金银花愈伤组织的诱导及继代培养研究
金银花组织培养研究
摘要：为了加快金银花产业的发展。
提高金银花的繁殖系数，避免生态环境被破坏。
以药用金银花的当年生幼叶为外植体，用MS基本培养基。
通过不同的生长激素和细胞分裂素浓度梯度，筛选适合的培养浓度和培养条件。
实验结果表明，随着培养基中6-BA浓度的升高，褐变率随之提高，褐变现象出现的时间也越早；反之，较低浓度的6-BA适宜幼叶的分化生长，褐变反应慢。
另外，培养时间过长，未及时转接，也出现了褐变现象。
采用3×3（6-BA,NAA各3个平行组）正交实验的方法，找出最优水平组合，得出最佳的激素配比组合。
培养条件：26℃恒温培养，光照1200lx。
实验结果表明，诱导愈伤组织的增殖最佳培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5 mg/L;诱导芽分化的最佳培养基：MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L。
关键词：金银花；外植体；生长激素；细胞分裂素AbstractTo quicken the development of Honeysuckle industry, improve the proliferation rate of Honeysuckle, avoid the damage of ecological environment, we choose current-year-young leaves of Jiangsu medicinal Honeysuckle to establish aseptic system for explants.In the whole cultivation process, we choose MS medium. The disinfection method: 1.Sterilization with alcohol of 75% concentration for 45s, 2.Sterilization with HgCl2 of 0.15% concentration for 8min, 3.Washing with aseptic water for 4 or 5 times, 4.Drying with aseptic filter paper.There two kinds of medium: with activated carbon and without activated carbon. Experimental results demonstrated that a little of activated carbon can decrease Browning. With comparison of different cultivation time and concentration of growth hormone(NAA) and cytokinin(6-BA), we discover that the higher of the 6-BA concentration, the higher Browning rate and the earlier of Browning. On the contrary, young leaves growth better and later Browning with lower concentration of 6-BA. We also found Browning with too long cultivation time. By 3×3 Orthogonal Experiment, We find optimal combination of hormone. Cultivation environment: constant temperature with 26℃, light irradiaton 1200lx. The main results: 1.The best multiplication medium for callus: MS+6-BA0.5mol/L+NAA0.5 mol/L.2. The best medium for meristtem culture: MS+6-BA1.0 mol/L+NAA0.1 mol/L.Key words: Honeysuckle, aseptic system, growth hormone, cytokinin1 前言1.1形态特征及生物学特征金银花（拉丁学名：Lonicera Japonica，英文名：Japan-ese Honeysuckle）别称：忍冬、金银藤、银藤、二色花藤、二宝藤、右转藤、子风藤、鸳鸯藤。
(2021年整理)第三章-愈伤组织诱导
（完整）第三章-愈伤组织诱导编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（（完整）第三章-愈伤组织诱导）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为（完整）第三章-愈伤组织诱导的全部内容。
第三章愈伤组织的诱导与培养第一节愈伤组织的诱导与继代培养愈伤组织（callus）: 在培养基上，由外植体经脱分化和细胞分裂形成的一团无序生长的薄壁细胞。
大部分外植体细胞须经脱分化形成愈伤，才能再分化成完整植株，只有茎尖等少数细胞只恢复为分生状态但不分裂，直接再分化。
愈伤组织的诱导与分化是植物组培的基本环节。
一、愈伤组织的诱导及其形态特征1、愈伤组织的诱导1）起动期/诱导期（initiation/induction stage， Induction of growth）外植体细胞在外源激素作用下,经脱分化而恢复分裂状态，开始形成愈伤。
细胞外观无明显变化，代谢旺盛,合成加强,为分裂做准备.持续十几小时～几天。
2）分裂期（divition stage/phase)：外植体切口边缘膨大,外层细胞迅速分裂，体积变小，具分生细胞的特征，细胞数速增。
3）形成期(formation stage/Differentiation phase）：外植体表层细胞分裂减缓，内部细胞开始分裂，大量细胞形成瘤状/泡状或片状结构。
若不及时继代，将分化出拟分生组织瘤状物和维管组织，又称分化期。
2. 愈伤组织的形态特征质地:松脆易碎的颗粒状;紧密坚实的结块状；水渍或浆糊状。
颜色：白色或淡黄色;淡绿色或绿色；黄色至褐色。
一般,淡黄或淡绿/绿色松脆（近圆形）或致密的颗粒状愈伤再生能力较强，白色/灰白色或黄褐色、浆糊状或紧实（香蕉形）的愈伤再生能力差。
愈伤组织的诱导和培养
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223愈伤组织的诱导和培养一、实验目的及意义植物愈伤组织的诱导和培养在植物科学的基础研究和应用研究中都有重要的意义。
通过本次实验，可以初步掌握植物外植体材料消毒、接种的无菌操作技术，愈伤组织的诱导方法和愈伤组织继代培养的方法。
二、实验原理植物组织与细胞培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。
如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择适当的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得植物组织培养，成功的基本前提和重要保证。
由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织（callus）。
植物生长调节剂如2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等是诱导外植体形成遇上组织的重要因素。
三、实验仪器与药品超净工作台，酒精灯，镊子，剪刀，解剖刀，75%乙醇，酒精消毒棉材料：烟草无菌苗，甘薯无菌苗四、实验步骤1.按下表分别配制培养基将配置的四种培养基分别分装入20个培养瓶，高温灭菌后水平放置凝固2.接种前，将实验所需器具放入超净工作台，打开紫外灯灭菌20~30min，关闭紫外灯，开启通风开关。
洗手后用酒精喷洒消毒手、手臂、实验材料及培养基外部等进入超净工作台的部分。
进入超净工作台，用酒精棉擦拭台面（手勿伸出工作台），台面完全风干后点燃酒精灯。
3.接种开始时，将镊子及手术刀在酒精中浸泡，并在酒精灯外焰上烧炽片刻，充分冷却。
取幼嫩的烟草（甘薯）叶片，用手术刀切割成小片，再用镊子将其接种至相应的培养基上，每瓶接种3~5片，封口后取出超净工作台，标注姓名、日期、培养基和接种材料。
4.将上述培养材料常温暗培养，每隔7天观察一次，并记录培养情况五、实验结果组织长芽，而当生长素含量大于细胞分裂素含量时，二者共同作用在室温下可诱导外植体生成不定根，也可形成愈伤组织，细胞色素沉淀情况严重；NAA为植物生长素，6-BA为细胞分裂素，促进扦插生根，而当细胞分裂素含量大于生长素含量时，二者共同作用在室温下可诱导外植体生成不定芽，此次实验由于温度非形成愈伤组织的最适温度，所以未形成完整的愈伤组织细胞团。
金银花组织培养与快速繁殖研究
培养基
生根率 （%）
1/2MS
10
1/2MS+ IBA0.5mg·L-1
20
平均 平均根长 根数 （cm）
0.6
0.5
2
1
生根情况 生根慢
生根慢，根细
1/2MS+IBA 1.0mg·L-1
40
2
2.2
生根快，根粗
1/2MS+IBA 2.0mg·L-1
82
4.2
3.0
中图分类号 R282.2
文献标识码 A
文章编号 1007-7731（2014）21-21-02
Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Lonicera japonica
Liu Minjie （Department of Biotechnology，Xinyang Agricultural and Forestry College，Xinyang 464000，Cnina） Abstract：In order to study the in vitro propagation techniques of honeysuckle，Lonicera japonica bud tip was induced callus and proliferated by using different way variety of media formulations. The results showed that the best culture medium for adventitious bubs induction was MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1； Using MS + 6- BA2.0mg · L- 1 + NAA0.2mg · L- 1as proliferation medium，an optimal proliferation rate was ob⁃ tained， the proliferation rate could reach 3.7times；It could still form a good root system in a 1/2MS + IBA0.3mg·L-1+0.15%C medium.There was no strict demand for matrix，when the plantlets were transplant⁃ ed to vermiculite+pearlite+soil （1∶1∶1），the survival rate could reach 92%. Key words：Lonicera japonica；Tissue culture；Rapid prop；Media formulations
外植体类型和植物生长调节剂浓度对红金银花愈伤组织诱导的影响
外植体类型和植物生长调节剂浓度对红金银花愈伤组织诱导的影响摘要：以红金银花（Lonicera japonica var. chinensis）顶芽、当年生幼茎和叶片为试验材料，利用仿自然气候的培养条件，采用L9（34）正交试验设计，考察了外植体类型和培养基中添加植物生长调节剂的浓度对愈伤组织诱导的影响。
结果表明，外植体类型对红金银花组织培养的污染率及愈伤组织的诱导率均有影响，以顶芽为外植体时污染率低，愈伤组织诱导率高，为最佳外植体。
优化后的愈伤组织诱导培养基中KT、6—BA、α—NAA浓度分别为1.5、1.5、0.5 mg/L。
关键词：红金银花（Lonicera japonica var. chinensis）；外植体类型；植物生长调节剂；愈伤组织；正交试验金银花（Lonicera japonica Thund.）又名忍冬，是忍冬科忍冬属多年生半常绿藤本植物，是一种珍贵的观赏树种和绿化材料，也是临床常用中草药，具有清热解毒、凉散风热之功效[1]。
红金银花（L. japonica var. chinensis）为忍冬科忍冬属木本植物，是金银花的野生变种。
其枝、叶、茎淡紫色，叶久寒而不落，花蕾红色，香味浓郁，且生长快、适应性强、耐旱、耐涝、耐寒、耐瘠薄，是集药用、观赏、水土保持于一体的优良品种[2]。
目前，生产上金银花和红金银花的主要繁殖方式是扦插，也可用种子繁殖，关于金银花的组织快繁已有少量报道[3—5]，而红金银花相关方面的研究则较少[6，7]。
为加快红金银花的繁育，探讨了外植体类型和植物生长调节剂浓度对红金银花愈伤组织诱导的影响，旨在优化红金银花的组培快繁技术，为红金银花工厂化育苗和规模化栽培提供技术参考。
1 材料与方法1.1 供试材料红金银花当年生幼嫩枝条采自河南省封丘县金银花基地。
1.2 实验方法将取回的红金银花枝条置于水槽中，用软毛刷刷洗表面尘土，无菌水反复冲洗干净，剪取顶芽部位，保留幼茎和叶片。
探讨影响金银花组织再生率的因素
探讨影响金银花组织再生率的因素金银花，又称忍冬花，是一种常见的藤本植物，被广泛用作中药材和观赏植物。
其具有清热解毒、清肺润喉、凉血止血等药用价值。
金银花也具有较强的再生能力，能够快速生长并繁衍。
金银花组织再生过程受到多种因素的影响，这些因素对金银花再生率产生重要影响。
本文将探讨影响金银花组织再生率的因素，以期为金银花的再生及优化生产提供参考。
一、遗传因素金银花的再生能力与其遗传因素密切相关。
在金银花的种质资源中，存在着不同的遗传变异类型，这些遗传变异类型对金银花的再生能力有着显著影响。
有的品种再生率高，能够在较短时间内快速生长；而有的品种则再生率低，需要较长时间才能恢复生长。
在金银花的繁育过程中，应选择再生率高的优良品种进行繁育，以提高金银花的再生率和生长速度。
二、生长环境因素金银花的生长环境对其组织再生率亦有重要影响。
光照、温度、湿度等环境因素是影响金银花再生率的重要因素。
充足的光照能够促进金银花的光合作用，提高其再生率；适宜的温度和湿度则有利于金银花组织的生长与分化。
在金银花的生长过程中，应合理调控其生长环境，为其提供适宜的光照、温度和湿度条件，以提高其再生率。
三、培养基因素培养基是植物体外再生的重要基础，对金银花组织再生率同样具有重要影响。
培养基的成分、pH值、激素浓度等因素会直接影响金银花的再生能力。
过高或过低的激素浓度会抑制金银花的再生，而适宜的激素浓度则能够促进金银花的组织再生。
在金银花的组织培养过程中，应合理设计培养基的成分及配比，以提高其再生率。
四、激素因素五、外界刺激因素外界刺激因素对金银花的再生率也有着重要影响。
外界刺激因素包括机械刺激、生物刺激和化学刺激等多种类型，这些刺激因素能够诱导金银花的再生。
机械刺激能够促进金银花的愈伤组织再生；生物刺激如植物激素或外源基因的引入亦能够促进金银花的再生。
在金银花的再生过程中，可以通过合理引入外界刺激因素的方式来提高其再生率。
影响金银花组织再生率的因素包括遗传因素、生长环境因素、培养基因素、激素因素和外界刺激因素。
金银花组织培养初报
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
0.1
0.5
1.0
1.1
0.1
0.5
1.0
1.1
0.1
0.5
1.0
1.1
1.0
1.0
1.0
1.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.2
2.2
2.2
2.2
注： 激素浓度均为 ｍｇ／Ｌ
１．４ 培养条件 光照强度 １２００ｌｘ， 光照时间 １０￣１２ｈ／ｄ， 温度 ２５℃，
表 ５ 不同激素组合对腋芽诱导的影响
12
MS+BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L
33
25
78.1%
10
MS+BA2mg/L+NAA0.05mg/L
8
4
50%
2
MS+BA0.1mg/L
12
8
75%
11
MS+NAA0.1mg/L
12
1
8.3%
22
1/2MS+IBA0.2mg/L
8
1
12.5%
表 ６ 不同激素组合对腋芽增殖的影响
Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒ ｅ ｏｆ Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ Ｌｉｕ Ｗｅｉ１， Ｈｅ Ｚｈａｏｒｏｎｇ１， Ｚｈｏｕ Ｈｏｕｇａｏ２
（１ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｙｕｎｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００９１； ２ Ｚｈｏｎｇｋａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０２２５）
植物组织培养-红金银花组织培养试验研究
红金银花组织培养试验研究世界上忍冬属植物有200多种,我国有98种,约占世界总数的50%,其中以西南部为主产区。
金银花生长快,寿命长,其生理特点是更新性强,老枝衰退新枝很快形成。
红金银花是金银花的变种,花蕾、叶、茎均为红色,花蕾为红色,花开后变成红、黄、白相间,赏心悦目,花色艳丽,香味浓郁。
该试验对红金银花的组织培养试验进行了研究,为红金银花在山东地区乃至全国快速推广应用,发挥其园林绿化功能,提供了基础性和技术性支持。
1 材料和方法1. 1 材料试验所用材料为当年生红金银花中、上部的枝条,采集时间是春季,取自青岛平度地区。
将取回的红金银花枝条放入水槽中,用软毛刷刷洗枝条的表面,自来水冲洗,将尘土冲洗干净。
剪取顶芽部位1. 0～2. 0 cm,放入洗涤液或洗衣粉溶液中浸泡15～20 min ,再用自来水将洗涤液冲洗干净。
在超净工作台下,先用75 %的酒精浸泡30 s ,用无菌水冲洗1～2次,再用0. 2 %的升汞溶液灭菌3～5 min ,用无菌水冲洗5～6 次。
备用。
1. 2 方法切取已经灭菌的红金银花顶芽部位1.0～2.0cm作为外植体,接种到以MS 为基本培养基,添加0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L的6-BA 和0、0.1、0.2、0.4 mg/L 的NAA以及10、20、30、40 g/L的蔗糖的初代培养基上。
当初代培养的芽长到3.0～4.0cm 时,将其转接到以MS 为基本培养基,同时添加1.0、1.5、2.0 mg/L的继代培养的6-BA和0.1、0.2、0.4mg/L的NAA以及0、0.5、1.0mg/L的GA3基上。
另添加LH0.2g/L,蔗糖20.0g/L。
当继代培养的芽生长较健壮(高4.0～5.0 cm) 后,先将其从基部切下转接到只含MS的空白培养基上,培养1周后再接到生根培养基上,生根培养基以1/2MS为基本培养基,同时添加0、0.25、0.5mg/L的6-BA 和0.5、1.0、2.0mg/L的NAA以及0、1.0、2.0g/L的活性炭。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
金银花愈伤组织诱导培养基的 ６ ） 正交实验设计 Ｌ ５ ２ ５（
６） Ｌ Ｏ ｒ ｔ ｈ ｏ ｏ ｎ ａ ｌ ａ ｒ ｒ ａ ５ ｏ ｆ ｇ ｙ ２ ５（
Байду номын сангаас
ａ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ ｃ ａ ｌ ｌ ｕ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍ ｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｏ ｆ Ｌ ｏ ｎ ｉ ｃ ｅ ｒ ａ Ｔ ｈ ｕ ｎ ｂ ． ｊ ｐ
以金银花优良品种“ 金丰一号” 为试 材， 研究了不同外植体 及 不同 浓度激素组合 对 金 摘 要： 银花愈伤组织诱导和继代的影响。 结果表明： 愈伤组织 诱导 时， 最佳 外植体为 花蕾 下部， 最佳 培 ／ ， ／ ， ， ／ 诱导 率可达 且愈伤组织 养 基为 Ｍ Ｌ ＋ ６ Ｓ ＋Ｎ Ａ Ａ ２ ． ０ｍ － Ｂ Ａ ０ ． ０ １ｍ ＋ ２４ － Ｄ ０ ． ５ｍ １ ０ ０ ％ ｇ ｇＬ ｇＬ ／ 生长较快， 量多， 质地疏松、 湿润， 颜色鲜亮； 愈伤组织继代时， 最佳培养基为 Ｍ Ｓ ＋ ６ － Ｂ Ａ ２ ． ０ｍ Ｌ＋ ｇ ／ ／ ， ， 在 此 继代 培养 基 上 经过 次 继代 后 可 以 得到 种不同 类 ３ ～ ５ ４ Ｋ Ｔ ０ ． ７ ５ｍ ＋Ｎ Ａ Ａ ０ ． ２ ５ｍ ｇＬ ｇＬ 型的愈伤组织。 关键词： 金银花； 愈伤组织； 诱导； 继代 ＋ ： （ ） 文献标识码 中图分类号： Ａ 文章编号： １ ０ ０ １ － ０ ０ ０ ９ ２ ０ １ ３ ０ ５ － ０ １ ０ ６ － ０ ４ Ｓ ５ ６ ７ ． ７ ９ ） 属忍冬科忍冬属 Ｌ ｏ ｎ ｉ ｃ ｅ ｒ ａ ａ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ 金银花（ Ｔ ｈ ｕ ｎ ｂ ｊ ｐ 多年生缠绕木质藤本植物， 在全国大部分地区都有分 ［ ］ １ ， 其茎、 叶、 藤和花蕾均可入 布 是一种常用的名贵中药 ， ［ ］ ２ 药， 尤以花蕾最佳 。 研究表明， 金银花的主要化学成 分含有绿原酸、 异绿原酸、 黄酮类以及挥发油等化合物， 具有广谱抑菌消炎、 抗病毒、 抗肿瘤和免疫调节等多种 ［ ］ ３ － ４ 功效 。因金银花通常以扦插方式繁殖， 容易使金银 花植株携带病毒细菌等， 造成金银花植株生长不良， 有 效成分积累少， 植株及产品品质降低。 利用现代生物技 术和现代农业生产技术细胞工程， 可以解决金银花退化 课题组对河南省道地中药材 “ 金丰一 等问题。近年来， ］ ［ － ６ ５ 号” 金银花组织培养技术进行了系统的研究 。 现分 别以金银花优良品种的花蕾上半部分、 花蕾下半部分、 叶片、 茎段和顶芽为外植体， 对愈伤组织的诱导和继代 ， 进行了研究 为下一步进行细胞培养及有效成分的生产 和细胞工程育种奠定技术基础。 １ ． ２ 试验方法 １ ． ２ ． １ 金银花愈伤组织的诱导 采用 ４ 因素 ５ 水平设 计试验， 研究外植体 （ 花蕾上半部分、 花蕾下半部分、 叶 ， 、 、 和 种因素对愈伤 片、 茎段和顶芽） － Ｂ Ａ ２４ － Ｄ ４ Ｎ Ａ Ａ６ ６ ） ） 。 将供试材 正交表 （ 表１ 组织诱导的影响， 选用 Ｌ ５ ２ ５（ ， 料接种于正交设计的 ２ 种培养基上 观察愈伤组织的 ５ 诱导情况， ２ ５ｄ时对愈伤组织诱导率进行测定。 表１
·生物技术·
北方园艺２ （ ） ： ０ １ ３ ０ ５ １ ０ ６ １ ０ ９ ～
金银花愈伤组织的诱导及继代培养研究
， ２ ３ ３ ４ ３ ， ， ， ， 张 晓 丽１， 李 明 军１， 陈 明 霞１， 刘 文 英１， 芦 婕１ 单 广 福１，
（ ； ； 河南师范大学 生命科学学院 ， 河南 新乡 ４ 河南教育学院 ， 河南 郑州 ４ 河南省高校道地中药材保育及 １ ． ５ ３ ０ ０ ７ ２ ． ５ ０ ０ ４ ６ ３ ． ； ） 利用工程技术研究中心 ， 河南 新乡 ４ 新乡市中药材保育及利用工程技术研究中心 ， 河南 新乡 ４ ５ ３ ０ ０ ７ ４ ． ５ ３ ０ ０ ７
培养基序号 Ｎ ｏ ． ｏ ｆ ｍ ｅ ｄ ｉ ｕ ｍ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １ ０ １ １ １ ２ １ ３ １ ４ 因素 Ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ／ ／ ·Ｌ－１ ２ ·Ｌ－１ ， ／ ·Ｌ－１ ６ 外植体 Ｅ ｘ ｌ ａ ｎ ｔ Ｎ Ａ Ａ ｍ ｐ － Ｂ Ａ ｍ － Ｄ ｍ ４ ｇ ｇ ｇ （ Ａ） （ 花蕾上部） １ １ １ １ １ （ 花蕾下部） ２ ２ ２ ２ ２ （ 顶芽） ３ ３ ３ ３ ３ （ 叶片） ４ ４ ４ ４ ４ （ 茎段） ５ ５ ５ ５ ５ （ ） Ｂ （ ） １ ０ （ ） ２ ０ ． １ （ ） ３ ０ ． ５ （ ） ４ １ ． ０ （ ） ５ ２ ． ０ １ ２ ３ ４ ５ １ ２ ３ ４ ５ １ ２ ３ ４ ５ １ ２ ３ ４ ５ （ ） Ｃ （ ） １ ０ （ ） ２ ０ ． ０ １ （ ） ３ ０ ． １ ０ （ ） ４ ０ ． ５ ０ （ ） ５ １ ． ０ ０ ２ ３ ４ ５ １ ３ ４ ５ １ ２ ４ ５ １ ２ ３ ５ １ ２ ３ ４ （ Ｄ） ） （ １ ０ （ ） ２ ０ ． １ （ ） ３ ０ ． ５ （ ） ４ １ ． ０ （ ） ５ ２ ． ０ ５ １ ２ ３ ４ ４ ５ １ ２ ３ ３ ４ ５ １ ２ ２ ３ ４ ５ １
１ 材料与方法
１ ． １ 试验材料 ， 试材为金银花优良品种“ 金丰一号” 经常规灭菌后 获得的金银花花蕾上半部分、 花蕾下半部分、 叶片、 茎段和 顶芽为外植体。