酵母菌的分离筛选方法
五株酵母菌的分离鉴定及产丁二酸能力分析
张 霞，雷学俊，杨康卓，罗青春，廖勤俭，刘多涛，乔宗伟，郑 佳·五株酵母菌的分离鉴定及产丁二酸能力分析 41
温、12000 r/min 离心 5 min 获得菌体，用 Ezup 柱式 真菌基因组 DNA 抽提试剂盒提取菌株的基因组 DNA，置于-20 ℃下备用。
PCR 扩 增 ：采 用 酵 母 菌 通 用 引 物 为 NL1（5GCATATCAA TAAGCGGAGGAAAAG- 3'）和 NL4 （5'- GGTCCGTGTTTCAAGACGG- 3'），PCR 反 应 体系包括 0.5 μL 的基因组 DNA、2.5 μL 的 10×Buffe（r 含 Mg2+）、1 μL 的 dNTP、0.2 μL 的聚合酶、0.5 μL 的引物、0.5 μL 模板，加双蒸水至 25 mL；PCR 循环 条件为 94 ℃ 4 min 预变性、94 ℃45 s 变性、55 ℃ 45 s 退火、72 ℃ 1 min 延伸、循环 30 次，72 ℃ 10 min 修复延伸，4 ℃终止反应。经 PCR 反应扩增出 26S rDNA 产 物 ，用 PCR 及 酶 反 应 产 物 纯 化 试 剂 盒 将 PCR 产物进行纯化，将纯化产物交由上海生工生物 工程股份有限公司完成测序工作。 1.3.3 酵母菌的系统发育分析
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程引言酵母菌是一类单细胞真核微生物，被广泛应用于食品工业、酿酒工业、生物工程等领域。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
本文将介绍酵母菌的筛选思路和分离筛选流程，并以Markdown文本格式输出。
酵母菌的筛选思路1. 依据目标功能进行筛选首先，根据酵母菌在应用领域中的具体功能要求，确定筛选目标。
常见的筛选目标包括产酶能力、抗逆性、代谢产物产量等。
2. 筛选条件的优化确定筛选目标后，需要对筛选条件进行优化，以提高筛选效率和准确性。
优化筛选条件的方法包括：•pH值的调节•温度的调节•增加对抗生素的抗性3. 基于遗传工程的筛选方法如果目标无法通过传统筛选方法获得，可以借助遗传工程的方法进行筛选。
这包括基因操作、基因组重组、基因表达等。
酵母菌的分离筛选流程1. 样品的采集和处理首先，需要根据筛选目标的要求，采集合适的样品。
样品的处理包括：•去除杂质和污染物•对样品进行稀释2. 培养基的选择和制备根据筛选目标的要求，选择合适的培养基。
培养基的制备包括：•加入适当的营养成分•调节pH值和温度•预防细菌污染3. 分离和筛选将处理好的样品接种到培养基上，进行分离和筛选。
分离和筛选的方法包括：•简单扩增法：通过胶体扩散、直接接种等方法进行菌落的扩增，然后通过各种筛选方法进行检测和选择。
•高通量筛选法：利用自动化设备进行酵母菌的扩增和筛选，大大提高了筛选效率。
4. 筛选结果的评估与分析获得候选酵母菌后，需要对其进行评估和分析，判断是否满足筛选目标。
评估和分析方法包括：•酶活力测定•代谢产物测量•生长速率测定•遗传稳定性检测等。
结论酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
在筛选时，根据筛选目标优化筛选条件，利用遗传工程方法进行筛选。
分离筛选流程包括样品的采集和处理、培养基的选择和制备、分离和筛选以及筛选结果的评估与分析。
通过合理的筛选思路和分离筛选流程，可以获得具有优良特性的酵母菌，满足不同应用领域的需求。
饲用酵母菌的筛选鉴定及抗逆性分析
饲用酵母菌的筛选鉴定及抗逆性分析陈秀秀，孙洪浩，孙小涵，吕福军*（辽宁波尔莱特农牧实业有限公司，沈阳110000）摘要：为了筛选出可作为微生态制剂及用于发酵饲料的优良菌株，试验以蜂蜜及水果酵素为原料，进行菌株的分离鉴定，并对分离出的酵母菌进行抗逆性研究。
结果显示：从蜂蜜中分离出7株菌（A、H、I、J、K、L、M），从苹果酵素中分离出2株菌（DM和DS），从葡萄酵素中分离出2株菌（E1和E3），通过细菌形态学及26S rDNA 序列鉴定，确定A是假丝酵母，DM、DS是毕赤酵母，E1是假鲁氏接合酵母，E3是鲁氏接合酵母，H、I、J、K、L和M是酿酒酵母。
6株酿酒酵母菌中K的产气能力最强，发酵15h后产气达到满管，其次是I、J和L；在葡萄糖含量为100~500g·L-1条件下，6株菌均可以生长，其中J的耐糖性最好；当pH值为1~5时，6株菌均可生长，耐低pH性由高到低为J>L>I>H>M>K；H的高温耐受性最好，I、J和L较好，K和M略差；胆盐浓度为0.03%~0.3%时，I、J和M完全耐受且存活率可达100%。
本研究为发酵饲料生产提供具备耐高糖、耐低pH、耐高温、耐胆盐等应用潜力的菌株。
关键词：酿酒酵母；筛选鉴定；抗逆性研究中图分类号：S816.6文献标志码：A文章编号：1001-0084（2022）01-0001-06Screening,Identification and StressResistance of Feed YeastCHEN Xiuxiu,SUN Honghao,SUN Xiaohan,LYU Fujun*（Liaoning Powerlight Agricultural and Animal Husbandry Enterprise Co.,Ltd.,Shenyang110000,China) Abstract:In order to screen superior strains as microecologics,and aimed to use for fermented feed.Natural honey and friut were taken as the materials,isolation and identification were carried on.Meantime,the isolated forage yeasts were carried on the stress resistance.The result showed that seven strains were isolated from natural honey(A,H,I,J,K,L and M),and two strains(DM and DS)were isolated from appleenzyme,two strains(E1and E3) were isolated from grape enzyme.A was Starmerella sorbosivorans,DM and DS were Pichia deserticola,E1was Zygosaccharomyces pseudorouxii,E3was Zygosaccharomyces rouxii,H,I,J,K,L and M were Saccharomyces cerevisiae through the analysis of morphological and26S rDNA gene sequences identified.Among the six strains of Saccharomyces cerevisiae,K had the strongest gas production and reached full gas production after15h of fermentation,followed by I,J and L;under the condition of glucose content of100-500g·L-1,all the six strains could grow,among which J had the best sugar tolerance.When the pH value was1-5,all the six strains could grow, and the high temperature tolerance from high to low,pH was J>L>I>H>M>K;H,I,J and L were better,K and M were slightly worse.When the concentration of bile salt was0.03%-0.3%,I,J and M were completely tolerated and the survival rate could reach100%.The study provided potential strains,which had glucose tolerance,level 收稿日期：2021-12-13作者简介：陈秀秀（1988—），女，黑龙江哈尔滨人，硕士，研究方向为饲用益生菌。
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌的分离方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：使用含有适当营养物质和抑制其他微生物生长的培养基。
常用的选择包括酵母营养琼脂糖培养基和酵母抑制琼脂糖培养基。
2. 样品处理：将酵母菌样品（例如酵母悬液或含有酵母菌的混合物）以适当稀释倍数取出，避免过度稀释或稀释不够。
3. 观察与筛选：将适量的稀释液均匀平铺于琼脂糖培养基上，培养一段时间后观察培养基上的菌落。
通过观察菌落形态、颜色和其他特征，选择单独的菌落。
4. 分离纯化：将所选的菌落用无菌的酵母菌营养琼脂糖培养基进行分割传代，最终得到纯化的酵母菌培养基。
5. 培养与保存：将纯化的酵母菌培养液进行扩大培养，得到足够数量的酵母菌。
然后，可以将其中一部分保存在液氮中，以备日后使用。
需要注意的是，以上方法只能分离到可培养的酵母菌，对于某些酵母菌可能不适用。
另外，为了避免污染，所有实验操作都应在无菌条件下进行。
酵母菌、乳酸杆菌的分离筛选
姓名:温迪雅学号：10991367 专业：环境科学乳酸杆菌的分离筛选及鉴定一、材料与方法：1、菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2、试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml 浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g、香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；3、仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸4、方法：（1）无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养（2）菌落观察与镜检（3）筛选生产用菌株二、实验步骤1、分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
BCG牛乳培养基配制：A溶液：脱脂乳粉100g,水500ml，加入1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。
（1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）B溶液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g，PH6.8，121℃湿热灭菌20min。
以灭菌操作趁热将A溶液和B溶液混合均匀后倒平板。
（2）样品的处理按照无菌操作要求，从市售新鲜酸乳中吸取10ml检样，放入装有90ml无菌水的三角瓶内，振摇混匀。
（3）分离方法①倒培养基在无菌室，先用紫外线照射半小时把表面菌灭了，在通风10min后，每培养皿倾注约15ml左右已溶化的BCG牛乳培养基，立即放在桌上摇匀，冷却凝固后即成平板。
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程通常包括以下几个步骤：
1. 采集样品：从自然环境中或已知的发酵样品中采集可能含有酵母
菌的样品，如水、土壤、植物材料、发酵食品等。
2. 预处理样品：对样品进行预处理，如去除杂质、抑制细菌生长等。
这可以通过过滤、离心、稀释等方法实现。
3. 分离酵母：将预处理后的样品通过不同的分离方法（如稀释涂布法、滴管稀释法、涂布法等）分离到培养基上，使单个酵母菌落生长。
4. 筛选途径：根据所需目标酵母菌的特征，选择特定的筛选途径加
以筛选。
- 抗性筛选：在培养基中添加特定的抗生素或抗菌药物，可以筛选出对此类物质具有抗性或耐受能力的酵母菌。
- 产物筛选：培养基中添加特定的检测试剂或基质，通过对应的反应或变色现象，筛选出产生特定产物的酵母菌。
- 形态特征筛选：通过观察酵母菌的形态特征，如菌落形状、颜色、纹理等，筛选出符合要求的酵母菌。
- 发酵能力筛选：通过检测酵母菌的发酵能力，如对糖类底物的发酵能力，选择具有高发酵活性的酵母菌。
5. 分离纯培养：将筛选出来的单个酵母菌菌落分离到新的培养基上
进行纯培养，以获得纯种的酵母菌。
6. 鉴定酵母菌：通过形态学观察、生理生化特征、分子生物学方法
等对所分离出的酵母菌进行鉴定，确定其菌种。
值得注意的是，以上步骤仅为一般的酵母菌筛选思路，具体的筛选
方法和流程可能会因实验目的和需要而有所差异。
酵母菌的分离
酵母菌的分离酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、果实等环境中。
酵母菌以其独特的代谢特性被广泛应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。
为了深入了解酵母菌的特性和应用潜力，科学家们对酵母菌进行了大量的分离研究。
酵母菌的分离是指从样本中筛选出纯种的酵母菌，并将其进行培养和研究。
在分离酵母菌的过程中，科学家们需要采集样本，如土壤、果实等，将样本经过一系列处理后进行培养。
首先，样本会经过物理处理，如振荡、搅拌等，以分散其中的酵母菌。
然后，样本会被培养在富含营养物的培养基中，提供适宜的环境条件，使酵母菌能够生长繁殖。
接下来，科学家们会进行菌落计数，通过观察和统计菌落的数量和形态，筛选出单一的酵母菌菌种。
最后，分离得到的酵母菌菌种会被进行进一步的鉴定和培养，以确保其纯度和活力。
酵母菌的分离研究对于酵母菌的应用具有重要意义。
首先，分离得到的酵母菌菌种可以用于酿酒和发酵产业。
不同的酵母菌菌种具有不同的发酵特性和产物特性，通过分离和筛选，可以获得更适合特定产品的酵母菌菌种，从而提高产品的质量和产量。
其次，分离得到的酵母菌菌种可以用于制药工业。
酵母菌可以被用于生产多种药物，如抗生素、维生素等，分离研究可以为制药工业提供更多的菌种资源和新的应用途径。
此外，分离酵母菌还可以用于食品工业。
酵母菌可以被用于发酵食品的制作，如面包、啤酒等，通过分离和培养研究，可以获得更适合特定食品的酵母菌菌种，提高食品的品质和口感。
当前，酵母菌的分离研究正处于不断深入的阶段。
科学家们通过采集不同样本，如极端环境、农产品等，寻找更多的酵母菌菌种。
同时，利用现代生物技术手段，如基因工程、高通量筛选等，加速酵母菌的分离和鉴定过程。
这些研究不仅有助于发现新的酵母菌菌种，还可以为酵母菌的应用提供更多的可能性。
酵母菌的分离是一项重要的研究工作，对于酵母菌的应用具有重要意义。
通过分离研究，科学家们可以获得纯种的酵母菌菌种，并将其应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。
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酵母菌的分离筛选方法
酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条
件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，
菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，
圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：
葡萄糖 50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L L L MgSO41g/L
FeSO4 L 酵母膏 L 孟加拉红 L （富集用）
★乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗
糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布
过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养
用）（富集用）
★麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过
滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，
10-15波林，氯霉素L 121℃ 20min （分离保存
用）
灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）
★虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨L 葡萄糖10g/L
L L 孟加拉红L 氯霉素L 琼脂15g/L PH自然
（分离纯化用）
★豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L
察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用
蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾L 硫酸镁
L 硫酸亚铁L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然
一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。
若从样品中分离特定种类时先集菌。
集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。
实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml 三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。
镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。
3.筛选：
分离：取集菌液适当稀释，吸取梯度菌液（至少两个两个平衡），涂布于马铃薯-葡萄糖麦芽汁或虎红培养基平板，也可采用混菌法或蘸取集菌菌液直接划线，（平放12h后倒置培养），25℃培养48h，低温酵母菌15℃高温酵母菌 35℃ 40℃ 45℃，形成清晰菌落。
在培养皿底划分小方格，待菌落生长良好后，用放大镜或低倍镜，观察每格内每个菌落编号并描述，颜色表面边缘切面等，再制片在高倍镜下观察各菌株的个体形态，做好记录。
选择不同菌落分别接于麦芽汁斜面，25℃培养48小时备用。
纯化：培养基与分离培养基相同，否则，不同培养基菌落会改变形态，决不能认为菌落外观相同菌属于同一种。
菌落外观相近的菌落，只能挑取一至数个菌落为代表进行纯化。
常用方法为平板划线分离法：挑取单菌落于平板划线纯化菌株，25-28℃ 2-3d，选择菌生长快菌落大典型继续纯化，每个分离物至少经两次划线，结合镜检保持菌株的纯度，对于保存菌株也应定期检查纯度。
纯化的菌株转接于麦芽汁斜面25-28℃ 2d 待鉴定或用灭菌液体石蜡封面于4℃冰箱保存。
筛选：性能测定：根据不同需要，选择不同性能测定方法。
产气性能比较：采用杜氏管发酵法，将斜面菌种两环接种于麦芽汁或豆芽汁液体培养基中（可以分两次加培养基），28℃振荡培养48h，产气时间和产气量。
产酒精能力测定：采用蒸馏法测酒精含量。
产香能力测定：通过嗅觉鉴定。
附：不同酵母菌的形态特征：
酿酒酵母：在麦芽汁琼脂培养基上，菌落与细菌相似，比细菌大而厚，不透明，表面光滑，湿润粘稠，乳白色，形成假菌丝。
单细胞，形状有圆形椭圆形等，大小不一。
在麦芽汁中，沉淀表面形成环状膜。
不能利用硝酸盐。
产朊假丝酵母：在麦芽汁琼脂培养基上菌落为乳白色，平滑，有光泽或无光泽，边缘整齐呈菌丝状。
细胞呈圆形椭圆形和圆柱形等。
能利用硝酸盐为氮源。
实例1：大曲中酵母菌的分离及鉴定
1.富集培养：取5g样品，在试管中加入10ml麦芽汁培养基，同时加入一滴乳酸摇匀，25-28℃24h，后取1ml菌液转入另10ml麦芽汁培养基试管中培养25-28℃ 24h，稍长(过长则霉菌长出)。
培养液变浊产膜或沉淀。
观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。
活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。
要求：较高的糖50g/l，抑菌剂孟加拉红 g/L（许多细菌放线菌和快速生长的霉菌），PH 。
或用乳酸（5ml）-马铃薯（200g）-葡萄糖（20g）培养基富集。
2.酵母菌分离：平板划线涂布或混菌均可。
取集菌菌液，梯度稀释，取10-5 10-6 10-7,菌液涂布虎红培养基上，25-28℃ 48h（若
不纯可挑取单菌落连续多次划线）。
3.酵母菌选择：对典型单菌落，经美兰染色，制片镜检，进行描述性记录，然后选择不同菌落转接于麦芽汁斜面，25-28℃ 48h备用。
4.酵母菌纯化：挑取10-7 培养基不同的单菌落，在PDA培养基接种25-28℃ 2-3d后，取形态不同的单菌落传接二次，观察菌落形态确定为单菌落后，分别接种于PDA培养基和MA培养基中，25-28℃ 3d，根据在不同培养基中菌落形态进行初步分类。
将所得菌株于斜面培养保存在4℃冰箱中。
实例2：高温堆积糟醅中酵母菌的选育
1.集菌：同上 45℃ 2-3d，依此法转接2-3次，再行分离。
2.分离：梯度菌液分别涂布于麦芽汁麸皮汁豆芽汁平板于45℃
2-3d，将平皿上生长的菌落划线纯化，菌株移入斜面，备用。
3.有效菌株的确认：分离的数十株酵母经镜检有酵母属的各种酵母，假丝酵母，红酵母，白地霉等。
用高粱粉糖化液，饴糖稀释液，麸皮等进行发酵，测定次生代谢产物，依次判出Y1 Y2 Y3 Y4等与酱香酒产量质量有关。
4.菌种的分类鉴定：
形态特征：（麦芽汁琼脂）
编号形态特征
Y1 菌落由白色到奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。
边缘呈波纹，凸起，色黄，中心凹，奶油色，室温放一月后，培养物由奶油色变浅褐色。
细胞呈圆卵圆椭圆，大小不等。
单个，成双，偶尔成短链，多边芽殖。
（意大利酵母）Y2菌落呈浅奶油色，菌落平滑或部分有皱纹，无光泽，边缘呈黄色，大波纹状。
细胞圆形卵形椭圆形，大小不等，多边芽殖。
(地生酵母) Y3 28℃ 3d后，细胞圆形椭圆形，单个或成双，两端芽殖，培养物奶油状，奶油色到浅褐色，平滑，稍平坦，光亮，边缘偶尔波纹，无真菌丝。
（酿酒酵母）Y4 菌落白色至奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。
培养时间偏长菌落渐硬，并呈菌丝状，不易挑起。
在麦芽汁平皿上，菌落白色，凸起，有皱纹，边缘
波纹状。
细胞较小，卵圆椭圆形，有大量真菌丝。
（间型假丝酵母）生理生化特征
发酵糖类：
酵母菌发酵液成分分析
Y1 Y2 Y3 Y4
香气稍酱香，酯香稍酱香，酯香酯香醇甜香
酒精（%）
代谢产物乙丙丁乳异戊酸同Y1 除硫甲基丙醇乙丙丁乳酸乙醛乙酯乳酯丙醇其他成分均有乙醛丙醇异丁醇
异丁醇异戊醇戊醇异戊醇
硫甲基丙醇
各种酵母发酵糖类结果
Y1 Y2 Y3 Y4
葡萄糖 + + + +
D-半乳糖 + - + -
麦芽糖 + - + +
蔗糖 + - + +
乳糖 - - - +
棉子糖 - - + +
蜜二糖－－－－
纤维二糖－－－－
海藻糖－－＋－
松三糖－－－－
菊糖－＋－＋
可溶性淀粉－＋－＋
ａ-甲基-葡萄糖苷－－－－
同化碳源
葡萄糖 + + + +
D-半乳糖 + - + -
麦芽糖 + - + +
蔗糖 + - + +
乳糖 + - - +
棉子糖 - - + +
蜜二糖－－－－
山梨糖－－－－
纤维二糖－－－－
海藻糖－－＋－
松三糖－－+ －
菊糖－- －-
可溶性淀粉－＋－＋
ａ-甲基-葡萄糖苷－－－+
卫茅醇+ －－－
甘露醇－＋－＋
D-木糖－- －-
琥玻酸＋－－＋
柠檬酸＋＋－＋
各酵母菌其他生化生理特征
Y1 Y2 Y3 Y4
同化氮源（硝酸钾）－－－－
同化乙醇＋＋－＋
液化明胶－－－＋
产酸试验－－＋＋
产醋试验＋＋＋＋
结果：
Y1意大利酵母，Y2地生酵母，Y3酿酒酵母，Y4间型假丝酵母
分离耐酸耐高温酵母菌选择压排底醅或双轮底糟为试样，集菌培养基中加入少量底醅浸出液。