纯化水微生物限度检查表
纯化水质量标准、检查项目表及验证检测周期2019.10.29文件
在表中列出，采用线性内插法计算得到限度值，所测定的电导率值应不大于限度值。
表1温度和电导率的限度表
温度（℃）010导率
2.43.64.35.15.46.57.18.19.19.79.79.710.2 (μS/cm )
硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管于50℃水浴中放置15分钟，溶液
产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取
1ml，加水稀释成100ml，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得(每1ml相当于
1μgNO3)]0.3ml，加无硝酸盐的水4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0.000
项目标准检测依据
性状无色澄清、无臭、无味
加甲基红指示液不显红色，加溴麝酸碱度
香草酚蓝指示液不显蓝色
硝酸盐≤0.000006%
亚硝酸盐≤0.000002%
氨≤0.00003%2015版
易氧化物粉红色不完全消失《中国药典》
不挥发物遗留残渣不得过1mg
重金属0.00001%
电导率
总有机碳≤0.5mg/L
微生物限度菌落总数≤100cfu/ml
易氧化物：取纯化水100ml，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)0.10ml，
再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。
不挥发物：取纯化水100ml，置105℃恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥
至恒重，遗留残渣不得过1mg。
重金属：取纯化水100ml，加水19ml，蒸发至20ml，放冷，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml
纯化水微生物限度
纯化水微生物限度滤膜法微生物检测：将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。
样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去。
然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。
滤膜法的优点：- 与直接法比较，可以检测大量的样品- 浓缩效应使微生物检测的准确度提高- 带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档- 可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果操作具体一点就是：薄膜过滤法检测，一个样过滤一份，就是200ml的纯化水通过滤膜，将该滤膜浸泡在灭菌好的l生理盐水中，再接种到平皿中，制成10级、100级、1000级稀释倍数的细菌、霉菌和酵母菌稀释培养皿，即可用平皿法检测纯化水的微生物限度摘要：目的探讨平皿法检查纯化水微生物限度的可行性。
方法采用《中华人民共和国药典》2005年版二部附录平皿法和薄膜过滤法同时时纯化水进行微生物限度检壹并作出比较。
结果平皿法操作简便，菌落清晰．准确可靠。
结论平皿法检测纯化水微生物限度是可行的，尤其适用药厂、医院开展此项检验。
关键词；纯化水；微生物限度；平皿法；薄膜过滤法纯化水为蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其它适宜的方法制得的供药用的水，不含任何附加剂。
纯化水的优劣，直接关系到药品质量。
《中华人民共和国药典》2005年版规定其微生物限度检查采用薄膜过滤法。
并规定其细菌、霉菌和酵母菌总数每毫升不得过100个。
由于此法操作较繁，滤膜较小(直径只有50mm)，菌落多时清晰度欠佳，影响计数的准确性。
笔者采用平皿法进行比较，该法操作简便，菌落清晰，计数准确，效果较为理想。
1 材料和仪器1．1 样品来源 19批纯化水系辖区内7家制药厂生产的为微生物限度检查验证用送样检品。
其中用盐水瓶盛装的12个批次，三角烧瓶盛装的7个批次。
1．2 培养基和仪器设备1．2．1 培养基：营养琼脂培养基批号050401，玫瑰红钠琼脂培养基批号050202，蛋白胨批号050523均为北京三药科技开发公司生产。
纯化水检测项目
纯化水检测项目一、酸碱度1.试剂a .甲基红指示液：取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml。
变色范围PH4.2-6.3（红→黄）b .0.05mol/L氢氧化钠溶液：取0.2g分析纯氢氧化钠，用水稀释至100ml。
c .溴麝香草酚蓝指示液：取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2ml使溶解，再加水稀释至200ml。
变色范围pH6.0—7.6(黄→蓝)。
2、操作取纯化水10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取纯化水10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
二、硝酸盐1.试剂a. 10％氯化钾溶液：取氯化钾10g，加水使溶解成100ml，即得。
b. 0.1％二苯胺硫酸溶液：取二苯胺0.1g，加硫酸100ml使溶解，即得。
c. 标准硝酸盐溶液：取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml相当于1µg NO3）。
2、操作取本品5ml置试管中，于冰浴（0℃）中冷却，加10％氯化钾溶液0.4ml与0.1％二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管于50℃水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液0.3ml，加无硝酸盐的水4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0.000 006%)。
三、亚硝酸盐1、试剂a. 稀盐酸溶液：取盐酸234ml，加水使稀释至1000ml，即得。
本液含HCl应为9.5%-10.5%。
b. 对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1→100）：取氨基苯磺酰胺1g，加稀盐酸溶液使溶解成100ml。
c. 盐酸萘乙二胺溶液（0.1→100）：取盐酸萘乙二胺0.1g，加水使溶解成100ml。
d. 标准亚硝酸盐溶液：取亚硝酸钠0.750g（按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50 ml，摇匀即得(每1ml相当于1µgNO2) 。
纯化水微生物限度检查记录表
检验日期
年月日
报告日期
年月日
检验依据 《中国药典》2015 年版二部、四部通则微生物检查法
需氧菌总数检查：取纯化水 50ml，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM 直径）过滤，减
压抽干。取出滤膜，将滤膜放入制备好的 R2A 培养基平板上，在 30～35℃培养 3 天，计数。
需氧菌阴性对照：取 50ml 已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性 对照 。
R2A 琼脂培养基配制批号
培养温度
放入培养时间 年 月日时 培养 / 时间
取出培养时间 年 月 日时
取样点编号
累计培养时间 h
阴性对照
1 24h
2
□长菌 □未长菌
1 48h
2
□长菌 □未长菌
1 72h
2 菌数报告 CFU/ml
标准规定
项目结论
检验人：
□符合规 定
□不符合 规定
□长菌 □未长菌
/
需氧菌总数每 1ml 不得过 100CFU。
□符合规 □符合规 □符合规 □符合规 □符合规
定
定
定
定
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
定
/
□不符合 □不符合 □不符合 □不符合 □不符合
规定
规定
规定
规定
规定
复核人：
纯化水检验原始记录
云南永安制药有限公司原始记录第1 页共 1 页
纯化水微生物限度检验原始记录REC-ZL-17002-02
品名纯化水批号检验日期报告日期温度℃湿度% R 2 A琼脂培养基批号配制批号培养温度：30-35℃仪器型号：SPX--250 型生化培养箱；编号：04030206
操作过程取本品ml（不少于1ml），经薄膜过滤法（0.45μm孔径）处理后，在无菌条件下，用经高温灭菌的镊子取出滤膜，菌面朝上贴于R 2 A 琼脂培养基平板上，滤膜贴于平板上时，不得有空隙或气泡，30〜3 5℃培养不少于5天，逐日记录检测结果。
标准规定lml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。
超净台菌落数取水点1天2天3天4天5天6天cfu/2ml 报告数cfu/ml 培养1天2天3天4天5天6天
平皿1菌落数
平皿2菌落数
平皿3菌落数
手检操作前操作后
接触碟1
接触碟2
接触碟3
结果判断：
取水点
符合规定，
结果取水点不符合规定。
检验人/日期复核人/日期。
纯化水的微生物限度检查方法验证
微生物限度检查方法验证——纯化水的微生物限度检查方法验证验证方案制定人：部门：日期：验证方案审核人：部门：日期：验证方案批准人：部门：日期：1验证目的：当建立纯化水的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌和酵母菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于纯化水的细菌、霉菌和酵母菌检查。
2验证方案：照《中国药典》2005版二部附录Ⅺ J 方法。
2.1仪器与试药2.1.2仪器：STV3无菌检查薄膜过滤器（浙江宁海白石药检仪器厂），微孔滤膜（孔径0.45um,直径50mm）。
2.1.3试药：2.1.4培养基：营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基。
来源：北京三药科技开发公司生产中国药品生物制品检定所监制2.1.5试液：生理盐水，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
（均按照《中国药典》2005版二部附录Ⅺ H、J要求配制）2.1.6对照菌株：大肠埃希菌[CMCC(B) 44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501]、白色念珠菌[CMCC(F) 98 001]、黑曲霉 [CMCC(F) 98 003]。
来源：广州药物研究中心2.2对照菌液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面新鲜培养物各1环分别接种于15ml 营养肉汤培养基内，于30～35℃培养18～24小时后，稀释至1：105～1：107，，取1ml注入平皿中，注入约45℃的营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置30～35℃培养48h，进行活菌计数。
取白色念珠菌的玫瑰红钠琼脂斜面新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内，于25～28℃培养24～48小时后稀释至1：105～1：106，取1ml注入平皿中，注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置25～28℃培养72h，进行活菌计数。
取黑曲霉的玫瑰红钠琼脂新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内斜面中，于25～28℃培养5～7天后，用3～5ml0.9%的无菌氯化钠溶液洗脱。
2015版纯化水微生物限度检查记录
累计培养时间
年月日时
年月日时
h
培养
时间
/
取样点编号
阴性对照
24h
1
□长菌
□未长菌
2
48h
1
□长菌
□未长菌
2
72h
1
□长菌
□未长菌
2
菌数报告
CFU/ml
/
标准规定
需氧菌总数每1ml不得过100CFU。
项目结论
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
纯化水微生物限度检查记录
检验日期
年月日
报告日期
年月日
检验依据
《中国药典》2015年版二部、四部通则微生物检查法
需氧菌总数检查：取纯化水50ml，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM直径）过滤，减压抽干。取出滤膜，将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上，在30～35℃培养3天，计数。
需氧菌阴性对照：取50ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
/
检验人：复核人：
纯化水检测标准
纯化水检测项目一、酸碱度1、试剂a. 甲基红指示液：取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml 使溶解，再加水稀释至200ml。
变色范围pH4.2—6.3(红→黄)。
b. 0.05 mol/L氢氧化钠溶液：取0.2g分析纯氢氧化钠，用水稀释至100ml。
c. 溴麝香草酚蓝指示液：取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液 3.2ml使溶解，再加水稀释至200ml。
变色范围pH6.0—7.6(黄→蓝)。
2、操作取纯化水10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取纯化水10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
二、硝酸盐1、试剂a. 10％氯化钾溶液：取氯化钾10g，加水使溶解成100ml，即得。
b. 0.1％二苯胺硫酸溶液：取二苯胺0.1g，加硫酸100ml使溶解，即得。
c. 标准硝酸盐溶液：取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml相当于1μg NO3）。
2、操作取本品5ml置试管中，于冰浴（0℃）中冷却，加10％氯化钾溶液0.4ml 与0.1％二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管于50℃水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液0.3ml，加无硝酸盐的水 4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0.000 006%)。
三、亚硝酸盐1、试剂a. 稀盐酸溶液：取盐酸234ml，加水使稀释至1000ml，即得。
本液含HCl应为9.5%-10.5%。
b. 对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1→100）：取氨基苯磺酰胺1g，加稀盐酸溶液使溶解成100ml。
c. 盐酸萘乙二胺溶液（0.1→100）：取盐酸萘乙二胺0.1g，加水使溶解成100ml。
d. 标准亚硝酸盐溶液：取亚硝酸钠0.750g（按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50 ml，摇匀即得(每1ml相当于1μgNO2) 。
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□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格
1.1培养基
R2A琼脂培养基培养基配制批号：
1.2设备编号
培养箱：集菌仪：
1.3判断标准
纯化水中p;日期：复核人&日期：
纯化水微生物限度检查表
检品名称
纯化水
检品来源
批号
取样日期
取样数量
检验日期
检验依据
报告日期
检验结果
取样点
培养时间
需氧菌总数（cfu）
检验结果
（cfu /ml）
结论
1天
2天
3天
4天
5天
□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格
□合格□不合格