实验六：生物碱的提取
粉防己生物碱的提取分离和鉴别
粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。
一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。
二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。
轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。
五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。
生物碱实验报告
一、实验目的1. 学习生物碱的提取、分离和鉴定方法。
2. 掌握生物碱的理化性质和反应特点。
3. 提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理生物碱是一类含有氮原子，具有生物活性的有机化合物。
本实验通过从植物中提取生物碱，然后对其进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物样品（如颠茄、烟草等）2. 无水乙醇3. 氢氧化钠溶液4. 醋酸酸化试剂5. 醋酸铅溶液6. 醋酸铜溶液7. 氯化钡溶液8. 硝酸银溶液仪器：1. 水浴锅2. 蒸发皿3. 烧杯4. 滤纸5. 研钵6. 离心机7. 显微镜8. 紫外分光光度计四、实验步骤1. 提取：将植物样品干燥、粉碎后，加入无水乙醇，回流提取一定时间，过滤得到滤液。
2. 浓缩：将滤液蒸发浓缩至一定体积。
3. 酸化：向浓缩液中加入醋酸酸化试剂，使生物碱沉淀。
4. 过滤：过滤得到沉淀，用少量水洗涤沉淀。
5. 分离：将沉淀加入醋酸铅溶液，观察是否产生沉淀，若产生沉淀，则说明有生物碱存在。
6. 鉴定：- 加入醋酸铜溶液，观察是否产生蓝色沉淀，若产生蓝色沉淀，则说明有生物碱存在。
- 加入氯化钡溶液，观察是否产生白色沉淀，若产生白色沉淀，则说明有生物碱存在。
- 加入硝酸银溶液，观察是否产生白色沉淀，若产生白色沉淀，则说明有生物碱存在。
五、实验结果与分析1. 提取：从植物样品中成功提取出生物碱。
2. 分离：通过酸化、过滤和分离等步骤，成功分离出生物碱。
3. 鉴定：通过加入醋酸铅溶液、醋酸铜溶液、氯化钡溶液和硝酸银溶液，成功鉴定出生物碱。
六、实验讨论1. 生物碱的提取和分离过程中，要注意控制提取时间、温度和溶剂用量，以确保提取效率和分离效果。
2. 生物碱的鉴定方法较多，可根据实际情况选择合适的鉴定方法。
3. 生物碱在医药、农业等领域具有广泛的应用，本实验有助于了解生物碱的提取、分离和鉴定方法。
七、实验总结本实验成功提取、分离和鉴定了植物中的生物碱，加深了对生物碱的认识，提高了实验操作技能和数据分析能力。
汉防己中实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习掌握汉防己中生物碱的提取方法。
2. 掌握生物碱的分离纯化技术。
3. 熟悉生物碱的鉴定方法。
二、实验原理汉防己是一种传统中药材，具有祛风除湿、利水消肿、镇痛消炎等功效。
其主要成分是多种生物碱，如汉防己碱、去甲基汉防己碱等。
本实验通过采用有机溶剂提取法提取汉防己中的生物碱，再利用低压柱层析和薄层层析等方法进行分离纯化，最后通过光谱分析等手段对分离得到的生物碱进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己药材、氯仿、甲醇、石油醚、硅胶、活性炭等。
2. 仪器：索氏提取器、旋转蒸发仪、低压柱层析仪、薄层层析仪、紫外可见分光光度计、红外光谱仪等。
四、实验步骤1. 汉防己药材的预处理将汉防己药材剪碎，用乙醇回流提取2小时，过滤，浓缩得到浸膏。
2. 生物碱的提取将浸膏用氯仿溶解，加入活性炭脱色，过滤，浓缩得到氯仿溶液。
3. 生物碱的分离将氯仿溶液用硅胶柱层析分离，依次用石油醚、氯仿-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，收集各个洗脱液。
4. 生物碱的纯化将收集到的各个洗脱液用旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。
5. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：对生物碱粗品进行紫外可见光谱扫描，测定最大吸收波长。
（2）红外光谱法：对生物碱粗品进行红外光谱扫描，分析其官能团。
（3）质谱法：对生物碱粗品进行质谱分析，确定其分子量。
五、实验结果与分析1. 生物碱的提取通过索氏提取法，从汉防己药材中成功提取出生物碱。
2. 生物碱的分离采用低压柱层析法，将提取得到的生物碱进行分离，得到多个组分。
3. 生物碱的纯化通过旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。
4. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：生物碱粗品在紫外可见光谱中具有特定的吸收峰。
（2）红外光谱法：生物碱粗品在红外光谱中具有典型的生物碱官能团吸收峰。
（3）质谱法：生物碱粗品的质谱结果显示出与其分子量相符的峰。
综上所述，本实验成功从汉防己中提取、分离和鉴定了生物碱，为汉防己的药理作用研究提供了实验依据。
生物碱的提取方法及应用
关键词：生物碱；回流；萃取；饲料
中图分类号：
S816.7
文献标识码：A
文章编号：1008-6137（2016）05-0010-04
0
引言
碱在常温下以液体方式存在。生物碱不溶于乙醇
生物碱（alkaloid）是指存在于生物中的有机
等有机溶剂，
微溶于水，
在热水中的溶解度较大。
化合物（含氮），该类生物碱大多数都具有复杂的
环状结构，并且呈现碱性，有旋光性及生理效应，
2
生物碱的提取技术
生物碱提取方法较多，绝大多数生物碱是利
大多数药用植物中的主要成分便是生物碱，它也
用溶剂提取法进行提取。生物碱的溶解性能是
是人类最早研究的一类化合物。至今从植物以
提取与纯化的重要依据[2]。适宜的提取方法对于
持生理机能所必需的低分子有机化合物，常需要
苦参制成的各种剂型也已经用于医学临床，比如
在饲料中添加，是一种使用量最大的维生素，王
从苦参中提制成的浸膏片可用于治疗急性菌
文高等通过乙醇低温提取纯化磷脂酰胆碱，优化
痢。苦参还能够提高雏鸡的生长速度、防治球虫
了碱水提取法。
感染、增强免疫功能等作用；在仔猪饲料中添加
易挥发有机溶剂乙醇回流提取。与传统的乙醇
学性质与一般生物碱不同，且在酸性条件或中性
直接回流提取法的提取相比，其中总生物碱的提
条件下不稳定的生物碱，
如用乙醇浸提。刘杰等[8]
取率提高约 24%，比较适用于岩黄连等总生物碱
在单因素试验基础上，通过正交试验对桑叶生物
[5]
的辅助提取。郭晓雨等 用回流法也是通过正交
试验六柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量
实验六柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量一、目的要求1.掌握用连续回流提取法定量提取中药制剂中生物碱的原理和操作方法。
2.掌握柱色谱法净化样品和用吸收系数法测定盐酸小檗碱的基本原理和操作方法。
二、基本原理用连续回流提取法，将生物碱以盐的形式提取后，用氧化铝做净化剂进行液-固萃取净化处理，使提取液中具有紫外吸收的黄酮类及其他极性大的干扰组分保留于柱上，小檗碱、药根碱等小檗碱型生物碱被洗脱，以消除干扰。
盐酸小檗碱在345nm±1nm处有最大吸收，在此波长处测定洗脱液的吸收度，以吸收系数法按盐酸小檗碱计算总生物碱含量。
三、仪器与试药1.分析天平、恒温水浴锅、分光光度计。
2.量瓶、三角瓶、烧杯、刻度吸管、量筒、索氏提取器、色谱柱。
3.色谱用中性氧化铝，其他试剂均为AR级。
4.万氏牛黄清心丸(市售品)。
四、操作步骤1.提取去剪碎的万氏牛黄清心丸约4g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇(1﹕100)适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50mL量瓶中，用盐酸-甲醇(1﹕100)稀释至刻度，摇匀。
2.净化精密量取上述提取液5mL，置氧化铝柱(内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用30mL乙醇预洗)上，用25mL乙醇洗脱，收集洗脱液，置50mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。
3.测定法精密量取上述净化液2mL，置50mL量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。
以2mL乙醇及0.05mol/L H2SO4液稀释至50mL的混合液为空白，用1cm比色池，E)为728计算即在345nm波长处测定吸收度。
按盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCL)的吸收系数(1%1cm得。
本品按干燥品计算，含总生物碱以盐酸小檗碱计，不得少于1.7%。
五、思考题1.本实验操作中应注意哪些问题？2.欲证明此方法的可靠性，须做什么试验？如何设计？。
生物碱的制备实验报告
一、实验目的1. 学习生物碱的提取和分离方法。
2. 掌握利用酸碱中和反应从植物材料中提取生物碱的原理。
3. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能。
二、实验原理生物碱是一类含氮的有机化合物，广泛存在于植物中，具有多种生物活性。
本实验通过利用生物碱与酸碱反应的性质，从植物材料中提取生物碱。
具体操作步骤包括：原料的预处理、提取、酸碱中和、沉淀、过滤、干燥等。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物原料（如金鸡纳树皮、鸦胆子等）2. 稀盐酸3. 氨水4. 乙醇5. 水合氯醛6. 硅藻土7. 石棉仪器：1. 烧杯2. 玻璃棒3. 过滤器4. 滤纸5. 蒸发皿6. 烘箱7. 分析天平四、实验步骤1. 原料预处理：将植物原料洗净、干燥、粉碎，过40目筛。
2. 提取：取一定量的预处理好的植物原料，加入适量的乙醇，加热回流提取2小时。
3. 过滤：将提取液过滤，滤液待用。
4. 酸碱中和：将滤液加入适量的稀盐酸，搅拌，直至生物碱沉淀完全。
5. 沉淀：将混合液静置，待生物碱沉淀完全后，取出上层清液。
6. 过滤：将沉淀物过滤，滤液待用。
7. 干燥：将滤液加入适量的水合氯醛，搅拌，使生物碱沉淀完全。
静置，待沉淀完全后，取出上层清液。
8. 过滤：将沉淀物过滤，滤液待用。
9. 干燥：将滤液加入适量的硅藻土，搅拌均匀。
静置，待生物碱沉淀完全后，取出上层清液。
10. 过滤：将沉淀物过滤，滤液待用。
11. 干燥：将滤液加入适量的石棉，搅拌均匀。
静置，待生物碱沉淀完全后，取出上层清液。
12. 干燥：将滤液蒸发浓缩，待水分蒸发至一定程度后，取出干燥。
五、实验结果与分析经过上述步骤，成功从植物原料中提取出生物碱。
实验过程中，需要注意以下几点：1. 在提取过程中，温度不宜过高，以免破坏生物碱的结构。
2. 在酸碱中和过程中，盐酸的浓度不宜过高，以免过度酸化，导致生物碱的损失。
3. 在沉淀过程中，需控制好时间，以确保生物碱沉淀完全。
4. 在干燥过程中，需注意温度的控制，以免生物碱分解。
汉防己提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解汉防己生物碱的提取、分离与鉴定方法。
2. 掌握回流提取、低压柱层析等实验操作技术。
3. 学习天然产物中活性成分的提取与分离过程。
二、实验原理汉防己（Stephania tetrandra S. Moore）为防己科千金藤属植物，其根含有多种生物碱，如汉防己甲素、乙素等。
本实验采用回流提取和低压柱层析方法，从汉防己根中提取生物碱，并进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己根粉、95%乙醇、丙酮、硅胶、氧化铝、硝酸银、氨水、氯化钡等。
2. 实验仪器：圆底烧瓶、回流装置、布氏漏斗、抽滤瓶、低压柱层析柱、超声波清洗器、电子天平、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1. 汉防己生物碱的提取（1）称取100 g汉防己根粉，置于1000 ml圆底烧瓶中。
（2）加入500 ml 95%乙醇，回流1 h。
（3）过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液。
（4）浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析（1）装柱：取25 cm长、内径1.8 cm的层析柱，用减压干法装硅胶约25 g（高约20 cm）。
（2）拌样加样：取汉防己碱约150 mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度），用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱：开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入溶剂，收集不同洗脱组分。
3. 汉防己生物碱的鉴定（1）紫外分光光度法：将提取的生物碱溶液在紫外分光光度计上测定其最大吸收波长。
（2）薄层色谱法：将提取的生物碱溶液点于薄层板上，与已知标准品进行对照，观察其Rf值。
五、实验结果与分析1. 提取结果：经回流提取和低压柱层析，从汉防己根中成功提取出生物碱。
2. 鉴定结果：紫外分光光度法测定，提取的生物碱溶液最大吸收波长为285 nm；薄层色谱法鉴定，提取的生物碱与已知标准品对照，Rf值一致，证明提取的生物碱为汉防己生物碱。
生物碱提取
生物碱提取——从茶叶中提取咖啡因一、实验题目：生物碱提取——从茶叶中提取咖啡因二、实验日期:实验地点：实验指导老师：三、实验目的1、学习从植物中提取生物碱的原理及方法。
2、通过学习从茶叶中提取咖啡因的实验，掌握一种从天然化合物中提取和提纯有机化合物的方法。
3、练习升华法纯化咖啡因的方法。
四、实验原理茶叶中含有生物碱，其主要成分是含量约占3-5%的咖啡因和含量较少的茶碱和可可豆碱。
此外，茶叶中还含有11-12%的丹宁酸以及叶绿素、纤维素、蛋白质等物质。
咖啡因是一种白色针状的晶体，无臭，味苦。
易溶于水、乙醇、丙酮、氯仿，微溶于石油醚，难溶于苯和乙醚。
咖啡因在100℃时失去结晶水，并开始升华，178℃时升华很快。
无水咖啡因的熔点为238℃,它的化学名称是 1,3,7-三甲基-2,6-二氧嘌呤，其结构式如下：咖啡因具有刺激心脏、兴奋大脑神经和利尿等作用，因此，可作为中枢神经兴奋剂，在医学上有重要的用途。
本实验从茶叶中提取咖啡因是用适量的乙醇(95%)作溶剂，在索氏提取器中连续萃取，然后浓缩、焙炒、升华而制得。
索氏提取器又叫脂肪提取器，它由三部分组成，下部为烧瓶，上部为球形冷凝管，中间为提取器。
被提取的物质放在提取器中加热至沸腾后溶剂蒸汽通过蒸汽上升管进入冷凝管，被冷凝为液体滴入提取器中。
器内液体与固体进行液-固萃取。
当液面超过虹吸管的顶点时，萃取液自动流回烧瓶中，经加热再蒸发、冷凝、萃取，如此循环，直至大部分可溶性固体物质被萃取，富集于烧瓶为止。
升华是利用固体混合物的蒸汽压或挥发度不同，将不纯净的固体化合物在熔点温度以下加热，利用产物蒸汽压高，杂质蒸汽压低的特点，使产物不经过液体过程而直接气化，遇冷后固化，而杂质则不发生这个过程，达到分离提纯的目的。
C H 33H 37主要试剂及产品的物理常数：（文献值）五、实验部分1、实验仪器：100mL圆底烧瓶、蒸发皿、玻璃漏斗、蒸馏头、球形冷凝管、尾接管、直形冷凝管、烧杯、锥形瓶、量筒等2、实验药品：茶叶、95%乙醇、生石灰3、实验内容、现象与解释：①主要实验流程：②具体实验内容：放入一粒沸石，加热后，滤纸开始变成浅褐色，滤纸的4、实验注意事项：（1）在用蒸发皿除水分的过程中,一定要不停的搅拌，以免爆沸。
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【实验目的】
1、学习生物碱提取及其衍生物的制备方法；
2、学会升华操作；
【实验原理】
咖啡碱具有刺激心脏，兴奋大脑神经和利尿等作用。主要用作中枢神经兴奋药。它也是复方阿斯匹林（A. P. C）等药物的组分之一。现代制药工业多用合成方法来制得咖啡碱。
茶叶中含有多种生物碱，其中咖啡碱（或称咖啡因,caffeine）含量约1%-5%，丹宁酸（或称鞣酸）约占11%-12%，色素、纤维素、蛋白质等约占0.6%。咖啡因是弱碱性化合物，易溶于氯仿、水、热苯等。
（2）瓶中乙醇不可蒸得太干，否则残液很粘，转移时损失较大。
（3）生石灰起吸水和中和作用，以除去部分酸性杂质。
（4）在萃取回流充分的情况下，升华操作是实验成败的关键。升华过程中，始终都需用小火间接加热。如温度太高，会使产物发黄。注意温度计应放在合适的位置，使正确反映出升华的温度。
【主要试剂及产品物理常数】
名 称
分子量
性状折光率Leabharlann 比重熔点℃
沸点
℃
溶解度：克/100ml
水
醇
醚
咖啡因C8H10N4O2
194.19
白色结晶
1.2300
234-239
【产品性状外观】
白色结晶状粉末
【产率计算】
【实验问题】
1、提取咖啡因时，方法（一）中用到生石灰，方法（二）中用到碳酸钠，它们各起什么作用？
2、从茶叶中提取出的粗咖啡因有绿色光泽，为什么？
2、升华操作
流程
回流提取 蒸馏 蒸干
95%乙醇
①升华
②收集
图2.8.2 常压升华装置
【实验关键和注意事项】
（1）滤纸套筒大小要合适，以既能紧贴器壁，又能方便取放为宜，其高度不得超过虹吸管；要注意茶叶末不能掉出滤纸套筒，以免堵塞虹吸管；纸套上面折成凹形，以保证回流液均匀浸润被萃取物，也可以用塞棉花的方法代替滤纸套筒。用少量棉花轻轻阻住虹吸管口。
从茶叶中提取咖啡因，是用适当的溶剂（氯仿、乙醇、苯等）在脂肪提取器中连续抽提，浓缩得粗咖啡因。粗咖啡因中还含有一些其它的生物碱和杂质，可利用升华进一步提纯。咖啡因是弱碱性化合物，能与酸成盐。其水杨酸盐衍生物的熔点为138℃，可借此进一步验证其结构。
【操作过程和实验装置图】
1、生物碱及其衍生物的提取与制备方法。
咖啡碱为嘌呤的衍生物，化学名称是1，3，7-三甲基-2，6-二氧嘌呤，其结构式与茶碱，可可碱类似。
嘌呤（Purine） 咖啡因(Caffeine) 茶碱(Guanine) 可可碱(Adenine)
含结晶水的咖啡碱为白色针状结晶粉末，味苦。能溶于水、乙醇、丙酮、氯仿等。微溶于石油醚，在100℃时失去结晶水，开始升华。120℃时升华显著，178℃以上升华加快。无水咖啡因的熔点为238℃