ELISA法检测血清抗心磷脂抗体
抗心磷脂抗体的实验室检测
典 型 的 抗 心 磷 脂 抗 体 出 现 于 原 发 性 和 继 发 性 抗 磷 脂 综 合 征 。可 长 期 持 续 存 在 。然 而 ，其 他疾 病 如 感 染 ，恶 性 肿 瘤 ，服 药 （如 氯丙 嗪 等 ）或 健 康 个 体 也 可检 出 。 此 时 。抗 心 磷 脂 抗 体 常 常 为 一 过 性或 持 续 几 年 消 失 。因 此 。并 非 所 有 ＡＣＡ 阳性 均 为 ＡＰＳ患 者 。 ２．２ ＡＣＡ 与 血 栓 性 疾 病
２．３ ＡＣＡ 与 反 复 流 产
研 究 发 现 在 自身 免 疫 性 疾 病 ．某 些 因 感 染 、药 物 导 致 的 疾 病 中 ，如 果 ＡＣＡ 阳 性 ，则 习 惯 性 流 产 的 发 生 率 较 高 ，约 ２８ 左 右 ，且 高 滴 度 的ＩｇＧ 型ＡＣＡ 可 作 为 预 测 高危 妇 女 流 产 发 生 的一 种 较 为 敏 感 的指 标 。 ２．４ ＡＣＡ 与 肾脏 疾 病 Ⅲ
［４］张 文 ，李 芳 ，张丽 颖 ．抗 心 磷 脂 抗 体 的 临 床 意 义 ［Ｊ］．中 国 药 物 与 临
床 ，２００２，２（２）：６９—７１ ［５］王 宇 泓 ，杨 锡 强 ．抗 心磷 脂 抗 体 的 研 究 发 展 ［Ｊ］．重 庆 医 学 ．２００３，
３２（４）：４４７— ４４９
［６］钟 清 ．杜 晓 刚 ，陈 思 静 ．等 ．肾脏 病 患 者 抗 心 磷 脂 抗 体 检 测 的 临 床 意 义 ［Ｊ］．广 东 医学 ，２００２，２３（１２）：１２５０—１２５１
很 多 文 献 报 道 ＡＣＡ 是 血 栓 形 成 的 指 标 之 一 ，一 些 年 轻 人 出 现 不 明 原 因 的多 发 性 深 部 静 脉 栓 塞 ，肾 静 脉 栓 塞 ，视 网 膜 静脉 栓 塞 ．实 验 室 检 查 唯 一 不 正 常 的指 标 就 是 ＡＣＡ 升 高 。
抗磷脂抗体检测方法
抗磷脂抗体检测方法
抗磷脂抗体检测方法是用于检测人体血清中是否存在抗磷脂抗体（APA），这是一类自身免疫抗体，与磷脂类物质结合而产生。
以下是几种常见的抗磷脂抗体检测方法：
1.免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种常用的检测方法，在抗磷脂抗体检测中也广泛应用。
该方法将标准化的抗磷脂抗原固定在微孔板上，然后通过加入待测血清样本，观察是否有抗磷脂抗体与抗原发生特异性结合。
结果可以通过酶标记的二抗或底物染色来定量或定性分析。
2.凝集试验：抗磷脂抗体可与磷脂类物质结合形成凝集，因此凝集试验也是一种常见的抗磷脂抗体检测方法。
这种方法通常通过向抗原和血清混合后进行观察，观察是否有凝集形成。
3.血浆高灵敏度C反应蛋白（hs-CRP）：hs-CRP是一种炎症标志物，但高水平的hs-CRP也可能与抗磷脂抗体的存在相关。
因此，测量血浆中的hs-CRP水平也可以作为抗磷脂抗体的间接指标。
系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义
系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义张晓梅;夏小明;连金泉;罗兴燕;杨峰【期刊名称】《南昌大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(050)004【摘要】目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者抗心磷脂抗体(anti-cardiopin antibody,ACA) 的检测及其临床意义.方法采用ELISA 法检测69例SLE患者(SLE组)和50例健康体检者(正常对照组)的血清ACA水平,同时对SLE组患者进行抗核抗体(anti-nuclear antibody,ANA)、抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA antibody,dsDNA)、尿蛋白定性、补体C3、血小板计数等测定.结果 SLE组血清ACA阳性23例,阴性46例.SLE组血清ACA抗体水平为(13.18±11.53)kRU·L-1,显著高于正常对照组的(5.01±2.67)kRU·L-1(P＜0.01).ACA阳性组ANA平均滴度高于ACA阴性组(1∶2 549.2 vs 1∶1 324.0),但差异无统计学意义(P＞0.05).ACA阳性组抗dsDNA、尿蛋白定性阳性率分别为60.9%、65.2%,均显著高于ACA阴性组的34.8%、30.4%(P＜0.05或P＜0.01).ACA阳性组补体C 3、血小板计数分别为(0.43±0.17)g·L-1、(91.42±16.19)×109·L-1,均显著低于ACA阴性组的(0.59±0.19)g·L-1、(108.24±22.05)×109·L-1(均P＜0.01).结论 ACA在SLE的发病及病情发展起了重要的作用.它对SLE的诊断、病情严重程度的评价、判断预后及疗效观察等均有重要的临床意义.【总页数】3页(P66-68)【作者】张晓梅;夏小明;连金泉;罗兴燕;杨峰【作者单位】上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000【正文语种】中文【中图分类】R593.24+1【相关文献】1.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义 [J], 李建民2.系统性红斑狼疮D-二聚体、抗心磷脂抗体检测的临床意义 [J], 吴南辉;许赤多3.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体检测及临床意义 [J], 张玉蓉;李义德;王立新4.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义 [J], 张晓梅;夏小明;连金泉;罗兴燕;杨峰5.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义 [J], 梁虹;徐世正;周心房;熊腊元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2020抗磷脂综合征诊断与治疗(系列八)(三)抗磷脂综合征实验室检查
2020抗磷脂综合征诊断与治疗（系列八）（三）抗磷脂综合征实验室检查2016年我国复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）诊治专家共识将复发性流产定义为：3次或3次以上在妊娠28周之前的胎儿丢失。
但大多数专家认为，连续发生2次流产即应重视并予评估，因其再次出现流产的风险与3次者相近。
2017年欧洲人类生殖与胚胎学会（ESHRE）的最新定义：反复妊娠丢失（recurrent pregnancy loss，RPL）又称反复自然流产（recurrent spontaneous abortion，RSA），是指2次或2次以上孕周在24周之前的妊娠丢失。
反复流产发病原因众多，既可能是单一因素、也可能是混杂的多因素。
反复流产病因主要包括遗传因素（夫妻染色体异常2%-5%）、生殖道解剖结构异常（7%）、内分泌紊乱（8%-12%）、生殖道感染（4%）、免疫及血栓性疾病等因素（50%-60%），其他还有男性因素、环境因素、精神因素、药物因素、不良生活习惯、营养状况及不明原因反复流产（unexplained recur-rent spontaneouse abortion，URSA）。
不明原因反复流产中约80%与免疫学因素相关。
反复流产的诊断为排除性诊断，病因检查和治疗费用较高。
中国地域辽阔，经济发展不平衡，对反复流产患者病因检查和保胎用药应遵循因地制宜、量力而行、规范检查和适度治疗的原则。
根据不良孕产史、流产次数、经济条件、检查技术、酌情选择检查项目，尽可能做到病因清楚，诊断准确。
孕后根据既往流产病史、流产病因，孕后阴道超声、绒毛膜促性腺激素（HCG）、孕酮（P）、雌二醇（E2）、免疫和凝血等检查，横向及纵向综合分析，准确判断胚胎发育情况，恰当选择保胎药物，力争做到精准检查、精准诊断、精准用药、精准保胎。
为了推广普及反复流产与精准保胎事业，规范反复流产病因检查、诊断和治疗，我将反复流产与精准保胎理论知识按临床需要编排为以下篇章，供同行参考使用。
2种不同方法检测抗磷脂抗体的结果比较
ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１１．１８·临床实验研究·２种不同方法检测抗磷脂抗体的结果比较王杜平ａ，陈艳红ａ，祖蓓蓓ｂ，杨德良ａ，金海峰ａ，刘苏贤ａ，牛国平ａ（徐州市中心医院ａ．检验科，ｂ．风湿免疫科，江苏徐州２２１００９）摘要：目的 比较化学发光法（ＣＬＩＡ）与ＥＬＩＳＡ检测抗磷脂抗体（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＰＬｓ）的结果。
方法 收集８６例抗磷脂综合征（ＡＰＳ）患者、５０例健康人对照共１３６份血清，分别用ＥＬＩＳＡ和ＣＬＩＡ法检测抗心磷脂抗体（ａＣＬ）ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ和抗β２糖蛋白Ⅰ抗体（ａβ２ＧＰⅠ）ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ。
对比分析２种方法学试剂检测结果的一致性。
结果 ＥＬＩＳＡ法与ＣＬＩＡ法检测ａＣＬＩｇＭ／ＩｇＧ和ａβ２ＧＰⅠＩｇＭ／ＩｇＧ／ＩｇＡ的总符合率均超过８５％，仅ａＣＬＩｇＡ符合率稍差，为７７．９％；除ａＣＬＩｇＡ项目Ｋａｐｐａ值为０．１９８外，其他项目符合率Ｋａｐｐａ值范围为０．４３４～０．７８７。
在ＡＰＳ组中，ＣＬＩＡ法检测ａＣＬ（ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ）和ａβ２ＧＰⅠ抗体（ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ）的检出率均高于ＥＬＩＳＡ法（８６．０％ｖｓ６２．８％，９１．９％ｖｓ８１．４％），差异有统计学意义（χ２分别为６．７、１０．５，Ｐ＜０．０５）。
结论 ＣＬＩＡ法与ＥＬＩＳＡ法检测ａＰＬｓ的结果符合率较高，而ＣＬＩＡ法检测可提高对ＡＰＳ患者的检出率，为临床诊断提供更好的实验室诊断依据。
关键词：化学发光法；酶联免疫吸附试验；抗磷脂抗体；抗心磷脂抗体；抗β２糖蛋白Ｉ抗体中图分类号：Ｒ４４６．６ 文献标志码：Ａ 抗磷脂综合征（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＰＳ）是一组异质性自身免疫性疾病，其特征是反复出现动脉血栓、静脉血栓以及妊娠并发症，血清中抗磷脂抗体（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＰＬｓ）持续阳性等［１］。
ELISA法检测梅毒患者血清中抗心磷脂抗体
主围监垦崖壁蜜枣盎型些生！笪篁１１鲞箜兰塑ＥＬＩＳＡ法检测梅毒患者血清中抗心磷脂抗体郑占才１张荣富２白彦萍１陈锡唐［摘要］目的：探时ＨＪＳＡ法测定抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）在梅毒检测中的应用价值。
方法：用ＥＬｌＳＡ法检测６７例梅毒患者血清巾ＡＣＡ水平，并对恐例ＡＣＡ阳性的自身免疫性疾病患者血清进行ＲＰＲ、ＴＰＰＡ榆测。
结果：３９侧ＲＰＲ阳性的梅毒血清中，ＥＨＳＡ检测ＡＣＡ阳性２３例，若以ＲＰＲ为金标准，ＥＨＳＡ法检测梅毒的敏感性只有５８９７％（２３１３９）；２８倒ＲＰＲ阴性（ＴＰＰＡｍ性）的梅毒Ｊ】『【清中，ＥＬＩＳＡ检测ＡＣＡ阿性１例。
＾（Ｈ的阳性牢与ＲＰＲ滴度呈正相关（ｒ＝０９９５，Ｐ＜０００１）。
２２倒ＡＣＡ阳性的对照血清，ＴＰＰＡ椅测均阴性，ＲＰＲ阳性１例＝．结论：本研究提示ＥＬＩＳＡ法检测梅毒患者血清中ＡＣＡ时，敏感性和特异性均不如ＲＰＲ法。
［关键词］梅毒；酶联免疫吸附实验；抗心磷脂抗体ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆⅫｔｉｃⅫ蝴ａｎｆｉｂ础ｌｅｓｈｔｓｍｏｆｓｙｐｌ越ｓｂｙＥＬＩＳＡｚｋ增励删，蜘田蜡胁卿，ＢａｉＹａｎｐｉｎｇ，ｄ—Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆ㈣蝴，ＣｈｉｎａＪａｐａｎｆ恤ｒｌ蛳Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９［ＡｌⅪｔｎｌｅｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：＇ｌｉｂｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅ硝ａｌｌＨＩＳＡｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｆｉｌｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｆｉｃａｒｄｉｏｌｉｐｉｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＣＡ）ｉｎ【ｍｎｅｎｂｗｉｔｈｓ刑ｆｉｌｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：１’Ｅｓ盯ａｏｆ６７ｃａｓ瞄ｏｆｓｙｐｈｉｌｉｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＡＣＡ—ＥＬＩＳＡ，ａｎｄ２２ｃａｓ・惜ｏｆａｕｔｏｉＦＩＩＩＴＩＩＩｌｌｆ＇ｄｉｓｅａｓｅｓｗｉｔｈｐｏａｉｔｉｖｅＡＣＡｗｅｒｔｊｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈＲＰＲａｎｄＴＰＰＡＲｔｓｕｌｌｓ：Ｏｆｔｈｅ３９ｃａｓ嘴０ｆＲ豫ｐｏｓｉ—ｔｉｒｅｓｙｐｈｉｌｉｓ．Ｚ３ｗｅｍＡＣＡｐｏｓｉｔｉｖｅｂｙＡＣＡ—ＥＬｌＳＡＣｏｍｐａｒｄｔｗｉｔｈＲＰＲ，ｌｌｌｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ０ｆＡＣＡ—ＥＩ，ＩＳＡⅧ５８９７％（２３／３９）．Ｏｆｔｈｅ２８ｃａｓｅｓｏｆＲＰＲｎｅｇａｔｉｖｅ（１胛ＡＦｚｓｉｔｉｖｅ）ｓｙｐｈｉｌｉｓ，１ｗａｓＡＣＡｐｏｓｉｔｉｖｅｂｙ廿』ｓＡ．ＴｈｅｒｅｗａｓａｐｏｓｉｔｉｖｅＩｉｌｌｅ８１＂ｃｏｍｊ｜ａｔｉ（）１１ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｉｔｅｒ０ｆＲＰＲａｎｄｔｈｅｔｒ，ｓｉｔｉｖｅｒｉｔｅｏｆＡＣＡｂｙＥＬＩＳＡ（ｒ＝０．９９５，Ｐ＜０００１）．ＡⅡｔｈｔ＿２２ｃｏｎｔｒｏｌｓ棚ｏｆＡＣＡｐｏｓｉｔｉｖｅ㈣ｗｅ撺僻Ａｎｅｇａｔｉｖｅ，ｂｕｔＯｎｅｏｆｔｈｅｍ惴ＲＰＲｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｃｌｍｅｌｕｓｉｍ・Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉ，：ｉｔｒａｎｄＨｅｃｉｔｌｃｉｔｙｏｆＡＣ“叫ＳＡｉｎｔｅｓｔｉｎｇｆｏｒｔｈｅｄｉａ＂ａｓｉｓｏｆｓｙｐｈｉｌｉｓａｒｅｋｓａｔｉｒｉｎｇｔｈａｎＲＰＲｌＫｅｙｗｏｒｄｓｓｙｐｈｉｌｉｓ；ＥＬＩＳＡ；ａｎｔｉｃｍａｔｉｏｌｉｐｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ梅毒螺旋体感染人体后，患者血清中产生一种抗心磷脂抗体，又称反应索。
ELISA检测血清抗体
间接ELISA检测血清抗体一实验原理将一定量的已知抗原吸附在酶标板的凹孔内，加入待测抗体（如免疫抗血清），保温后洗涤未结合的杂质蛋白；加酶标抗抗体（酶标二抗）并保温，洗涤；加底物保温一定时间后，加酸或碱终止酶促反应，底物降解量等于抗体量，酶标仪测定抗体含量。
原理如图。
包被抗原加入一抗加酶标二抗终止显色二实验操作程序1 包被用包被液稀释正常人血清（抗原）稀释1000倍↓酶标板每孔加入稀释后人血清100μl↓置于湿盒中37度1小时2 洗涤取出酶标板↓甩去酶标板小孔内液体，用洗涤液（PBST缓冲液，pH7.4）洗3次，每次3分钟，每次洗后，在滤纸上排干3 封闭封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。
滤纸干燥过的酶标板↓每孔加入100μl抗体稀释液↓置于湿盒中37℃保温1小时↓洗涤，方法同（2）。
4 加一抗（兔抗人血清）：将兔抗人抗血清用抗体稀释液稀释不同倍数：100、1000、10000、40000、80000、160000倍，每样设3复孔。
同时设阴性对照孔，阴性对照孔只加抗体稀释液。
（兔抗人抗血清稀释1000倍）封闭后的酶标板↓每孔加入不同稀释倍数的人抗兔抗血清100μl，每样设3复孔↓置于湿盒中37℃保温1小时↓洗涤，方法同（2）5 加酶标二抗用抗体稀释液将酶标二抗稀释为5000倍。
加入一抗并洗涤过的酶标板↓每孔加入稀释后的酶标二抗100μl↓置于湿盒中37度0.5小时↓洗涤，方法同（2）6 显色：每孔加底物A和B各50μl，置于室温显色15分钟左右。
可见颜色明显的梯度变化。
7 终止：显色后，用2MH2SO4溶液50μl终止反应.终止后即测吸光值。
8 酶标仪检测吸收值。
双波长检测：630nm/450nm三溶液配制以下为准备的药品，学生自己配制底物显色液A（避光）：50mlNa2HPO4.12H2O(MW358.14) 18.4g过氧化脲0.03g需要加热促进溶解底物显色液B(避光)：50ml柠檬酸H2O 0.515gTMB母液1ml(TMB母液：10mgTMB+1mlDMSO)四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)辣跟过氧化物酶的底物，经酶作用后共产物显兰色。
抗心磷脂抗体(ACA)IgGELISA
抗心磷脂抗体(ACA) IgG ELISA磷酯有着广泛的生理意义。
循环抗磷脂抗体的存在可引起种种疾病，这些抗磷脂抗体的作用途径至今不清楚。
可能通过与内皮细胞膜上磷脂的交叉反应防止花生四烯酸释放，致使前列环素合成减少，从而促进血小板凝聚；另一种机理是防止血纤维蛋白溶解酶原激活剂的释放，降低血纤维蛋白溶酶原转变成血纤维蛋白溶酶，致使血纤维蛋白裂解减低。
ACA的存在常易发生静脉及动脉血栓形成。
ACA对血小板膜上的磷脂具有交叉反应，导致网状内皮系统摄血小板作用加强。
ACA阳性见于急性缺血性脑病，缺血性视神经病、脑血栓形成、偏头痛样头痛、肺源性高血压和习惯性流产。
抗磷脂抗体综合症的实验室诊断主要是抗磷脂抗体测定。
本试剂盒用于定性检测人血清中的抗心磷脂抗体ACA IgG浓度。
酶标板96wells 浓缩洗涤液(20X) 25ml吸收液12ml 酶联物12ml底物A 6ml 阴性对照 1 vial底物B 6ml 终止液6ml1.避免溶血、高血脂标本。
2.标本中若有悬浮物，应离心去除。
3.标本若不及时检测，请冻存于-20°C。
1.取出所需板条，其余立即密封放回2-8°C。
取出的板条应放入自封袋内（密封）平衡至室温再试验，以防水滴凝聚在冷板条上。
2.浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至500ml)。
未用完的放回2-8°C。
3.试剂盒应平衡至室温再试验。
1.样品孔内先加入100ul吸收液，再加入10ul血清标本。
2.加入100ul阴性对照至相应孔内。
(必要时加入100ul阳性血清至适当孔内)3.空白孔内加入100ul吸收液。
4.轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 45分钟。
5.洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上拍干，洗5次。
6.每孔加入100ul 酶联物, 轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 30分钟。
7.洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上拍干，洗5次。
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临床检验杂志 2010年 1月第 28卷第 1期 Ch in J C lin L ab Sc,i Jan. 2010, V o .l 28, N o. 1
文章编号: 1001-764X ( 2010) 01-016-03
#临床检验技术研究 #
EL ISA 法检测血清抗心磷脂抗体
金燕萍 1, 陈因1, 于雪 莹1, 鄢盛恺 1, 侯林浦 2, 李欣 2, 吴尔若 2, 马旭 2 ( 1. 卫生部中 日友好医院检 验科, 北京 100029; 2. 国家人口计生委科学技术研究所, 北京 100081)
度心磷脂包被效果进行比较, 结果用 100、50、12. 5、 6. 25和 3. 125 Lg /m l心磷脂包被时, P /N 值分别为 6. 988、6. 474、5. 891、4. 762和 3. 733。在以后的研 究中均选用 50 Lg /m l浓度包被。同法选用 1 Lg /m l B2-G P I进行包被。包被体积 50 Ll与 100 L l结果无 区别, 均选用 50 Ll。 2. 3 包被条件的比较 一种方法是在氮气条件下 快速蒸发约 20 m in, 另一种在 4 e 过夜, 两者结果无 显著差异, 因此选用 4 e 过夜进行包被。分别用 10 g /L BSA、3 g /L BSA-H epes、10% 小牛血清 ( 灭活 )、 10% 小牛血清 ( 新鲜 ) 、10 g /L PEG-PBS等 5种封闭 液封闭, 结果见表 1。各种封闭液封 闭效果无显著 差异 ( P > 0. 05) , 但以 10 g /L PEG-PBS混合液效果 最佳且价格便宜。
敏感、特异、简便快速、重复性佳的特点, 可 用于血清 ACA 水平的常规检测。
关键词: 抗心磷脂抗体; 酶联免疫 吸附试验
中图分类号: R 446. 6
文献标识码: A
S tudy on an EL ISA for detecting an ticard iolip in an tibod ies in serum J IN Yan-p ing1, CH EN Y in1, YU X ue-y ing1, YAN Sheng-kai1, H OU Lin-pu2, LI X in2, W U E r-ruo2, M A X u2 ( 1. D epartm ent of Laboratory, China-Japan F riendship H o sp ital, B eij ing 100029; 2. N ational R esearch Institu te of Fam ily P lanning, Beij ing 100081, Ch ina) Abstrac t: Ob jec tive T o ana ly ze influenc ing facto rs on an EL ISA for detecting an ticard io lipin antibod ies ( ACA ) in serum and to improve test procedures. M ethods ACA in 559 serum sam ples w as detec ted by indirect EL ISA, in wh ich the standard certificated by Con federation of Euro immun also serv ed as cut-o ff va lue. Re su lt T he techn ica l com parison and im provem ent o f m ethod fo r detec ting ACA w ere accomp lished w ith the specificity o f 96. 7% ( 503 /522) , sensitiv ity o f 89. 2% ( 33 /37) and c lin ica l co incidence of 96. 2% ( 538 /559) . Conclusions T he optim ized m ethod has advantages of h igh sens itiv ity and spec ificity, good repeatability, rap idity, and conv en ience. The assay can be used for routine detection o f ACA in se rum. K ey word s: anticardio lip in an tibody; EL ISA
1 材料和方法
1. 1 样本来源 血清样本来自本院及北京大学第 一医院检验科, 其中健 康成人 431名, 梅毒患者 89 名, SLE患者 39名, 均保存于 - 70 e 待测。经欧蒙 公司 EL ISA 法检测 ACA 试剂盒测定, ACA 阳性 37 份, ACA 阴性 522份。 1. 2 试剂 包被用抗原 Ñ 为心磷脂, Ò 为 B2-糖蛋 白 Ñ ( beta 2 g lycoprote in I, B2-GP I)。心磷脂系从 牛心中提取的心磷脂乙醇溶液, 浓度为 4. 7 mg /m ,l
2 实验与结果
2. 1 包被载体的比较 本研究对 Corn ing Costar高 亲和力板条、C-射线处理国产 8孔板条及国产 12孔 板进行了比较, 将阳性及阴性样本用以上不同包被 载体进行检测, 其 P /N 值显 示不同厂家、批号的包 被载体对包被抗原的吸附力和均一性均有差别, 其 中以 C orn ing Costar板吸附力最佳。 2. 2 包被抗原浓度与体积的选择 以 4份阳性血 清与 4份阴性血清平均 A 值的比值 ( P /N ) 对不同浓
注: * 含 10 mm ol /L H epes, 150 mmo l/ L N aC ,l 3 g /L BSA, pH 7. 4。
10% 小牛血清 (新鲜 ) 0. 649 0. 226 2. 872
10 g /L PEG-PBS
0. 634 0. 210 3. 019
2. 4 样 本稀释 液的比 较 本 研究 就含 不同浓 度 BSA 的稀释液对检测结果的影响进行比较, 结果含 有 20 g /L、100 g /L BSA的 PBS稀释液的检测结果基 本一致, 并且加入显色剂后对实验结果无显著影响。 但未含 BSA的稀释液则检测结果不佳。 2. 5 样本稀释度与反应温度的选择 血清 1B50和 1B100 稀释 P /N 值分别为 3. 737 和 3. 511, 二者无显著区 别。稀释度 > 1B200, P /N值显著降低 ( 2. 963~ 2. 646)。 反应温度 25 e 优于 37 e 水浴。 2. 6 B2-GP I对检测结果的影响 用欧蒙公司 A CA 检测试剂检测结果 阳性的血清 25 份, 阴性血清 17 份进行比较, 发现单用心磷脂抗原包被时, 敏感性为 68. 0% ~ 76. 0% , 特异性为 82. 4% ; 将 B2-GP I与心 磷脂抗原混合后包被者, 敏感性 84. 0% , 特 异性仅 76. 5% ; 而先包被心磷脂抗原, 次日再包被 B2-GP I时, 敏感性最高, 达 92. 0% , 特异性也最高, 为 94. 1% 。 2. 7 稳定性试验 包被板及试剂于 37 e 分别存放 4~ 8 d后, 与 4 e 存放的试剂进行比较。放 37 e 后 A 值略有下降, 但与 4 e 保存者无统计学差异。 2. 8 精密度 4份血清样本同一批次重复检测 12 次, 批内变异系数 ( CV ) 为 4. 0% ~ 9. 5% ; 以 3份血 清样本重复检测 12次, 批间 CV 为 9. 9% ~ 15. 4% 。
作者简介: 金燕萍, 1962年生, 女, 主管技师, 本科, 从事临床病毒与血清自身抗体检测。
临床检验杂志 2010年 1月第 28卷第 1期 Chin J C lin L ab Sc ,i Jan. 2010, V o .l 28, N o. 1
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涤后加入底物系统显色, 最后加入终止液 200 L,l 于 酶联仪 450 nm 波长测 A 值。以欧蒙公司 ACA 试剂 盒标示的临界值判定结果是否阳性。 1. 5 统计学方法 采用 SPSS 11. 0 统计软件对检 测数据进行统计学分析。
摘要: 目的 分析 EL ISA 检测血清抗心磷脂抗体 ( A CA )的方法学影响因素, 并 对实验条件进行优化。方法 用间接 EL ISA 检
测 559份血清 ACA 水平 , 并以欧蒙公司标准品标优 化, 本 试验特 异性为
96. 4% ( 503 /522), 敏感性为 89. 2% ( 33 /37), 临床诊断符合率 为 96. 2% ( 538 /559)。结论 优化后的 EL ISA 法检测 ACA 具有
表 1 5种不同封闭液效果的比较 ( A 值均值 )
标本
ACA 阳性血清 ( n = 11) ACA 阴性血清 ( n = 12)
P /N
10 g /L BSA
0. 908 0. 316 2. 873
3 g /L BSA-H epes*
0. 855 0. 309 2. 767
10% 小牛血清 (灭活 ) 0. 630 0. 212 2. 972
抗磷脂抗体综合征 ( an tiphospho lipid syndrom e, APS)为非器官特异性的自身免疫性疾病, 临床表现 包括反复血管栓塞、流产或胎死宫内、血小板减少、 溶血性贫血及肢端顽固性溃疡等, 这些临床表现可 单一出现或并存。由于 APS患者体内具有中、高滴 度抗心磷脂抗体 ( anticardio lip in an tibody, ACA ) 并可 长期存在 [ 1] , 因此 A CA 为 诊断 APS 的 重要 依据。 EL ISA法检测 ACA 具有简便、快速、可定量检测抗 体类型及易于标准化等优点, 但影响因素较多, 不同 实验室测得的结果差异较大 [ 2-3] 。本研究对 EL ISA 法 检测 ACA的影响因素进行了比较研究, 现报告如下。