细菌数量的测定方法
细菌总数测定操作规程
细菌总数检测操作规程1 原理试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件（如使用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g（mL）试样中所含细菌总数。
2 试剂与仪器2.1 所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基营养琼脂取营养琼脂32.0g，加入蒸馏水1L，搅拌加热至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
3、操作步骤3.1配制0.85%生理盐水。
称取氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。
3.2三角烧瓶加入生理盐水90mL和玻璃珠，试管中加入生理盐水9mL，121℃灭菌30min。
（三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关）3.3将1000μL枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺，121℃灭菌30min。
（注意计算数量）3.4将枪头、培养皿置于烘箱103℃烘干。
（1-3步需提前一天完成）3.5对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。
以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成1:10的均匀稀释液。
3.6用1000μL枪头吸取1:10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。
3.7另去一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支灭菌吸头。
3.8选择2个~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。
3.9稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃的培养基（可放置46℃±1℃水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀（从稀释试样到倾注培.养时间不能超过30min）。
食品中细菌总数的测定
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀 释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告
之。 检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释
若大于2则报告其中较小的数字。
度的各平板平均菌落总数。 平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
（2）菌落计数的报告 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培 养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空 白对照。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。
这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。
2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。
通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。
3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。
这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。
4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。
这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。
5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。
这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。
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细菌总数测定实验报告
细菌总数测定实验报告细菌总数测定实验报告引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界的各个角落。
细菌的数量对于环境卫生和食品安全至关重要。
本实验旨在通过测定细菌总数的方法，了解样品中细菌的数量，并探讨不同环境条件对细菌总数的影响。
实验方法：1. 样品采集：我们选择了不同环境中的样品，包括自来水、空气、餐具表面和人体皮肤表面。
通过无菌棉签或无菌采样器，分别采集样品，并放入无菌试管中。
2. 稀释液的制备：我们准备了一种稀释液，以免细菌过多导致结果不准确。
稀释液的配方为：1克氯化钠和1克蛋白胨溶解在100毫升蒸馏水中。
3. 稀释样品：将采集到的样品取出一定量，加入稀释液中，进行逐级稀释。
我们选择了1:10、1:100和1:1000三个不同的稀释倍数。
4. 培养：将稀释后的样品分别接种在琼脂平板上，利用无菌棉签均匀涂抹样品。
然后将琼脂平板倒置放置于恒温培养箱中，温度设定为37摄氏度。
培养时间为24小时。
5. 细菌总数计算：在培养箱中，我们观察到琼脂平板上的菌落。
根据菌落的数量和稀释倍数，可以计算出原始样品中的细菌总数。
实验结果：我们进行了多次实验，得到了不同样品中的细菌总数。
结果显示，自来水中的细菌总数最低，空气中次之，餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多。
此外，我们还发现，稀释倍数越高，细菌总数越低。
讨论：细菌总数的测定对于环境卫生和食品安全具有重要意义。
通过本实验，我们了解到不同环境中细菌总数的差异，为进一步研究提供了基础数据。
自来水中的细菌总数较低，这可能是由于自来水经过了严格的处理和消毒。
空气中的细菌总数稍高，这是因为空气中存在着大量的微生物，例如细菌和真菌。
餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多，这与人们日常接触物体和环境有关。
稀释倍数的选择对于测定细菌总数至关重要。
过高的稀释倍数会导致菌落过少，难以准确计数；而过低的稀释倍数则会导致菌落过多，影响结果的准确性。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的稀释倍数。
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-
V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法
测定生活饮用水中细菌总数的一种方法是平皿计数法，本文将对这种方法进行详细介绍。
一、实验原理
平皿计数法是利用细菌在液体培养基表面生长成菌落的原理，通过计算菌落个数来确定水中的细菌总数。
二、实验步骤
1. 准备培养基，将培养基倒入无菌平皿中；
2. 取样，将水样取自自来水管道或自然水源中；
3. 稀释，将取样液进行10倍、100倍、1000倍稀释，分别将每份稀释液分别均匀分散在培养基表面，避免液滴残留；
4. 写标签，标注菌落计数的相关信息，例如样品名称、稀释倍数、菌落计数的日期等；
5. 培养，将培养皿放置在恒温培养箱中，设定温度为37℃，并在3-5天内进行观察和计数。
三、实验注意事项
1. 取样应避免超过24小时，以免菌群失去代表性；
2. 取用的平皿应事先灭菌处理，以避免外来细菌的污染；
3. 实验室应有专门的抽风设备、消毒液等清洁工具，以维持实验室的高度卫生。
通过以上三个步骤，我们就可以精确地测定出生活饮用水中细菌总数。
同时，这种方法也可以应用在其他领域，例如食品安全、环境监测等
方面。
但需要注意的是，实验过程中必须遵守实验室操作规程，以保
证实验结果的可靠性。
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法
测定细菌总数的方法通常包括以下几种：
1. 显微镜计数法：将待测样品制成适当浓度的悬浮液，然后使用显微镜观察计数。
这种方法常用于观察对显微镜可见的大型细菌。
2. 平板计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，然后在固体培养基上均匀涂布。
经过适当时间后，可数出单个菌落的数量，并根据稀释倍数计算出细菌总数。
3. 涂布计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，通过草屑涂布或涂布棒均匀涂布在固体培养基上。
经过适当时间后，可数出涂布上细菌的总数。
4. 易液化琼脂凝胶计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，与液化琼脂凝胶混合，然后倒入琼脂凝胶平板上固化。
经过适当时间后，可数出液化琼脂凝胶上细菌的总数。
5. 流式细胞仪计数法：将待测样品进行适当稀释后，通过流式细胞仪对样品中的细菌进行单个细胞的计数和分析。
这种方法快速、准确，适用于大批量的细菌计数。
需要注意的是，不同的方法适用于不同类型的细菌和样品，选择合适的方法对准
确测定细菌总数十分重要。
此外，测定细菌总数时需要注意消毒、防止交叉感染等实验操作安全。
细菌总数的测定法
细菌总数的测定法一、细菌数测定的基本概念药品细菌数测定是微生物的定量检查，是用来判断药品被细菌污染程度和卫生质量评价的重要指标，也是检测药品质量的重要指标之一。
细菌计数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH 位、培养温度和时间等）每1g、lml、l0cm2供试品液经培养后所生长的菌落数。
所谓一定条件是按我国药典规定，在需氧条件下，30～35℃，一般培养48h,在营养琼脂培养基平板上生长的细菌菌落数。
细菌数的测定方法有多种：平板法、薄膜过滤法、涂抹法。
药品细菌数测定是活菌计数，最常用的平板法是以平板菌落计数为依据，即每个菌落代表个菌细胞，但有的菌落也可能是多个菌细胞形成，如双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等，很可能是多个菌细胞在一起。
故准确地说，细菌数测定值实际上是菌落形成单位数( CFU)。
平板法菌落计数法，是受一定条件的限制：如供试液是否均质，供试液中的细菌是否充分分散；培养基的质量、培养温度及培养时间的影响；有繁殖能力的菌细胞才能形成菌落，死菌及某此受损伤的细菌或营养要求苛刻的细菌在规定的培养基上不能生长，因而不被计数。
在试验操作中应考虑到这此问题。
二、设施、设备、仪器及器皿1、设施细菌数测定全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净净度l0000级和局部洁净度100 级单向流空气区域内进行，以防止再污染。
2、设备、仪器恒温培养箱（30～35℃）、微波炉、匀浆仪（4000～10000r / min ）、康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果验证并应定期请有关部门检定）菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平（感量0.1g）、pH 值系列比色计、全封闭可拆卸或开放式的薄膜过滤器。
3、器皿锥形瓶（250～300ml ）、培养皿（∮9cm）、量筒（100ml）、试管（18×18mm）、刻度吸管（l ml , 10ml）、载玻片、玻璃或搪瓷、不锈钢消毒缸（带盖）。
细菌总数的测定
细菌总数的测定（平皿计数法）1.概述本法适用于生活用水、循环冷却水及其它水中细菌总数的测定。
也适用于反渗透脱盐水中细菌总数的测定。
敞开式循环冷却水系统细菌总数的要求：≤1×105个/mL。
2.方法介绍本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泥，所得的黏泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在（29±1）℃培养72h来测定黏泥中的细菌总数。
3.试剂和材料3.1 牛肉膏，生化试剂。
3.2 蛋白胨，生化试剂。
3.3 NaCl.3.4琼脂，生物试剂。
3.5 NaOH溶液，40g/L。
3.6 HCl，1＋11溶液。
3.7 乙醇溶液，75％。
3.8 牛皮纸。
3.9 医用脱脂棉。
3.10 医用脱脂纱布。
3.11 石英砂，210～150μm 。
4.仪器和设备4.1 25号浮游生物网。
4.2 量筒，25mL和500mL。
4.3 转子流量计。
4.4 瓷研钵。
4.5 无菌箱（室）或超净工作台。
4.6 蒸汽压力灭菌器。
4.7 生化培养箱。
4.8 电热干燥箱，温度可控制在[（60～280）±2]℃.4.9 刻度吸管，1mL和5mL。
4.10 磨口三角瓶，100mL。
4.11容量瓶，1000mL。
4.12 培养皿，d90mm 。
4.13 三角瓶，500mL。
4.14 搪瓷量杯，1000mL。
5.试验前的准备5.1 培养基的制备称取下列试剂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂15.0g。
将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000mL。
用NaOH 溶液或HCl溶液调节pH值至7.2±2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。
塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器在（121±1）℃下灭菌15min,此为灭过菌的培养基。
5.2 无菌稀释水的制备5.2.1 生理盐水的配制。
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细菌数量的测定方法
1、计数器测定法：
即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:
电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法
常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法
此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重
法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
6、测定细胞总氮量或总碳量
氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。
此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）
这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。
它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作：
（1）.取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
（2）.在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管
（3）.于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。
在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。
至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件而定。