3M细菌总数测试片操作以及判读
3M环境李斯特菌测试片操作以及判读
3M环境李斯特菌测试片操作以及判读3M 环境李斯特菌测试片操作以及判读一、测试环境李斯特菌数操作方法1.将未开封的测试片贮藏在<=8o C (46oF)的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。
在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。
2.已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。
3.为防止暴露于潮湿的环境中，请不要冷藏已开封的测试片。
将胶带封好的测试片贮藏在低温干燥的地方，保持时间不超过1个月。
请勿将测试片放在温度>25oC (77oF)和(或)相对湿度>50%的环境中。
4.用涂抹棒、海棉或其它采样设备收集环境样本。
湿润采样设备的液体应<=10mL。
湿润剂可以是无菌水、缓冲蛋白胨水(Buffered Peptone Water,BPW)，或中和缓冲液，如Letheen 肉汤或Dey/Engley (DE)中和肉汤。
5.在无菌环境下在收集的样品中添加5mL，20-30oC，灭过菌的缓冲蛋白胨水(BPW)溶液。
不要将Petrifilm EL 测试片与Vermont 培养基(UVM)、Fraser 肉汤、李斯特菌增菌培养基(LE B)或缓冲李斯特菌增菌培养基(BLEB)共用。
6.混合，蠕动或旋转样品与BPW 的混合液将近一分钟。
将样品置于室温(20-30oC)1h，最久不超过1.5h，以修复损伤的李斯特菌。
7.将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。
8.用3M TM电子移液枪或其它移液器垂直滴加3mL 样品到下层膜的中央。
9.将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。
10.轻轻地将塑料压板放在位于接种区上层膜上。
不要压，扭转或滑动压板。
提起压板。
等至少10分钟，以使胶体凝固。
11.将测试片透明面朝上，可叠放至10片，在35o C±1o C或37o C±1o C下培养28h±2h。
12.Petrifilm EL测试片能够用标准的菌落计数器或其它光学放大器计数或判读。
3M PetrifilmTM 肠杆菌科测试片法
Microbiology
3M PetrfilmTM 肠杆菌科测试片法
检样 25g(ml)样品＋225ml 稀释液
10倍系列稀释
选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，接种Petrifilm测试片
371°C, 24 2h
菌落计数
Copyright 3M China Ltd.
结果报告
Microbiology
好氧或兼性厌氧发酵型G-杆菌
氧化酶阴性
氧化酶阳性
肠杆菌科
乳糖发酵
非乳糖发酵
埃希氏菌 克雷伯氏菌 柠檬酸杆菌 等
Copyright 3M China Ltd.
沙门氏菌 志贺氏杆菌 耶尔森氏菌 普罗威登斯菌等
Microbiology
什么是肠杆菌科？
革兰氏阴性 无芽孢杆菌 氧化酶阴性 发酵葡萄糖产酸或产酸产气 习惯生长于肠道、土壤、水和蔬菜 在干燥环境中存活性差 对热敏感 部分对人体有致病性
Microbiology
操作时的注意点
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
操作时的注意点
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
食品与环境中 肠杆菌科和大肠菌群检测的对比试验
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
Microbiology
3MTM PetrifilmTM 霉菌酵母测试片
标准培养基 抗生素抑制细菌生长 叠放片数小于20片 磷酸酶指示剂 3-5天，21-25°C AOAC官方方法
997.02
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
3M大肠菌群的测定
实验目的
学习并掌握国标GB/T 4789.38—2008标准中 规定食品中大肠菌群的测定方法。
大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气。需氧 和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源 于人畜粪便，故此作为粪便污染指标来评价食品的卫 生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否 被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌 污染的可能性。
计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一 个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成 单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的 菌落数（圆形生长面积为20 cm2）。食品中最终菌 落浓度的单位以“cfu/g (mL)”表示，表面上菌落数以 “cfu/cm2”表示。
3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片
• 含有改良的VRB培养基 • 目标菌落为红色带气泡 • 35±1°C, 24 ±2 h培 养 • AOAC Offical Method 991.14
3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片
样品制备
样品制备
接种
接种
接种
培养
解释
3. 接种 将PetrifilmTM大肠菌群测试片或PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开 上层膜，用吸管吸取1 mL样液垂直滴加在测试片的 中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜 直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中 央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面 积上。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。
在PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片上， 蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡 和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。培养 圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出 现大量气泡形成、不明显的小菌落，培养区呈蓝 色或暗红时，进一步稀释样品可获得准确的读数。
MPetrifilm酵母菌与霉菌快检片判读手册
Estimated Yeast Count ~TNTC (actual count >104) 圖 4 顯示 Petrifilm YM (TNTC 數量太多 而無法計算)，可以發現在培養區邊緣 有許多小的藍色菌落(上方方框)，
Estimated Mold Count~64 圖 5 測試片上的菌落彼此推擠覆蓋，可由 菌落的邊緣或中心焦點計數。亦可將測試 片分成幾個區域計算，本例分成 4 個小區 域，計算右下角區塊可得 16 個黴菌菌落 數。
3M
Petrifilm Yeast and Mold Count Plate
酵母菌及黴菌快速檢驗測試片 判讀手冊 3M Petrifilm Yeast and Mold Count Plate (YM)，內含培養基、水溶膠、和方便判讀的呈色 劑。
Total Count =20 Yeast Count =16 Mold Count =4 Petrifilm YM 可以同時培養酵母菌及黴菌
。大形菌落 。菌落有擴散的邊緣 。各種顏色(棕色、米黃色、橙色、藍綠色) 。菌落為平面狀 。菌落中心顏色較深(亦可能不同顏色)
圖 11.揭起上層膜並從培養基 中挑起菌落，進一步鑑定。
圖 12.將菌落移到滴上無菌水 的載片上，蓋上蓋玻片並以 顯微鏡觀察。
圖 13.酵母菌為卵圓形或有出 芽生殖現象。
圖 14.黴菌為有分枝或成串的 菌絲。
3M Petrifilm Yeast and Mold Count Plate
Yeast and Mold Count =0 圖 2 顯示 Petrifilm YM 測試片上沒有酵母 菌及黴菌生長。
Estimated Total Count~500 Estimated Yeast Count~480 Mold Count =21 微生物培養圓形區域面積為 30cm²，若菌落數超 過 150 可使用估計方法，先計算數個 1cm²菌落 求其平均數，然後乘以 30。 酵母菌顏色為粉棕 色至藍綠色。
项目实训手册-项目9-方便面菌落总数快速检验-3M试纸片概要
《食品微生物检验技术》课程实训指导手册项目九方便面菌落总数快速检验-3M试纸片（依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片操作说明书）一、实训目的以3M试纸片进行样品中菌落总数计数，熟练使用各类3M试纸片进行检验操作，明确常用微生物快速检验方法的原理与优缺点与注意事项。
二、实训原理Petrifilm TM是3M公司专利发明，将传统的琼脂平板或试管的培养方法浓缩在小小的一张测试片上，现阶段共有十余种测试片，比较常用的有：菌落总数测试片、大肠菌群计数测试片、快速大肠菌群计数测试片、高灵敏度大肠菌群计数测试片、大肠杆菌/大肠菌群计数测试片、肠杆菌科测试片、霉菌和酵母菌计数测试片、快速金黄色葡萄球菌计数测试片、环境李斯特菌测试片三、实训要求本项目3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片说明书进行检验操作，标准与操作说明书规定了3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验的基本要求、操作程序和结果判定。
本项目全面考察学生依据标准与操作说明进行微生物快速检验的能力。
本项目实施过程可分为样品准备、接种、培养、计数4个步骤。
本项目按2人/组为单位进行操作，要求在实验室完整使用3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验。
四、实验材料和设备1试剂和溶液无菌生理盐水、75%乙醇。
2 仪器和设备除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料包括冰箱、天平、剪刀、镊子、移液管、锥形瓶、试管、恒温培养箱、均质器及耗材、达到精度要求的pH计，超净工作台或百级洁净实验室。
五、实训任务（包含结果计算）1、样品制备以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。
如有包装，用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
a）固体和半固体样品：无菌操作，称取25 g样品置盛225 mL生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
3M检测纸片与国标方法相关性实验观察
３Ｍ检测纸片与国标方法相关性实验观察赵君周媛媛(本文字数：2798)《中国食品工业》2005年第8期字号：【大中小】传统的微生物学检测方法是概率理论与实验设计方法在细菌测定上的实际应用，被定为国标法；3M公司生产的细菌总数及大肠菌群检测纸片，含有VRB(Violet Red Bile)，一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁（tetrazolium）指示剂，可增强菌落计数效果，其表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。
美国3M的细菌总数及大肠菌群检测纸片，目前尚未在国内实验室普遍应用。
为进一步了解其与目前实行的国标法之间的相关性，同时使用国标法和3M纸片法，对随机抽取的252件食品样本，进行了1:1配对实验比较和计数资料结果的统计分析，现将结果报告如下。
材料及方法1 样本所辖19家宾馆、招待所随机抽取的252件冷荤凉菜，其中熟肉制品71份，豆制品45份，冷食菜136份，采样方法见GB 4789.1-94,冷链箱保存，4小时内检测。
2培养基及制备2.1 营养琼脂培养基2.2 磷酸盐缓冲稀释液2.3 生理盐水2.4 75%乙醇2.5 乳糖胆盐发酵管2.6 伊红美蓝琼脂平板2.7 EC肉汤2.8 革兰氏染色液2.9 3M公司的细菌总数及大肠菌群快速检验测试片3方法3.1 实验设计按1:1配对设计。
所有样品均以国标法(细菌总数为平皿法，大肠菌群为9管发酵法)、3M 纸片法同时进行试验。
3.2 试验方法国标法3M 纸片3.3 SPSS统计软件，进行1:1配对资料的χ２检验，计算双侧精确概率（P）、相关系数（r），观察显著性和相关性；进行Kappa检验, 计算系数（k），观察吻合度。
4结果判定传统国标法熟肉制品：细菌总数≤80000cfu/g视为阴性，大肠菌群≤150个/100g视为阴性。
豆制品、冷食类：细菌总数≤ 5000cfu/g视为阴性，大肠菌群≤150个/ 100g视为阴性。
纸片法：见细菌总数快速检验测试片判读手册，大肠菌群及大肠杆菌快速检验测试片判读手册。
沙门氏菌
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LC/CEC-07
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标题：沙门氏菌检测3MPetrifilmTM测试片法
4.16.加入终止液.酶标仪进行判定结果
5.判读结果.使用酶标仪
使用酶标仪在414±10nm处读取样品的吸光度值。如果使用单波长酶标仪，可用盛有200ul水的微孔板做空白.如果使用双波长，以空气做空白，参比波长为490±40nm
4.9.封好微孔后，将微孔板置于培养箱内36℃±1℃孵育30min
4.10.取出微孔板，冲洗微孔3次
4.11分别添加200ul结合物到每个微孔内。
4.12.封好微孔后，将微孔板置于培养箱内，36℃±1℃孵育30min
4.13.取出微孔板，冲洗微孔4次。
4.14.分别添加200ul底物到每个微孔内。
4.15.置于室温下放置10min后即可参照比色卡用肉眼判读颜色。。
。吸光度值大于等于0.3的样品为阳性。注意阳性对照液的酶标仪读数至少达到1.0，并且阴性对照液的酶标仪读数小于0.2.此试验结果有效。
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标题：沙门氏菌检测3MPetrifilmTM测试片法
4.操作步骤.
4.1取25g样品..
4.2充分均质.
4.3.前增菌：将均质好的样品.→无菌锥形瓶盛有225ml前增菌（乳糖肉汤）36℃±1℃培养18h～22h.
4.4选择性增菌：移取0.1ml前增菌液到9.9ml RV{R10}中培养.42℃±1℃. 16ｈ～20h
测菌片的使用方法
测菌片使用方法
1、取冷却液的工作液一烧杯，拧开测菌片，把测试片放入
工作液中，使测试片的两面都完全接触工作液，取出测试片，拧紧盖子，放入温度为27－30℃的环境中。
2、放置24－48小时后，观察细菌面（即浅色面）的情况，
与对比表对比，得出细菌值。
3、放置3－4天或4－7天后，观察真菌面（即深色面）的
情况，与对比表对比，得出真菌值。
注意：
1、未使用的测菌片必须保存在15－25℃的环境中，否则易
变质。
2、接触工作液时，请避开工作液表面的浮油，以免影响测
试结果。
3、在未得到结果时，不要随意拧开测试片。
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3M 细菌总数测试片操作以及判读一、测试细菌总数操作方法
1、未开封时，冷
藏于≤8℃（≤46
℉），并在保存期
内用完，高温度时，
凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。
2、已开封的，将封口以胶带封紧。
3、保存再封的袋
于≤25℃（≤77
℉）和温度<5
0％，不要冷藏已
开启的包装袋，并于一个月内使用完。
4、制备1：10和更
大稀释的食物样品
稀释液，0称取或吸
取食物样品，置入适
宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内.
5、加入适量的无
菌稀释液,包括Bu
ffered peptone
Buffer(IDF pho
psphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.
2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法68 87) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579)、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite -free letheen broth或蒸馏水.
不可使用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液. 因为它们能抑止菌生长。
6、搅拌或均质样品。
样品的稀释液调PH
6.5－
7.2
对酸性样品的稀释
液用IN NaOH
对碱性样品用IN HCL调PH
7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。
8、使用吸管将1mL 样液垂直滴加在测试片的中央处。
9、允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。
10、使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。
12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
13、测试片的透明
面朝上，可堆叠至
20片，对有一定
湿度养箱能保持最
少份损失是需要的。
14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。
15、可以分离菌落
作进一步鉴定，即
掀起上层膜，由培
养胶上挑取单个菌
落。
二、测试细菌总数判读方法
Aerobic
bacter
ia coun
t=152
测试片
中含有
一种红
色指示
染剂可
使菌落着色,计算所有红色菌落(不论其大小和颜色深浅均计算之). Count=0 在petrifil m AC测试片上,很容易解释,图2测试片上没有任何菌落生长.
Count= 16
图3示有不多的菌落. Count=1 43 Petrifilm AC测试片菌落数适宜计数范围是25 -250,见图4
Count=
560
测试片
面积约
为20cm
2,当菌
落数超
过250
个,如图
5所示,为了估计菌落数,可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数,再乘以20可得到整个测试片上的菌落数
Count=t
ntc(esti
mated c
ount=10
3)
图6所示
petrifilm
AC测试
片上菌落
太多而无法计数(tntc)
count=
tntc(Es
timated
count
=105)
有很多
高数量
菌落,使
整个生
长区变粉色,如图7所示,你仅可在生长区边缘现观察到单个菌落,应计录为菌落太多无法计数(TNTC)
count=t
ntc(Esti
mated c
ount=10
3)
有时菌落
分布出现
不均衡,如
图8所示,
这也记录为TNTC.
Count=
tntc(Es
timated
count
=107)
在图9中
petrifil
m AC
测试片
上的菌落,最先粗略一看是可计数的,然而,你密切注意到生长区边缘,能看到高密度的菌落,应记录为TNTC
Estimate
d count
=160
很少数菌
种会液化
petrifilm
AC测试
片上的培
养基,如图
10所示.若有这种现象发生,可选择没有液化区的几个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数.不要计数液化区内的红点.
Count=
83
因为在p
etrifilm
AC测
试片上
菌落是
红色的,
你会和
不透明的不规则形状的事物颗粒区分开,见圆圈1和2.。