《培养基的制备与消毒灭菌》 实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告（文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌（一）、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
（二）、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
（三）、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
（四）、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
《培养基的制备与消毒灭菌》-实验报告.doc
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一、实验目的
本实验旨在让同学们掌握培养基的制备和消毒灭菌方法，使我们更好地了解了解培养
基的制备和消毒灭菌的操作步骤，以有效管理实验室内的微生物，保证实验的准确性。
二、实验内容
（1）准备用材：复比的培养基，抗污垫，重瓶、竹筷，托盘、烤箱等。
（2）培养基制备方法：将培养基配比好，用竹筷搅拌，然后倒入重瓶中，然后用抗
污垫研细，并用眼检验培养基的细菌孢子，然后封口处固定好封口带，放到托盘里，放入
烤箱烘干。
（3）消毒及灭菌：使用烘箱的温度控制器，调节温度和时间，以保证培养基的安全，确保其中有效成分的不变，温度调到121℃，恒温20分钟，然后把培养基取出，放入凉粉中冷却，来进行灭菌。
三、结论
本实验经过正确地操作，成功地完成了培养基的制备和消毒灭菌，我们熟悉了培养基
制备和消毒灭菌的操作流程，以及烘干灭菌的步骤，同时也熟悉了实验中用到的各种工具
和仪器，以达到良好的实验室安全管理。
本次实验使我们更加深入地了解了培养基制备和
消毒灭菌技术，为我们今后实验做好准备和提供帮助。
实验一 培养基的制备消毒灭菌
(2) 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两
两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。
(3) 加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，
维持3---5min，锅内空气排尽，关上排气阀。另外一种排气方法：先将排气 阀关闭，待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀，等到压力表指针回到零， 关闭排气阀。
培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
培养基配制原则
◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位
原料来源的选择
根据培养目的不同调配
灭菌处理
2 消毒和灭菌的原理
★ 消毒与灭菌是确保 微生物纯培养 （由一个菌体
生长繁殖的群体）的最基本的实验技术。
高 压 蒸 汽 灭 菌 锅
a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：灭菌开始排净冷空气；
灭菌终了，自然缓慢降压回零；
灭菌结束，趁热取出物品。
三 实验操作步骤
分组操作：分6组，5人1组。
◆ ◆ ◆
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（第1~2组做，每组600ml） 马铃薯糖琼脂培养基（第3~4组做，400ml） 高氏1号培养基（第5~6组做，200ml）
每组需要做的其它工作
（1）每组包1ml吸管5支（塞棉花）（示范） 。 （2）每组包培养皿2包（每包6个） （示范）。 （3）每组装9ml无菌水5管。 （4）每组装20ml无菌水2瓶（50ml三角瓶，内有玻璃珠）。
（5）装锅灭菌。
高压蒸汽灭菌
(1) 灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌培养基的制备与灭菌实验⼋培养基的制备与灭菌⼀、⽬的要求1.掌握微⽣物实验室常⽤玻璃器⽫的清洗及包扎⽅法。
2.掌握培养基的配置⽅法。
3.掌握⼲热灭菌和⾼压蒸汽灭菌的操作⽅法。
⼆、基本原理正确掌握培养基的配制⽅法是从事微⽣物学实验⼯作的重要基础。
由于微⽣物种类及代谢类型的多样性．因⽽⽤于培养微⽣物的培养基的种类也很多，它们的配⽅及配制⽅法虽各有差异。
但⼀般培养基的配制程序却⼤致相同．例如器⽫的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜⾯与平板的制作以及培养基的⽆菌检查等基本环节⼤致相同。
三、实验材料1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L 的NaOH 和HCl 溶液。
2.仪器及玻璃器⽫：天平、⾼压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三⾓瓶、培养⽫、玻璃漏⽃等。
3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤(⼀)玻璃器⽫的洗涤和包装1.玻璃器⽫的洗涤玻璃器⽫在使⽤前必须洗刷⼲净。
将三⾓瓶、试管、培养⽫、量筒等浸⼊含有洗涤剂的⽔中.⽤⽑刷刷洗，然后⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲净。
移液管先⽤含有洗涤剂的⽔浸泡，再⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲洗。
洗刷⼲净的玻璃器⽫置于烘箱中烘⼲后备⽤。
2 ?灭菌前玻璃器⽫的包装(1)培养⽫的包扎：培养⽫由⼀盖⼀底组成⼀套，可⽤报纸将⼏套培养⽫包成⼀包，或者将⼏套培养⽫直接置于特制的铁⽪圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养⽫须经灭菌之后才能使⽤(2)移液管的包扎：在移液管的上端塞⼊⼀⼩段棉花(勿图8-1移液管的包扎⽤脱脂棉），它的作⽤是避免外界及⼝中杂菌进⼊管内，并防⽌菌液等吸⼊⼝中。
塞⼊此⼩段棉花应距管⼝约0.5cm 左右，棉花⾃⾝长度纟勺1~1.5cm。
塞棉花时.可⽤⼀外围拉直的曲别针、将少许棉花塞⼊管⼝内。
棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通⽓⽽⼜不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽勺5cm 左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的⼀端，约成45C⾓，折叠纸条包住尖端，⽤左⼿握住移液管⾝，有⼿将移液管压紧.在桌⾯上向前搓转，以螺旋式包扎起来。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
实验二培养基的制备消毒与灭菌
编辑课件
培养基配制实验原理
❖培养基是人工配制的适合微生物生长繁 殖或积累代谢产物的营养基质。
❖人工制备培养基的目的，在于给微生物 创造一个良好的营养条件。
编辑课件
培养基配制要素
❖营养：碳源、氮源、能源、生长因子、 水分和无机盐；
❖适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力； ❖一定的氧化还原电位；
• 当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼 洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细 擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀 和变质。
• 要检查压力表上的指数为“0 Mpa”后才能打 开锅盖。
• 外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否 则会引起装置故障、起火、短路。 编辑课件
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过滤除菌
❖ 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要 高（160～170℃），时间要长（1～2h）， 但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器 皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
编辑课件
高压蒸气灭菌
❖ 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的灭菌锅 内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 待水蒸气急剧将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气 阀，继续加热。由于水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内 的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
• 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体
中细菌的方法。根据不同的需要选用不同 的滤器和滤板材料。
• 此法除菌的最大优点是可以不破坏溶液中
各种物质的化学成分，但由于滤量有限， 所以一般只适用于实验室中小量溶液的过 滤除菌。
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紫外线灭菌
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300 nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力 最强。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1.掌握培养基的配制方法；2.掌握培养基的灭菌方法；3.了解常用的培养基配方和用途。
二、实验仪器和试剂仪器：称量器、自动调pH计、恒温培养箱、高压灭菌器等。
试剂：各种常用的培养基配方、蒸馏水、紫外灯、酒精等。
三、实验步骤1.准备工作首先准备好需要的试剂和仪器，经过试剂和仪器的消毒处理后，将其放置在试验台上，以备使用。
2.培养基的配制培养基的配制是实验的关键步骤之一。
在实验过程中，我们使用锥形试管来制备试验的培养基。
首先需要称量出所需的重量并将其加到试管中，之后按照规定的比例加入蒸馏水、糖和其他的试剂，搅拌均匀。
最后使用自动调pH计来调节培养基的pH，确保在制备培养基过程中能够准确地保持pH值在标准范围内。
3.培养基的灭菌在实验中，我们使用高压灭菌器对制备好的培养基进行灭菌处理，以确保在培养试验过程中，培养基中不会出现杂菌和异物的干扰。
在灭菌过程中，我们需要将培养基放入高压灭菌器中，通过高压和高温来杀死细菌和其他微生物。
同时，也需要不断监测培养基的温度和压力，确保灭菌过程的正常进行。
四、实验结果根据实验的结果可以发现，在正确地配制和灭菌培养基的情况下，我们可以得到符合规定标准的培养基样品。
通过实验，我们也可以更加深入地理解常见的培养基配方和用途，为今后的实验研究提供更加可靠和高质量的实验基础。
五、实验思考在实验过程中，我们还需要注意以下几个问题：1.实验时需要仔细操作，避免粗心大意和疏忽带来的不好的影响。
2.在配制和灭菌时，需要严格遵守规定的操作流程和步骤，以免影响前后实验结果的统一性和准确性。
3.值得注意的是，在配制和灭菌过程中，需要注意卫生和消毒处理，以避免细菌和其他微生物的污染和繁殖。
4.在实验过程中，还需要对实验结果进行仔细的分析和讲解，以便更好的理解和掌握实验原理和方法。
综上所述，在实验培养基的配制和灭菌实验中，需要做好多方面的考虑和准备，以确保实验能够顺利进行，并能获得稳定、高质量和高准确度的结果。
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《培养基得制备与消毒灭菌》实验报告
实验目得
1、学习与掌握配制培养基(以牛肉膏蛋白胨培养基得配制为例)得一般方法与原理。
2、了解消毒与灭菌得原理,掌握常用灭菌方法得操作步骤。
实验原理
培养基就就是人工配制得适合微生物生长繁殖或积累代谢产物得营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中、微生物种类繁多,营养类型多样，加之实验与研究得目得不同,所以培养基得种类很多。
但就就是,不同种类得培养基中,一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。
不同微生物对ＰH要求不一样、雷菌与酵母得培养基得pH一般就就是偏酸性得,而细菌与放线菌得培养基得pH一般为中性或微碱性得（嗜碱细菌与嗜酸细菌例外)。
所以配制培养基时，都要根据不同微生物得要求将培养基得pH调到合适得范围。
此外，由于配制培养得各类营养物质与容器等含有各种微生物,因此,已配制好得培养基必须立即灭菌、如果来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中得微生物生长繁殖而消耗养分与改变培养得酸碱度所带来不利得影响。
高压蒸气灭菌就就是将持灭菌得物品放在一个密闭得加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅套间得水沸腾而产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内得冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀、继续加热,此时由于蒸气不能道出,而增加了灭菌器内得压力，从而使沸点增高，得到高于10０℃得温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌得目得。
牛肉膏蛋白胨培养基就就是一种应用最广泛与最普通得细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要得最基本得营养物质,所以可供作微生物生长繁殖之用。
基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨与NａＣl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐与维生素,蛋白胨主要提供氮源与维生素,而NａCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂,琼脂在常用浓度下９6℃时溶化，实际应用时,一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂得含量根据琼脂得质量与气温得不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌,因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性,以利于细菌得生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基得配方如下：
牛肉膏３．0ｇ
蛋白胨 10.0 g
NaＣl ５.0ｇ
水１００0ｍl
ｐＨ７、4—7、６
实验仪器与药品
１、溶液或试剂:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NａOＨ、1ｍol/Ｌ HCｌ。
2、仪器或其她用具:试管、三角瓶、10０0mｌ烧杯(或１０00ml刻度搪瓷杯)、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(pH 5、5－9、０)、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。
实验步骤
(一）牛肉膏蛋白胨培养基得制备
1、称量(假定配制1０0０mｌ培养基）
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯（或1０00ml刻度搪瓷杯)中、牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。
2、溶化
在上述烧杯中先加入少于所需要得水量(如约７0０ｍl),用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后,补充水到所需得总体积(１000ml);如果配制固体培养基时,将称好得琼脂放人已溶得药品中，再加热溶化,最后补足所损失得水分。
3、调pＨ
在未调ｐＨ前，先用精密pH试纸测量培养基得原始pH，如果偏酸、用滴管向培养基中逐滴加入1ｍol/ＬNaＯＨ，边加边搅拌,并随时用ｐH试纸测其PH，直至pH达7、4-7、6。
反之，用１mｏl/LＨCl进行调节。
4、过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果得观察。
可以省去（本实验勿需过滤)。
5、分装
液体分装
分装高度以试管高度得１／4左右为宜。
分装三角瓶得虽则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积得一半为宜,如果就就是用于振荡培养用,则根据通气量得要求酌情减少;有得液体培养基在灭菌后，需要补加一定量得其她无菌成分,如抗生素等，则装量一定要准确。
固体分装
分装试管,其装量不超过管高得1／5，灭菌后制成斜面。
分装三角烧瓶得量以不超过三角烧瓶容积得
一半为宜。
半固体分装
一般以试管高度得１/3为宜，灭菌后垂直待凝。
６、加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染，并保证有良好得通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。
7、包扎
加塞后,将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。
８、灭菌
将上述培养基以0、103ＭPａ,l21℃,２0min高压蒸气灭菌。
9、摆斜面
将灭菌得试管培养基冷至５0℃左右（以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其她合适高度得器具上，搁置得斜面长度以不超过试管总长得一半为宜
l０、无菌检查
将灭菌培养基放入３７℃得恒温箱中培养24－48ｈ、以捡查灭菌就就是否彻底。
注意事项
1、蛋白胨很容易吸湿,在称取时动作要迅速,另外，称量时严防药品混杂、一把牛角匙用于一种药品、或称取一种药品后,洗净——擦干——再称职另一药品——瓶盖也不要盖错。
2、在琼脂溶化过程中、应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。
同时,需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦,制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化,以免离子进入培养基中,影响细菌生长。
3、对于有些要求PH较精确得微生物,其PＨ得调节可用酸度计进行(使用方法、可参考有关说明书)。
pH不要调过头,以避免回调而影响培养基内各离子得浓度。
配制ｐＨ低得琼脂培养基时、若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌,则琼脂因水解不能凝固。
因此,应将培养基得成分与琼脂分开灭菌后再混合，或在中性ｐＨ条件下灭菌,再调整pH。
4、分装过程中,注意不要使培养基沾在管（瓶)口上,以免沾污面塞而引起污染。
(二)高压蒸汽灭菌法步骤
1、加水
使用前在锅内加入适量得水,加水不可过少,以防将灭菌锅烧干,引起炸裂事故。
加水过多有可能引起灭菌物积水。
水面与三角架相平为宜
2、装料
将灭菌物品放在灭菌桶中,不要装得过满。
3、加盖
盖好锅盖,按对称方法旋紧四周固定螺旋，打开排气阀。
4、加热排气
加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出,待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，排出得气流很强并有嘘声时,维持2—3min以排除冷空气。
如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分排除,然后将排气阀关闭。
5、加压
将排气阀关闭
6、保压
当压力升至０、1MPa时,温度达12１℃,此时应注意观察,控制热源。
保持压力稳定,维持20－30min 后,切断热源。
7、自然降压
当压力表降至“0”处，稍停,使温度继续降至1０0℃以下后,打开排气阀,旋开固定螺旋,开盖,取出灭菌物。
注意:切勿在锅内压力尚在“0”点以上,温度也在100℃以上时开启排气阀,否则会因压力骤然降低，而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口,污染棉塞，以后培养时引起杂菌污染。
压力降到“0”时,方可打开排气阀。
8、保养
灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出,以保持内壁及内胆干燥,盖好锅盖。
９、培养基无菌检查
五、关键步骤及注意事项
1、要严格按配方配制。
2ﻫ、调pH不要过头。
3、干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度得时间控制,70ºC以下放物、取物。
ﻫ４、高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气,到时降压回零取物。
5ﻫ、过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。
陕西师范大学远程教育学院
生物学实验报告
报告题目《培养基得制备与消毒灭菌》实验报告
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