实验九酵母菌的计数
实验九微生物菌体大小及菌群数量的测定
实验九微生物菌体大小及菌群数量的测定生科15.2 周罡 201500181104【实验目的】1. 学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。
2. 学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。
【实验原理】（一）微生物菌体大小的测定微生物大小的测定，需借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。
镜台测微尺（图1）是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每一小格长度为0.01mm，即10μm。
刻线外有一直径为Φ3，线粗为0.1mm的圆，以便调焦时寻找线条。
刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久用而不损伤。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
图1 镜台测微尺图2 目镜测微尺目镜测微尺（图2）是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般优彼等分为50小格和100小格两种。
测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。
由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的长度。
然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。
（二）显微镜计数显微技术法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有特定容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。
目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。
其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数，而后两种计数器较薄，可用油镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
酵母菌的计数
实物图
计数室 滴液处
正面图
侧面图
♣ 酵母菌的计数 （1）计数工具——血球计数板
•每块计数板由H形凹槽分为2个同 样的计数池。 •每个计数池分为9个大方格，其中 中央的即为计数室，每个计数室的 体积为0.1mm3 。
放大后的计数池
16个小格
25个中格
*
25X16 = 400小格
抽样检测： 5×16=80个小格 抽样检测： 4×25=100个小格
无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度（℃）
— — 10 0.1 0.1 0.1 28 5 28
探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化
♣ 酵母菌的计数 （6）讨论：计数前还应有哪些步骤？需注意些什么？
酵母菌培养： ♠培养液配制 ♠灭菌 ♠接种
配制质量分数为5％的葡萄糖溶液（葡 萄糖20g，1000 mL水），分装到5个 烧杯中（200mL/烧杯） 用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计 数时所用的滴管分别灭菌。贴标签。 接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的 1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌 母液，往每个烧杯中加入。（注意：滴 加量不要太多，避免初始菌数过多。） 将烧杯置于28℃的恒温箱中培养
♣ 酵母菌的计数 （4）血球计数板的清洗：
• 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗， 切勿用硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。 镜检，观察每个小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化
♣ 酵母菌的计数 （5）注意事项：
探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化
提出问题 酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？
作出假设
设计实验
变量如何控制？
实验酵母菌种群数量变化
分析影响酵母菌种群数量的因素
营养物质
研究不同营养成分对酵母菌种群数量的影响，如碳源、氮源 等。
环境因素
探究温度、pH值、氧气浓度等环境因素对酵母菌生长的影响 。
掌握实验方法和技巧
培养基制备
学习并掌握不同类型培养基的制备方法，以适应 不同实验需求。
酵母菌计数
熟悉显微镜观察和血球计数板的使用，准确统计 酵母菌数量。
数据分析
运用统计学方法对实验数据进行处理和分析，得 出科学结论。
02
实验原理
酵母菌种群增长特性
01
酵母菌是一种单细胞真菌，具有典型的生长曲线，即
经过延迟期、对数增长期、稳定期和衰亡期。
02
在适宜条件下，酵母菌种群数量呈指数增长，迅速繁
殖，产生大量后代。
03
延迟期是酵母菌适应新环境的过程，种群数量增长缓
数据转换
将原始数据转换为适合分析的格式，如折线图或表格。
结果分析与解释
01
趋势分析
对比分析
02
03
解释结果
分析酵母菌种群数量随时间的变 化趋势，判断其生长或衰退状态。
比较不同实验条件下的酵母菌种 群数量变化，分析各条件对酵母 菌生长的影响。
根据分析结果，解释酵母菌种群 数量变化的可能原因，如营养物 质消耗、代谢产物积累等。
对实验的反思与改进建议
实验过程中应严格控制温度、湿度等环境因素，以减小其对实验结果的影 响。
增加实验组别，提高实验的重复性和说服力，以更全面地反映酵母菌种群 数量的变化规律。
在后续研究中，可以考虑引入不同酵母菌种间竞争的实验条件，以更真实 地模拟自然环境中的种群变化情况。
06
参考文献
参考文献
酵母菌大小的测定及计数实验流程
酵母菌大小的测定及计数实验流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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实验九酵母菌的计数
contents
目录
• 实验简介 • 实验材料 • 实验操作 • 结果分析 • 结论与总结
01 实验简介
实验目的
掌握酵母菌的计数方 法。
探究酵母菌在发酵过 程中的作用。
了解酵母菌在不同环 境下的生长情况。
实验原理
酵母菌是一种单细胞真菌，具 有细胞壁、细胞膜、细胞质和 细胞核等结构。
未来改进方向
优化实验操作
为了提高计数的准确性和可靠性，我们可以在实验过程中采用更加先进的显微技 术和设备，如自动计数仪等。
扩大样本量
为了使实验结果更具有代表性，我们可以增加样本数量和实验重复次数，以提高 数据的稳定性和可靠性。
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感谢您的观看
结果讨论
根据实验结果，我们可以讨论酵母菌在不同环境中的生长特点、影响因
素以及在实际应用中的意义。同时，我们还可以提出改进实验的方法和
措施，以提高实验的准确性和可靠性。
05 结论与总结
实验结论
酵母菌数量计算
通过实验，我们成功地计算出了样品 中酵母菌的数量。通过对比标准曲线 ，我们得出了较为准确的计数结果。
数据记录与处理
数据记录
详细记录每个视野或平板上的酵母菌数量，确保数据准确无 误。
数据处理
根据实验要求，对数据进行统计、分析和图表绘制，得出结 论。
04 结果分析
数据解读
酵母菌数量
通过实验计数，我们得到了不同样品中酵母菌的数量。这些数据可以帮助我们了解酵母 菌在样品中的分布和密度。
误差分析
在实验过程中，由于操作、仪器误差等因素，可能会导致计数结果存在一定的误差。Байду номын сангаас 们需要对误差进行分析，以评估实验的准确性和可靠性。
酵母菌细胞的显微镜计数
6．排除异常标本的干扰
2.血球计数板的使用原理
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数
2．25×16型的计数板 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：
5.6清洗
计数板用毕后先用95%的酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。若计数的样品是病原微生物，则必须先浸泡在5%石炭酸溶液中进行消毒后再进行清洗。然后放回原位，切勿用硬物洗刷。
6.实验结果及结论
霉菌酵母菌计数实训报告
一、实训目的1. 掌握观察酵母菌和霉菌形态的基本方法；2. 观察酵母菌和霉菌的形态特征；3. 学习使用显微测微尺测量微生物大小；4. 熟悉霉菌酵母菌计数的实验流程和操作方法；5. 提高食品微生物学检验技能。
二、实训原理霉菌和酵母菌是广泛存在于自然界和食品中的微生物，它们对食品品质和人体健康具有重要影响。
霉菌和酵母菌计数是食品微生物学检验的重要指标之一，通过计数可以了解食品中霉菌和酵母菌的数量，为食品卫生质量控制提供依据。
本实训采用直接镜检计数法，利用显微镜观察霉菌和酵母菌的形态特征，并通过显微测微尺测量其大小，从而进行计数。
三、实训材料与仪器1. 实验材料：酵母菌、霉菌纯培养物，食品样品；2. 仪器设备：显微镜、显微测微尺、血球计数板、酒精灯、接种环、无菌培养皿等。
四、实训步骤1. 预备工作：a. 准备好实验所需的材料与仪器；b. 检查显微镜、显微测微尺等仪器的性能；c. 熟悉实验操作流程。
2. 观察酵母菌和霉菌形态：a. 将纯培养物接种于无菌培养皿中，培养至适宜生长状态；b. 取少量培养物，涂布于载玻片上；c. 将载玻片置于显微镜下，观察酵母菌和霉菌的形态特征，如菌丝、分生孢子、菌落等。
3. 使用显微测微尺测量微生物大小：a. 将显微测微尺放置于显微镜载物台上；b. 对准显微镜视野中的微生物，调整测微尺的刻度；c. 记录微生物的长度。
4. 霉菌酵母菌计数：a. 将纯培养物接种于血球计数板中，培养至适宜生长状态；b. 将血球计数板放置于显微镜下，观察菌落；c. 记录每个视野中菌落数量；d. 计算霉菌酵母菌总数。
5. 结果分析：a. 分析实验数据，得出霉菌酵母菌计数结果；b. 对比实验结果与理论值，分析误差原因。
五、实训结果与分析1. 观察酵母菌和霉菌形态：实验中观察到酵母菌为单细胞，呈圆形或椭圆形，细胞壁厚，具有芽生繁殖方式；霉菌为多细胞真菌，菌丝体发达，无较大的子实体，具有分枝、分生孢子等特征。
实验九 微生物的大小及数量测定
摘要
通过显微测微尺测量酿酒酵母的长和宽， 对其细胞体的大小有一个具体的了 解； 使用血球计数板对稀释 n 倍的酵母菌悬液进行细胞数量的测定，从而达到定 量了解微生物的生长繁殖情况。
关键词
目镜测微尺 物镜测微尺 血球计数板
前言
微生物细胞的大小， 是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之 一， 也让我们对微生物的实际大小有了一个感性的认识。微生物数量的测定在微 生物生长曲线中运用非常重要， 我们从微生物的数量上了解其生长状况，这也能 指导我们的工业生产。
用此法分别校正在物镜倍数为 10×，40×，100×下目镜测微尺每小格所代 表的长度。 注意事项 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同， 因此校正目镜测微尺必须针对特定 的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况 下重复使用， 当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每 一格所代表的长度。 B 酵母大小的测定 1) 制片：在载玻片中央滴一滴蒸馏水，用接种针在酵母菌悬液中蘸一下，涂 到蒸馏水中，干燥固定（自然干燥或在酒精灯上方来回移动载玻片），用孔 雀绿染液覆盖涂菌部位 1.5min—2min，自来水冲洗掉孔雀绿染液，对载玻片 进行干燥。 2）酵母大小测定：移去镜台测微尺，换上酵母菌装片，先在低倍镜下找到目的 物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长，宽各占几格（不 足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的 校正值，即等于该菌的长和宽。 3)由于不同细胞之间存在个体差异， 在测定菌体细胞大小时随机选取三个细胞进 行测量，然后计算平均值。 4)同样的方法，分别在 40 倍物镜和油镜下测定酵母菌的大小。 注意事项 测量菌体大小时要在同一个标本片上测定 3 个大小相近的菌体， 求出平均值， 才能代表该菌的大小。而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。 测量完毕后取出目镜测微尺，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测 微尺分别用擦镜纸擦拭干净，放回盒内保存。 2、酵母菌数量测定 (1)取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。 (2)将酵母菌菌悬液充分摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽 内沿盖玻片的右上角滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片之间自行渗入 计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。 (3)先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。 (4)计数时用 25 中格的计数板，要取上、下、左、右、中的 5 个中格(即 80 小格) 的酵母菌数。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下 才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗 漏。 如菌体位于中格的双线上， 计数时则数上线不数下线， 数左线不数右线， 以减少误差。 (5)样品最好重复计数 2-3 次(每次数值不应差过大，否则应重新操作)，取其平 均 值 ， 按 下述 公 式 计算 出 每 毫 升菌 液 所 含酵 母 菌 细 胞数 （ 25 中 格 ） 。
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二 基本原理
二 基本原理
1.规格一：大方格内分为16中格，每一中格 又分为25小格；
2.规格二：大方格内分为25中格，每一中格 又分为16小格。
特点：每一大方格都是16×25=25×16=400个 小方格组分。
二 基本原理
二 基本原理
血球计数板的构造
三 操作步骤
1. 对酵母菌悬液进行稀释，一般稀释10倍使 每小方格内含有4-5个酵母细胞。
三 操作步骤
三 操作步骤
三 操作步骤
5.当遇到位于大格线上的酵母菌，一般计 数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或 只计数下方和左方线上的酵母细胞)。
6.每个样品计数三次,取其平均值，按公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
2. 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央计数 室上加盖专用的厚玻片。
3. 将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴 置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多 余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵 母菌全部沉降到血球计数室内。
三 操作步骤
4. 计数时，如果使用16格×25格规格的计数 室，要按对角线位，取左上，右上，左下， 右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。 如果规格为25格×16格的计数板，除了取 其4个对角方位外，还需再数一个中格(即 80个小方格)的酵母菌数。
实验九 酵母菌的计数
一 目的要求
1. 了解血球计数板的构造和使用方法 2. 学会酵母菌的计数方法
二 基本原理
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的 特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽， 构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又 被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一 个方格网。方格网上刻有9个大方格,其中 只有中间的一个大方格为计数室，供微生 物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm， 深度为0.1mm，其体积为0.1mm。