公共场所空气微生物检测方法——细菌总数测定
空气中菌落总数计算公式
空气中菌落总数计算公式
计算空气中菌落总数的方法有很多，以下是两种常用的方法：
1. 采用平皿沉降法测定空气中菌落总数，计算公式为：细菌数（CFU）/
m3=N×100/A×5/T×1000/10=50000N/AT。
其中，A代表平板面积（cm2），T代表平板暴露时间（min），N代表平板平均菌落数（CFU）。
2. 菌落总数的计算公式为：菌落总数=（检测样品中菌落数量/空气采样量）×（采样时间/采样量）。
其中，检测样品中菌落数量是实验室检测得出的结果，一般使用平板计数法进行测定。
空气采样量是指在单位时间内采集的空气体积，常用立方米（m³）表示。
采样时间是指进行空气采样的时间，常
用分钟表示。
采样量是指从环境中采集的样品量，常用毫升（mL）表示。
以上信息仅供参考，如需了解更多信息，建议查阅相关书籍或咨询专业人士。
空气细菌总数测定中自然沉降法和撞击法的应用与比较
空气细菌总数测定中自然沉降法和撞击法的应用与比较摘要：目的：对自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的应用效果进行探究。
方法：选择酒店室内和室外以及万级实验室作为研究对象，分别使用自然沉降法与撞击法来获得三个环境中空气细菌总数情况，对测定结果进行对比分析。
结果：空气细菌总数的自然沉降发和撞击法测定结果存在正的线性相关关系，在测定灵敏度上，撞击法优于自然沉降法（P＜0.05），差异有统计学意义。
结论：撞击法具有较高的灵敏度，能够较为准确的反映空气中细菌含量情况，但当采样时间较长时，其准确度会下降。
关键词：自然沉降法；撞击法；空气细菌总数；应用效果比较随着人们保护意识的不断增强，对空气环境的质量提出了更高的要求，细菌等空气微生物的危害得到人们的充分重视，加强空气细菌的检测，对于提高控制质量水平十分重要[1]。
本文就对分别选择了酒店室内和室外以及公司无菌实验室空气环境为研究对象，探讨自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的效果，以提高空气细菌检测工作水平，现报道如下：1材料和方法1.1实验材料仪器准备，空气微生物采样器，型号TYK-6型；营养琼脂培养基，批号20131125-00；培养皿，直径9cm。
1.2空气环境采样对象：某酒店室内和室外以及公司万级实验室。
1.3空气细菌总数测定方法1.3.1自然沉降法测定1.3.1.1根据现场大小，选择3~5个采样点（室内面积不足50m2，设置3个采样点；50m2以上的设置5个采样点；采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。
）采样高度为1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m，避开通风口、通风道等。
1.3.1.2将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，分别自然暴露在空气中，时间为5min和10min，盖上皿盖，采样完成。
1.3.1.3将平板倒置放入35℃~37℃恒温培养箱中，培养48h后取出，进行菌落计数[4]。
公共场所卫生制度公共场所卫生检验方法
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公共场所卫生标准监测检验方法
GB/T18204.1-18204.30-2000 公共场所卫生标准查验方法>>>> GB/T18204.1-2000 公共场所空气微生物查验方法细菌总数测定>>>> GB/T18204.2-2000 公共场所茶具微生物查验方法细菌总数测定>>>> GB/T18204.3-2000 公共场所茶具微生物查验方法大肠菌群测定>>>> GB/T18204.4-2000 公共场所毛巾、床上卧具微生物查验方法细菌总数测定 >>>> GB/T18204.5-2000 公共场所毛巾、床上卧具微生物查验方法大肠菌群测定 >>>> GB/T18204.6-2000 剪发器具微生物查验方法大肠菌群测定>>>> GB/T18204.7-2000 剪发器具微生物查验方法金黄色葡萄球菌测定>>>> GB/T18204.8-2000 公共场所拖鞋微生物查验方法霉菌和酵母菌测定>>>> GB/T18204.9-2000 游泳池水微生物查验方法细菌总数测定>>>> GB/T18204.10-2000 游泳池水微生物查验方法大肠菌群测定18204.11-2000 公共场所浴盆脸 (脚)盆微生物查验方法细菌总数测定 >>>> GB/T18204.12-2000 公共场所浴盆脸 (脚)盆微生物查验方法大肠菌群测定 >>>> GB/T18204.13-2000 公共场所空气温度测定方法>>>> GB/T18204.14-2000 公共场所空气湿度测定方法>>>> GB/T18204.15-2000 公共场所风速测定方法>>>> GB/T18204.16-2000 公共场所气压测定方法>>>> GB/T18204.17-2000 公共场所气辐射热测定方法>>>> GB/T18204.18-2000 公共场所室内新风量测定方法>>>> GB/T18204.19-2000 公共场所室内换气率测定方法>>>> GB/T18204.20-2000 公共场所采光系数测定方法>>>> GB/T18204.21-2000 公共场所照度测定方法18204.22-2000 公共场所噪声测定方法>>>> GB/T18204.23-2000 公共场所空气中一氧化碳测定方法>>>> GB/T18204.24-2000 公共场所空气中二氧化碳测定方法>>>> GB/T18204.25-2000 公共场所空气中氨测定方法>>>> GB/T18204.26-2000 公共场所空气中甲醛测定方法>>>> GB/T18204.27-2000 公共场所空气中臭氧测定方法>>>> GB/T18204.28-2000 游泳水温度测定方法>>>> GB/T18204.29-2000 游泳水中尿素测定方法>>>> GB/T18204.30-2000 海滨游泳水透明度测定方法。
空气微生物分析检测实施细则
空气微生物分析检测实施细则细菌总数依据标准：GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物细菌总数撞击法/自然沉降法；HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室内空气中细菌总数的测定方法撞击法一、撞击法1原理1.1检测方法原理：采用撞击法采集空气微生物，至无菌营养琼脂培养基上，再适宜的温湿度下培养出菌落数，通过菌落的数目间接检测出空气中细菌总数。
1.2采样器工作原理FA-1型六级筛孔撞击式空气微生物采样器模拟人体呼吸道的解剖结构及其空气动力学特征，采用惯用撞击原理，将悬浮在空气中的微生物粒子，按大小等级分别收集在采样介质表面上，然后共培养及做进一步微生物分析，求出空气微生物粒子数量及其大小分布的特征。
2. 检测项目细菌总数3.仪器设备3.1六级筛孔撞击式空气微生物采样器3.2高压蒸汽灭菌器3.3生化培养箱3.4直径90的平皿。
3.5超净工作台4.六级筛孔撞击式空气微生物采样器主要参数如下:4.1高压蒸汽灭菌器：日本松下MLS－3781L－PC型高压蒸汽灭菌器，具有4个灭菌及保温程序。
配置灭菌筐 3个，排水管1，沸水桶1个（另配2灭菌桶用于废弃培养基进行灭菌处理），可实行（115~135）℃，灭菌时长（1~300）min，紧凑设计，占空间小。
语音提示，全自动操作，快速灭菌。
4.2六级筛孔撞击式空气微生物采样器技术参数4.2.1型号FA-1型，捕获率：≥98％4.2.2捕获粒子范围：第一级＞7.0um 孔径1.18mm第二级 4.7-7.0um 孔径0.91mm第三级 3.3-4.7um 孔径0.71mm第四级 2.1-3.3um 孔径0.53mm第五级 1.1-2.1um 孔径0.34mm第六级0.65-1.1um 孔径0.25mm4.2.3采样流量28.3L/min（可调节）4.2.4电源：A V220V 功率：35W4.2.5体积：Φ108mm x 192mm 主机:长230mm x宽145mm x 高170mm5 实验步骤5.1采样平皿的制备5.1.1配置琼脂培养基。
空气细菌培养的采样方法
1 空气细菌培养的采样方法检测空气细菌总数的细菌培养法平板暴露法。
此法简便，目前大部分医疗单位采用。
在消毒处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。
基本原理是：空气中细菌等微生物可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好营养琼脂平板，采样高度距地面0.8～1.5m，采样时，将平板盖打开，暴露5min或10min，盖好平板。
将平板置于37℃恒温箱培养48h计算菌落数。
2 细菌数的计算方法细菌总数（cfu/m3=4500N/A×T）式中A=平板面积（cm2） T——平板暴露时间（min） N——平均菌落数（cfu）这个计算公式是根据在面积100cm3的培养基表面，5min内能落下的细菌相当于10L 空气中含的细菌数而推算出来的。
3 空气消毒效果和污染状况的评价空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细菌总数≤500cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格。
Ⅰ类环境包括层流洁净手术室和层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。
Ⅱ类环境包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房、采用循环风紫外线空气消毒器或静电吸附式空气消毒器，这类均为有人房间，必须采用对人无毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生物减到此标准以下。
Ⅲ类环境包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房室和房间，采用紫外线消毒，化学消毒剂熏蒸或喷雾消毒。
据统计，目前世界上有41种主要传染病，其中经空气传播的就有14种，占首位［1］。
公共场所微生物检验结果的报告方式
公共场所微生物检验结果的报告方式开展公共场所卫生检测工作，并对其结果进行卫生学评价，出据检验报告是疾病预防控制工作中一项十分重要的工作。
在实行计量认证以后，要求评价和检验结果要严格按照国家卫生标准进行，但笔者在这几年的工作中发现，公共场所微生物检验结果的报告方式不太明确，与《公共场所卫生标准》[1] 的评价方式有所不同，经文献查阅，发现与<关于《公共场所卫生标准检验方法》结果报告方式的理解探讨>[2] 也存在着一些分歧。
为此，笔者就《公共场所卫生标准检验方法》--2000[3] 中微生物结果报告方式结合自己的理解提出了一些建议，以供大家在今后的工作中参考和改进。
1 公共场所空气细菌总数的报告方式1.1 撞击法以cfu/m3报告。
cfu/m3=生长的平均菌落数/空气流量/采样时间×1000，保留整数，数字修约按四舍六入五留双的原则，大于100保留2位有效数字。
报告方式与国家卫生标准相符合。
1.2 自然沉降法以cfu/皿报告。
平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，有几个算几个，保留整数，数字修约按4舍6入5留双的原则，大于100保留2位有效数字。
报告方式与国家卫生标准相符合。
2 公共场所茶具微生物的报告方式2.1 细菌总数的报告方式以cfu/cm2报告。
cfu/cm2=平均菌落×稀释倍数/50。
国标GB9663-1996中茶具细菌总数的单位与GB/T18204.2-2000中表1用的单位cfu/ml是一致的，而计算公式却是cfu/cm2。
笔者认为是不可以等同的，根据样品的采样方法来看，结果的报告应与采样的面积（S）和体积(V)有关，单以cfu/ml报告不准确，而应以cfu/cm2报告较为妥当。
若所有稀释度均无菌落生长时，按照GB/T18204.2-2000中9.6所述，报告数为<1cfu/ml，若以cfu/cm2报告就必须根据采样面积（S）和体积（V）进行计算，当S=50cm2，V=10ml 时，结果菌落数<1cfu/ cm2；再根据计算公式，当采样面积S=50cm2，采样体积V=10ml时，菌落数也为<1cfu/cm2。
公共场所卫生检验方法 空气微生物细菌总数的测定方法证实
公共场所空气细菌总数的测定一、项目概述依据GBT 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法空气微生物细菌总数的测定撞击法。
公共场所空气中采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃～37℃、48 h培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
本部分适用于公共场所空气中细菌总数的测定。
二、仪器2.1六级筛孔撞击式微生物采样器。
2.2高压蒸汽灭菌器。
2.3恒温培养箱。
2.4平皿：90 mm。
三、培养基与试剂3.1. 平板计数营养琼脂成分：A 牛肉膏 3gB 蛋白胨 10gC 氯化钠 5gD 琼脂 10～20gE 蒸馏水 1L将上述成分加于蒸馏水中，加热溶解，调节pH值为7.4～7.6，分装于玻璃容器中，121℃高压灭菌20分钟，储藏于冷暗处备用。
3.2. 无菌生理盐水的配制称取8.5g氯化钠溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌30分钟。
四、采样4.1 采样点：4.1.1室内面积不足50m2的设置3个采样点，50m2以上的设置5个采样点。
4.1.2采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。
4.1.3采样点距离地面高度1.2 m～1.5 m，距离墙壁不小于1m。
4.1.4采样点应避开通风口、通风道等。
4.2 采样环境条件：采样时关闭门窗15 min～30 min，记录室内人员数量、温湿度与天气状况等4.3 采样方法：采样方法：以无菌操作，使用撞击式微生物采样器以28.3 L/min流量采集5min～15 min。
采样器使用按照说明书要求进行。
五、检验步骤将采集细菌后的营养琼脂平皿置35℃～37℃培养48 h，菌落计数。
六、菌落计数及报告方法6.1采样点细菌总数结果计算：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3（每立方米空气中菌落形成单位）。
6.2一个区域细菌总数测定结杲：一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值中的最大值给出。
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空缺中微生物检验方法
菌落总数测定
自然沉降法
1 原理：指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，经37℃、48h培养后，计数生长的细菌菌落数的采样检测方法。
2 仪器：
2.1 高压蒸汽灭菌器
2.2 恒温培养箱
2.3 冰箱
2.4 平皿（直径9cm）
2.5 制备培养基用一般设备
3 培养基
3.1 成分：
蛋白胨10g
牛肉浸膏3g
氯化钠5g
琼脂15～20g
蒸馏水1000mL
3.2 制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min 高压灭菌，用自然沉降法时倾注约15mL于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
4 操作步骤：
4.1 设置采样点时，应根据现场大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点，该点与四墙角对角线的中点为另4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m。
采样点应远离墙壁1m 以上，应避开空调、门窗等空气流通处。
4.2 将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min，盖上皿盖，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱中，培养48h。
4.3 计数每块平板上生长的菌落数，球场全部采样点的平均菌落数。
以每平皿菌落数（cfu/皿）报告结果。