实验一 槐米中芦丁的提取 分离和鉴定
槐米中芦丁的提取、水解和鉴定
槐米中芦丁的提取、水解和鉴定实验简介槐米系豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。
能凉血止血，清肝泻火。
药理实验证明芦丁有调节毛细血管渗透作用，临床上可作为毛细血管脆弱引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
其有效成分为芸香苷，又称芦丁(rutin)，含量可高达12～20％。
芦丁为槲皮素-3-O-芸香糖苷，淡黄色粉末或细针状结晶，含3分子结晶水（C 27H 30O 16•3H2O ），mp.177~178℃，无水物mp.188~190℃。
溶解度:冷水中的溶解度为1﹕10000，沸水中1﹕200，冷乙醇1﹕650，沸乙醇1﹕60，沸甲醇中1﹕7，可溶于丙酮、乙酸乙酯、吡啶及碱液中，不溶于三氯甲烷、乙醚、苯及石油醚。
芦丁水解后得槲皮素，槲皮素为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水（C 15H 10O 7•3H2O ），mp.313~314℃（分解），无水物mp.316℃。
溶解度:热乙醇中1﹕23,冷乙醇中1﹕300,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶与冰醋酸等，不溶于水、三氯甲烷、乙醚、苯与石油醚等。
本实验应用碱溶解酸沉淀法，重结晶法，酸水解法，纸色谱法，紫外光谱分析法对槐米中芦丁进行提取、水解和鉴定。
O O HO OH O OHOHO O OH OHOHH 2CO OH OH CH 3OH 3H 2O 芦丁 O HO OH OH OH 槲皮素实验原理1、提取精制的原理：芦丁分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又可沉淀析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
芦丁的精制可根据其在冷、热水（或冷、热乙醇）中溶解度相差悬殊的性质进行。
2、鉴定的原理：利用纸色谱的吸附分配原理，将样品和对照品在同一条件下展开显色，判断芦丁和槲皮素的Rf值，达到鉴定的目的。
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断化合物羟基的位置。
槐花米中芦丁的提取分离和鉴定
五、思 考题
❖ 苷类结构的检识大体程序如何？ ❖ 苷类水解的方法？ ❖ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素
3-OH上？ ❖ 苷元的结构怎样确定？ ❖ 怎样确定苷键的构型？
六、实验课后总 结与讨论
❖ 芦丁提取 ❖ 芦丁的分离纯化 ❖ 芦丁的理化鉴别 ❖ 芦丁的苷元-槲皮素的制备 ❖ 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
▪ 芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、 乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
▪ 芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇 中1:60，沸甲醇中1:7
▪ 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中， 酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
碱溶酸沉法原理
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 ❖ 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯
(365nm)下观察。
5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
❖ 样品：自制芦丁。 ❖ 实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。 ❖ IR谱图与芦丁标准谱图对照。 ❖ DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
四、注意事 项
调节 PH8-9
1.5g CaO 加10ml水
直火加热
保持微 沸
注3意0m及时in补充水
和石灰乳，维持 PH 8~9
双层滤纸趁 热抽滤
• 趁热抽滤时，注意防 止滤液因减压而沸腾。
滤液 残渣
在60-70度下，用 浓盐酸调PH3-4
静置
2、芦丁的精制与水解
第一次实验所得滤液
• 酸水解过程ຫໍສະໝຸດ 抽滤中，注意补充由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实 验是根据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异 的特性进行提取和精制，或根据芦丁分子中 具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大 溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液 加酸酸化后则芦丁游离析出。
槐米中芦丁的提取分离与鉴定(1)
芦丁
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
OH OH
HO
O
O OH OH O OH OH OH OH OH O CH2O O
用于治疗毛细管脆弱引 起的出血病，并用作高 血压的辅助治疗剂。
芦丁
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O O 4'
性状：黄色针状结晶（稀乙醇）。 溶解度：冷乙醇中1:300，热乙醇中 1:23。可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 冰乙酸、吡啶，不溶于水、氯仿、乙 醚、苯和石油醚等。
注意观察现象：未加热时，瓶悬 液逐渐变为澄清液（芦丁易溶于热水）， 继续加热，有鲜黄色沉淀析出（槲皮素不 溶于水）
滤液处理： 取芦丁水解后的滤液15m1，加 氢氧化钡粉 中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸 钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后， 加1－2 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。 （如果加 氢氧化钡加过量后可以加少量的硫 酸回调pH)
天然药物化学实训
项目一 槐米中芦丁的提取分离 与鉴定
实训目的
能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对 槐米中的芦丁进行提取分离 能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进 行水解 能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别 芦丁、槲皮素和糖类化合物
实训结果
得到两个单体化合物
OH OH
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O O 4'
芦丁的提取分离与鉴定
子项目三 芦丁 和槲皮素的鉴别
糖 的 鉴 定
残渣
水解所得滤液20ml
用饱和Ba(OH)2调PH值至中 性，折叠滤纸过滤
滤液 蒸干，放冷 加2-3ml乙醇溶解 供试品溶液 纸色谱
中药化学 实验 槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备
槲皮素的制备
精品芦丁(0.2g)
放入150ml圆底烧瓶中，加入2%稀硫酸50ml, 空气冷 凝直火加热（电炉上放石棉网）40分钟，放冷抽滤。
沉淀
滤液
水洗至中性抽滤、干燥。 取10ml，加氢氧化钡约1g,调PH7.5,过滤。
沉淀
滤液 水浴浓缩至1~2ml
浓缩液（备检查糖用）
4、芦丁、槲皮素的鉴定
（1）试管定性反应： ①HCI-Mg粉反应
行酸水解得到槲皮素
[实验流程]
1、提取
槐米（20g）
加水煎煮两次，趁热过滤合并煎煮液
药渣
煎煮液
放置4~5h，抽滤
沉淀
自然干燥
粗品芦丁
2、精制
粗品芦丁
加甲醇15~20ml，水浴加热（空气冷凝） 溶解， 至无黄色物，趁热过滤。
沉淀
滤液
放置，待结晶析出，抽滤至干。
沉淀
干燥
精品芦丁
注意：
1、甲醇量可以适当增加。 2、注意控制回流温度。 3、回流时间以芦丁完全溶解为准。
取样品的乙醇溶液1ml加少许镁粉，再加浓 HCI 1~2滴，观察颜色。 ②FeCl3反应
取样品的乙醇溶液1ml加1%的FeCl3乙醇溶 液2~3滴，观察颜色。 ③中性醋酸铅反应
取样品的乙醇溶液1ml加5%的中性醋酸铅溶 液1~2滴，观察现象。
④α-萘酚、浓H2SO4反应 取样品的乙醇溶液1ml加α-萘酚试液1~ 2滴
实验
槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备
[实验目的]
1.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、 苷元的结构研究的一般方法；
2.熟悉根光谱的测定方法。
实验原理
➢提取原理：芦丁在冷热水中的溶解度差异； ➢纯化原理：芦丁在冷热甲醇中的溶解度差异 ➢制备原理：槲皮素为芦丁的苷元，因此可进
槐米中芦丁的提取,分离与鉴定实验报告
槐米中芦丁的提取,分离与鉴定实验报告一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
二、实验原理芦丁:浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。
溶解度:1:8000;热水1:200;冷乙醇1:300;热乙醇1:30;冷甲醇1:100:热甲醇1:10.槲皮素:黄色结晶，mp313℃-314℃，能溶解于冷乙醇，易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙酯等;难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。
本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取:取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟，并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。
浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。
五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。
在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。
槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。
PH应严格控制8-9，不得超过10,。
因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。
酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。
2、提取过程中加入硼砂作用:保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐米中芦丁的提取与分离摘要：利用芦丁在沸水中溶解度大的性质将其在沸水中进行提取，而芦丁与其他水溶性化合物可借助聚酰胺柱色谱予以分离。
关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定1 引言芦丁（Rutin ）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素（Quercetin ）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose ）〔葡萄糖（Glucose ）与鼠李糖（Rhamnose ）组成的双糖〕脱水形成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子结晶水，熔点为174~178℃，不含水的芦丁熔点为188℃。
含2分子结晶，熔点为313~314℃。
水溶解度：冷水中为1:10000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
不含结晶水的槲皮素熔点为316℃，它们的结构式如下：OHOHO O OHO OOH OHOH OHOH CH 2CH 3OH O O OH芦丁（Rutin ）O OHO OH OHOH槲皮素（Quercetin ）芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。
2 实验内容与步骤2.1仪器与试剂仪器：紫外灯 蒸馏装置一套 250mL 烧杯（一只） 500mL 烧杯（两只） 100mL 三角瓶（两只） 纱布 色谱柱（Ф1.5×30cm ） 玻璃板 硅胶G 板试剂：甲醇 70%工业乙醇 槐米 层析用聚酰胺（60-100目） 芦丁标准样2.2 芦丁的提取将粉碎好的槐米10g 倒入500mL 烧杯中，加沸水150mL ，煮沸1h(在煮沸的过程中可补加水），趁热用纱布过滤，残渣加入100mL 水，再煮沸30分钟，共进行两次，将两次滤液混合，放置，冷却，即有大量黄色沉淀生成，抽滤。
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
槐米中芦丁的提取和精制实验报告
实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）实验目的要求1.制备芦丁，供药用。
2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
3.熟悉重结晶技巧。
4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
（二）实验的基本原理1.芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
(三) 实验内容1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。
2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。
3. 溶剂重结晶精制芦丁。
4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材槐米20g。
2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml 园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。
3. 试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。
（五）实验步骤1.提取（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，趁热过滤。
残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。
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实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
一、概述
槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。
具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。
近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。
槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。
主要化学成分的结构及理化性质：
芦丁（rutin）：C
27H
30
O
16
·3H
2
O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃
（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin）：C
15H
10
O
7
·2H
2
O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃
（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分
（一）实验目的
1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。
（二）实验原理
1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。
（三）实验药材、仪器与试剂
1、药材：槐米50g(每组)。
2、仪器：电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml烧杯、冰箱、滤纸、PH试纸、减压抽
滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。
3、试剂：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。
（四）实验方法
1、芦丁的提取：（碱提酸沉法）
取槐米50g，加0.4%硼砂水溶液400ml至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节PH=9，加热微沸30min，随时补充失去的水分及控制PH值，四层纱布过滤，药渣再重复处理一次（不用调PH值）。
合并两次滤液，用浓盐酸调PH=3，放入冰箱中析晶。
2、芦丁的精制：（水重结晶法）
（1）抽滤：用虹吸法先除去上清液，再进行抽滤，可更换滤纸。
（2）精制：取全部芦丁粗品，加入蒸馏水800ml，煮沸至全部溶解（15min），趁热抽滤，放入冰箱析晶。
3、芦丁的水解：（酸水解法）
取芦丁1g，加入2%硫酸150ml，小火加热微沸30min，注意观察现象：溶液由浑浊变澄清，逐渐析出黄色结晶，抽滤，得到槲皮素粗品。
剩下的芦丁要妥善保管，下次课还要带来。
4、鉴别反应
（1）称槲皮素重量，计算水解率。
（2）薄层色谱鉴定
样品：自制芦丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液。
（每组称取20mg）
对照品：芦丁及槲皮素对照品的1mg/ml甲醇溶液。
展开剂：90%乙醇溶液
显色：喷三氯化铝溶液，紫外光（365nm）观察荧光。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
（3）显色反应
①Molish反应：取芸香苷及槲皮素样品分别1ml，加入3%α-萘酚溶液1滴，振摇，沿壁滴加浓硫酸1ml，观察现象。
②盐酸-镁粉反应：分别取样品1ml，加入浓盐酸2-3滴，再加入少许镁粉，观察现象。
③纸片反应：取一张滤纸，分别滴加样品1滴，在上面再滴加三氯化铝溶液1滴，
观察现象。
（同理，再用醋酸镁显色）
（五）注意事项
1、提取时控制小火加热，微沸即可。
2、加热完成后要放冷抽滤。
3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。
但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
4、用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（PH2以下）会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。
5、Molish反应中加入浓硫酸后不可振摇。
6、纸片反应待溶液干燥后观察荧光效果好，否则荧光颜色淡或没有。
（六）思考题
1、如果碱或酸加过量会对实验有何影响？
2、加石灰乳和硼砂分别有何目的？。