恒河猴CD1d基因的克隆及其组织表达差异性分析
我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析
Ｓ ｑｕ ｎ ｉ ｎｄ ａ ｌ ｓ ｓ ｏ ｈｅ ａ ｅ ｏ ｉ ｕ ｏ ｙ ｅ ａ ｅ ｇ ｎ ｅ ｅ ｃ ｎｇ ａ ｎａ ｙ ｅ ｆｔ ｄ ｎ ｖ ｒ ｓ ｐ ｌ ｍ ｒ ｓ ｅ ｅ ｉ ｅ ａ ａ ｐｌｓ ｏ ａ ｉ ｅ ｙ ｂｒ ｄ ｒ ｅ ｕ ａ ａ ｅ ｎ Ｃｈ ｎａ ｎ ｆ ｃ ｌｓ ｍ ｅ ｆ ｃ ｐｔｖ ｌ ｅ ｈ ｓ ｓ ｍ ｃ ｑｕ ｓｉ ｉ
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恒河猴糖尿病动物模型血清及组织中细胞因子的变化
恒河猴糖尿病动物模型血清及组织中细胞因子的变化朱华;徐艳峰;刘颖;黄澜;秦川【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2013(021)003【摘要】Objective To investigate the changes of cytokines (IL-6,IL-10,TNF-α) in rhesus monkey models of diabetes mellitus.Methods Ten adult rhesus monkeys were divided into experimental and control groups,5 in each group.The experimental monkeys were intravenously injected with streptozotocin (STZ) (30 mg/kg body weight,three times).The dynamic changes of IL-6,IL-10 and TNF-α serum levels were measured for 19 months.The animals were sacrificed when impending death.The expressions of IL-6,IL-10 and TNF-α in the pancreatic islets,liver and kidney were examined by immunohistochemical staining.Image analysis and statistical analysis were carried out of all the data obtained above.Results Compared with the serum levels before STZ injection,the level of IL-10 was significantly increased (P ＜0.01),while the levels of IL-6 and TNF-α decreased (P ＜ 0.01).The expressions of IL-6 and TNF-α were significantly decreased in pancreatic islets than those in the control group (P ＜0.05).The IL-10 expression was significantly increased in pancreatic islets than that in the control group (P ＜ 0.01).The number of TNF-α-positive cells in the liver was significantly decreased compared with that of the control group (P ＜ 0.05).Conclusions The levels and changes of cytokinesin the rhesus monkey models of diabetes mellitus generated by multiple injection of low-dose streptozotocin are similar to those in human diabetes,and this animal model may be used as a useful tool in researches assessing safety and efficacy of protective agents.%目的探讨恒河猴糖尿模型病细胞因子的水平和变化规律.方法健康恒河猴5只,小剂量(30mg/kg)多次静脉注射链脲佐菌素(STZ),血糖稳定后3、9、12和19个月检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10 (IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.安乐濒死状态的动物,取胰腺、肝脏、肾脏制成石蜡切片,用免疫组化染色法显示组织中IL-6、IL-10、TNF-α的表达,并对结果进行图像分析和统计学处理.结果造模后9个月动物血清中IL-10浓度显著降低(P＜0.01).IL-6、TNF-α水平在采样的各个时间点均显著高于造模前(P＜0.01).胰腺组织中IL-6中等强度着色,对照组弱阳性表达(P＜0.05).对照组IL-10强阳性表达,模型组弱阳性(P＜0.01).模型组TNF-α中等强度表达,对照组弱阳性(P＜0.05).模型组肝脏组织TNF-α中等阳性表达,对照组弱阳性(P＜0.05).结论小剂量多次注射STZ后恒河猴细胞因子的含量及变化与临床类似,可作为相关研究的动物模型.【总页数】5页(P53-56,后插8)【作者】朱华;徐艳峰;刘颖;黄澜;秦川【作者单位】卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.2型糖尿病并发肺结核患者血清中炎症细胞因子水平变化的研究 [J], 李雨泽;刘玉琴;陈向丽;侯绍英;Hayder;姜辉;李殿忠2.SIVmac239感染中国恒河猴动物模型组织病理学变化 [J], 徐文漭;李霞;赵稳兴;李涛;宋蜀伶;杨举伦3.观察糖尿病合并高血压患者血清促炎细胞因子(IL-6、TNF-α)和抗炎细胞因子(IL-10)水平变化 [J], 汪川;赵雯4.恒河猴糖尿病动物模型血清超氧化物歧化酶和丙二醛的检测及意义 [J], 朱华;刘颖;秦川5.糖尿病视网膜病变患者血清中细胞因子及视网膜中央动脉血流动力学的变化 [J], 金梅;李晓凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验性糖尿病恒河猴的组织病理学观察
感谢实验室人员的辛勤付出和协助，他们为本实验提供了宝贵的 支持和帮助。
对资助机构的感谢
感谢相关资助机构对本实验的资助和支持，这些机构的支持使得 本实验得以顺利进行。
THANKS
谢谢您的观看
背景
糖尿病是一种常见的慢性疾病，对人 类健康具有严重危害。
恒河猴是一种常用的实验动物，具有与人 类相似的生理特征，可用于研究人类疾病 。
组织病理学观察是研究疾病发生、 发展过程中组织结构与功能变化的 重要手段。
02
实验方法与过程
实验动物与饲养条件
实验动物
健康成年恒河猴，雌雄不限，体重在3-5kg之间。
细胞坏死
实验性糖尿病恒河猴的胰岛细胞坏死数量也明显增加。
免疫细胞浸润与炎症反应
T淋巴细胞浸润
实验性糖尿病恒河猴的胰岛和肾组织中T 淋巴细胞浸润明显，提示免疫调节异常。
VS
单核/巨噬细胞浸润
实验性糖尿病恒河猴的视网膜和肾组织中 单核/巨噬细胞浸润明显，表明炎症反应 强烈。
04
讨论与结论
糖尿病对恒河猴组织的影响
通过对恒河猴组织的病理学观察，可以了解糖尿病对机 体的影响程度，为诊断提供依据。
01
机制研究
通过对恒河猴组织的病理学变化进行 分析，有助于深入探讨糖尿病的发病 机制。
02
03
药物筛选
通过对恒河猴组织的病理学变化进行 观察，可以评估药物对糖尿病的治疗 效果，为新药研发提供参考。
本实验的优缺点与改进方向
取材部位
取胰腺、肾脏、肝脏等组织。
取材时间
在注射后4周进行取材。
组织处理
将取材的组织用10%中性甲醛固定，进行石蜡包 埋、切片等处理。
人CD1d分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备
人CD1d分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备作者：陈章权*, 黄震, 梁晓东, 陆田田, 何天文【摘要】目的: 原核细胞表达人CD1d分子胞外区及制备其多克隆抗体。
方法: 用RT-PCR法扩增人CD1d分子胞外区基因, 将其克隆入原核表达载体pET28中, 转化大肠杆菌BL21（DE3）, 用IPTG 诱导重组蛋白的表达, 用亲和层析法纯化重组蛋白, 以之为免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体, 并以ELISA、 Western blot及免疫组织化学法检测抗体。
结果: 在原核细胞中高效表达和纯化了人CD1d分子胞外区蛋白, 用其免疫小鼠, 获得了效价高、特异性较好的多克隆抗体, 免疫组织化学检测显示该抗体可识别人小肠组织中的天然CD1d分子。
结论: 成功制备了人CD1d分子胞外区重组蛋白及鼠抗人CD1d分子胞外区抗体, 为进一步建立人CD1d分子的免疫学检测方法及其生物学功能的深入研究奠定了基础。
【关键词】 CD1d 基因表达抗体制备CD1分子是独立于MHC分子之外的第三类抗原提呈分子, 分为CD1-I和CD1-II两组, 前者包括CD1a、 CD1b、 CD1c和CD1e等4个分子, 后者只有CD1d分子［1］。
CD1d分子由胞内区、跨膜区和胞外区组成, 胞外区又由α1、α2和α3等3个结构域组成, 它主要提呈糖脂抗原, 在免疫调节及与感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的发生发展过程中起重要作用［1, 2］。
在CD1d基因克隆过程中, 我们发现在某些疾病患者体内存在α3结构域或跨膜区缺失的变异体, 跨膜区缺失的变异体的存在提示患者体内可能存在可溶性CD1d分子。
为此, 我们拟建立双抗体夹心ELISA法进行可溶性CD1d分子的检测, 但目前尚未见有其商品化ELISA检测试剂盒。
特异性抗体的获取是建立ELISA检测方法的关键所在, 在成功制备兔抗人CD1d分子α3结构域抗体［3］的基础上, 我们又对人CD1d分子胞外区编码基因进行了重组表达, 并制备了其鼠源性抗体。
最新北师大版高中数学高中数学选修2-3第三章《统计案例》检测(答案解析)(2)
一、选择题1．为了调查某校高二学生的身高是否与性别有关，随机调查该校64名高二学生，得到2×2列联表如表：附：K 2()()()()2()n ad bc a b c d a c b d -=++++由此得出的正确结论是（ ）A ．在犯错误的概率不超过0.01的前提下，认为“身高与性别无关”B ．在犯错误的概率不超过0.01的前提下，认为“身高与性别有关”C ．有99.9%的把握认为“身高与性别无关”D ．有99.9%的把握认为“身高与性别有关”2．某人研究中学生的性别与成绩、视力、智商、阅读量这4个变量的关系，随机抽查了52名中学生，得到统计数据如表1至表4，则与性别有关联的可能性最大的变量是（ ） 表1表2表3表4 智商 性别 偏高正常总计阅读量 性别丰富不丰富总计男 8 12 20 男 14 6 20 女 8 24 32 女 2 30 32 总计163652总计163652A ．成绩B ．视力C ．智商D ．阅读量3．下列命题是假命题．．．的是（ ） A ．某企业有职工150人，其中高级职称15人，中级职称45人，一般职员90人，若用分层抽样的方法抽出一个容量为30的样本，则一般职员应抽出18人； B ．用独立性检验（列联表法）来考察两个分类变量是否有关系时，算出的随机变量的值越大，说明“与有关系”成立的可能性越大；C ．已知向量，，则是的必要条件； D ．若，则点的轨迹为抛物线.4．通过随机询问100名性别不同的居民是否能做到“光盘”行动，得到如下的列联表：做不到“光盘” 能做到“光盘” 男 45 10 女3015则有（ ）以上的把握认为“该市民能否做到‘光盘’与性别有关”，附表及公式()20P K k ≥0.100 0.050 0.010 0.001 0k 2.7063.8416.63510.828()()()()()22n ad bc K a b c d a c b d -=++++A ．90%B ．95%C ．99%D ．99.9%5．为了检验设备M 与设备N 的生产效率，研究人员作出统计，得到如下表所示的结果，则（ ）设备M 设备N生产出的合格产品4843生产出的不合格产品27附：()2P K k>0.150.100.050.0250.0100.0050.001 k 2.072 2.706 3.841 5.024 6.6357.87910.828参考公式：22()()()()()n ad bcKa b c d a c b d-=++++，其中n a b c d=+++.A．有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性B．没有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性C．可以在犯错误的概率不超过0.01的前提下认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性D．不能在犯错误的概率不超过0.1的前提下认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性6．为了普及环保知识，增强环保意识，随机抽取某大学30名学生参加环保知识测试，得分如图所示，若得分的中位数为m e，众数为m0，平均数为x-，则()A．m e＝m0＝x-B．m0＜x-＜m eC．m e＜m0＜x-D．m0＜m e＜x-7．如图所示，茎叶图记录了甲、乙两组各4名学生完成某道数学题的得分情况，该题满分为12分．已知甲、乙两组学生的平均成绩相同，乙组某个数据的个位数字模糊，记为x．则下列命题正确的是( )A．甲组学生的成绩比乙组稳定B．乙组学生的成绩比甲组稳定C．两组学生的成绩有相同的稳定性D．无法判断甲、乙两组学生的成绩的稳定性8．为考察数学成绩与物理成绩的关系,在高二随机抽取了300名学生,得到下面的列联表:现判断数学成绩与物理成绩有关系,则犯错误的概率不超过 ( ) A ．0.005B ．0.01C ．0.02D ．0.059．春节期间，“厉行节约，反对浪费”之风悄然吹开，某市通过随机询问100名性别不同的居民是否能做到“光盘”，得到如下的列联表：由此表得到的正确结论是( )A ．在犯错误的概率不超过0．01的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别有关”B ．在犯错误的概率不超过0．01的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别无关”C ．在犯错误的概率不超过0．1的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别有关”D ．在犯错误的概率不超过0．1的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别无关” 10．在一项中学生近视情况的调查中，某校男生150名中有80名近视，女生140名中有70名近视，在检验这些中学生眼睛近视是否与性别有关时用什么方法最有说服力（ ） A ．平均数与方差 B ．回归分析 C ．独立性检验 D ．概率11．若在区间[－5,5]内任取一个实数a ，则使直线x ＋y ＋a ＝0与圆(x －1)2＋(y ＋2)2＝2有公共点的概率为( )A ．5B ．25C ．35D ．1012．对两个变量x 和y 进行回归分析,得到一组样本数据: ()()1122,,,x y x y ,…(),n n x y ,则下列说法中不正确的是( )A ．由样本数据得到的回归方程ˆˆˆy bx a =+必过样本中心(),x yB ．残差平方和越小的模型,拟合的效果越好C ．若变量y 和x 之间的相关系数为0.9362r =-,则变量y 和x 之间具有线性相关关系D ．用相关指数2R 来刻画回归效果, 2R 越小,说明模型的拟合效果越好二、填空题13．如图所示是世界20个地区受教育程度的人口百分比与人均收入的散点图，样本点基本集中在一个条型区域，因此两个变量呈线性相关关系．利用散点图中的数据建立的回归方程为ˆ 3.19388.193yx =+，若受教育的人口百分比相差10%，则其人均收入相差_________．14．下列说法：①将一组数据中的每个数据都加上或减去同一个常数后，方差恒不变；②设有一个回归方程＝3－5x ，变量x 增加一个单位时，y 平均增加5个单位；③线性回归方程＝x ＋必过(，)；④曲线上的点与该点的坐标之间具有相关关系；⑤在一个2×2列联表中，由计算得K 2＝13.079，则其两个变量之间有关系的可能性是90%.其中错误的个数是________．15．以下结论正确．．的序号有_________ （1）根据22⨯列联表中的数据计算得出2K ≥6.635, 而P （2K ≥6.635）≈0.01，则有99% 的把握认为两个分类变量有关系.（2）在残差图中，残差点比较均匀落在水平的带状区域中即可说明选用的模型比较合适，与带状区域的宽度无关.（3）在线性回归分析中，相关系数为r ，r 越接近于1，相关程度越大；r 越小，相关程度越小.（4）在回归直线0.585y x =-中，变量200x =时，变量y 的值一定是15.16．如果根据性别与是否爱好运动的列联表得到K 2≈3．852＞3．841，则判断性别与是否爱好运动有关，那么这种判断犯错的可能性不超过________．17．为了解某班学生喜爱打篮球是否与性别有关,对该班50名 学生进行了问卷调查, 得到了如下22⨯ 列联表喜爱打篮球 不喜爱打篮球 合计男生20 525 女生 10 1525合计30 2050则至少有_____的把握认为喜爱打篮球与性别有关(请用百分数表示). 18．已知方程是根据女大学生的身高预报她的体重的回归方程，其中的单位是，的单位是，那么针对某个体的残差是______.19．已知的取值如表所示：若与呈线性相关，且回归方程为，则等于 ．23454620．已知下列命题：①从匀速传递的产品生产流水线上，质检员每30分钟从生产流水线中抽取一件产品进行某项指标检测，这样的抽样方法是系统抽样；②两个变量的线性相关程度越强，则相关系数的值越接近于1；③两个分类变量X 与Y 的观测值2k ，若2k 越小，则说明“X 与Y 有关系”的把握程度越大；④随机变量X ～(0,1)N ，则(1)2(1)1P X P X <=<-. 其中为真命题的是__________．三、解答题21．我国新型冠状病毒肺炎疫情期间，以网络购物和网上服务所代表的新兴消费展现出了强大的生命力，新兴消费将成为我国消费增长的新动能.某市为了了解本地居民在2020年2月至3月两个月网络购物消费情况，在网上随机对1000人做了问卷调查，得如表频数分布表：（1）作出这些数据的频率分布直方图，并估计本市居民此期间网络购物的消费平均值； （2）在调查问卷中有一项是填写本人年龄，为研究网购金额和网购人年龄的关系，以网购金额是否超过4000元为标准进行分层抽样，从上述1000人中抽取200人，得到如表列联表，请将表补充完整并根据列联表判断，在此期间是否有95%的把握认为网购金额与网购人年龄有关.参考公式和数据：()()()()()22n ad bc K a b c d a c b d -=++++.（其中n a b c d =+++为样本容量）22．某私营业主为确定下一年度投入某种产品的宣传费，需了解月宣传费x （单位：百元）对月销售量y （单位：t ）和月利润z （单位：百元）的影响，对8个月的宣传费i x 和销售量i y （i ＝1，2，...，8）数据作了初步处理，得到如图的散点图及一些统计量的值.x y w()821i i x x =-∑()821ii w w =-∑()()81iii x x y y =--∑ ()()81iii w w yy =--∑（1）根据散点图判断出y ＝c +y 关于月宣传费x 的回归方程类型，求y 关于x 的回归方程；（表中i w =（2）已知这种产品的每月利润z 与x 、y 的关系为2z y x =-，根据（1）的结果，当月宣传费用x ＝16时，求月利润的预报值.参考公式：1122211()()()()n ni iiii i nni i i i x y nx y x x y y b x n x x x ====-⋅--==--∑∑∑∑, ˆˆa y bx=- 23．为了了解某校高中生的身体质量情况，某调查机构进行了一次高一学生体重和身高的抽样调查，从中抽取了8名学生（编号为18）的身高(cm)x 和体重(kg)y 数据.如下表，某调查机构分析发现学生的身高和体重之间有较强的线性相关关系，在编号为6的体检数据丢失之前，调查员甲已进行相关的数据分析并计算出该组数据的线性回归方程为ˆˆ0.5ya x =+，且根据回归方程预估一名身高为180cm 的学生体重为71kg ，计算得到的其他数据如下：81170,89920i ii x x y===∑.（1）求a 的值及表格中8名学生体重的平均值y ；（2）在数据处理时，调查员乙发现编号为8的学生体重数据有误，应为63kg ，身高数据无误.请你根据调查员乙更正的数据重新计算线性回归方程，并据此预估一名身高为180cm 的学生的体重.附：回归直线方程ˆˆˆy a bx=+的斜率和截距的最小二乘法估计分别为：1221ˆni ii nii x ynx y bxnx==-=-∑∑，ˆˆay bx =-. 24．“海水稻”就是耐盐碱水稻，是一种介于野生稻和栽培稻之间的普遍生长在海边滩涂地区，具有耐盐碱的水稻，它比其它普通的水稻均有更强的生存竞争能力，具有抗涝，抗病虫害，抗倒伏等特点，还具有预防和治疗多种疾病的功效，防癌效果尤为显著.海水稻的灌溉是将海水稀释后进行灌溉.某试验基地为了研究海水浓度x (‰)对亩产量y (吨)的影响，通过在试验田的种植实验，测得了某种海水稻的亩产量与海水浓度的数据如表.绘制散点图发现，可用线性回归模型拟合亩产量y 与海水浓度x 之间的相关关系，用最小二乘法计算得y 与x 之间的线性回归方程为.88ˆ0ˆy bx=+.（2）①完成上述残差表：②统计学中，常用相关指数2R 来刻画回归效果，2R 越大，模型拟合效果越好，并用它来说明预报变量与解释变量的相关性.你能否利用以上表格中的数据，利用统计学的相关知识，说明浇灌海水浓度对亩产量的贡献率？（计算中数据精确到0.01）(附：残差公式ˆˆi i i ey y =-，相关指数()()22121ˆ1ni i i nii y yR y y ==-=--∑∑)25．在传染病学中，通常把从致病刺激物侵入机体或者对机体发生作用起，到机体出现反应或开始现该疾病对应的相关症状时止的这一阶段称为潜伏期.一研究团队统计了某地区1000名患有某种传染病的患者的相关信息，得到如表：该传染病的潜伏期受诸多因素的影响，为研究潜伏期与患者年龄的关系，以潜伏期是否超过6天为标准进行分层抽样，从上述1000名患者中抽取200人，得到如下列联表.（Ⅰ）请将列联表补充完整；（Ⅱ）根据列联表判断是否有95%的把握认为潜伏期与患者年龄有关？附：()()()()()22n ad bcKa b c d a c b d-=++++，其中n a b c d=+++.26．2020年5月22日晚，国际权威医学杂志《柳叶刀》在线发表了全球首个新冠疫苗临床试验结果，该试验结果来自我国的陈薇院士和朱凤才教授团队､由于非人灵长类动物解剖生理､组织器官功能和免疫应答反应等性状与人类非常接近，所以常选择恒河猴进行科研和临床实验.某生物制品研究所将某一型号疫苗用在恒河猴身上进行科研和临床实验，得到部分数据如下表.现从注射疫苗的恒河猴中任取1只，取到感染病毒的恒河猴的概率为2 5 .95%把握认为注射此种疫苗有效？（2）在感染病毒的恒河猴中，按未注射疫苗和注射疫苗的比例抽取5只进行病理分析，然后从这5只恒河猴中随机抽取3只对注射疫苗情况进行核实，求恰好抽到2只未注射疫苗的恒河猴的概率.附：()()()()()22n ad bcKa b c d a c b d-=++++，n a b c d=+++.【参考答案】***试卷处理标记，请不要删除一、选择题 1．D 解析：D 【分析】根据22⨯列联表，计算2k ，与临界值表比较即可得出结论. 【详解】K 的观测值：K 2264(862426)34303232⨯⨯-⨯=≈⨯⨯⨯20.330；由于20.330＞10.828，∴有99.9%的把握认为“身高与性别有关”，即在犯错误的概率不超过0.001的前提下，认为“身高与性别有关” 故选：D ． 【点睛】本题主要考查了独立性检验的应用问题，K 2的计算，22⨯列联表，考查了运算能力，属于中档题．2．D解析：D 【分析】计算得到22322214χχχχ>>>，得到答案. 【详解】计算得到：222152(6221410)5281636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯； 222252(4201612)521121636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯ ； 222352(824128)52961636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯ ； 222452(143062)524081636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯；故22322214χχχχ>>>. 故选：D . 【点睛】本题考查了独立性检验，意在考查学生的计算能力和应用能力.3．D解析：D 【分析】根据分层抽样的概念易得，解出方程即可判断为真；用独立性检验（列联表法）的判定方法即可得出B 为真；根据充分条件和必要条件的定义以及向量的数量积的应用，进行判断即可得到C 为真；可将原式化为，表示动点到定点和到动直线距离相等的点的轨迹，但是定点在定直线上，故可判断D. 【详解】设一般职员应抽出人，根据分层抽样的概念易得，解得，即一般职员应抽出18人，故A 为真； 用独立性检验（列联表法）来考察两个分类变量是否有关系时，算出的随机变量的值越大，说明“与有关系”成立的可能性越大，可知B 为真；若，则，即不成立，若，则，即成立，故是的必要条件，即C 为真；方程即：，化简得，即表示动点到定点的距离和到直线的距离相等的点的集合，且在直线上，故其不满足抛物线的定义，即D 为假，故选D.【点睛】本题主要考查了分层抽样的概念，独立性检验在实际中的应用，充分条件、必要条件的判定，抛物线的定义等，属于中档题.4．A解析：A 【解析】分析：根据列联表中数据代入公式计算k 的值，和临界值表比对后即可得到答案. 详解：将列联表中数据代入公式可得()210045153010 3.030 2.70675255545k ⨯⨯-⨯=≈>⨯⨯⨯，所以有0090的把握认为“该市居民能否做到‘光盘’”与性别有关.点睛：独立性检验的一般步骤：（1）根据样本数据制成22⨯列联表；（2）根据公式()()()()()22n ad bc K a b a d a c b d -=++++计算2K 的值；(3) 查表比较2K 与临界值的大小关系，作统计判断.（注意：在实际问题中，独立性检验的结论也仅仅是一种数学关系，得到的结论也可能犯错误.）5．A解析：A【解析】将表中的数据代入公式，计算得22100(487243) 3.0535050919K ⨯⨯-⨯=≈⨯⨯⨯，∵3.053 2.706>，∴有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性，故选A ．6．D解析：D 【解析】由条形图知，30名学生的得分情况依次为2个人得3分，3个人得4分，10个人得5分，6个人得6分，3个人得7分，2个人得8分，2个人得9分，2个人得10分，中位数为第15,16个数(分别为5,6)的平均数，即m e ＝5.5,5出现的次数最多，故众数为m 0＝5，平均数为x ＝130(2×3＋3×4＋10×5＋6×6＋3×7＋2×8＋2×9＋2×10)≈5.97，故m 0＜m e ＜x . 故答案为D.点睛：这个题目考查的是条型分布直方表的应用，以及基本量：均值，平均数的考查；一般在这类图中平均数就是将数据加到一起除以数据的个数即可，在频率分布直方表中是取每个长方条的中点乘以相应的频率并相加即可.7．A解析：A 【解析】()x 甲＝14×(9＋9＋11＋11)＝10，x 乙＝14×(8＋9＋10＋x ＋12)＝10，解得x ＝1.又2s 甲＝14×[(9－10)2＋(9－10)2＋(11－10)2＋(11－10)2]＝1，2s 乙＝14×[(8－10)2＋(9－10)2＋(11－10)2＋(12－10)2]＝52，∴2s 甲<2s 乙，∴甲组学生的成绩比乙组稳定． 故答案为A.8．D解析：D 【解析】因为K 2的观测值k=2300(371433585)12217872228⨯-⨯⨯⨯⨯≈4.514>3.841, 所以在犯错误的概率不超过0.05的前提下认为数学成绩与物理成绩有关系. 选D.9．C解析：C 【解析】由2×2列联表得到a ＝45，b ＝10，c ＝30，d ＝15．则a ＋b ＝55，c ＋d ＝45，a ＋c ＝75，b ＋d ＝25，ad ＝675，bc ＝300，n ＝100．所以K 2的观测值k ＝2100675-30055457525⨯⨯⨯（）≈3．030．因为2．706<3．030<3．841．选C. 点睛：根据卡方公式求K 2，再与参考数据比较，最后作出判断.10．C解析：C【解析】判断两个分类变量是否有关的最有效方法是进行独立性检验，故选C. 考点：独立性检验的意义.11．B解析：B 【解析】∵直线0x y a ++=与圆()()22122x y -+=+有公共点，∴≤13a -≤≤，∴在区间[55]-，内任取一个实数a ，使直线0x y a ++=与圆()()22122x y -+=+有公共点的概率为312555+=+，故选B. 点睛：本题主要考查了几何概型的概率，以及直线与圆相交的性质，解题的关键弄清概率类型，同时考查了计算能力，属于基础题；利用圆心到直线的距离小于等于半径可得到直线与圆有公共点，可求出满足条件的a ，最后根据几何概型的概率公式可求出所求.12．D解析：D 【解析】逐一分析所给的各个选项：A. 由样本数据得到的回归方程ˆˆˆy bx a =+必过样本中心(),x yB. 残差平方和越小的模型,拟合的效果越好C. 若变量y 和x 之间的相关系数为0.9362r =-,则变量y 和x 之间具有线性相关关系D. 用相关指数2R 来刻画回归效果,2R 越大,说明模型的拟合效果越好，该说法错误. 本题选择D 选项.二、填空题13．93美元【分析】设所受教育百分比分别为且利用回归方程计算即可【详解】设所受教育百分比分别为且根据回归方程为收入相差大约为：即受教育的人口百分比相差则其人均收入相差约美元故答案为：3193美元【点睛】解析：93美元 【分析】设所受教育百分比分别为%,%a b ，且10a b -=，利用回归方程计算即可． 【详解】设所受教育百分比分别为%,%a b ，且10a b -=根据回归方程为 3.19388.193y x ∧=+， 收入相差大约为：()3.19388.193 3.19388.193 3.1931031.93a b ⨯+-⨯+=⨯=，即受教育的人口百分比相差10%，则其人均收入相差约31.93美元． 故答案为：31.93美元． 【点睛】本题考查了线性回归方程的应用问题，属于中档题．14．3【解析】【分析】逐一分析各个说法即可得到结论【详解】由方差的性质知：方差反映一组数据的波动大小将一组数据中的每个数据都加上或者减去同一个常数后方差恒不变①正确；一个回归方程＝3－5x 变量x 增加一个解析：3 【解析】 【分析】逐一分析各个说法即可得到结论 【详解】由方差的性质知：方差反映一组数据的波动大小，将一组数据中的每个数据都加上或者减去同一个常数后，方差恒不变，①正确；一个回归方程ˆy＝3－5x ，变量x 增加一个单位时，y 平均减少5个单位，②错误 线性回归方程必过样本中心点，③正确；曲线上的点与该点的坐标之间具有一一对应关系④错误．在一个2×2列联表中，由计算得K 2＝13.079，则其两个变量之间有关系的可能性是99.90%，故⑤错误综上所述，其中错误的个数是3个 故答案为3 【点睛】本题主要考查了线性回归方程，考查了独立性检验，考查了方差的变化特点，考查了相关关系，是一道考查的知识点比较多的题目，综合性较强，注意分析，本题不需要计算，只要理解概念即可得到结论15．(1)(3)【解析】分析：根据独立性检验残差图相关系数回归分析的定义及性质逐一分析四个答案的真假即可详解：对于（1）根据2×2列联表中的数据计算得出≥6635而P （≥6635）≈001则有99的把握解析：(1)(3). 【解析】分析：根据独立性检验、残差图、相关系数、回归分析的定义及性质，逐一分析四个答案的真假即可．详解：对于（1），根据2×2列联表中的数据计算得出2K ≥6.635, 而P （2K ≥6.635）≈0.01，则有99%的把握认为两个分类变量有关系，故（1）正确．对于（2），根据残差图的意义可得，当带状区域的宽度较小时，说明选用的模型比价合适，而当带状区域的宽度较大时，说明选用的模型不合适，故（2）不正确．对于（3），在线性回归分析中，相关系数为r ，|r |越接近于1，则相关程度越大；|r |越接近于0，则相关程度越小．故（3）正确．对于（4），在回归直线y =0.5x −85中，当x =200时，y =15，但实际观测值可能不是15，故（4）不正确．综上可得（1）（3）正确．点睛：本题考查回归分析和独立性检验的基本知识，属于基础类题目，解题的关键是熟记相关的的概念和性质．16．【解析】∵P(K2≥3841)≈005∴判断性别与是否爱好运动有关出错的可能性不超过5点睛：根据卡方公式计算再与参考数据比较就可确定可能性 解析：5%【解析】∵P (K 2≥3．841)≈0．05．∴判断性别与是否爱好运动有关，出错的可能性不超过5%． 点睛：根据卡方公式计算2K ，再与参考数据比较，就可确定可能性.17．【解析】则至少有的把握认为喜爱打篮球与性别有关 解析：99.5%【解析】2250(30050)8.33325253020k -==⨯⨯⨯()200.0050.001p k k >≥>则至少有99.5%的把握认为喜爱打篮球与性别有关18．【解析】试题分析：由回归直线方程可知当时所以针对个体的残差是考点：线性回归方程 解析：0.29-【解析】试题分析：由回归直线方程可知当160x =时，53.29y =，所以针对个体的残差是5353.290.29-=-.考点：线性回归方程.19．5【解析】试题分析：考点：回归方程【方法点睛】求回归直线中的参数ba 需要先求得b 再求a 因为所以要根据列表中的数据求得公式中相关的量将这些数据代入公式中即可求得参数b 对于参数a 需要将b 代入回归直线求得解析：5【解析】试题分析：3125344646i i i x y ==⨯+⨯+⨯=∑， 32222123429i i x ==++=∑，3x =， 5y =， ∴ 31322130.53ˆi i i i i x y xyb x x==-==-∑∑． 考点：回归方程．【方法点睛】求回归直线中的参数b ，a ，需要先求得b ，再求a ，因为，所以要根据列表中的数据求得公式中相关的量，将这些数据代入公式中，即可求得参数b ．对于参数a ，需要将b ，代入回归直线求得．20．①④【解析】对于①从匀速传递的产品生产流水线上质检员每30分钟从生产流水线中抽取一件产品进行某项指标检测这样的抽样方法是系统抽样故①正确；对于②两个变量的线性相关程度越强则相关系数的绝对值越接近于1解析：①④ 【解析】对于①，从匀速传递的产品生产流水线上，质检员每30分钟从生产流水线中抽取一件产品进行某项指标检测，这样的抽样方法是系统抽样，故①正确；对于②，两个变量的线性相关程度越强，则相关系数的绝对值越接近于1，故②错误； 对于③,两个分类变量X 与Y 的观测值2k ,若2k 越小，则说明“X 与Y 有关系”的把握程度越小，故③错误；对于④,∵随机变量X ∼N (0,1),设P (|X |<1)=p ,则1(1)(1)2pP X P X ->=<-=， ∴11(1)1(1)122p pP X P X -+<=->=-=， ∴2(1)1P X p <-=,即(1)2(1)1P X P X <=<-，故④正确。
恒河猴五种组织染色质化学组分的对比研究
恒河猴五种组织染色质化学组分的对比研究
钟叔平;温博贵
【期刊名称】《动物学研究》
【年(卷),期】1994(000)003
【摘要】恒河猴五种组织染色质化学组分的对比研究钟叔平，温博贵（汕头大学医学院生化教研室汕头５１５０３１）关键词恒河猴，细胞分化，染色质，非组蛋白，基因调控ＣＯＭＰＡＲＡＢＬＥＳＴＵＤＹＯＮＣＨＲＯＭＡＴＩＮＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＯＦＦＩＶＥＴＩＳＳＵＥＳＦＲ...
【总页数】1页(P70)
【作者】钟叔平;温博贵
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.848
【相关文献】
1.低渗肿胀实验、苯胺蓝染色及染色质扩散实验检测精子核蛋白及膜完整性对比研究 [J], 李安娜;张美华;房振亚;邱毅
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3.不同年龄恒河猴消化系统的组织学与组织化学研究比较 [J], 于博;孔小明;程树军;黄韧
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5.八种脱钙液对骨组织制片后HE染色质量影响的实践探究 [J], 方皓;云杰苗;王雄;袁滋铎;林俞辰;陶子春;薛逢贵;胡爱华
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恒河猴骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
恒河猴骨髓间充质干细胞的培养与鉴定董婧婧;胡竹林;李妍;孙晓梅【摘要】背景:关于恒河猴骨髓间充质干细胞的研究结果很有限,来自幼年恒河猴骨髓间充质干细胞的分化潜力仍然未知.目的:探讨体外分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生物学特性,对其生长曲线和表型进行初步鉴定.方法:采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法提取培养幼年恒河猴骨髓间充质干细胞,利用MTS法绘制第2,7代骨髓间充质干细胞生长曲线,利用流式细胞仪分析法检测第3代骨髓间充质干细胞凋亡及第4代骨髓间充质干细胞表面标志物CD29、CD34、CD45、CD90、CD147表达,检测第3代骨髓间充质干细胞的成骨及成脂分化能力.结果与结论:①第2,7代骨髓间充质干细胞在培养第一二天为潜伏期,第3-7天为对数生长期,第8天后细胞增殖逐渐减慢,进入平台期,第7代细胞增殖能力弱于第2代;②骨髓间充质干细胞表面标志物CD90、CD29、CD147呈阳性表达,CD34、CD45呈阴性表达;③流式细胞仪细胞凋亡检测结果显示,73.83％为活细胞,21.76％为死亡细胞,4.27％为凋亡细胞;④骨髓间充质干细胞可诱导分化为成骨细胞与成脂细胞;⑤结果表明,分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生长活跃,有较强的增殖及多向分化能力.%BACKGROUND:Studies on rhesus monkey bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) are limited,and the differentiation potential of juvenile rhesus monkey BMSCs remains unknown.OBJECTIVE:To investigate the biological characteristics of rhesus monkey BMSCs isolated and cultured in vitro,and to identify the growth curve and phenotype ofBMSCs.METHODS:BMSCs from juvenile rhesus monkeys were isolated and cultured by density gradient centrifugation and the whole bone marrow adherence methods.BMSCs at passages 2 and 7 were taken to draw cellgrowth curves by MTS method.Flow cytometry was used to detect apoptosis of passage 3 BMSCs and to detect expression of cell surface markers,CD29,CD34,CD45,CD90,CD147,in passage 4 BMSCs.Osteogenic and adipogenic abilities of passage 3 BMSCs were also detected.RESULTS AND CONCLUSION:The BMSCs at passages 2 and 7 were incubated at first 2 days,logarithmically grew at 3-7 days,and then proliferated slowly at 8 days.The BMSCs at passage 2 showed stronger proliferation than those at passage 7.At passage 3,BMSCs were negative for CD34 and CD45,but positive for CD90,CD29 and CD147.Results from the fiow cytometry showed that there were 73.83％ living cells,21.76％ dead cells,and 4.27％apoptotic cells.BMSCs could differentiate into osteoblasts and adipocytes under osteogenic and adipogenic induction,respectively.Toconclude,BMSCs from the rhesus monkey have strong proliferation and multilineage differentiation abilities in vitro.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)029【总页数】6页(P4623-4628)【关键词】干细胞;间充质干细胞;恒河猴;原代培养;形态学;分化;鉴定【作者】董婧婧;胡竹林;李妍;孙晓梅【作者单位】昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;中国医学科学院昆明医学生物研究所灵长类研究中心,云南省昆明市650018【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言 lntroduction间充质干细胞是分布在间质骨髓的多能祖细胞，在特定培养条件下有极强的增殖分化潜能，并打破了传统的胚层分化限制，可向3个胚层的细胞分化：内胚层的肝细胞，中胚层细胞的成骨细胞、脂肪细胞和肌细胞，外胚层的神经细胞等[1-4]。
用微卫星DNA标记技术建立猕猴遗传检测方法及对群体遗传多样性的分析
用微卫星DNA标记技术建立猕猴遗传检测方法及对群体遗传多样性的分析随着生物学、医学和药学的发展,对标准化实验猕猴的需求量不断增加,建立并提供遗传背景清楚的标准化实验猕猴,将对生命科学研究结果的准确性和可靠性提供有力保障。
实验动物科学是生物医学乃至整个生命科学研究的基础和支撑条件,其发展和应用程度是衡量一个国家或地区科学技术水平高低的一个重要标志。
但是,从整体水平看,我国实验动物工作的发展还不平衡,标准化进程和水平也不一致,尤其是实验猕猴等大型实验动物,不管是资源丰厚程度,还是自身的研究力度都相当薄弱。
实验动物遗传质量监测是评价动物质量好坏的一个重要手段,其目的是为了验证各种动物品系应具有的遗传特性,检查是否存在杂合性、基因突变和遗传污染等,以确定被检对象是否符合该群体的生物学特性。
微卫星DNA标记技术由于其具有高度地灵敏性、特异性和多态性,方法简便、快速和廉价等特性,被广泛地应用到实验动物的遗传质量监测和遗传结构多样性分析中,是目前公认的物种遗传多样性评估的最佳分子遗传标记技术,也是实验动物遗传质量监测的重要手段。
本实验研究通过优化各猕猴微卫星DNA位点的复性温度和Mg2+浓度等PCR扩增反应体系条件,从100个位点中筛选出D1S1594、D1S533、D3S3045、D21S1246、D7S513、D6S493、D6S2419、D4S1645、D5S820、D5S1470、D5S1466、D14S255、D15S644、D10S611、D20S171、D12S372、D2S1333、D12S67、D2S146、D11S2002、D11S1352、D9S934、D17S1290、D17S791、D13S797、D18S536、D18S869、D19S571、D19S559和D16S403等30个具有多态性高、等位基因数多和染色体上分布均匀的微卫星DNA位点。
利用这30个多态性微卫星DNA位点对北京地区恒河猴种群的28只个体的遗传结构进行了监测分析,其等位基因数均在7条以上,最高的达到了11条。
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恒河猴CD1d基因的克隆及其组织表达差异性分析作者：张萍, 周慧芳, 孙正华, 邵晓丽, 张华堂, 徐小宁【摘要】目的: 克隆非人灵长类疾病动物模型恒河猴的CD1d 基因并检测其在不同组织中的表达差异情况。
方法: 提取恒河猴血液及各组织的RNA, 以反转录得到的cDNA为模板, 用特异性引物扩增CD1d; 以管家基因GAPDH为内参, 用半定量RT PCR的方法对CD1d 的组织表达差异性进行分析。
结果: 成功扩增了恒河猴CD1d基因的编码区序列; 首次用半定量RT PCR的方法检测了CD1d mRNA在恒河猴部分组织中的表达情况, 发现其表达水平存在明显的组织差异性, 其中, 在肝脏、脾脏和心脏中的表达水平较高, 在血液、小肠和肺中次之, 在脑中表达最少。
结论: 研究结果为今后表达恒河猴CD1d蛋白并制备其四聚体进而研究恒河猴NKT细胞在众多疾病中的作用奠定了基础; 组织表达差异的研究结果提示其在相关疾病的发生发展过程中可能扮演着重要的角色, 具体作用还有待深入研究。
【关键词】 CD1d; NKT细胞; 恒河猴; 组织分布［Abstract］ AIM: To amplify the CD1d and analyze its tissue distribution in Rhesus macaque. METHODS: Extracting total RNA from different tissues of Rhesus macaque. CD1d amplification wascarried using specific primers and tissue distribution was analyzed by semiquantification RT PCR, using the house keeping gene GAPDH as an internal control. RESULTS: The CD1d coding region was obtained in this experiment and tissue distribution was analyzed: a highest level of CD1d expression was detected in heart, liver and spleen, lower level in blood, lung, small intestine and stomach, and least in brain. CONCLUSION: The successful amplification of CD1d is useful to produce antiCD1d antibody and CD1d tetramer to study NKT cells in Rhesus macaque. The expression profile of CD1d mRNA in Rhesus macaque is in accordance with the tissue distribution and the functions of NKT cells in other species. These results will provide important insights for future research on the relationship of CD1d/NKT cells and their roles in different tissues.［Keywords］CD1d; NKT cells; Rhesus macaque; Tissue distributionCD1家族是一类非经典的抗原递呈分子, 包括CD1a、 b、 c、 d 和e 5个成员, 其中CD1 a、 b、 c和e属于第Ⅰ组, CD1d属于第Ⅱ组。
在灵长类中两类CD1分子均有表达, 但在小鼠等啮齿类动物中仅表达CD1d, 称为CD1d 1［1］。
CD1家族成员在进化中表现的非常保守。
与经典的抗原递呈分子MHCⅠ结构类似, CD1d分子也包括胞膜外区（α 13）、跨膜区和胞质区, 并通过重链α3结构域与β2m非共价结合形成异源二聚体发挥抗原递呈的功能; 与MHCⅠ不同的是, CD1d递呈的是脂类抗原, 而非肽类抗原。
作为抗原递呈分子, CD1d可以将外来或自身的脂类抗原递呈给CD1d限制性的NKT细胞。
NKT细胞是一类数量很少但很重要的免疫细胞, 在细胞免疫和体液免疫中均起重要作用［2］。
鉴于NKT 细胞表现出的CD1d限制性, 承载αGalCer（一种从海绵中提取的鞘糖脂）的CD1d四聚体已经成为检测和认定NKT细胞的关键性标记之一［3］, 因此, 克隆并表达功能性的CD1d已经成为研究NKT细胞的重要环节。
目前, 许多物种的CD1d基因序列已经得到了公布, 其编码区长度在不同物种中稍有差别, 人的CD1d基因编码区全长有1 008 bp, 恒河猴为1 014 bp, 小鼠CD1d 为1 011 bp。
尽管如此, 不同物种间CD1d 的同源性及功能上均表现了高度的保守性。
有研究表明, CD1d分子主要表达在脾细胞、树突状细胞（DC）和胃肠道上皮细胞上。
Canchis 等［4］曾通过免疫组化染色方法检测到人的CD1d在小肠、肝脏、胰脏、肾脏、胃以及皮肤等组织中均有表达。
Kasai等［5］结合原位杂交及免疫组化方法发现在大鼠的脾脏、胸腺、肝脏、肺、心脏、肾脏、小肠等组织中均有CD1d 1的表达。
但尚未见到关于恒河猴的CD1d组织表达差异情况的详细报道。
本试验中, 我们对人类疾病发生和治疗等研究中被广泛应用的非人灵长类动物模型恒河猴的CD1d分子进行了克隆和研究。
成功克隆了恒河猴的CD1d编码区序列, 并首次用半定量RTPCR的方法检测了部分组织中CD1d的表达情况, 为今后研究CD1d/NKT细胞的分布及其在不同组织中的功能特点给出了提示。
1 材料和方法1.1 材料恒河猴各组织总RNA由昆明动物研究所比较基因组学研究组提供; rTaq聚合酶 (DR001A)、 DNA Marker DL 2 000 (D501A)、pMD19T（D102A）载体、及其他生化常用试剂购自TaKaRa公司; 大肠杆菌DH5α为中科院昆明动物研究室免疫生物学实验室制备并保存; RNAprep培养细胞总RNA提取试剂盒（DP430）、琼脂糖凝胶回收试剂盒（DP21402）、 pfu高保真聚合酶（EP10101）、 TIANscript M MLV逆转录酶（ER10404）购自Tiangen公司; iCyclerTM Thermal Cycler PCR仪购自Bio Rad公司; Sal I （ER0641）和BamH I （ER0051）内切酶购自Fermentas公司。
1.2 方法1.2.1 组织cDNA模板的获得取10 μL总RNA(约5 μg), 按TIANscript M MLV逆转录酶的说明书进行反转录: 加入2 μL dNTP (10 mol/L)和2 μL oligo (dT)引物(10 μmol/L), 混匀后70℃反应5 min; 冰上冷却, 加入1μL DTT, 4 μL 5×First Strand Buffer, 混匀, 42℃反应2 min; 加入1 μL反转录酶 M MLV (200 U), 42℃反应50 min; 最后95℃放置5 min终止反应即得到第1链cDNA。
1.2.2 基因的扩增、质粒的构建、提取及鉴定根据GenBank 中恒河猴CD1d序列（NM_001033114）设计引物（表1）, 利用恒河猴血液的cDNA作模板进行扩增; 同时用管家基因GAPDH作为参照进行CD1d基因在各组织中表达差异性的半定量分析。
用pfu高保真酶进行CD1d扩增的条件为: 50 μL反应体系, 96℃预变性4 min, 扩增30个循环（95℃变性30 s, 55℃退火30 s, 72℃延伸2 min）, 最后72℃充分延伸10 min。
扩增完成后将产物进行加A处理: 50 μL产物中加2 μL dNTP和1 μL rTaq, 72℃反应40 min。
扩增产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测, 得到预期长度的片段后割胶回收, 然后连入pMD19T载体, 转化入DH5α感受态, 菌液涂到含Amp的LB平板上, 37℃过夜培养, 随机挑取长出的克隆摇菌, 12 h后提质粒; 提出的质粒用Sal I和BamH I进行双酶切鉴定, 鉴定正确的克隆送去测序, 进一步确认所得到的产物是恒河猴的CD1d基因。
1.2.3 恒河猴CD1d mRNA的组织表达差异性分析以管家基因GAPDH为参照, 用半定量RT PCR的方法检测恒河猴不同组织中CD1d mRNA的表达水平。
表1 扩增人和恒河猴的CD1d全长基因及GAPDH片段的引物 2 结果2.1 恒河猴的CD1d基因的扩增以人和恒河猴的血液cDNA为模板, 用如表1中设计的特异性引物扩增人和恒河猴的CD1d基因编码区, 经10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测发现我们得到的片段长度为1 000 bp 左右, 与预期结果相符（图1）。
2.2 重组质粒的鉴定 PCR产物经割胶回收后连入pMD19T载体, 转化入DH5α感受态, 涂含Amp的LB平板, 挑取长出的克隆摇菌, 12 h后提质粒并用Sal I和BamH I进行双酶切鉴定, 经鉴定发现所提的重组质粒中确实含有1 000 bp左右的插入片段（图2）。
为进一步确认所得到的片段确为恒河猴CD1d基因, 我们将初步鉴定正确的克隆送出测序。
测序结果显示, 我们得到的片段为1 014 bp, 经BLAST序列比对显示该序列与GenBank中恒河猴的CD1d序列一致编码336个氨基酸, 用EditSeq软件预测其蛋白的相对分子质量（Mr）约为37 861, 说明我们成功获得了恒河猴CD1d的编码区序列, 为今后表达该蛋白和研究该分子的功能奠定了基础。
2.3 恒河猴CD1d mRNA的组织表达分布情况的初步分析以恒河猴血液及各组织总RNA反转录得到的cDNA为模板, 用管家基因GAPDH (669 bp)为参照对不同组织中CD1d（1 014 bp）的表达水平进行了检测（图3）, 结果表明, 检测的各组织中均有CD1d mRNA的表达, 但以心脏、肝脏和脾脏中表达最多, 小肠、血液、肺和胃中的表达相对较少, 脑中CD1d的表达水平最低。
3 讨论Canchis等利用免疫组化和原位杂交的方法检测了人和大鼠中的CD1d在各组织中的表达情况［4, 5］, 而恒河猴CD1d的组织表达谱至今还没有研究报道。