抑菌效果的检测方法
抑菌效力检查法---原理和意义汇总
概述 抑菌效力检查的原理和意义
一、异常毒性的概念
（一）抑菌效力检查的原理 抑菌效力检查是采用微生物法进行，供 试品中含有的抑菌剂会对加入其中的微生物 产生抑制作用，时间越长抑制作用越强，存 活的微生物数量越少。
（二）抑菌效力检查的意义
添加抑菌剂是药物制剂防腐，保障 药品质量的一项重要措施，抑菌效力检查 是用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性 。因此，抑菌效力检查对于检测、评价和 保障药品质量意义重大。
第一，在药品的研发阶段，无论是添加抑
菌剂，还是药物本身具有抗菌活性，都应 通过抑菌效力检查确认其抗菌效力。 第二，在药品的生产阶段，在药物制剂的 制备过程中要完全防止微生物污染是很困 难的，通过加入适当的抑菌剂可以有效达 到抑菌防腐的目的。抑菌效力检查可以帮 助筛选和确定抑菌剂及其使用浓度。
第三，在药品的贮存阶段，抑菌剂的效力
可能因贮存时间、贮存条件、药品包装材 料等因素发生变化，抑菌效力检查可以检 查成品制剂的抑菌效力在有效期内是否发 生变化。
对于加入抑菌剂的药物制剂，在生产 与贮存期间应该符合《中华人民共和国药 典》（2015年版）抑菌效力检查法（通பைடு நூலகம்则1121）的有关要求。
抗菌测试检测标准
抗菌测试检测标准
抗菌测试是评价物质抑制或杀灭细菌或其他微生物能力的方法。
下面是常见的抗菌测试方法和相关的标准：
1. 纸片扩散法（Disk diffusion method）：根据CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）标准进行抗菌活性测试。
该
标准包括了对不同细菌株和药物的测试方法和结果解读标准。
2. 最小抑菌浓度法（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）：根据CLSI或欧洲常用测试方法（EUCAST，European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing）进行细菌的
药敏性测试。
该测试可以确定药物对细菌的最低有效抑制浓度。
3. K-B法（Kirby-Bauer method）：也是一种常用的纸片扩散法，测定细菌对抗生素的药敏感性。
除了上述各种抗菌测试方法外，还有许多其他的标准和指南可供参考，例如：
- 美国药典（USP，United States Pharmacopeia）中的相关方法
规范。
- 欧洲抗菌药物开发委员会（EUCAST）的药敏性测试指南。
- 中国药典（ChP，Chinese Pharmacopoeia）中的抗菌药物相关标准。
这些标准和指南提供了在实验室中进行抗菌测试的具体步骤和结果的解释。
根据不同的应用领域和目的，选择合适的标准进行抗菌测试非常重要。
微生物的抑菌圈检测方法
抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。
通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。
用具和材料霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。
试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。
2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。
3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。
4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。
注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。
2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。
3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。
也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。
5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。
结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。
抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。
在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。
此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。
抑菌类产品抑菌性能测试方法
其他菌种
其他菌种
白念、铜绿
液体、凝胶、固体 液体、凝胶、固体 液体
0.5mL混合液 +5mLPBS 对照组用染菌载片
5×105~5×106
直接取样
0.5mL混合液 +4.5mLPBS
对照组是同材质不
/
含抑菌成分的样品
5×105~5×106
1×104~9×1 04
THANK YOU
演示完毕感谢观看
20min 20min30s 21min 21min30s 27min 27min30s
WS650：产品测试浓度样液与加入其中的菌 作用完成后，直接取样（即不做稀释）于平皿 中作活菌菌落计数
QB2738：取试验菌与样品混合液0.5mL加 入到含4.5mL经灭菌的PBS试管中
0 2 载 体 抑 菌
抑菌类产品抑菌性能测试方法
➢ GB15979-2002《一次性使用卫 生用品卫生标准》—附录C4、C5 ➢ QB/T 2738-2012《日化产品抗 菌抑菌效果的评价方法》 ➢ 消毒技术规范 ➢ WS/T 650-2019《抗菌和抑菌 效果评价方法》
液体类
凝胶类
固体类
适用产品性状
15979 2738 消规 650
常用菌株
1
2
3
金黄色葡萄球菌 ATCC6538
大肠杆菌8099 白色念珠菌ATCC10231
0 1 悬 液 法
浓度为5×106~4.5×107cfu/mL
作用至一定时间后，吸取0. 5 mL样液至含5 mL PBS的试管内
滴加0.1mL菌悬液
2min 5min 5mL样液 2min 5min
10min 20min
作用至一定时间后，将样片夹至含5 mL PBS的试管内
抑菌效果的检测方法
抑菌效果的检测方法：将抗生素菌株进行平板划线分离，长出单菌落后，在421房间的超净工作台上找到直径7mm的打孔器（只有一个，请大家不要拿到其它地方去！），用该打孔器在单菌落上打取菌落块，若菌落块卡在打孔器内，请用接种针挑出来，将菌落块以菌落面向上的方式放置在已经涂布有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的平板上，培养48小时后测量抑菌圈的直径。
发帖位置: Tuesday, March 25, 2014微生物学实验安排及自主实验要求第6周：1.口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用；第7周：2.培养基的制备；3.高压蒸汽灭菌；第8周：4.土壤中微生物的分离；第9周：5.微生物菌落的观察；6. 微生物的分离纯化与菌种保存第10周：7.细菌的革兰氏染色；8.放线菌装片的制作及观察；第11周：9.酵母菌装片的制作及观察；10.霉菌装片的制作及观察；第12周：11.酸奶的制作第13周：12.水中大肠菌群的检测；第12-14周：自主实验——抗生素产生菌的分离纯化及抗菌活性测定；第15周：实验考核（无菌操作、制片、染色、油镜观察）；各组提交自主实验项目总结报告，要求按照正式发表的科研论文进行写作；自主实验总结汇报。
要求：1.以一个班为单位，3~4人一组（即每张桌子上的同学分成两个自主实验小组2.禁止选择以青霉为筛选目标的实验方案，各组自己查阅相关资料然后设计实验方案主要包括样品的采集、所用的培养基配方、分离方法、鉴定的方法、活性测定的方法等方面；各组长在第9周上实验课时将纸质实验方案提交给指导教师(实验方案请标明：2012级*班*组+组长姓名+联系电话+组员姓名）发帖位置: Tuesday, March 25, 2014抗生素产生菌的分离与抗菌活性检测1. 分离纯化获得1株以上具有明显抑制测试菌生长作用的产抗生素菌株，测试菌建议选用：金黄色葡萄球菌或大肠杆菌，只要对任何一种测试菌有比较明显的抑菌圈就可以了。
2. 对上述菌株进行初步鉴定，包括菌体形态、大小、菌落形态等、以及一些本实验室可以完成的生理生化反应，在此基础上对上述菌株鉴定到属名。
日化产品长效抑菌效果的评价方法
日化产品长效抑菌效果的评价方法一、微生物培养法微生物培养法是通过将一定量的日化产品加入培养基中，然后接种微生物，在一定温度下培养一段时间后，观察和测量生长的菌落数来评价抑菌效果。
该方法可以直观地反映微生物的生长情况，从而判断抑菌效果。
二、抑菌圈法抑菌圈法是在琼脂平板上划线接种已知菌种，然后将待测的日化产品涂布于平板上，观察抑菌圈的大小来判断抑菌效果。
该方法简单易行，适用于表面抑菌剂效果的测定。
三、重量法重量法是通过测量抑菌前后样品的质量变化来评价抑菌效果。
该方法适用于能够去除微生物的日化产品效果的测定，如某些洗手液、清洁剂等。
四、表面观察法表面观察法是通过观察实验前后样品表面的变化来判断抑菌效果。
该方法适用于表面杀菌剂效果的测定，如某些消毒液、抗菌湿巾等。
五、残留量法残留量法是通过测量抑菌后样品中有效成分的残留量来判断抑菌效果。
该方法适用于能够定量检测有效成分的日化产品效果的测定。
六、计时法计时法是在一定的时间内，观察抑菌剂对微生物生长的抑制作用，通过比较抑菌剂处理组和对照组微生物的生长情况来判断抑菌效果。
该方法适用于能够观察到微生物生长变化的抑菌剂效果的测定。
七、反复实验法反复实验法是在相同条件下进行多次重复实验，取平均值作为实验结果，以提高实验的准确性和可靠性。
该方法适用于任何需要重复实验的抑菌剂效果的测定。
八、质量控制法质量控制法是通过建立质量控制标准，对实验全过程进行质量监控，以保证实验结果的准确性和可靠性。
该方法适用于任何需要保证实验质量的抑菌剂效果的测定。
九、微生物计数法微生物计数法是通过在琼脂平板上接种一定量的待测微生物样品，在一定温度下培养一段时间后，对菌落进行计数来判断抑菌效果。
该方法适用于能够进行微生物计数的抑菌剂效果的测定。
抑菌试验方法总结用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称
抑菌试验方法总结用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验。
通过抑菌实验，可以测定一个药物的最低抑菌浓度，用以评价该药物的抑菌性能，这是抗菌药物的最基本的药效学数据。
主要方法有进行定性测定的扩散法（如抑菌斑试验）和进行定量测定的稀释法（如最低抑菌浓度实验）。
1、定性测定（1）纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法：WHO推荐的全球统一的标准方法。
原理：含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
质控：标准菌株的抑菌圈直径应落在预期范围内，如果超出该范围，应视为失控而予以纠正。
影响因素：培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具的精度和质控菌株本身的药敏特性等均能影响试验结果的准确性。
操作方法：按每1000 ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38 g配备M—H琼脂，按每个平皿(直径9 mm)25 ml进行分装。
将孵育16—24 h的菌种分别接种生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准(相当于1.0×108 CFU／m1)。
用无菌棉签拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M—H琼脂表面，均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周。
平板在室温下干燥3—5 min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面．置35℃孵育16 18 h。
记录抑菌圈的直径，实验。
重复10次。
主要用于比较不同抗菌物质，或者通过不同方法提取的同一种物质的效果。
（2）打孔法药敏实验：待M—H平板干后，用无菌棉签蘸取菌液(相当于1.0×108CFU／m1)，在培养基平板上密集划线接种。
抑菌测试标准
抑菌测试标准抑菌测试标准是一种用于评估和比较不同产品或材料的抗菌性能和效果的标准化的测试方法。
这种测试方法通常用于医疗、食品、化妆品、日用品等领域，以确保产品的抗菌性能达到预期效果，从而保证产品的安全性和有效性。
下面将详细介绍抑菌测试标准的概述、测试方法、应用领域和发展趋势等方面。
一、抑菌测试标准的概述抑菌测试标准是一种通过在一定条件下培养细菌，并观察和比较不同产品或材料的抗菌效果的标准化的测试方法。
这种测试方法可以评估产品或材料的抗菌性能和效果，以及其对于不同细菌的抑制作用。
抑菌测试标准通常由政府机构或行业协会制定和发布，以确保不同产品或材料的抗菌性能能够进行比较和评估。
二、抑菌测试标准的测试方法抑菌测试标准的测试方法包括以下步骤：1.选取测试菌种：根据产品或材料的特点和用途，选取具有代表性的菌种进行测试。
常见的测试菌种包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等。
2.制备菌悬液：将选取的菌种接种在营养培养基中，培养一定时间后，将细菌悬挂在无菌生理盐水中，制备成一定浓度的菌悬液。
3.接种菌悬液：将制备好的菌悬液涂抹或滴加在测试产品或材料的表面或与材料接触的介质中。
4.培养：将接种后的样品在一定温度和湿度条件下培养一定时间，使细菌充分生长繁殖。
5.观察：观察不同样品对于细菌生长的抑制作用，记录各个样品上的细菌数量和生长情况。
6.数据分析：根据观察结果，对不同样品的抗菌性能进行比较和分析，得出各个样品的抑菌率、杀菌率等指标。
7.结果判定：根据抑菌测试标准的判定标准，对各个样品的抗菌性能进行评级，并给出相应的评价报告。
三、抑菌测试标准的实际应用抑菌测试标准在实际应用中具有广泛的应用领域，例如：1.医疗领域：用于评估医用材料、医疗器械等的抗菌性能和效果，以保证医疗安全和有效。
2.食品工业：用于评估食品包装材料的抗菌性能和效果，以保证食品的卫生和质量。
3.化妆品行业：用于评估化妆品的抗菌性能和效果，以保证产品的安全性和有效性。
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抑菌效果的检测方法：将抗生素菌株进行平板划线分离，长
出单菌落后，在421房间的超净工作台上找到直径7mm的
打孔器（只有一个，请大家不要拿到其它地方去！），用该打孔器在单菌落上打取菌落块，若菌落块卡在打孔器内，请用接种针挑出来，将菌落块以菌落面向上的方式放置在已经涂
布有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的平板上，培养48小时后测量抑菌圈的直径。
发帖位置: Tuesday, March 25, 2014
微生物学实验安排及自主实验要求
第6周：1.口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用；
第7周：2.培养基的制备；3.高压蒸汽灭菌；
第8周：4.土壤中微生物的分离；
第9周：5.微生物菌落的观察；6. 微生物的分离纯化与菌种保存
第10周：7.细菌的革兰氏染色；8.放线菌装片的制作及观察；
第11周：9.酵母菌装片的制作及观察；10.霉菌装片的制作及观察；
第12周：11.酸奶的制作
第13周：12.水中大肠菌群的检测；
第12-14周：自主实验——抗生素产生菌的分离纯化及抗菌活性测定；
第15周：实验考核（无菌操作、制片、染色、油镜观察）；
各组提交自主实验项目总结报告，要求按照正式发表的科研论文进行写作；自主实验总结汇报。
要求：1.以一个班为单位，3~4人一组（即每张桌子上的同学分成两个自主实验小组
2.禁止选择以青霉为筛选目标的实验方案，各组自己查阅相
关资料然后设计实验方案主要包括样品的采集、所用的培养基配方、分离方法、鉴定的方法、活性测定的方法等方面；
各组长在第9周上实验课时将纸质实验方案提交给指导教师(实验方案请标明：2012级*班*组+组长姓名+联系电话+组员姓名）
发帖位置: Tuesday, March 25, 2014
抗生素产生菌的分离与抗菌活性检测
1. 分离纯化获得1株以上具有明显抑制测试菌生长作用的
产抗生素菌株，测试菌建议选用：金黄色葡萄球菌或大肠杆菌，只要对任何一种测试菌有比较明显的抑菌圈就可以了。
2. 对上述菌株进行初步鉴定，包括菌体形态、大小、菌落形
态等、以及一些本实验室可以完成的生理生化反应，在此基础上对上述菌株鉴定到属名。
3. 条件允许的情况下，选取一株菌进行液体摇床发酵培养（250ml三角瓶内装50ml液体培养基，统一采用28℃，150r/min），测试其发酵液的抑菌活性，测试时请向徐老师借牛津杯6个，分别加入发酵液上清液100μl、200μl，培养48小时后，测量抑菌直径，各组间以抑菌圈直径大小比较产抗生素活性的大小。
注意：尽可能多留一些图片资料，如抑菌圈、菌体形态、菌落形态等的图片，拍照时请注意在拍照物上留下清晰的标记
如“ 12级？班？组***”，实验过程中要留下详尽的原始实验记录。