氧化苦参碱提取工艺研究
苦参中氧化苦参碱的提取分离工艺流程
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氧化苦参碱提取条件的优化
以期为 实际生 产提供 理 论依据 。
ｌ 实 验
１ １ 材 料 、 剂 与 仪 器 ． 试
干 ， 蒸气 显色 。刮 下氧化 苦参 碱斑 点处硅 胶 ， 入离 碘 移
心管 中 ， 无 水 乙醇 ６ｍＬ， 声 提 取 ２次 ， 次 １ 加 超 每 ５ ｍｉ ， ２ ０ ・ｍｉ 离心 １ ｎ 倾 出 上 清液 合 并 ｎ 于 ００ｒ ｎ ５ｍｉ， 至 ５ ０ｍＬ具 塞 三 角 烧 瓶 中 ， 浴 蒸 干 。冷 至 室 温 后 ， 水
参 药材 粉末 １ ． ， 设计 的实 验方 案 回流 提取 ３ ， ０ ０ｇ 按 次 过 滤 ， 并滤 液 。滤液 经减压 浓缩蒸 干 ， 合 残渣 用无水 乙
免疫等功能Ｉ 。近年来有关 氧化苦参碱 的研究报道 多 ２ ］ 数集 中在其分析 检测 上， 所采用 的提取 方法 多为分 析检 测其含量时 的前 处理方 法 ， 在着 工艺路 线 长、 存 步骤 多、 效率低 、 能耗物耗高等问题 ， 缺少生产应用 价值＿ 。 ５ ｑ］
体 积分 数 、 液 比 、 料 提取 温度 和提 取时 间对 氧化苦 参碱
提 取件 ， 采
吸取标 准 品溶液 １ Ｉ、Ｏ Ｏ ２ Ｌ、Ｏ ４ Ｌ、Ｏ ３ Ｉ Ｏ ５ Ｉ分 别点 于 同一硅胶 Ｇ 薄层板 上 ， 以氯仿 一 甲醇 一氨水 （ ５
分 别加 入 ｐ 值 为 ７ ６的 ０ ０ ２ 溴 麝草 酚兰缓 冲溶 Ｈ ． ． １５ 液和氯 仿各 ６ｍＬ， 密塞 ， 摇 ２ｍｉ， 入 ５ 振 ｎ移 ０ｍＬ分液
漏 斗 中 ， 置 ３ ｎ 分 出氯 仿 层 于具 塞 试 管 ， 静 ０ｍｉ， 置入 分
苦参中生物碱的提取及纯化工艺研究进展
目前，国内有关苦参中生物碱的提取主要有溶剂
提取、超声辅助提取和微波辅助提取。
1.1 溶剂提取工艺
溶剂提取是依据相似相容的原理，选用对生物碱 溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，尽量多地将 苦参中生物碱类成分溶出。目前，我国溶剂提取在苦 参生物碱的提取中研究应用较多，包括浸提、回流、 渗漉提取等。杨美玲等 [4] 研究了苦参中苦参碱的浸提， 通过单因素试验得出最佳浸提工艺为：60% 乙醇为浸 提剂，料液比（g/mL）1 ∶ 12，浸提温度 60 ℃，浸提 时间 2.5 h，浸提次数 2 次。该工艺条件下，苦参碱的 得率为 8.88%。李茹等 [5] 研究了苦参中生物碱的渗漉 提取，由正交试验优化的工艺条件为：65% 乙醇为溶 媒体，料液比（g/mL）1 ∶ 6，浸泡 24 h，渗漉速度 4 mL/min。该工艺条件下，苦参总生物碱提取率约为
料液比（g/mL）1 ∶ 25，温度 90 ℃，回流时间 2.0 h。 32 min，提取 1 次。超声辅助提取操作简便，提取时间短，
该工艺条件下，苦参叶中生物碱提取率为 2.86%。陈 明月等 [7] 研究了苦参中生物碱的酸水温浸提取，正交 试验优化的最佳工艺为：0.1% 盐酸溶液为提取剂，温
提取率高，发展前景良好。
ｄｏｉ：１０．１６７３６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｎ４１－１４３４／ｔｓ．２０１８．１５．０５０
Process Technology 工艺技术
苦参中生物碱的提取及纯化工艺研究进展
Research Progress on Extraction and Purification Technology of the Sophora Flavescens Alkaloid
◎ 韩高伟，高子怡，赵二劳 （忻州师范学院化学系，山西 忻州 034000）
匀浆法提取狼牙刺中氧化苦参碱的工艺研究
公 司 ；ＩＫＡ Ｔ１０型 高速组 织匀 浆机 ：艾 卡 （广 州 ）仪 器 设 备有 限公 司 ；ＪＳＭ６３６０ＬＡ透射 电镜 ：ＪＥＯＬ；ＳＺ一９３ 自动双 重纯 水蒸 馏器 ：上 海亚 荣生 化仪 器厂 。 ２ 实验方 法
大 等缺 陷 ，影 响 提取 效 率 ；尤 其 对 于 氧 化 苦参 碱 ，研 ２．１ 提 取 溶剂 选择
另外 ，氧 化苦 参 碱 具 有 优 良 的杀 菌 灭 虫 作 用 ，且 低 花 的干燥 种 子 ；氧 化 苦 参 碱 对 照 品 （＞９８％ ）：上 海 残 留 、无 毒 副作 用 ，市 场 上 已 经 有 多 种 以 氧 化 苦 参 阿拉 丁生 化 科 技 股 份 有 限公 司 。 乙 醇 、甲醇 、浓 氨
２．２．２ 其 他 提 取 方 法 取 狼 牙 刺 种 子 ，用粉 碎 机
取成 本 高 ，产 品价 格 昂贵等 问题 。
效液相色谱仪 （配 自动进样仪 ）：安捷伦公 司；ＤＨＧ
生 物活 性 成 分 的 提 取 目前 普 遍 采 用 的方 法 有 一 ９０５３Ａ 电热恒 温鼓 风 干燥 箱 ：扬 州 鸿都 电 子 有 限
传统 的水 提法 、索 氏 回流 提 取 、超 声辅 助 提取 法 、微 波提 取法 、减 压 提 取 法 等 等 ，这 些 方 法 首 先 需 要 将物料粉碎 ，然后再在沸点 、减压等条件下提取 ，均 存 在提 取操 作 步骤 多 、提 取 时 间 长 、后 处 理 工 作 量
果能 开发 出从 狼 牙 刺 中有 效 的提 取 出 氧 化 苦 参 碱
ＢＸ５１一Ｐ型偏 光显 微镜 ：奥林 巴斯 ；２２Ｒ型 高 速
的技 术 ，将 可 以有 效 的缓 解 传 统 苦 参 资 源 有 限 ，提 离 心机 ：Ｈｅｒａｅｕｓ ｓｅｐａｔｅｃｈ公 司 ；Ａｇｉｌｅｎｔ一１ １００型 高
狼牙刺中氧化苦参碱的提取纯化工艺研究及含量分析的开题报告
狼牙刺中氧化苦参碱的提取纯化工艺研究及含量分析的开
题报告
研究背景：
氧化苦参碱是一种天然的生物碱，具有广泛的生物活性，如抗肿瘤、抗菌、抗氧化和解热等，因此在医药和保健品领域具有广泛的应用前景。
狼牙刺是氧化苦参碱的
主要来源之一，但其含量极低，提取纯化工艺需要进一步研究。
研究内容：
本文旨在研究氧化苦参碱的提取纯化工艺，包括狼牙刺的采集、萃取液的制备、分离纯化、鉴定结构和含量测定等方面。
其中，关键技术包括超声波提取、纯化层析
和高效液相色谱法分析等。
研究意义：
本研究将为氧化苦参碱的工业化生产提供基础数据和技术支持，同时有助于认识狼牙刺中氧化苦参碱的生物活性和药理作用，促进其在临床和保健品领域的应用。
研究方法：
1. 狼牙刺的采集和制备
采集生长于四川省乐山市犍为县的狼牙刺，割取其茎叶部分，晒干后粉碎，制成粉末。
2. 超声波提取
以狼牙刺粉末为原料，用70%乙醇溶液进行超声波提取，优化提取时间、温度、液料比、乙醇浓度等参数。
3. 纯化层析
将超声波提取液通过分子筛、活性炭和硅胶三级柱层析纯化。
4. 鉴定结构和含量测定
采用高效液相色谱法对纯化后的氧化苦参碱进行分析和测定，同时进行IR和NMR等结构鉴定。
预期成果：
1. 确定狼牙刺中氧化苦参碱的提取纯化工艺。
2. 确定氧化苦参碱的结构和含量。
3. 探究氧化苦参碱的生物活性和应用前景。
苦参碱提取工艺与氧化苦参碱制备方法
1 简述苦参碱、氧化苦参碱(苦参素)是苦豆子、苦参、广豆根等豆科槐属植物中生物碱的主要成份。
苦参碱(matrine)和氧化苦参碱(oxymatrine)化学分子式分别为C15H24N2O 和C 15H24N2O2，分子量分别为248 和264，是苦参型生物碱的主要活性成分，二者在一定条件下可以转化.2 苦参碱提取工艺2.1溶剂提取法苦参碱的溶剂提取法, 常用水、酸水及乙醇等作为提取溶媒, 提取方法多为浸渍、渗滚、煎煮、回流等经典方法。
孔令明等川从酸水回流提取、乙醇回流提取两大苦参总碱方法的对比中发现,乙醇回流法对苦参总碱的提取效果较好, 是一种目前较为合适的苦参总碱溶剂提取方法。
其最佳工艺参数为: 采用筛分目数20—60 目的苦参粉, 以60 % 的乙醇溶液, 料液比为1 : 2 , 回流提取2 次。
谭桂莲分别对水煎法、乙醇回流法和渗滤法提取氧化苦参碱工艺进行优选研究, 结果表明, 渗滤法所得浸提物中, 氧化苦参碱含量明显高于水煎法和乙醇回流法, 故认为渗滤法为氧化苦参碱的最佳提取方法。
2.2 离子交换法利用生物碱盐通过强酸型阳离子交换树脂柱, 使生物碱盐阳离子交换在树脂上, 而非生物碱化合物则流出柱外, 将交换后的树脂晾干, 用氨水碱化, 氯仿提取的原理。
高拴平等研究了离子交换法提取分离苦参碱的工艺和过程, 技术路线是:苦参粉→甲醇回流提取→回收溶剂→粗提物→稀硫酸溶解→脱脂→水层→除鞣→上D201型阳离子交换树脂※碱化树脂→氯仿提取→回收溶剂→脱水→丙酮→苦参碱结晶。
采用上述提取分离方法, 苦参碱的产率最高, 结晶质量最好。
张存莉等采用不同浓度的乙醇和阳离子交换树脂对苦参碱进行提取和纯化, 并对不同的苦参碱纯化工艺进行比较和研究。
结果表明, 用60%的乙醇进行提取和用阳离子交换树脂进行纯化的工艺过程生物碱收率较高, 生产成本较低, 工序较为简单, 有一定的进步性, 适宜工业化生产。
2.3 树脂吸附法吸附树脂是近10年来发展起来的一类有机高分子聚合物, 它具有物理化学稳定性高、吸附选择性独特、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和, 使用周期长、宜于构成闭路循环, 节省费用等诸多优点。
氧化苦参碱的含量测定及提取工艺研究进展
究仍比较薄弱。结论 ：氧化苦参碱的提取纯化工艺有待进一步改进。
【 关键词】氧化苦参碱 ；含量测定 ；提取工艺；研 究进展 【 中图分类号】Ｒ２４ 【 文献标识码】Ａ 【 ８ 文章编号】１ ８ ４８ （ １）０ － １ － ３ ０ － ９３ ２ ２ ２ ０２ ０ ０ ０ ７ Ｒｅ ｅ ｒ ｈ Ｐｒ ｇ ｅ ｓｏ ｎ Ｅｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ａ ｄ Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ｔｏ ｆ Ｏｘ ｍ ａ ｒ ｎ ｓ ａ ｃ ｏ ｒ ｓ ｉ ｎ ｏ ｔ ａ ｔｏ ｎ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｏ ｙ ｔｉｅ
第２ ５卷 第 ２期
２１ ０ ２年 ０ 月 ６
黔
南 民
族
医
专 学
报
Ｊｕ ａ ｏ Ｑａ ｎ ｎ Ｍｅ ｉ ｌ Ｃ ｌ ｇ ｆｒ Ｎ ｔ ｎ ｏｌ ｅ ｏ ａ ｏ ａ ｔ ｓ ｅ ｉ ｌｉ
Ｖ １２ Ｎ ． ｏ ５ ｏ２ ． Ｊｎ ｕ．
于喹喏里西啶类生物碱 ， 泛存在于豆科槐属植 广 物苦参 、山豆根、狼牙刺等中。氧化苦参碱是中 药苦参 的主要有效成分 ，相对苦参碱含量较高 。 现代药 理研究 表 明， 氧化 苦参碱 具有 抗炎、保 肝 、抗 肿 瘤 、抗 心 律 失 常 和 免 疫 调 节 等 功 碱的进一步开发应用提供参考。 １ 含量测定方法研究 氧化苦参碱作为生物碱之一 ， 其含量测定方 法理论上可采用酸碱滴定法，但由于原料药及其 制 剂 中常含 有其 他生 物碱 ，难 以排 除其 干扰 ，而
氧 化 苦 参 碱 的含 量 测 定 及 提 取 工 艺研 究 进 展
赵 鸿 宾 ，余跃 生 ，陶 晨 ，魏 学军 ，王 恒 （ 南 民族 医学高 等专 科 学校 ，贵 州 都 匀 ５８ ０ ） 黔 ５０ ３
氧化苦参碱的提取分离和鉴定
实验一 氧化苦参碱的提取分离和鉴定一．实验目的与要求1. 掌握渗漉法的原理、操作与影响因素，了解离子交换树脂的结构、性质及使用方法。
2. 掌握连续回流提取法的原理、特点及仪器的使用方法。
3. 学习粗提物的纯化方法，学会分析纯化过程中所应用的原理。
4. 进一步理解对粗品进行检识的意义及方法。
5. 学习制备性薄层色谱及闪柱色谱的操作，了解色谱条件的选择方法及影响分离度的因素。
二．实验方法（一）概述中药苦参是豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait)的干燥根，有清热燥湿、杀虫、利尿之功效。
苦参在临床上用于杀虫、治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。
药理实验证明苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。
苦参中主要含生物碱和黄酮类成分。
苦参中主要生物碱有：苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、槐定(3)、槐果碱(4)，结构如图1。
氧化苦参碱有抗癌、抗衰老等作用。
氧化苦参碱13C-NMR 数据：68.7(C-2), 17.0(C-3), 25.9(C-4), 34.3(C-5), 66.6(C-6), 42.4(C-7), 24.4(C-8), 17.0(C-9), 69.1(C-10), 52.8(C-11), 28.3(C-12), 18.5(C-13), 32.7(C-14), 169.8(C-15),41.6(C-17)。
苦参碱 氧化苦参碱 槐定 槐果碱表11-1 主要苦参生物碱的理化性质N N O中英名称分子式性状mp(℃) 旋光溶解度苦参碱(matrine) C15H24N2O白色针状结晶76 +39.11°易溶于醇、氯仿，溶于乙醚、苯，难溶于水氧化苦参碱(oxymatrine) C15H24N2O2白色方晶207-208 +47.7°易溶于水、乙醇、甲醇、氯仿，不溶于乙醚、苯槐定(sophoridine)C15H24N2O 白色棱晶106-108槐果碱(sophocarpine)C15H22N2O 白色棱晶80-81 -29.44°同上从苦参中提取生物碱一般用水、酸水或醇提法，粗提物用树脂法或酸碱法纯化，分离方法多用氧化铝或硅胶柱层色谱。
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苦参中氧化苦参碱的提取工艺研究摘要目的：利用正交试验，确定最佳提取工艺，并考察阳离子交换树脂法精制苦参中氧化苦参碱的效果，且与其它大孔树脂法进行了比较。
方法：采用HPLC法测定氧化苦参碱的含量。
结果：确定最佳工艺，即用10倍量于药材的1%醋酸溶液提取，两小时三次，用001×4强酸型阳离子交换树脂法较大孔树脂法可更有效的保留有效成分、去除杂质。
结论：优选得到的工艺简便易行。
关键词苦参；氧化苦参碱；正交试验；阳离子交换树脂Study on different extraction process of oxymatrine in RadixSophora flavescensAbstract Objective: To study the effect of cation exchange resin method in fefining of oxymatrine in Sophora flavescens, and to compare the results with that of macroporous resin. Orthogonal test was used to optimize the technology for extracting oxymatrine. Mehtods: HPLC was applied to analyze the content of oxymatrine in the samples. Results: The optimal extraction technology was as follows: the medicinal mateial was refluxed with 1% acetum for three times and each time was 2 hours. 001×4 cation exchange resin method was more effective than macroporous resin for refining oxymarine in Sophora flavescens. Conclusion: This optimized method is simple and efficient.Key words Radix Sophora flavescens; oxymatrine; orthogonal test; cation exchange resin 苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Art.的干燥根，有清热燥湿，杀虫，利尿之功效。
主要成分为氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱等多种生物碱类成分。
现代研究表明，氧化苦参碱具有抗心律失常，抗癌及抗衰老等活性。
目前，如何高效、快速提取、分离、纯化氧化苦参碱，满足其在医药、化妆品、植物生长调节剂等方面的不断增长的大量需求，研究不足，而且产品的纯度等方面均达不到要求，影响其药理活性的发挥和进一步的开发利用。
本文以氧化苦参碱为考察对象，对苦参的不同提取工艺进行比较，优选出氧化苦参碱的最佳提取工艺。
1 实验材料及仪器1.1 实验材料苦参，购于河北省安国，氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所）；001×4强酸型阳离子交换树脂、AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂（南开大学化工厂）；乙腈、无水乙醇为色谱纯；水为自制高纯水；其余试药均为分析纯。
1.2 仪器高效液相色谱仪（Waters:510泵，2487紫外检测器）；JS-3030江申通用汉化色谱工作站（大连江申分离科学技术公司）；DRT-TM调温电热套（巩义市予华仪器有限公司）；Senco R 系列旋转蒸发仪；SHZ-IIIB型循环水真空泵（上海申生科技有限公司）。
2 实验方法及结果2.1 色谱条件和系统适用性条件以氨基键和硅胶为填充剂；柱温为30℃；流动相为乙腈:无水乙醇:3%磷酸（80:10:10）；检测波长为220nm。
理论板数按氧化苦参碱计算应不低于2500。
2.2 标准溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品5mg于50ml容量瓶中，用乙腈-无水乙醇（8:1）溶解并定容，混匀，即得标准溶液。
2.3 提取条件考察方案设计考虑到提取溶媒、溶媒用量、提取时间、提取次数等因素对提取的影响，每个因素选择三个水平，以L9(34)正交表进行实验研究，从而优选最佳提取工艺。
表1 因素水平表Table 1 Factors and levels of orthogonal test水平提取溶媒（A）溶媒用量（B）提取时间（C）提取次数（D）1 水 6 1 22 1%醋酸8 2 33 0.1%盐酸10 3 4实验方法及结果：精密称取苦参药材100g，分别根据正交表的实验研究，制备苦参提取液，滤过，吸取滤液1mL，用甲醇稀释并定容至一定体积。
按2.1项下条件测定氧化苦参碱的含量，并计算，结果见正交设计表。
表2 L9(34) 正交试验方案及结果Table 2 The scheme and results of L9(34) orthogonal test编号提取溶媒溶媒用量提取时间提取次数氧化苦参碱（g）1 11110.812 1222 1.323 1333 1.834 2123 2.045 2231 2.016 2312 2.137 3132 1.468 3213 1.919 3321 1.75K1 1.320 1.437 1.617 1.523K2 2.060 1.747 1.703 1.700K3 1.707 1.903 1.767 1.927R 0.740 0.467 0.150 0.4032.4 正交试验结果正交试验结果见表2。
由表2可得出，各因素作用主次为：A（提取溶媒）> D（提取次数）> C（提取时间）>B（溶媒用量）。
结果表明，A2B3C3D3组合为最佳提取路线，考虑到节约能源，选择A2B3C2D2，即选定10倍量于药材的1%醋酸回流提取3次，每次2h。
2.5 树脂吸附吸脱工艺筛选2.5.1 树脂柱预处理AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂用95%乙醇浸泡24h，充分溶胀，并用乙醇洗至流出液加等体积蒸馏水无白色混浊现象，再用蒸馏水洗至无醇味备用。
001×4强酸型阳离子交换树脂用蒸馏水浸泡24h，充分溶胀，并用蒸馏水洗至流出液澄清，用2倍树脂体积1NHCl 洗2h，水洗至中性，用2倍树脂体积1NNaOH 洗2h，最后用3倍树脂体积1NHCl洗3h，用蒸馏水洗至中性。
2.5.2 氧化苦参碱提取液的制备取800g苦参粗粉，用8000mL1%醋酸回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，置旋转蒸发仪中，浓缩至约800mL。
平均分成8份，每份100mL 苦参水提液。
2.5.3 不同树脂吸附药液量考查分别量取处理好的4种树脂, AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂和001×4强酸型阳离子交换树脂各60mL，分别装柱后平行进行以下试验。
向柱中不断加入上样液进行动态吸附，同时分别收集各流份，采用HPLC法对各流份进行检测，当有流份中明显出现氧化苦参碱时即认为吸附饱和。
表3 不同树脂吸附药液量树脂类型吸附药液量（ml）AB-8大孔吸附树脂80D101大孔吸附树脂100S-8大孔吸附树脂60强酸型阳离子树脂100结果表明：100ml AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂和001×4强酸型阳离子交换树脂分别吸附80mL、100mL、60mL、100mL药液。
2.5.4 洗脱剂浓度的选择强酸性阳离子树脂用氨水碱化后、大孔吸附树脂分别用4倍树脂体积的水冲，30%醇洗、50%醇洗、70%醇洗、80%醇洗、95%醇洗，分别收集后，测定含量，分别监测出氧化苦参碱富集的位置。
实验结果表明，采用不同类型大孔吸附树脂分离苦参水提液中氧化苦参碱时，宜选用30%乙醇洗脱，而用强酸型阳离子树脂时，洗脱时宜选用80%乙醇。
2.5.5 不同型号树脂的筛选另外4份上样液，分别按上述不同树脂吸附药液量，上此4种树脂，大孔树脂分别用30%乙醇洗脱，强酸型阳离子树脂用氨水碱化后用80%乙醇洗脱。
最后将洗脱液置旋转蒸发仪中浓缩至干。
分别对这4种不同树脂处理后得到的提取物按2.1条件测定氧化苦参碱含量，关于苦参中氧化苦参碱的含量进行比较，见表3。
结果表明，强酸型阳离子树脂所得的提取物中的氧化苦参碱含量明显高于其它三种大孔树脂法，故认为强酸型阳离子树脂为纯化氧化苦参碱的最佳树脂类型。
表3 最佳树脂类型的确定Table 3 Selection of the optimal resins树脂类型含量%（氧化苦参碱）转移率（%）AB-8大孔吸附树脂15.35 85D101大孔吸附树脂 6.5 89S-8大孔吸附树脂26.9 71强酸型阳离子树脂76.9 93 实验结果表明，采用不同类型大孔吸附树脂分离苦参水提液中氧化苦参碱时，宜选用30%乙醇洗脱，而用强酸型阳离子树脂时，洗脱时宜选用80%乙醇。
以氧化苦参碱在提取物中的含量为考评指标，实验结果表明，苦参优选的最佳提取工艺是：10倍量于药材的1%醋酸回流提取3次，每次2h，合并提取液，滤过，直接用强酸型阳离子树脂（树脂用量为每ml树脂吸附1g药材）吸附后，用氨水碱化后用80%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，即得。
用此工艺制备的氧化苦参碱得率高。
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