空气细菌总数的测定
空气中微生物的检测
2011.11.21
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一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果计算 五、结果评价
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一、实验目的和意义
掌握检测和计数空气中微生物的基本方法
掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操 作
学习对室内空气进行初步的微生物学评价
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实验意义
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三、实验步骤
1.自然沉降法 配制琼脂培养基（已做） ↓
培养皿暴露空气中5min/10min ↓
37℃温箱培养24h ↓
计数和结果评价
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采样布点原则 a. 根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，
小于50m2的房间应设3个点，50～100m2设3～5个 ；100m2以上至少5个点 b. 采样高度 和人呼吸高度一致（1.2～1.5m） c. 采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,采样 时关闭门窗，减少人员走动
空气中细菌总数常作为室内空气质量和空 气受到微生物性污染程度的指标。
用于医院、公共场所等空气质量的评价
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二、实验原理
1：自然沉降法（沉降平板法）
根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的 作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上， 经过24h，37℃温箱培养计算出菌落数。
特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1～5μm 的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集 率较低。
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各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义
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特点 a. 采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上； b. 采样效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高
低温空气中细菌菌落总数检测方法
附录C
（规范性附录）
空气中细菌菌落总数检测方法
C1测定空气中动态下细菌菌落总数。
C2采用平板暴露法：
车间在30m2以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，将普通营养琼脂平板（9cm直径）按上述采样点和高度布放，暴露15min后立即关盖，于37℃温箱培养24h后观察结果，求出5个或3个采样点的平均菌数。计算公式见式（C1）：
菌数/m3=
50000N
……………；
T——平板暴露时间，min；
N——平均菌落数。
空气中细菌含量的测定
实验室空气中细菌含量的测定
一．实验目的
测定实验室空气中沉降菌的含量，了解实验室的洁净程度。
二．实验原理
空气中漂浮着各种微生物，将盛有无菌培养液的平民放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落在培养基上，然后在37摄氏度的恒温培养箱中培养24h，计数每个培养皿表面的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
三．实验材料
琼脂，锥形瓶，无菌水，电热炉，培养皿，卧室灭菌锅，烘箱，37℃生化培养箱，超净工作台
四．实验方法
称取2.35g琼脂，加热溶解到100ml无菌水，存放于锥形瓶中，用封口膜和牛皮纸包装好锥形瓶。
准备五个培养皿，用牛皮纸包好，和锥形瓶一起放进卧室灭菌锅中灭菌，温度121℃，时间30min。
于无菌工作台上，每个培养皿倒进10ml培养基，待冷却凝固。
分别置于室内同一平面五个不同的点（四角加中央），打开皿盖，暴露15min,盖好平皿盖，37℃恒温箱中培养24h，
五．计算方法
按照奥梅梁斯基氏计算法，面积为100平方厘米的培养基表面5min沉降下来的细菌数相当于10L空气中所含菌落数来计算
细菌数（m³）=N*100/A*5/T*100/10=50000N/AT
(A:平板面积cm2、T平板暴露时间min、N：平板菌落数)。
空气细菌测定
空气细菌测定将采得的空气样品，通过培养，进行细菌菌落计数，或折算成单位体积空气中所含细菌数，对照标准，作出空气清洁或污染程度的评价。
一、沉降平皿法将盛有培养基的平皿持平暴露在空气中一定时间，然后置温箱培养，计算所生长的菌落数。
1．制备培养基常用的营养琼脂培养基含以下成分：牛肉浸膏50g；蛋白陈10g；氯分钠5g；琼脂20g；加水至1000ml。
调节培养基pH7.2～7.4，经15磅30分钟高压灭菌。
2．空气采样（1）选择有代表性的采样点，一般在室内四角及室中央，放置含营养琼脂的平皿。
（2）打开皿盖（将皿盖置于平皿底下，不可仰放，以防污染），将有培养基的平皿，暴露于空气10～20分钟（视空气清洁程度而定），采样毕合上皿盖，记录采样时间。
（3）培养皿置于37℃温箱培养24小时。
（4）记录5个平皿的菌落总数。
3．结果计算：100cm2琼脂面积上，5分钟所降落的菌落数，相当于10L空气所含细菌数，计算结果如下：t——平皿暴露于空气中的时间（分钟）N——培养后，平皿上的菌落总数A——所用平皿的面积（cm2）二、离心式空气微生物采样法（一）原理：采用LWC-1型离心式空气微生物采样器。
当采样器通电后，借助采样器内叶轮的高速旋转，把距离40cm范围内的空气吸进采样器，由于离心力的作用，空气中的粒子冲击到含有琼脂培养基的塑料条上，而空气呈螺旋状离开采样器涡壳流出。
（二）操作步骤1．根据所采细菌种类，往琼脂培养基条上浇灌不同种类的培养基，每条琼脂培养基的注入量约为6ml。
2．把琼脂培养基条，从无菌塑料套中取出，插入采样器头部的涡壳内。
3．根据需要选定采样时间的采样地点。
4．将电源开关拨至“开”的位置，指示灯亮。
5．按动按钮，即起动开始采样。
6．采样完毕，关断电源开关。
将基条从涡壳内抽出，放入无菌塑料套中（将条的凹面对准套的凸面）送恒温箱中进行培养，然后计算菌落数。
7．菌落计算菌落形成单位CFU/m3=琼脂培养基条上的菌落数／40×采样时间（min）琼脂培养基的表面积为34×1cm2。
空气培养细菌总数的卫生学标准
空气培养细菌总数的卫生学标准
空气中的细菌总数是衡量空气卫生状况的重要指标之一。
空气中的细菌数量过
多可能会对人体健康造成影响，因此对空气中细菌总数的卫生学标准有着严格的要求。
首先，根据卫生学标准，空气中细菌总数的测定方法应当符合相关的规范和标准。
通常采用的方法是空气采样后在培养基上进行培养，然后通过计数方法来测定细菌总数。
这一过程需要严格控制培养条件和操作流程，以确保测定结果的准确性和可靠性。
其次，根据卫生学标准，空气中细菌总数的限定值应当符合相关的卫生标准。
一般来说，不同场所对空气中细菌总数的要求也有所不同。
例如，医疗机构、食品加工场所等对空气中细菌总数的要求更为严格，而一般办公场所、居住区域对空气中细菌总数的要求相对较低。
这些限定值的制定应当考虑到不同场所的特点和实际需求，以保障人们的健康和安全。
此外，根据卫生学标准，空气中细菌总数的监测和管理应当符合相关的规范和
要求。
定期对空气中细菌总数进行监测，及时发现和处理空气污染问题，是保障空气卫生的重要手段。
同时，对空气中细菌总数的管理也需要建立健全的制度和措施，加强对空气质量的管理和控制。
总的来说，空气培养细菌总数的卫生学标准是保障空气卫生的重要依据，对空
气中细菌总数的测定、限定值的制定以及监测和管理都有着严格的要求。
只有严格遵守这些标准和要求，才能有效保障人们的健康和安全。
因此，各相关单位和个人都应当重视空气培养细菌总数的卫生学标准，加强对空气质量的管理和控制，共同营造一个清洁、卫生的空气环境。
试验 公共场所空气微生物细菌总数测定
3 开 2min 80L
4 开 4min 160L
1~4 关 8min 320L
实验注意事项
空气微生物采样应尽量避开空调、门窗气 流量变化较大的区域
采样前与相关公共场管理部门有效的协调 平皿中营养琼脂厚度和制备水平，避免出
现气泡 沉降平板法平皿盖的放置 撞击式空气采样时要注意消毒和无菌操作 采样高度的选择：中心空调出风口
风速 采样者
Ⅵ
0.25
0.65-1.1
FA-1型六级筛板固体撞击式空气微生物采样器
筛板孔径范围 I 1.18um II 0.25um
捕获粒子范围 I >7.0um II 0.65um~1.0um
JWL-2 二级筛板固体撞击式空气微生物采样器
FA-1型撞击式空气微生物采样器采样
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿约8ml营养琼脂 ２采样器的消毒和安装 ３采样时间和流量： 时间根据空气状况，流量28.3L/min ４ 37℃培养48h (24h)
5 取出采样平皿，平皿加盖。依次编号。
6 细菌培养 采样平皿带回实验室，37℃ 48h
Andersen 采样器 各级喷嘴孔径及捕获粒子大小范围
级别 Ⅰ Ⅱ
喷嘴孔径 mm 1.80 0.91
捕获粒子 um ≥7.0 4.7-7.0
Ⅲ
0.71
3.3-4.7
Ⅳ
0.53
2.1-3.3
Ⅴ
0.34
1.1-2.1
5 样品培养 采样平皿带回实 验室，37℃ 48h
JWL－1A型 单级固体撞击式空气微生物采样器
JWL－1A型空气微生物采样器
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿5ml营养琼脂 ２调整采样器的采样时间和流量：20L/min，1~3min ３采样头的消毒和平皿的安装 ４现场采样，信息记录 ５ 37℃培养48h (24h)
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定一、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。
空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。
空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。
空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。
某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。
因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。
----测定方法--平皿沉降法二、测定原理空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
三、试剂营养琼脂1、成分A蛋白胨 1gB牛肉膏 0.3gC氯化钠 0.5gD琼脂 1.5gE蒸馏水1000mL2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
空气细菌数量的检测（共5篇）
空气细菌数量的检测（共5篇）第一篇：空气细菌数量的检测空气细菌数量的检测引言：与外界相通的各个空间的空气中均有大量的细菌存在，且种类繁多，而这些微生物中绝大多数对我们人体来讲都是有益的，但其中也有一部分微生物往往是实验室各种实验材料、实验菌种污染的祸根，也是引起人类各种传染性疾病的祸根。
因此，对空气进行细菌学检验，目的在于调查气溶胶扩散的范围、滞留时间及浓度；确定空气中病原体种类；研究呼吸道传染病传播机制及气雾免疫的应用；考核空气卫生学及消毒效果，树立“处处有菌”和严格的消毒与灭菌观念。
而处于学院的我们来说，学院空气质量的好坏与师生们的生活与学习息息相关，通过沉降法检测细菌总数来判断空气中的卫生状况与污染程度并了解空气质量显得至关重要。
材料与方法：（一）仪器与材料1、普通营养琼脂平板（由中山大学新华学院医学实验室提供）2、恒温培养箱（中山大学新华学院医学实验室提供）（二）采样地点按照《室内空气质量标准》的要求进行采样布点，选取新华学院的图书馆、西门口、校道、教学楼以及微生物实验室。
（三）采样时间及方法采样时间为2014年9月1日下午两到四点，采样天气为晴朗无雨，采样方法为自然沉降法。
沉降法是以微生物在空气中能随尘粒下降的原理，将平板平放在空气中暴露一定时间，使空气中的细菌直接沉降至培养基表面，然后置37摄氏度孵育24小时，计算菌落数。
实验方法：a.取用普通营养琼脂平板5个（直径7cm），在皿底做上标记；b.采用自然沉降法收集细菌，采用地点为新华学院的各个指定地方。
将平板打开，平板盖朝下放置在平板旁，分别暴露于空气中20分钟，然后盖好。
并注明采样的地点和暴露的时间；c.平板放置于37℃的恒温培养箱培养24小时后取出后观察，计算出所生长的菌落数和数量。
（四）菌落数计算按下列公式可得出空气中细菌总数。
每立方米细菌数=50,000N/AT A:所用平板面积（平方厘米）；T:平板暴露于空气中的时间（分钟为单位；N：平板上的菌落数实验结果使用实验室提供的营养琼脂平板，在学校各个地方收集空气中的细菌，培养空气中的细菌，并经过实验室的空气细菌培养24h后，得出以下数据：样本号 1 2 3 4 5 6 7 8 采样地点图书馆西门口校道采样时间/min平板上菌落数20 20 5 15 12 3 4 7 0 微生物实验室厕所微生物实验室楼梯教学楼 20 微生物实验室 20 微生物实验室办公室1、由上述数据可知校园内的空气质量较好；2、各采样点的空气菌落对比：校道>微生物实验室厕所>微生物实验室>西门口>教学楼>微生物实验室楼梯>图书馆>微生物实验室办公室。
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空气细菌总数的测定
一、实验原理
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。
空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。
空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。
空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。
某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。
因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。
----测定方法--平皿沉降法
二、测定原理
空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
三、试剂
营养琼脂
1、成分
A蛋白胨 1g
B牛肉膏 0.3g
C氯化钠 0.5g
D琼脂 1.5g
E蒸馏水1000mL
2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
四、仪器设备
1、高压蒸汽灭菌器
2、干热灭菌箱
3、恒温培养箱36±1℃
4、电炉
5、天平
6、冰箱
7、放大镜或菌落计数器
8、 pH计或精密pH试纸
9、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。