菌落总数检测操作规程(国标word版)
国标菌落总数检测方法
国标菌落总数检测方法引言：菌落总数是指在一定的培养条件下，菌落形成的数量。
菌落总数检测是食品微生物检验中的一个重要指标，用于评估食品中微生物的污染程度和卫生质量。
本文将介绍国标菌落总数检测方法的步骤和原理。
一、国标菌落总数检测方法的步骤国标菌落总数检测方法主要包括样品制备、平板计数和结果计算三个步骤。
1. 样品制备需要准备好待测样品。
样品通常是食品、水或其他物质，可以是液体或固体。
将样品称取一定的量，然后按照一定的比例与适量的生理盐水进行稀释，以降低样品中菌落的数量，使其适合于后续的菌落计数。
2. 平板计数将制备好的样品溶液均匀地倒入已经凝固的琼脂平板中，然后用无菌铲子或无菌玻璃棒将溶液均匀涂抹在琼脂平板表面。
待琼脂凝固后，将平板倒置放置在恒温培养箱中，以利于菌落的生长。
根据不同的样品特点和需求，可以选择适当的培养温度和时间。
3. 结果计算在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
在菌落形成后，使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
二、国标菌落总数检测方法的原理国标菌落总数检测方法基于微生物在适宜的培养条件下形成可见的菌落的特性进行。
其原理主要包括稀释平板法和菌落计数法。
1. 稀释平板法稀释平板法是菌落总数检测的一种常用方法。
通过将样品与一定量的生理盐水进行稀释，使菌落的数量适于计数。
然后将稀释好的样品均匀涂抹在琼脂平板上，使菌落在琼脂上生长形成可见的菌落。
根据样品的稀释倍数和计数得到的菌落数量，计算出菌落总数。
2. 菌落计数法菌落计数法是国标菌落总数检测方法的关键步骤。
在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
然后使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
三、国标菌落总数检测方法的应用国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、饮用水、药品、化妆品等领域。
细菌总数检查标准操作规程
细菌总数检查标准操作规程1目的建立规范细菌总数检查标准操作规程，确保检查操作正确。
2范围适用于本公司的细菌总数检查操作。
3职责4术语及定义无5 内容5.1实验5.1.1仪器设备：电热恒温培养箱、电动移液器、生物安全柜、电子天平、PH计。
水浴锅、研钵、玻璃珠、三角瓶。
5.1.2试剂：生理盐水、卵磷脂吐温80-营养琼脂培养基、吐温80、液体石蜡、0.5%氯化三苯四氮唑。
5.1.3耗材：10 mL刻度移液管、90mm培养皿5.2实验前准备5.2.1检查样本是否保持原有的包装状态。
容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。
5.2.2接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
5.2.3若只有一个样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做微生物检验，再将剩余样品做其他分析。
5.2.4在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在符合生物安全要求的实验室中进行。
5.2.2供试品处理5.2.2.1液体样品5.2.2.1.1.水溶性的液体样品，用灭菌吸管吸取10mL 样品加到90mL 灭菌生理盐水中，混匀后，制成1：10 检液。
5.2.2.1.2油性液体样品，取样品10g，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在40℃—44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL（在40℃—44℃水浴中预温），在40℃—44℃水浴中乳化，制成1：10 的悬液。
5.2.2.2膏、霜、乳剂半固体状样品5.2.2.2.1亲水性的样品：称取10g，加到装有玻璃珠及90mL 灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min。
用其上清液作为1:10 的检液。
5.2.2.2.2疏水性样品：称取10g，置于灭菌的研钵中，加10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL 灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL 灭菌生理盐水，在40℃—44℃水浴中充分混合，制成1：10 检液。
简述菌落总数检测程序
菌落总数检测程序是一项常见的微生物检测方法，其目的是确定样品中存在的微生物数量，以评估食品、饮料、制药和环境等领域的卫生状况。
本文将介绍菌落总数检测程序的步骤、工具和注意事项。
1. 样品采集首先需要从待测样品中采集适量的样品，并保证样品的代表性和均匀性。
在采样过程中需要使用无菌器具，并避免手部接触样品，以避免污染。
2. 样品预处理为了减少菌落总数检测时的误差，需要对样品进行预处理。
不同样品的预处理方式不同，但通常包括以下步骤：（1）对固体样品进行破碎和混合，确保样品的均匀性；（2）对液态样品进行搅拌或振荡，使样品中的微生物均匀分布；（3）对含有大量背景杂质的样品，如土壤和食品等，需要进行稀释处理，以便于后续操作。
3. 制备培养基制备培养基是菌落总数检测中至关重要的一步。
各种微生物需要不同的培养基进行培养，但是通常使用通用培养基，如营养琼脂培养基、普通琼脂培养基等。
在制备培养基时需要注意以下几点：（1）使用高质量的培养基原料和纯水；（2）遵循制备指南，按照正确的比例和顺序添加各种原料；（3）将培养基加热至沸腾，以杀死其中的细菌和孢子。
4. 分装和接种将经过预处理的样品分装到无菌平板上，并将平板放置在无菌工作台上。
然后使用无菌技术将培养基倒在平板上，并将培养基均匀涂抹。
最后使用无菌的匙子或移液器接种样品，或者将样品滴入培养基中，并确保接种均匀。
5. 培养和计数将接种好的平板在恒温培养箱中培养，通常是在30-37℃下进行。
培养时间因不同的微生物而异，但通常是24-72小时。
在培养过程中需要注意以下几点：（1）确保培养箱内的温度和湿度稳定；（2）避免平板受到震动或移动；（3）遵守无菌技术，以避免污染。
在培养结束后，使用计数器对菌落进行计数。
菌落是指可见的单个微生物群体，通常呈圆形或不规则形状，并具有明显的色彩和质地。
每个菌落代表一个微生物单元，因此可以根据菌落数量来评估样品中的微生物总数。
6. 结果分析根据菌落总数检测结果，可以评估样品的微生物质量。
国标菌落总数检测方法
国标菌落总数检测方法一、引言菌落总数是指在一定条件下，通过菌落计数方法，测定在样品中存在的微生物总数。
它是评价食品、水质和环境卫生状况的重要指标之一。
国标菌落总数检测方法是指根据国家标准规定的菌落总数检测方法进行微生物总数的测定。
本文将详细介绍国标菌落总数检测方法的原理、步骤及其应用领域。
二、原理国标菌落总数检测方法基于菌落形成的原理，通过将待测样品进行适当稀释，并在寒暖培养条件下培养一定时间，然后对形成的菌落进行计数。
根据国家标准，通常采用平板计数法和膜过滤法两种方法进行菌落总数的检测。
平板计数法是将适量的待测样品均匀涂布在含有适宜培养基的平板上，然后在适当温度下进行培养，最后对菌落进行计数。
该方法适用于微生物菌落较多的样品，如食品和水样等。
膜过滤法是将待测样品通过特定的膜过滤器，过滤到含有适宜培养基的培养皿中，然后在适当温度下进行培养，最后对膜上形成的菌落进行计数。
该方法适用于微生物菌落较少的样品，如空气和药品等。
三、步骤1. 样品制备：将待测样品按照国家标准要求进行适当稀释，以确保在培养过程中菌落呈现合适的数量。
2. 平板计数法：将稀释好的样品用无菌棉签均匀涂布在含有适宜培养基的平板上，然后倒扣放置在恰当温度下进行培养。
3. 膜过滤法：将稀释好的样品通过无菌膜过滤器过滤到含有适宜培养基的培养皿中，然后倒扣放置在恰当温度下进行培养。
4. 培养：根据国家标准要求，将培养皿或平板在适当温度下培养一定时间，以促使菌落的生长和形成。
5. 计数：在培养时间结束后，使用显微镜或菌落计数器对菌落进行计数，然后根据国家标准计算出菌落总数。
四、应用领域国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、水质和环境卫生等领域。
在食品行业中，菌落总数的检测可以评估食品的卫生状况和微生物污染程度，有助于保障食品的安全性；在水质监测中，菌落总数的检测可以评估水质的卫生状况和微生物污染程度，有助于确保饮用水的安全性；在环境卫生监测中，菌落总数的检测可以评估环境卫生状况和微生物污染程度，有助于维护公共卫生和环境健康。
菌落总数检验操作规程
A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤A.1.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化钠5.0 g乳糖5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g月桂基硫酸钠0.1 g蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。
分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。
121 ℃高压灭菌15 min 。
菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。
二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。
三、职责1.检验人员严格按检验操作规程进行检验。
2.QC主管监督检查执行情况。
四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4天平：感量为0.1 g。
3.5均质器。
3.6振荡器。
3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11放大镜或和菌落计数器。
4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。
5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。
图1 菌落总数的检验程序6.操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
菌落总数检测操作规程
微生物检测操作规范1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面生产线微生物控制及验证计划。
本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面产品菌落总数、大肠菌群检测。
2 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。
GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。
GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。
4 设备和材料恒温培养箱：36℃±1℃。
恒温水浴箱：46℃±1℃。
天平：感量为0.1g。
无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）。
无菌培养皿：直径90mm。
无菌锥形瓶：容量500ml；或225ml塑料稀释瓶（带内垫，可高温灭菌）。
灭菌试管：16mm×160mm；或10ml-20ml无菌管。
显微镜：10×-100×4 培养基和试剂平板计数琼脂培养基：GB 4789.2-2016 附录A.1。
无菌生理盐水：GB 4789.2-2016 附录A.3。
乳糖胆盐发酵管：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
伊红美蓝琼脂平板：按GB/T 4789.3-2003中4.25规定。
乳糖发酵管：按GB/T 4789.3-2003中2.2规定。
EC肉汤：按GB/T 4789.28-2003中4.11规定。
格兰仕染色液：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
5菌落总数检验程序实验前准备移液管、三角瓶、试管包扎、灭菌移液管：洗净烘干后在吸管粗头顶端约0.5cm处，塞上一小段棉花，后用4-5cm宽的报纸或牛皮纸将其以下图所示包扎好。
三角瓶包扎图例将包扎后的器具放入灭菌锅，121℃ 15min灭菌。
a.样品处理面饼样品经粉碎机粉碎后，称取25g粉碎样加入装有225ml无菌生理盐水的稀释瓶内，充分振摇，做成1:10的均匀稀释液。
菌落总数测试片安全操作及保养规程
菌落总数测试片安全操作及保养规程前言菌落总数测试片是在食品、饮料、制药等行业中广泛应用的一种实验室用品，用于检测样品中的微生物数量。
正确的操作和保养，不仅能够保证测试数据的准确性，还能延长设备的使用寿命。
本文档旨在为使用菌落总数测试片的实验室人员提供安全操作及保养规程，以便正确且有效地使用该设备。
安全操作规程1.检测前准备工作在进行菌落总数测试前，需要进行一些准备工作。
•首先，检查试剂盒是否完整、完好。
•其次，需要对实验室进行清洁，确保试样不会受到外来污染。
•最后，检查检测设备是否工作正常。
2.操作步骤具体的菌落总数测试操作步骤如下：1.将手持菌落计瓶插入加热设备中，加热到80℃左右（不要超过90℃）。
2.准备好待测样品，并使用消毒液将样品平台擦拭消毒。
待样品平台干燥后，打开试剂盒，取出测试片。
3.拿起测试片，用过滤棉球沾取少量样品，涂在测试片的圆形区域上，记得不要涂满，要注意对称，以避免对测试结果的影响。
4.将测试片放入一个透明的塑料袋里，将原袋弯角45°折叠，收紧口部，放置在加热设备中，加热时间为30min ± 1min。
5.取出加热设备中的透明袋，打开袋口，拿起测试片，将其反转在富营养液培养皿中，培养时间为48小时± 4小时。
6.在培养后的菌落数量区域，数清菌落数量，并将结果记录在实验记录簿上。
3. 注意事项在使用菌落总数测试片过程中，还需要注意以下事项：1.尽量避免使用过期的试剂盒和菌落计瓶。
2.操作过程中需要佩戴手套和口罩。
3.遵循操作规程，严禁进行任何私自操作或修改设备设置。
4.由专人负责使用和保养设备，不得擅自借用或转移使用。
5.每次操作后，要及时清洗设备以保证设备的清洁度和准确性。
保养规程菌落总数测试片是一种高精度、高灵敏度的实验室设备，因此需要进行专业的保养和维修。
1.日常保养日常保养是延长菌落总数测试片使用寿命和保证测试结果准确性不可缺少的一部分。
菌落总数测定操作规程1
适用范围：食品检样经过处理，在一定条件下培养（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1m1（g）检样中所含菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
操作内容：
1、检验程序：
2、操作方法：
2.1 以无菌操作，将检样25g（ml）放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃
瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
2.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的
试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混均，做成1：100的稀释液。
2.3 另取1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即
换用1支1ml灭菌吸管。
2.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在做10
倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做2个培养皿。
2.5 稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入培养皿约15ml，并转动培
养皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液灭菌培养皿内作空白对照。
2.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h±1h
3、菌落计数方法：
3.1 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜，以防遗漏。
在记下各平板的菌落
后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
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山西梁汾醋业有限公司
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菌落总数测定的标准操作规程
1. 目的
规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程，保证山西老陈醋产品的质量。
2. 适用范围
酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。
3. 仪器设备
恒温培养箱，冰箱，恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器，振荡器；无菌吸管1ml(0.01刻度)、10ml(0.1ml刻度)或微量移液器及吸头；无菌锥型瓶，250ml/500ml;
无菌培养皿：直径90mm；PH计或精密PH试纸；放大镜或菌落计数器
4.培养基和试剂
4.1平板计数琼脂培养基，
成分：
胰蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 2.5g
葡萄糖 1.0g
琼脂15.0g
蒸馏水1000ml
PH7.0±0.2
制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH。
分装试管或锥型瓶，121℃高压灭菌15min。
4.2磷酸盐缓冲液
成分：
磷酸二氢钾（KH
2PO
4
） 34.0g
蒸馏水500ml
PH 7.2
制法：
贮存液：称取34.0g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L 氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至1000ml存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25ml,用蒸馏水稀释至1000ml,分装于适宜容器中，121摄氏度高压灭菌15分钟。
4.3无菌生理盐水
成分：
氯化钠8.5g
蒸馏水1000ml
制法：8.5克氯化钠溶于100ml蒸馏水中121摄氏度高压灭菌15分钟。
5 检验程序
6操作步骤
6.1样品的稀释
6.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。
6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）
中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
6.1.3用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
6.1.4按1.4.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。
6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6及时将15 mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ±1℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2培养
6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48 h±2 h。
水产品30℃±1℃培养72 h±3 h。
6.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按1.4.2.1条件进行培养。
6.3菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应
的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7结果与报告
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g （mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
N =∑C/(n1 +0.1n2 )d (1)
式中：
N——样品中菌落数；
∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
示例：
N =∑C/(n1 +0.1n2 )d
=(232+244+33+35)/[2+(0.1×2)]×10-2=544/0.022=24727
上述数据按1.6.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。
7.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.2菌落总数的报告
7.2.1菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7.2.2菌落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数
形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
7.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
7.2.5称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。