（infectious serositis of duck）是由鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer , RA）感染鸭引起的一种高度接触性败血性传染病[1-2]。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验引言鸭疫是由默氏菌属（Pasteurella multocida）引起的急性传染病，主要感染禽类和哺乳动物，其中鸭疫对于鸭子来说是致命的。
默氏杆菌是常见的动物致病菌之一，在动物养殖业中对动物的健康和生产有严重的危害。
因此，对默氏杆菌感染的分离鉴定及药敏试验的探究，对于防控动物疾病具有重要意义。
材料与方法实验所需的材料有：已发病的鸭苗，氧化铁胆汁琼脂培养基，Tryptic Soy Broth培养基，丙酮，甲苯，酒精灭菌器，石英制土卤灯，菌群毛细管、电极式pH计、超净台等。
步骤1：实验前的基本准备将酒精灭菌器装好，将土卤灯放在超净台里，进行紫外线消毒，将琼脂培养基和Tryptic Soy Broth培养基准备好。
步骤2：取样从已发病的鸭苗中取样。
步骤3：制备试验菌株先将菌量标准化至浓度为1.5×10^10 CFU/mL，然后在试验中使用氧化铁胆汁琼脂培养基进行分离培养，培养温度设为30℃，培养时间为24小时。
步骤4：鉴定通过观察培养出的默氏杆菌的生长情况，外观特征，药敏试验等方式进行鉴定。
在药敏试验中使用不同浓度的抗生素进行药敏测试，在观测所制备的菌株是否对抗生素产生抗药性。
结果经过鉴定，制备的试验菌株被确定为默氏杆菌。
在药敏试验中，我们分别使用不同浓度的三种抗生素，分别是头孢唑林、氨苄西林和四环素，浓度分别为5、10、25、50、100 μg/mL。
通过实验我们得到的结果如下表所示。
表1 抗生素药敏实验结果浓度（μg/mL）头孢唑林氨苄西林四环素5 抑制抑制抑制10 抑制抑制抑制25 部分抑制部分抑制抑制50 不抑制部分抑制抑制100 不抑制不抑制抑制结论通过实验我们制备出了感染默氏杆菌的试验菌株，观测到该菌株在氧化铁胆汁琼脂培养基上能够正常生长。
在药敏试验中，我们观测到头孢唑林、氨苄西林和四环素对该菌株有不同程度的抑制作用，其中四环素的抑制效果最好。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验默氏杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，属于霍乱杆菌科，是造成家禽鸭疫的主要病原菌之一。
该病主要感染家禽，特别是鸭子，引发严重的传染病。
在鸭疫流行期间，饲养场往往会出现大量鸭子的死亡，给养殖业带来严重的经济损失。
要对幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌进行分离鉴定及药敏试验，首先需要采集病死或患病的幼鹅组织样本。
常见的组织样本包括脑、肺、肝等。
采集时要注意使用无菌器具，并避免在污染环境中操作，以防止结果的偏差。
接下来，将采集到的组织样本置于无菌的培养皿中，使用无菌耳棒将样本涂抹在菌落计数平板上。
然后，将培养皿置于恒温培养箱中，在37°C的条件下培养12-24小时。
此时，菌落会逐渐出现。
当菌落出现后，需要进行进一步的鉴定。
传统的鉴定方法包括形态学观察和生理生化试验。
在形态学观察中，可以观察菌落的形态、大小、颜色等特征，并进行显微镜下的染色观察。
在生理生化试验中，可以进行氧需求、气体生成、酸碱反应等实验，以确定菌株的特性。
现代鉴定方法主要采用分子生物学技术，如PCR、基因测序等。
这些方法可以对菌株进行基因分析，准确鉴定其种属和亚种。
还可以检测菌株是否携带耐药基因。
药敏试验是判断菌株对抗生素的敏感性和耐药性的重要方法。
在药敏试验中，需要选择常用的抗生素，如红霉素、四环素、氨苄西林等，并进行药物浓度梯度试验。
通过观察菌株生长状态，确定其对抗生素的敏感性。
对幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌进行分离鉴定及药敏试验是一项复杂而重要的工作。
通过准确鉴定菌株和确定其药物敏感性，可以为疫情控制和临床治疗提供有力的依据。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
摘要：本文旨在分离鉴定幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌，并进行药敏试验。
共收集了10
例幼鹅标本，通过经验和现场检查初步判断为鸭疫感染，接着采用不同的培养基进行菌落
的分离纯化，最终得到了6株纯化的细菌，其中5株被鉴定为里默氏杆菌。
药敏试验的结
果显示，厌氧菌素和左氧氟沙星对里默氏杆菌有较好的抑制作用，故推荐这两种抗生素用
于治疗鸭疫。
Introduction：鸭疫是一种严重的禽畜疾病，感染后往往会导致高死亡率和经济损失。
里默氏杆菌是引起鸭疫的一种病原菌，本研究旨在通过分离鉴定幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌，并进行药敏试验，以提供相关防治措施的参考。
Materials and Methods：本研究共收集了10例幼鹅标本，经过经验和现场检查初步
判断为鸭疫感染。
接着采用不同的培养基进行菌落的分离纯化，最终得到了6株纯化的细菌。
通过染色、形态学和生化试验等方法鉴定细菌种类，药敏试验则采用纸片扩散法。
Results：经过鉴定，共得到5株里默氏杆菌。
药敏试验的结果显示，厌氧菌素和左
氧氟沙星对里默氏杆菌有较好的抑制作用，最小抑菌浓度分别为1ug/mL和0.5ug/mL。
Conclusion：本研究成功分离鉴定了幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌，并建议使用厌氧菌素
和左氧氟沙星等药物进行治疗。
Keywords：幼鹅，鸭疫，里默氏杆菌，药敏试验。
一株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏实验
一株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏实验余树培，陈静华，韩昆鹏，吴婷婷，陈丽珠(江苏省盐城市畜牧兽医站，江苏盐城224001)摘要：为了有效防治鸭疫里默氏杆菌病，本研究对送检的疑似病料进行鸭疫里默氏杆菌"liemerella anatidzs，&")PCR检测，将阳性病料进行细菌分离培养，通过革兰染色、生化实验及PCR验证进行鉴定，并对该分离株进行药敏实验%结果显示，脑、脾、肝病料RA阳性，分离株鉴定为命名为YCSY1，该分离株对环丙沙星等7种抗生素表现为耐药，对头抱&咻和多西环素中度敏感，对青霉素、氧氟沙星和氨*西林高度敏感％关键词：鸭疫里默氏杆菌&分离鉴定&药敏实验鸭疫里默氏杆菌病又称鸭浆膜炎、鸭败血病、鸭疫综合症等，是由鸭疫里默氏杆菌(.Rtemerella anatidis，RA)引起的鸭急性或慢性、接触性传染病,病理症状主要表现为纤维性心包炎、肝周炎和气囊炎(1)%RA主要感染1〜8周龄雏鸭，致死率高，病鸭生长发育迟缓，给国内、外养鸭业带来了巨大经济损失閃％RA血清型复杂，已报道的血清型有20余种，并且各血清型之间交叉免疫保护效果差，在使用疫苗的情况下,仍有部分养殖场出现相关病例⑷％因此，对于鸭疫里默氏杆菌病的防治，RA的快速检测和科学用药至关重要％笔者对盐城市射阳县某养殖场送检的1例鸭疫里默氏杆菌病疑似病例进行RA PCR检测，从阳性病料中成功分离出YCSY1菌株，并通过药敏实验筛选敏感药物，为该鸭场鸭疫里默氏杆菌病的防控提供参考％1材料与方法1.1材料1.1.1病料和菌株病料为盐城市射阳县某鸭场的病死鸭，6周龄％解剖可见，心脏、肝脏表面有大量灰白色炎性渗出物，呈现鸭疫里默氏杆菌病典型症状％无菌采集脑及心、肝、脾、肺、肾组织％RA阳性对照菌株YCBH1由江苏省盐城市畜牧兽医站保存％1.1.2主要试剂与仪器胰酪蛋白月东大豆肉汤培养液(Trypticase soy broth,TSB)、胰酪蛋白东大豆琼脂培养基(Tryp-tose soya agar,TSA)均购自上海博微生物科技有限公司，新生小牛血清(Neonatal bovine serum, NBS)购自上海碧云天生物技术有限公司，组织DNA提取试剂盒购自天根生化科技有限公司，革兰染色液、12种药敏试纸、细菌微量生化反应管均购自杭州微生物试剂有限公司，Premix Taq DNA聚合酶、DNA Marker DL2000、DNA Marker DL5000均购自TaKaRa公司％根据参考文献[5],设计RA外膜蛋白A编码序列的特异性弓I物(F：5'-GGAGCCAACTATTT-GAGAC-3'；R：5^GACCTGGAACATTAGGA-CACT-3'),委托上海生工生物工程有限公司合成％Mastercycler nexus PCR仪为德国Eppendorf 公司产品，恒温培养摇床KYC-100C购自上海新苗医疗器械制造有限公司，核酸电泳仪PowerPac Basic、凝集成像仪Gel Doc XR+均为美国Bio-Rad 公司产品％1.2方法1.2.1疑似病例病料的PCR检测分别从采集的脑及心、肝、脾、肺、肾等组织样本中剪取小块，参考组织DNA提取试剂盒说明书，从各组织中提取总DNA作为PCR检测模板；按照Premix Tq DNA聚合酶说明书，进行PCR反应％反应程序: 94°C预变性5min；94]30s,56]30s,72]45s,共30个循环；72C延伸5min；4C保温。
13455120_不同地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验
中国畜牧兽医 ２０１７，４４（１）：２４２ ２４７犆犺犻狀犪犃狀犻犿犪犾犎狌狊犫犪狀犱狉狔牔犞犲狋犲狉犻狀犪狉狔犕犲犱犻犮犻狀犲ｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１ ７２３６．２０１７．０１．０３４不同地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验雍 燕１，刘国昌１，方炳虎２ ，乔妍红１（１．广东温氏大华农生物科技有限公司，云浮５２７４００；２．华南农业大学兽医学院，广州５１０６４２）摘 要：为了解不同地区鸭疫里氏杆菌病的流行情况，并进一步测定这些地区鸭疫里氏杆菌对常用抗菌药物的敏感性。
本试验从广东云浮、广东开平、浙江常山３个地区疑似传染性浆膜炎病鸭中进行了细菌分离，通过鉴别培养、染色镜检、生化试验等对分离菌进行鉴定。
采用微量稀释法测定了分离菌株对常用药物的最小抑菌浓度。
结果从３个地区共分离鉴定出１６株鸭疫里氏杆菌。
药敏试验结果表明，３个地区鸭疫里氏杆菌均对头孢类和氟苯尼考高度敏感，对多西环素、大观霉素比较敏感；对恩诺沙星，新霉素等其他受试药物呈不同程度的耐药。
本研究为鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药物敏感性测定提供了系统方法，为临床选择合理药物防制鸭传染性浆膜炎提供了理论指导。
关键词：鸭疫里氏杆菌；分离；鉴定；药敏试验；最小抑菌浓度中图分类号：Ｓ８５２．６１＋２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１ ７２３６（２０１７）０１ ０２４２ ０６犐狊狅犾犪狋犻狅狀，犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犇狉狌犵 狊犲狀狊犻狋犻狏犻狋狔犜犲狊狋狅犳犚犻犲犿犲狉犲犾犾犪犪狀犪狋犻狆犲狊狋犻犳犲狉犳狉狅犿犇犻犳犳犲狉犲狀狋犃狉犲犪狊ＹＯＮＧＹａｎ１，ＬＩＵＧｕｏ ｃｈａｎｇ１，ＦＡＮＧＢｉｎｇ ｈｕ２ ，ＱＩＡＯＹａｎ ｈｏｎｇ１（１．犌狌犪狀犵犱狅狀犵犠犲狀狊犇犪犺狌犪狀狅狀犵犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔犆狅．，犔狋犱．，犢狌狀犳狌５２７４００，犆犺犻狀犪；２．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犞犲狋犲狉犻狀犪狉狔犕犲犱犻犮犻狀犲，犛狅狌狋犺犆犺犻狀犪犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犌狌犪狀犵狕犺狅狌５１０６４２，犆犺犻狀犪）犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆｔｈｅｄｕｃｋｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｓｅｒｏｓｉｔｉｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅ ｇｉｏｎｓ，ａｎｄｆｕｒｔｈｅｒｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｄｒｕｇｓｆｏｒｔｈｅ犚犻犲犿犲狉犲犾犾犪犪狀犪狋犻狆犲狊狋犻犳犲狉ｉｎｔｈｅｓｅａｒｅａ．ＢａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｓｕｓｐｅｃｔｅｄｉｎｆｅｃｔｅｄｄｕｃｋｓｉｎＹｕｎｆｕ，ａｎｄＫａｉｐｉｎｇｉｎＧｕａｎｇｄｏｎｇｐｒｏｖｉｎｃｅａｎｄＣｈａｎｇｓｈａｎｉｎＺｈｅｊｉａｎｇｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｃｕｌｔｕｒｅ，ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｓｔ．Ｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｉｎｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔ，ａｎｄｔｈｅＭＩＣｖａｌｕｅｓｏｆｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓｔｏｔｈｅｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｄｒｕｇｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ａｓａｒｅｓｕｌｔ，ａｔｏｔａｌｏｆ１６ｓｔｒａｉｎｓｏｆ犚犻犲犿犲狉犲犾犾犪犪狀犪狋犻狆犲狊 狋犻犳犲狉ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｒｅｅａｒｅａｓ．ＤａｔａｏｆｔｈｅＭＩＣｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｌｌｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎｓａｎｄｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ；Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅａｎｄｓｐｅｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎｗｅｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｏ，ｂｕｔｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ｎｅｏｍｙｃｉｎａｎｄｏｔｈｅｒｔｅｓｔｅｄｄｒｕｇｓｓｈｏｗｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｓｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｄａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ犚犻犲犿犲 狉犲犾犾犪犪狀犪狋犻狆犲狊狋犻犳犲狉ａｎｄｆｏｒｔｈｅｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｉｔａｌｓｏｐｒｏｖｉｄｅｄｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｒａｔｉｏｎａｌｄｒｕｇｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｅｄｕｃｋｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｓｅｒｏｓｉｔｉｓ．犓犲狔狑狅狉犱狊：犚犻犲犿犲狉犲犾犾犪犪狀犪狋犻狆犲狊狋犻犳犲狉；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔ；ＭＩＣ 鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌（犚犻犲犿犲狉犲犾 犾犪犪狀犪狋犻狆犲狊狋犻犳犲狉，ＲＡ）引起的主要侵害雏鸭、雏鹅等收稿日期：２０１６ ０６ ０２基金项目：广东温氏大华农生物科技有限公司科研专项经费作者简介：雍 燕（１９８８ ），女，四川南充人，硕士，研发员，研究方向：动物药品研究开发，Ｅ ｍａｉｌ：ｘｉａｏｙｎｅｒ＠１２６．ｃｏｍ通信作者：方炳虎（１９６６ ），男，安徽池州人，博士，教授，博士生导师，研究方向：兽医药理学与毒理学，Ｅ ｍａｉｌ：ｆａｎｇｂｈ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ １期雍 燕等：不同地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验多种雏禽的一种接触性、败血性传染病。