天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)37℃参考测定程序的建立及其临床应用

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酸氨基转移酶(ALT)测定(速率丙氨法)标准化操作程序文件

酸氨基转移酶(ALT)测定(速率丙氨法)标准化操作程序文件

酸氨基转移酶(ALT)测定(速率丙氨法)标准化操作程序文件1概述肝脏内含有丰富的酶系统,以维持机体的正常生理代谢过程。

不少酶是由肝脏合成并由肝胆系统排泄,当肝脏有病时,可由于酶生成亢进或释出异常,引起血清内酶的活性改变。

这些改变在一定程度内反映了肝脏的功能状况。

人体转氨酶的种类甚多,而以血清丙氨酸氨基转移酶,血清天门冬氨酸转换酶活性最强。

此两种酶广泛在于机体组织细胞内,以肝脏,心脏,肾脏及骨骼肌中较多。

在肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量最多,AST以心肌含量最多,此两种转氨酶较多地释放在血液中,使血清中两种酶活性增高。

2 样本收集新鲜无溶血标本,血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时,采集静脉3ml,待凝固后(最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟)通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟,分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3 方法原理L-丙氨酸+α-酮戊二酸—————→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH—————→L-乳酸+NAD﹢4剂来源,配置及储存试剂来源:迪瑞试剂配置:试剂一和试剂二均为液体试剂,可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊,或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。

试剂储存:试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数:样品量15 u/l 试剂量:第一试剂240 u/l(R1);第二试剂60 u/l测光点23—38 测定模式:速率法负反应分析波长:340nm/405nm(主波长/副波长)6计算方法样本浓度(U/L)=样本管吸光度的变化×校准液浓度(U/L)校正管吸光度的变化7 线性范围:本实验的线性范围:4----1000U/L8 参考范围:男性;:5—40U/L 女性:5---35 U/L9 失控控理1:立即重测同一质控品,如重测后结果仍不再允许范围,请进行下一步。

门冬氨酸氨基移换酶(AST)测定的标准操作程序

门冬氨酸氨基移换酶(AST)测定的标准操作程序

门冬氨酸氨基移换酶(AST)测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆AST浓度测定。

【适用仪器】Olympus AU-2700全自动生化分析仪。

【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。

【方法学原理】 ASTL-天门冬氨酸+ α-酮戊二酸草酰乙酸+ L-谷氨酸MDH(苹果酸脱氢酶)草酰乙酸+ NADH +H+ L-苹果酸+ NAD+ + H2O【试剂】试剂1(R1):L-天门冬氨酸试剂2(R2):α-酮戊二酸试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于2-8℃,若无污染,可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

2.校准品:DiaSys TruCal U。

3. 质控品:Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本,适用标本为血清或肝素抗凝血浆(肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l),不可从正在静脉滴注手臂上采血,上机标本不能有凝块,样品采集后2天内离心标本,分离血清,血清或血浆标本室温保存4天,冷藏7天,冷冻保存6个月。

【操作步骤】1.仪器测定参数设置Test Name:Sample: Volume L DilutiR1 L DilutiR2Sec. ODMethod FirstLMeasuring Firs Last LMeasuring LastANo-Lag-Time: Onboard2.试剂准备:将准备好的试剂置仪器试剂盘中(8℃)。

3.校准校准物的准备:将校准物从冰箱取出,冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶,轻轻颠倒混匀3次,不可用力震摇,室温放置30分钟至完全溶解;液体校准物从冰箱取出,室温放置15分钟以平衡至室温。

校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。

亦可将校准液复溶后分装保存于-20℃冰箱中,每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。

上机校准程序:[1]入界面。

[2] 用光标键选欲校准项目,。

肝功能中各检测项目的测定方法

肝功能中各检测项目的测定方法

肝功能中各检测项目的测定方法、测定原理和临床意义一、血清总胆汁酸TBA:(1)测定方法:A、酶循环法,B、3a-HDS法(3-a羟类固醇脱氧酶)(2)测定原理方法A:胆汁酸被3α羟基类固醇脱氢酶(3a-HSDH)及口-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型特异性的氧化,生成3酮类固醇及}硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型。

此外,生成的3酮类固醇在3α羟基类固醇脱氢酶及β硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型存在下,生成胆汁酸及β烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。

以上依据循环酶而放大量的胆汁酸测定生成的β-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型的吸光度,计算血清中胆汁酸的量。

方法B:在3-a羟类固醇脱氧酶作用下,各种胆汁酸C3上α位的羟基脱氧形成羰基,同时氧化型NAD还原成NADH随后NADH上的氢由黄递酶催化转移给硝基四氮唑蓝(NTB)产生甲替,用磷酸中止反应,甲替的产量与总胆汁酸成正比,在波长540nm比色,与同样处理的标准品比较,计算其含量。

(3)临床意义1.测定血清中胆汁酸可提供肝胆系统是否正常,肝、胆疾病时周围血循环中的胆汁酸水平明显升高。

早期和肝外阻塞性时可增至正常值的100 倍以上。

对肝胆系统疾病的诊断具有特异性。

2.可敏感地反映肝胆系统疾病的病变过程。

肝胆疾病时血清胆汁酸浓度的升高与其他肝功能试验及肝组织学变化极为吻合,在肝细胞仅有轻微坏死时,血清胆汁酸的升高,常比其他检查更为灵敏。

据报道,急性肝炎、、原发性、急性肝内胆汁郁滞、原发性以及肝外,其血清胆汁酸均100 %出现异常。

上述疾病时均有血清胆汁酸含量的增高。

二、丙氨酸氨基转移酶ALT(1)测定方法:酶偶联法,赖氏法,连续监测法(2)测定原理:L-丙氨酸 + α-酮戊二酸---ALT----L-丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 +NADH+H+---------LD-------L--乳酸+NAD+(3)临床意义:谷丙转氨酶升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV 携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析,ALT 的升高只表示肝脏可能受到了损害。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)实验操作规程

丙氨酸氨基转移酶(ALT)实验操作规程

1.目的和适用范围:1.1.为保证血液检测的结果正确性,规范实验操作,特制定本操作规程。

1.2.适用于本实验室,全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。

2.术语:无。

3.职责:3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。

3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。

4.操作说明4.1.实验原理:血清中谷-丙转氨酶作用于由丙氨酸及α酮戊二酸组成的基质产生丙酮酸,丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用,形成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中呈红棕色。

反应过程如下:α酮戊二酸 + L丙氨酸→ L-谷氨酸 + 丙酮酸L-丙酮酸 + 2,4二硝基苯肼→ 2,4-二硝基苯腙 + 水4.2.实验所需设备和材料:ALT测定试剂盒、100μl加样器、一次性吸头、37℃水浴箱、DNM-9602酶标仪。

4.3.实验操作步骤:4.3.1.将基质液37℃保温5min。

4.3.2.微孔板上设定1个空白对照,3个标准孔,其余为样品孔。

4.3.3.各孔加缓冲液、基质液、丙酮酸与样品量如下:4.3.3.1.空白孔:10ul磷酸缓冲液后,再加50ul基质液。

4.3.3.2.标准孔:10ul磷酸缓冲液,加5ul丙酮酸标准液,再加45ul基质液。

4.3.3.3.样品孔:分别加样本10ul,加50ul基质液。

4.3.4.适当震荡混匀,置37℃温育30min。

4.3.5.每孔加2,4二硝基苯肼50ul,混匀后置37℃温育20min。

4.3.6.每孔加NaOH溶液150ul, 混匀后,置37℃温育5min。

4.4.结果判读:4.4.1.双波长(492nm,参考波长630nm),以空白孔为零点,测定标准液与样品的OD值。

4.4.2.CUT OFF值为3个标准孔的平均值。

4.4.3.若样品OD值大于或等于CUT OFF值,为阳性。

4.4.4.若样品OD值小于CUT OFF值为阴性。

4.5.注意事项4.5.1.严重脂血,溶血或黄胆血清可使吸光度明显增加,因此检测此类标本应作血清对照管。

生化试剂SOP标准操作程序(魅力)

生化试剂SOP标准操作程序(魅力)

⽣化试剂SOP标准操作程序(魅⼒)ALT/GPT 丙氨酸氨基转移酶试剂盒临床意义:本试剂盒适⽤于体外临床检验,⽤于测定⼈⾎清中丙氨酸氨基转移酶的活⼒。

临床上,有许多疾病会导致⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒增⾼。

如肝胆类疾病:包括传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎;⼼⾎管疾病:包括⼼肌梗塞、⼼肌炎、脑出⾎等。

⼀些药物和毒物也可以引起ALT活性升⾼:如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、酒精、铅、汞、有机磷等。

因此,⾎清丙氨酸氨基转移酶活⼒的测定可⽤于这些致病的诊断和监测,特别是⽤于肝胆类疾病的诊断和肝功能检测⽅法原理:上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒以IFCC1(国际临床化学委员会)推荐法为基础设计,采⽤两步法测定:丙氨酸氨基转移酶L-丙氨酸+ α-酮戊⼆酸-----------------------→丙酮酸+ L-⾕氨酸乳酸脱氢酶丙酮酸+ β-NADH + H+---------------→L-乳酸+ H2O + NAD+底物L-丙氨酸和α-酮戊⼆酸在丙氨酸氨基转移酶催化下,⽣成丙酮酸和L-⾕氨酸.其中丙酮酸在乳酸脱氢酶的催化下,⽣成了L-乳酸,并同时引起了β-NADH的氧化,使波长340nm处的吸光度下降.在⼀定底物浓度范围内,β-NADH的氧化所引起的340nm处吸光度的下降速率与⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒成正⽐。

样本:病⼈准备:应空腹取⾎。

样本类型:新鲜⽆溶⾎现象的⾎清或EDTA抗凝⾎浆。

最少样品量:0.2ml。

样本稳定性:⾎清中的ALT在2~8℃可稳定7天,不推荐使⽤冰冻保存的样本2。

仪器与试剂:仪器:魅⼒1800⽣化分析仪试剂:上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒试剂准备:丙氨酸氨基转移酶试剂盒为即开即⽤的液体双剂型,⽆需特殊准备。

试验⽤试管的直径在12~16mm。

试剂组份:参见试剂盒内说明书。

注意事项:1.此试剂为体外诊断⽤。

2.试剂有毒,不要⼊⼝,吞下有害,如误服(包括内部接触)应⽴即寻求医疗保护。

天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程

天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程

天门冬氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST )的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ,室负责人监督落实。

2.本SOP 的改动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ,不饮酒24h 后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】日立600全自动生化分析仪,低速离心机一、检测原理底物L-天门冬氨酸与α-酮戊二酸在天门冬氨酸氨基转移酶(AST )作用下生成草酰乙酸,生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶(MDH )作用下转化成L-苹果酸,同时伴随着NADH 的氧化,引起在波长340 nm 处吸光度下降,下降速率与血清中AST 活力成正比。

谷氨酸草酰乙酸酮戊二酸天门冬氨酸---L L AST +−−→−+α酮戊二酸苹果酸草酰乙酸-++-−−→−++++αNAD L H NADH MD H二、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司AST 试剂盒,为液体双试剂,各组分如分:R1:Tris 缓冲液、β-NADH 、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶(MEDH )R2:L-天门冬氨酸、α-酮戊二酸2.校准要求输入理论因数或使用科华生物配套校准品。

校准频次:空白定标:每日需做试剂空白定标。

三、操作1.分析参数:详见参数表。

2.操作步骤:签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)的实验室检测


5. 标准品法可避免检测受环境因素等 引起的系统误差,标准品的准确配置和加 样直接决定实验结果的准确。 出现大量负值(会导致漏检),阳性过多 基本上都是由于标准品配置和加样不准确。

(二) 复检——丙氨酸转移酶系数法 1. 设备 1.1 340 RT酶标仪。 2. 试剂 2.1 中生丙氨酸转移酶检测试剂(干粉) 2.2 ALT标准品:110U、88U、22U。 3. 程序设置 3.1读板程序:震荡20秒,60秒、120秒、180秒、 240秒、300秒340nm读板五次。 3.2 以标本△OD值乘以系数计算标本ALT值。
5.2.2 说明:K设为设定的接近K真的系数。 U设为已知的ALT标准品酶含量在K=K设时 测定的酶含量;∆OD为340nm波长测定反 应系统每单位时间OD值变化率; U设=K设×∆OD ∆OD= U设/K设 公式2 5.2.3同一酶含量的标本在同一反应系统中 ∆OD不变,将公式2代入公式1,得: K真= U真×K设/ U设

ALT是献血法规定的血液检验项目之一。 参考值范围为5~40U/L。 ALT催化下列反应: α-酮戊二酸 + L-丙氨酸 L-谷氨酸+丙 酮酸
ALT的生理变异较小,性别、年龄、进食、 适度运动对酶活性无明显影响。病毒性肝 炎时随不同病期和严重程度而异,常明显 升高,可达10~100倍正常上限。肝硬化、 急性心肌梗死、心肌炎、肌肉损伤、肌肉 萎缩等均可升高。
也只有在此基础上建立起来的测定方法才是可靠的准确酶反应是随着温度升高而升高的但测定酶是都需要酶和底物在一定温度下作用一段时间过高的温度可能使酶失活
丙氨酸氨基转移酶(Hale Waihona Puke LT)的 实验室检测基础知识

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂微板法)

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)简介:转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏,以心肌含量最高,肝脏次之。

AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用,形成谷氨酸和草酰乙酸。

Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,在ALT催化下,其反应公式如下:L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。

二硝基苯肼与α-酮酸反应,生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下,二硝基苯腙的吸收光谱有差异,通过分光光度计检测在处差异最大,以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量,进而计算酶的活性。

100T该检测试剂盒可检测50个样本(不含标准品),该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

组成:自备材料:1、蒸馏水2、离心管3、水浴锅4、96孔板5、酶标仪操作步骤(仅供参考):1、准备样品:编号名称TE0131100TStorage试剂(A): 丙酮酸标准(100mmol/L)1ml 4℃避光试剂(B): 丙酮酸标准稀释液2ml RT试剂(C): 标准对照液2ml 4℃试剂(D): AST assay buffer3ml -20℃避光使用说明书1份①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃保存1个月有效,用于AST/GOT的检测。

②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃保存1个月有效,用于AST/GOT的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。

2、制作AST标准曲线:取适量的丙酮酸标准(100mmol/L),按丙酮酸标准(100mmol/L):丙酮酸标准稀释液混合,即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L),按下表制备标准曲线。

19、天冬氨酸氨基转移酶标准操作规程(AST-SOP)

前言为使临床检验操作规范化,指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作,保证检验质量,特制定本操作规程。

本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订,作为本产品的标准操作程序。

本规程从2007年5月2日起实施,每2年复审1次。

本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。

本规程起草单位:伊利康生物技术有限公司技术部。

本规程主要起草人:蒙凯、蔡其浩。

本规程首次起草。

目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请:血清天门冬氨酸氨基转移酶(Apartate Aminotransferase,缩写(AST/GOT)测定;组合项目申请:肝功能测定项目组合。

临床医生根据需要提出检验申请。

2.标本采集与处理2.1 受检者的准备:病人空腹12h,不饮酒24h后。

体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。

丙氨酸氨基转移酶37℃参考方法评价临床常用方法探讨

( 国 医学 科 学 院 北 京协 和 医 院 检验 科 , 京 103 ) 中 北 070
摘要 : 目的
通过建立 3 ℃丙氨酸氨基转移酶 ( L ) 考方法 , 7 A T参 评价干化学和湿化学五种检测组合 的临床常用方
法, 探讨 A 测定结果的准确性与可 比性。方法Байду номын сангаасⅡ
依据国际临床化学 与检 验医学联 合会 ( C )推荐 的参考测 量程序 IC F
A p oc nuigterf ec to f a y c ocnrt no aie mio as rs(7 2 t a ae erui p raho s e ne h do  ̄ t netao f ln n t nf ae30 ) oe l t t ot e n h er me c ic i a na r e ( vu h n me os Q h hn , H NGF n Z ̄0 F n e . 脚 n l l ̄a lbrti , ei n nM d a C lg o— h t d t i o Z A ag, I ag,t ( Z -g 4 咖 e o i lao o e Pk U i eil oee s m fC r a rs g n o c l H pt , h e Aae yo d a cne, e g 103 , hn ) il C i s cdm a ne fMei l i c B n 0 70 C i c Se s a
建立 A 参考方法 , 测定 E M⑩.D44A J参考 品 , R A 5 『 T 验证参考方法 的准确性 。并对其精 密度进行评估 。同时用 参考 方法 为冰冻新鲜血清定值 , 校准非配套湿化学 常用方法 。干化学采 用 Vt s io 配套 系统 。按 照 N C SE 9A方 案分别 r C L P一 比较 4 份人血清干湿化学五种检测组合 的常 用方法 和参 考方法 A 结果 。结果 用参考 方法 测定 E M@ A 5 o R D44 A .参考 品结果 16 4U L 在其给定 的 164 / I T 8 . / , 8 4U L范围内。建立 的 3 ̄ L 参考方法 总 C .9 一1 1 - 7C A T V0 8 % .2%。Vt i —
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图3AsT线性范围预实验
图4ALT线性范围预实验
从图3和图4可见,稀释点和测定值间的关系为抛物曲线,在第一个稀释点到第四稀释点之间,曲线近似上升的直线,第五点达到曲线的最高点,从第五点开始,曲线呈下降趋势。

可以推断AsT、ALT(37℃)s0P线性范围大致在O一300u几之问。

AsT、ALT(37℃)SOP线性确证实验分别使用第二组稀释样本,相应的测定原始结果分别见表18、表19。

按照NccLsEP一6中的数据处理方法”1,将每个标本(X1到x4)四次测定的结果排列在Y卜Y4,进行离群点检查。

AsT、ALT(37℃)s0P离群点检查结果分别见表20、表21。

AST、ALT(37℃)SOP线性确证理论稀释值一测定值图分别见图5、图6。

图5AST线性确证实验
表20AST离群点检查结果
41
表19
ALT线性确证实验原始数据
样品号
理论稀释值———————————————壅型堕』坐旦L——=—_—————.=i_
(u/L)
第一次
第二次
第三次
第四次

075150225300
0.38O.19
0.19
0.00O.1976.23
75.98
75.56
75.2075.74151.00
150.96150.59150.23
150.76225.36
225.23224.28
224.98
224.96300.06
299.85
298.98
298.68
299.39
图6ALT线性确证实验
表21ALT离群点检查结果
界限值P。

;=0.765,P。

=O.889
43。

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