乙肝五项测定-ELISA(1)
乙肝五项
李成静
乙肝五项（酶联免疫法ELISA)
两对半：
表面抗原HBsAg ① 表面抗体HBsAb ② e抗原HBeAg ③ e抗体HBeAb ④ 核心抗体HBcAb ⑤
检验原理
表面抗原HBsAg 表面抗体HBsAb e抗原HBeAg e抗体HBeAb 核心抗体HBcAb
夹心法
竞争法
双抗体夹心法
乙肝表面抗原检验原理
采用抗体包被反应板，加入待测样本， 经孵育后，加入酶标抗体，当样本中存 在抗原时，该抗原与包被抗体结合并与 酶标抗体结合形成抗体抗原酶标抗体复 合物，加入底物产生显色反应，反之则 无显色反应。
乙肝e抗体检验原理（竞争法）
采用抗原包被反应板，加入待测样本， 同时加入酶标抗体，与抗原形成竞争结 合，如待测样本中抗体含量高，则酶标 抗体与抗原结合少，加入底物时显色淡， 反之显色深。
检验方法
表面抗原（两步法）
1.配置洗液（25倍稀释）。 2.根据标本数排板，多加两孔作为阳性对照。 3.加75ul待测样本和阳性对照于反应孔中。 4.封板，置37℃加速仪温育40min。 5.取出反应板，不洗，每孔各加酶50ul（即一滴）。 6.封板置37℃加速仪温育20min。 7.取出反应板，洗液洗5次，清水冲洗，吸水纸上拍干。 8.每孔各加显色液A和B各一滴，混匀。 9.显色蓝色为阳性，无色为阴性。
谢谢Βιβλιοθήκη 后四项（一步法）1.根据标本数排板，加阳性对照一孔。 2.加入血清50ul和阳性对照于反应孔中，加酶一 滴。 3.封板，加速仪温育20min。 4.取出反应板，用洗液洗5次，清水冲洗，板拍 干。 5.每孔各加显色液A和B各一滴，混匀。
乙肝五项(ELISA)手工操作法的假阳性与假阴性的分析及对策乙肝五项手工法
《乙肝五项(ELISA)手工操作法的假阳性与假阴性的分析及对策|乙肝五项手工法》摘要：乙肝检测中经常会出现假阳或假阴性的结果，这种情况是我们检验工作中经常会遇到的问题，也是科室与患者纠纷最多的问题，Ⅳ洗板要彻底，如不彻低，未去除实验中没参与反应的酶类物质，可造成假阳性和假阴性，抗病毒药物可清除血液中病毒，故有时检测表现为阴性乙肝检测中经常会出现假阳或假阴性的结果，这种情况是我们检验工作中经常会遇到的问题，也是科室与患者纠纷最多的问题。
患都不明白什么是假阳性和假阴性，只知在这家医院做出了阳性结果，就到其他医院或上级医院再做，如果出现结果不一样就找院领导和检验室索赔。
上述的问题是我们工作中问题还是患者自身的问题，难道不能避免吗？因此，在工作中我们用酶联免疫法（ELISA）一步法，结合病人所反应的情况，我们对1800份血样标本进行了分析，现报告如下： 1 外源性因素 1.1 标本因素①标本应防止溶血，脂血，细茵污染，血样标本和脂血严重都会造成结果错误，被污染的标本因菌体中可能含有辣根过氧化物酶，在测定中会导致非特异显色。
②标本最好采集后就做，不要放置冰箱内保存过久，因为血清中IgG 可聚合成多聚体，可造成假阳性。
此外标本在冰箱内放置过久抗原和抗体的免疫活性减弱，也可造成假阳性。
③采集后必须使其充分凝固后再分离，以保证血清中不含有纤维蛋白原，以防造成假阳性结果。
④另外反复冻融也可造成假阳性。
1.2 操作因素①操作者要高度的责任精神，操中作中要精力集中，标本不要张冠李戴，要做好操作前的校对工作。
②试剂准备。
从冰箱取出试剂后要与室温平衡后才能使用，一般为半小时平衡，所用去离子水应保证质量。
③熟练掌握操作规程和操作注意事项。
Ⅰ加样枪在加样过程中不可太快，以免吸入气体引起空泡，另外，建议用一次性的吸头，加样器要经常清洗，定期校对。
Ⅱ加入试剂前要充分混匀，，弃去两滴，要注意加入的角度，速度，以免多加或少加，和加入两孔之间，这样在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异性显色。
乙肝五项(ELISA法)手工操作不当结果分析
随 着现代 临床免疫 学不断 发展 ， Ｌ Ｓ 法 比较 灵敏 ， 需特殊 设 Ｅ ＩＡ 不 备， 可以定性 分析 ， 以应用 发展迅 速。Ｅ Ｉ Ａ 手工 法 已成 为医学 检 所 ＬＳ 验领域 的现实 。但在 实际 工作 中 ， 可能 会因操 作不 当而出现 一些 异常 指标 。近 几年来 笔者在 免疫室 丁作 中获得一 些经验 和体 会 ， 介绍 如 现
参考 文献
［］ 李天星 ． １ 现代 临床免疫学 检验 ． 北京 ： 军事医学 科学 出版 社 ，０ １ ２０，
５７．
［ ］ 赵 长春 ， ２ 王庭检 ， 春生 ． Ｊ 杨 临 未免疫检 验学 ． 天津 ： 天津 科学技 术
出版 社 ， ０ ， ８ பைடு நூலகம் ２ ０１ ５ －８ ．
作者 单位 ： 黑龙 － 省同 江 市人 民医院 检验 科 １ ６ ０ 工 ５４ ０
总之 ， 一点 小小 的疏忽 、失误 可能造 成检 验结 果的相 悖 ， 给患者 及家 属带 来物 质精神 上 的损 失 ， 临床 确诊带 来麻 烦 。冈此 ， 给 作为 检 验 １ 作人 员， 二 Ｔ作 中要 尽量减 少失误 ， 格遵守 操作规程 ， 及时总 结 严 并 经验 ， 提高 我们 的检 验工 作水 平 ， 为临 床提 供 町靠的 诊断依 据 。
血 液 ＡＬＴ 初 复 检 结果 差 异分析
张秀丽
【 中图 分类 号】 Ｒ４５ ７ 【 献 标 识码 】Ａ 文 【 文章编 号】 １ ０ ４— ７ ８ （ １ ）５ Ｉ ９ 一０ ０ ４ ４２ ｏ —０ １ ｂ ０ｏ
病 毒标 志物 未 被检 删和 “ 口期 ”的问 题 。但 因其 ＡＬ 升 高的原 窗 Ｔ 因很多 ， 肝胆 、心 血管 疾病 、骨 骼 疾病 外 ， 多非病 理 冈素 ， 除 诸 如药 物 、酒 精 、疲 劳 、剧 烈运 动 和 甲期 妊娠 等 也能 使 Ａ ＬＴ 轻 度增 高 。 ． 据统计 ， ＡＬ 从 Ｔ值来看 ， ７ ．％ Ａ Ｔ值偏 高者 ， Ｔ值处 丁 ２ ～ 有 ６９ Ｌ ＡＬ ５ ５ 赖 氏单位 ， 临床来 说是无病 理意义 。８ ％ 的单纯升 高者 可能为 Ｏ 从 ” １ 非肝 炎 因素 所致 ， 炎冈素 不是 造成 ＡＬ 肝 Ｔ值 升高 的主要 原 因 。 另 Ｉ 外 ， 衄 的 保存 、温度 、溶 血 、脂 血 、黄 疽 等 因素也 会 干扰 Ａ ＬＴ Ｉ液 测定 。 应对措施 ： ） 强对献血者 的宣传 ， （加 １ 初检合格 的献ｍ 员嘱其 ２ 周内 不 要饮酒 ， 注意休 息 ， 减少剧 烈运动 ， 避免 服用 引起 ＡＬ Ｔ增 高的药物 ， 如 抗高 【 药 、阿 司 匹林 等 。２ 由结 果可 看 出 ＡＬ 在 ４ ～５ ｕ Ｌ Ｉ １ Ｌ （） Ｔ ０ ０ ／ 的 占 ２ １％， ．８ 因此 对 比临界值稍 高一点 的血样应 进行 重复试验 。平底 微量板 底部应 清洁 ， 不能 有污迹和 划痕 ， 加样 后应立 即检测 ， 同时做好 ＡＬ Ｔ的室 内质控 。３ 尽量 减少人为 因素 ， （） 检验 人 员应 严格按操 作规程 操作 ， 少 技术 失误 ， 减 认真仔 细 。把 因人为 因素 造成 的影响 减小 到最
利用ELISA法检测乙肝五项操作过程中的几点注意事项
利用ELISA法检测乙肝五项操作过程中的几点注意事项【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085(2009)13-0236-02目前，临床乙肝五项检测一般采用ELISA法，因为ELISA法是当前灵敏度较高，特异性较好的方法，被临床广泛认可，而且操作非常简单。
但在操作过程中各个环节对检测结果影响较大。
望广大检验工作者引起高度重视，要严格遵守操作规程。
一般涉及标本的采集和保存、试剂的选择和准备、加样、浴温、冲板、显色、比色各步骤。
下面将操作过程中各个环节的注意事项做以下简介：1 标本的采集及保存采血管，优点是既可以预防血液中的气溶胶粒子在空气中传播，对工作人员造成危害，又可以防止标本被污染。
采血过程一定按无菌操作，保证采血顺畅,不要进行剧烈震荡，避免产生溶血现象，因溶血标本或长菌标本会造成假阳性结果。
血液标本采集后要使其充分凝固再分离血清，最好放置1小时，然后再用3000rmp离心15分钟，若当天检测可以放在室温，如果在次日或几天内检测，可分离血清后，放在2-8℃冰箱内保存，用时提前取出，恢复至室温温度时方可检测，如果长时间保存，必须分离血清后置于-20℃低温冰箱内密封保存，用时先置于2-8℃冰箱中使之溶解，然后在室温下使之全溶，方可使用。
2 试剂的选择及准备选择质量优质的试剂盒，严格阅读使用说明书，操作前将试剂在室温平衡30分钟，目的主要是为了保证试剂及反应微孔在后面浴温过程中能够较快达到所要求的温度，稀释洗板液所用蒸馏水或去离子水一定要保证质量，而且要当天用当天配制。
3 加入样本及反应试剂血清或血浆标本一定要分离好，决不能将纤维蛋白原或血球带入反应微孔中，避免出现假阳性或假阴性。
加样器必须经过校准；加样速度不可以太快，加样太快无法保证微量加样器的准确性和均一性；避免加在孔壁上部，加在孔壁上部的非包被区易导致非特异性吸附；避免样本溅出或产生气泡，溅出会对邻近孔造成污染，出现气泡则反应液界面有差异。
ELISA法检测乙肝五项影响因素
ELISA法检测乙肝五项的影响因素初探【摘要】目的：探讨elisa法检测乙肝五项的影响因素。
方法：对我院采用elisa法检测乙肝五项的试验进行回顾分析，总结试验影响因素。
结果：elisa法检测乙肝五项可能的影响因素为患者因素、实验操作因素、标本因素、试剂因素、elisa试验特点等。
结论：医务人员需严格按照规范操作进行试验，避免elisa法测定乙肝五项中的各项影响因素，从而提高临床诊断灵敏度、特异性。
【关键词】elisa；乙肝五项；影响因素随着现代临床免疫学的发展，酶联免疫吸附试验（elisa）因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点[1]。
通常采用96孔酶标板作为固相来检测相应抗原、抗体。
虽然操作简单，但可能由于人工操作的差异，检验过程中受到外界因素及人为因素影响较多，而易使检测结果出现误差。
本研究从患者因素、实验操作因素、标本因素、试剂因素、elisa试验特点等方面入手，简要探讨elisa法检测乙肝五项的影响因素，报道如下：1患者因素以患者体内的非特异性干扰物质为主，常见的有：内源性酶、补体、类风湿因子（rf）[2]。
人血清中igm、igg型类风湿因子（rf），能结合捕捉抗体与标记二抗的fc段，从而出现假阳性结果。
补体活化过程中，固相一抗及酶标二抗结合过程中，引起抗体分子变构，fc的c1q分子结合位点暴露出来，c1q可将本不能结合的二者连接起来，引起假阳性。
内源性酶对双抗夹心elisa影响较小，用edta或nan3·h2o2即可灭活酶。
2实验操作因素elisa实验操作包括包被、封闭、孵育、加样、洗涤、显色、比色。
下面就这几个操作可能涉及的影响因素一一分析。
2.1包被：要求包被液ph值9.6的碳酸盐缓冲液，通常与酶标板中加入包被液，后放置于4°c冰箱过夜，也有学者主37°c保温2小时。
包被最适浓度随载体及包被物的性质变化很大，需根据实验摸索与酶结合物的最适宜浓度。
通常的蛋白质包被浓度100?g/ml-20?g/ml。
乙肝五项金标法原理
乙肝五项金标法原理乙肝是一种由乙型肝炎病毒引起的传染病，对人体健康造成严重危害。
乙肝五项金标法是一种常见的乙肝检测方法，其原理主要基于血液中特定抗体和抗原的检测。
第一项：HBsAg检测HBsAg是乙型肝炎病毒的表面抗原，是乙肝病毒感染早期出现的标志物。
HBsAg检测是乙肝五项金标法中的第一项，其原理基于酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，通过检测血液中是否存在HBsAg抗原来判断个体是否感染了乙肝病毒。
第二项：HBsAb检测HBsAb是针对HBsAg抗原产生的特异性抗体，是乙肝病毒感染后免疫应答产生的免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）。
HBsAb检测是乙肝五项金标法中的第二项，其原理同样基于ELISA 技术，通过检测血液中是否存在HBsAb抗体来判断个体是否曾经感染过乙肝病毒或接种过乙肝疫苗。
第三项：HBeAg检测HBeAg是乙型肝炎病毒的核心抗原，是乙肝病毒感染中一种重要的指标。
HBeAg检测是乙肝五项金标法中的第三项，其原理同样基于ELISA技术，通过检测血液中是否存在HBeAg抗原来判断个体是否处于乙肝病毒活动性感染期。
第四项：HBeAb检测HBeAb是针对HBeAg抗原产生的特异性抗体，是乙肝病毒感染后免疫应答产生的免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）。
HBeAb检测是乙肝五项金标法中的第四项，其原理同样基于ELISA 技术，通过检测血液中是否存在HBeAb抗体来判断个体是否处于乙肝病毒慢性感染期或已经康复。
第五项：HBcAb检测HBcAb是乙型肝炎病毒的核心抗体，是乙肝病毒感染后免疫应答产生的免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）。
HBcAb检测是乙肝五项金标法中的第五项，其原理同样基于ELISA技术，通过检测血液中是否存在HBcAb抗体来判断个体是否曾经感染过乙肝病毒或接种过乙肝疫苗。
乙肝五项金标法是一种包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb检测的乙肝检测方法，其原理基于ELISA技术，通过检测血液中特定抗体和抗原来判断个体是否感染了乙肝病毒、处于何种感染期或是否曾经感染过乙肝病毒。
乙肝五项操作方法
乙肝五项操作方法
乙肝五项操作方法指的是乙肝病毒五项筛查。
乙肝病毒五项筛查是指采用检测HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg和HBeAb五个标志物来判断一个人是否感染了乙肝病毒。
具体操作方法如下：
1. 采集血样：可以通过采集患者的静脉血进行操作。
首先清洁患者的皮肤，然后用一次性注射器采集静脉血。
2. 检测HBsAg：将采集到的血样进行实验室操作，使用酶联免疫吸附法(ELISA)或免疫荧光法(IF)等方法检测血样中的HBsAg。
3. 检测HBsAb：对于HBsAg阳性的血样，进一步检测HBsAb。
同样使用ELISA 或IF等方法检测血样中的HBsAb。
4. 检测HBcAb：如果HBsAg和HBsAb都阳性，进一步检测HBcAb。
仍然使用ELISA或IF等方法检测血样中的HBcAb。
5. 检测HBeAg和HBeAb：对于HBcAb阳性的血样，可以继续检测HBeAg 和HBeAb。
同样使用ELISA或IF等方法进行检测。
通过对血样中这五个标志物的检测，可以判断一个人是否感染了乙肝病毒，以及感染状态的不同。
这对于乙肝病毒的预防和控制具有重要意义。
ELISA法检测乙肝五项影响因素及结果分析与对策
经验 爻 流
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法检 测 乙肝 五项影 响因素及结果分析与对策
曹贺涛
宁夏石嘴 山市疾病预 防控制 中心 ７ ５ ３ ０ ０ ０
【 摘
要】 随着临床免疫 学不 断发展 ， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法比较灵敏 ， 不需特殊设备 ， 可以定性分析 ， 所以应 用发展迅速 。 但在 实际工作 中，
１ ． ２标 本凝 固２ ～２ ｈ 开始 可 将 二者连 接起 来 造成 假 阳性 ，采用 ５ ６ ℃３ ０ 分 钟 灭活 补体 可 降
凝 固 ，１ ８～ ２ ４ ｈ血块 完全 收缩 。在 工作 中 ，有 时 为了争 取时 间快 低假 阳性率 ，高 浓度 的 Ａ Ｆ Ｐ（ 如孕 妇 ），在储 存 过程 中可 能形 成
可能会 因操作 不 当而 出现一 些异常指标 。总之 ，一点 小小的疏忽、失误可能造成检验 结果的偏差 ，给 患者及 家属 带来物 质
精神 上的损失 ，给 临床确诊 带来麻 烦。 【 关键 词 】Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ；乙肝 两对半 ；影响 因素 ；结果分析
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法广 泛 用 于 乙肝 两对 半 检测 ，但 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ测 定 中影 响 因 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ 、Ｈ Ｂ ｅ Ａ ｇ 假 阴性 ；或 Ｈ Ｂ ｅ Ａ ｂ 和Ｈ Ｂ ｃ ｈ ｂ的假 阳性 。 素 较 多，有 些 因素 会 导致结 果假 阳 性或 假 阴性 ，本文 就 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测
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HBsAg HBsAb HBeAg
夹心法
HBeAb HBcAb
竞争法
底物 显色
+
-
？
？？？
免疫反应模式
图1 双抗体夹心法ELISA原理图
竞争
固（待相H测BcA抗Agb体）+ （酶待H标B检c抗Ab体A）b + AbE
HBcAEb检E测
样本 1~20
3 加样
50μl
阴性 对照 50μl
阳性 对照 50μl
空白 对照
—
1d 4 加酶结合物
1d
1d
—
振荡混匀
5 温育 6 洗涤
封板， 37℃，30min 弃液，加洗涤液洗5遍，拍干
7 加显色剂
A、B显色液各1d，振荡混匀
8 温育
封板， 37℃，15min
结果判定： 与对照比较后依据判定标准报告
夹心法：
竞争法：
阳性：显色 阴性：不显色
阳性：不显色 阴性：显色
报告：
1号血清， HBsAg（-） HBsAb（+） HBeAg（-） HBeAb（-） HBcAb（-）
检测方法：ELISA
注意：
1.溶血标本会影响结果准确性； 2.ELISA双抗体夹心法，类风湿因子会干扰实验；
思考：
1.各诊断试剂盒中哪些成分可以交叉使用？
底物
显色
固相抗原 HBcAg
温育 洗板
E
温育
E
图2 竞争法ELISA测HBcAb
材料： 1. 标本 ： 待检血清标本1~20号
2. 诊断试剂：乙肝五项商品试剂盒
HBsAg商品试剂盒 HBeAg商品试剂盒 HBcAb商品试剂盒
HBsAb商品试剂盒 HBeAb商品试剂盒
3. 其他材料：
（1）37℃培养箱、微量移液器等。 （2）蒸馏水等。