免疫学检测原理
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免疫学技术的应用极为广泛, 疾病 的诊断、疗效评价及理论研究等。
概述
主
抗原抗体的检测技术 免疫细胞的检测
要 细胞因子及其受体的检测
内 粘附分子的检测
容
免疫相关基因分析 免疫标记技术
免疫PCR(IM-PCR)技术
细胞凋亡的检测
二、抗原抗体的检测技术
* 根据反应的基本原理与表现主 要分为凝集反应、沉淀反应和补 体参与的各种反应。
2. B细胞功能判定
(1) B细胞增殖(转化)试验： (2) 溶血空斑形成试验 (3) 反向溶血空斑试验 (4) 酶联免疫斑点法(ELISPOT):
一种可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分 泌量的体外实验方法。
溶 血 空 斑 实 验
ELISPOT实验
① 稳定、特异，且抗原用量少； ②可同时检测不同抗原诱导的 抗体分泌，并可定量检测 ③可检测组织切片中分泌抗体 的单个细胞
凝集试验
间接凝集抑制试验
沉淀反应 （Precipitation)
血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等 可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀 物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反 应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多 沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质， 进行琼脂扩散故也称免疫扩散。
沉淀反应
单扩与双扩 原理
* 根据抗原抗体反应设计的试验 还有标记抗原(或抗体)检测相应物 质的标记技术。
抗原-抗体反应的特点
抗原-抗体的结合是特异性结合； 抗原抗体反应可分为两个阶段：
特异性结合阶段
可见的反应阶段
抗原和抗体结合是否呈现可见的反应
现象，与两者的分子比例密切相关。
抗原抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体溶血反应 和补体结合反应 中和反应 用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
* 丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、PPD和白色念 珠菌等； * 同种MHC及抗CD3单抗等 * 肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养
淋巴细胞转化试验（形态学示意图）
• 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体， T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能 转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行 分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。
FCM是将免疫荧光技术应用于流式 细胞仪，对单个细胞的表面标志（抗原 或受体）进行快速、精确的分析和自动 检测，并将不同类型的细胞分选收集。 FCM还可对同一细胞的多种参数（如 DNA、RNA、蛋白质和细胞体积等）进 行多信息分析，为当代生命科学研究领 域中广泛使用的一项新技术。
流式细胞仪工作原理
FACS细胞分选
FACS 技术分析
用抗IgM单抗分 离B细胞克隆
RemovHale Waihona Puke Baidul of T cells from marrow graft
Magnetic antibodies Magnet
(二) 免疫细胞功能的测定
1. T细胞功能测定： (1) 细胞增殖(转化)试验：可分为非特异性丝裂 原和特异性抗原两类。
第二十二章 免疫学检测原理
概述
主 要 内 容
抗原抗体的检测技术 免疫细胞的检测 细胞因子及其受体的检测 粘附分子的检测 免疫相关基因的检测
免疫标记技术
细胞凋亡的检测
一、概 述
免疫学检测是应用免疫学理论设计 的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及 其分泌的细胞因子的实验手段及分子生 物学技术在免疫学研究中的应用。
凝集反应 (Agglutination)
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合 后形成凝集 现象，称为凝聚反应。
1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体 直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。 又分为玻片法和试管法。
2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或 乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝 集现象。
PHA刺激 48~72小时
淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图
培养液
PHA
3H-TdR
淋巴细胞
全 血
离心
分层液
过滤
测 量 放 射 性
细胞毒试验（51Cr释放法）示意图
靶细胞
51Cr
洗涤
去除游离 的51Cr
效应细胞
测量上清液中 释放的51Cr
混合培养4-6小时
(3)T细胞功能的体内检测法 * 移植物抗宿主反应(GVHR) * 迟发型超敏反应(DTH)
3. NK细胞活性测定
(1)形态学检查法 (2)放射性核素释放法：
用放射性核素(51Cr、125I －UdR)标记靶细胞。
(3)酶释放法：
测定靶细胞膜受损后从胞浆内释放至介质中的 乳酸脱氢酶(LDH)活性。
(4)化学发光法 (5)流式细胞术
4．吞噬细胞功能测定
(1)中性粒细胞趋化功能测定
滤膜渗透法(Boyden小室法) 。
(2)中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定
1) 显微镜检法 2) NBT试验 3) 化学发光测定法
(3) 巨噬细胞吞噬功能测定 (4) 巨噬细胞细胞毒测定
一、概述
主
二、抗原抗体的检测技术
要
三、免疫细胞的检测 四、细胞因子及其受体的检测
内
五、粘附分子的检测
容
六、免疫相关基因分析
七、免疫标记技术
八、细胞凋亡的检测
单向琼脂糖 扩散实验
双扩实验 结果分析
火箭电泳
对流免疫电泳
补体结合试验
Western Blot 检测HIV
一、概述
主
二、抗原抗体的检测技术 三、免疫细胞的检测
要
四、细胞因子及其受体的检测
内 五、粘附分子的检测
容
六、免疫相关基因分析
七、免疫标记技术
八、免疫PCR(IM-PCR)技术
九、细胞凋亡的检测
三、免疫细胞的检测
对机体参与免疫应答的细胞进行鉴定, 计数及功能测定。
(一) 淋巴细胞及亚群的分离
(1) 抗凝 静脉血
(2) 加等 量NS
(3) 混匀后，缓 慢加于分离液上
(4) 密度梯度离心
血浆
PBMC 分离液 PMN RBC
E花环实验
利用表面标志分 离淋巴细胞亚群
流式细胞术
（Flow Cytometry, FCM)
细胞因子及其受体的检测
免疫学检测法 生物学测定法 分子生物学测定法 细胞因子受体检测的基本技术
免疫学检测法
免疫学检测的基本原理是将细胞因 子作为抗原进行定量检测。如免疫斑 点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹 法等均已用于细胞因子的检测。某些 细胞因子含量甚微的样品(如脑脊液) 可用免疫聚合酶链反应(immuno-PCR) 进行检测。
概述
主
抗原抗体的检测技术 免疫细胞的检测
要 细胞因子及其受体的检测
内 粘附分子的检测
容
免疫相关基因分析 免疫标记技术
免疫PCR(IM-PCR)技术
细胞凋亡的检测
二、抗原抗体的检测技术
* 根据反应的基本原理与表现主 要分为凝集反应、沉淀反应和补 体参与的各种反应。
2. B细胞功能判定
(1) B细胞增殖(转化)试验： (2) 溶血空斑形成试验 (3) 反向溶血空斑试验 (4) 酶联免疫斑点法(ELISPOT):
一种可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分 泌量的体外实验方法。
溶 血 空 斑 实 验
ELISPOT实验
① 稳定、特异，且抗原用量少； ②可同时检测不同抗原诱导的 抗体分泌，并可定量检测 ③可检测组织切片中分泌抗体 的单个细胞
凝集试验
间接凝集抑制试验
沉淀反应 （Precipitation)
血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等 可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀 物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反 应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多 沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质， 进行琼脂扩散故也称免疫扩散。
沉淀反应
单扩与双扩 原理
* 根据抗原抗体反应设计的试验 还有标记抗原(或抗体)检测相应物 质的标记技术。
抗原-抗体反应的特点
抗原-抗体的结合是特异性结合； 抗原抗体反应可分为两个阶段：
特异性结合阶段
可见的反应阶段
抗原和抗体结合是否呈现可见的反应
现象，与两者的分子比例密切相关。
抗原抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体溶血反应 和补体结合反应 中和反应 用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
* 丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、PPD和白色念 珠菌等； * 同种MHC及抗CD3单抗等 * 肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养
淋巴细胞转化试验（形态学示意图）
• 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体， T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能 转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行 分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。
FCM是将免疫荧光技术应用于流式 细胞仪，对单个细胞的表面标志（抗原 或受体）进行快速、精确的分析和自动 检测，并将不同类型的细胞分选收集。 FCM还可对同一细胞的多种参数（如 DNA、RNA、蛋白质和细胞体积等）进 行多信息分析，为当代生命科学研究领 域中广泛使用的一项新技术。
流式细胞仪工作原理
FACS细胞分选
FACS 技术分析
用抗IgM单抗分 离B细胞克隆
RemovHale Waihona Puke Baidul of T cells from marrow graft
Magnetic antibodies Magnet
(二) 免疫细胞功能的测定
1. T细胞功能测定： (1) 细胞增殖(转化)试验：可分为非特异性丝裂 原和特异性抗原两类。
第二十二章 免疫学检测原理
概述
主 要 内 容
抗原抗体的检测技术 免疫细胞的检测 细胞因子及其受体的检测 粘附分子的检测 免疫相关基因的检测
免疫标记技术
细胞凋亡的检测
一、概 述
免疫学检测是应用免疫学理论设计 的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及 其分泌的细胞因子的实验手段及分子生 物学技术在免疫学研究中的应用。
凝集反应 (Agglutination)
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合 后形成凝集 现象，称为凝聚反应。
1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体 直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。 又分为玻片法和试管法。
2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或 乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝 集现象。
PHA刺激 48~72小时
淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图
培养液
PHA
3H-TdR
淋巴细胞
全 血
离心
分层液
过滤
测 量 放 射 性
细胞毒试验（51Cr释放法）示意图
靶细胞
51Cr
洗涤
去除游离 的51Cr
效应细胞
测量上清液中 释放的51Cr
混合培养4-6小时
(3)T细胞功能的体内检测法 * 移植物抗宿主反应(GVHR) * 迟发型超敏反应(DTH)
3. NK细胞活性测定
(1)形态学检查法 (2)放射性核素释放法：
用放射性核素(51Cr、125I －UdR)标记靶细胞。
(3)酶释放法：
测定靶细胞膜受损后从胞浆内释放至介质中的 乳酸脱氢酶(LDH)活性。
(4)化学发光法 (5)流式细胞术
4．吞噬细胞功能测定
(1)中性粒细胞趋化功能测定
滤膜渗透法(Boyden小室法) 。
(2)中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定
1) 显微镜检法 2) NBT试验 3) 化学发光测定法
(3) 巨噬细胞吞噬功能测定 (4) 巨噬细胞细胞毒测定
一、概述
主
二、抗原抗体的检测技术
要
三、免疫细胞的检测 四、细胞因子及其受体的检测
内
五、粘附分子的检测
容
六、免疫相关基因分析
七、免疫标记技术
八、细胞凋亡的检测
单向琼脂糖 扩散实验
双扩实验 结果分析
火箭电泳
对流免疫电泳
补体结合试验
Western Blot 检测HIV
一、概述
主
二、抗原抗体的检测技术 三、免疫细胞的检测
要
四、细胞因子及其受体的检测
内 五、粘附分子的检测
容
六、免疫相关基因分析
七、免疫标记技术
八、免疫PCR(IM-PCR)技术
九、细胞凋亡的检测
三、免疫细胞的检测
对机体参与免疫应答的细胞进行鉴定, 计数及功能测定。
(一) 淋巴细胞及亚群的分离
(1) 抗凝 静脉血
(2) 加等 量NS
(3) 混匀后，缓 慢加于分离液上
(4) 密度梯度离心
血浆
PBMC 分离液 PMN RBC
E花环实验
利用表面标志分 离淋巴细胞亚群
流式细胞术
（Flow Cytometry, FCM)
细胞因子及其受体的检测
免疫学检测法 生物学测定法 分子生物学测定法 细胞因子受体检测的基本技术
免疫学检测法
免疫学检测的基本原理是将细胞因 子作为抗原进行定量检测。如免疫斑 点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹 法等均已用于细胞因子的检测。某些 细胞因子含量甚微的样品(如脑脊液) 可用免疫聚合酶链反应(immuno-PCR) 进行检测。