18种氨基酸分析方法
氨基酸分析仪原理、分类及几种氨基酸分析仪的比较-科邦实验室
氨基酸分析仪原理、分类及几种氨基酸分析仪的比较概述氨基酸分析仪是一种分析仪器，采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法，对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。
工作原理通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。
其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸，速度较快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢，基线一般不如钠盐系统好。
应用全自动氨基酸分析仪主要应用:各种物质中18种氨基酸的定性定量分析。
1.饲料上的应用：质量控制：各种饲料必需氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当，测定原料和产品中的氨基酸含量，以达到保证质量的目的。
真伪鉴别：鱼粉氨基酸组成特点是赖氨酸、蛋氨酸含量高，氨基酸分析结果很容易就可以区别它的真伪。
2.农业、食品、饮料及玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测；对果汁、饮料进行真伪的鉴别；检验测定茶氨酸来鉴别真伪茶叶；对酱油级别的认定。
分类氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型。
第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法测定的经典方法（IEC）。
此类方法于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。
第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）以及阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法（IC）。
选型指南1、原理。
基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。
此类方法由Stein和Moore两人1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。
2、重要指标。
满足分析需要的技术指标如分离度、重复性等要求，而其中的分离度又是更为重要的指标，因为，色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提，只有峰分开了，才有意义去讨论定性和定量的重复性。
柱前衍生化-超高效液相色谱法快速测定酱油中的18种氨基酸
酱油 中 １ ８种 氨 基 酸 的加 标 回收 率 为 ９ ．％ ～】３ ７ ０２ ０ ． ％。该 方 法 前 处 理 过 程 简 单 ， 离时 间 短 ， 检 测 酱 油 中 氨 基 酸 分 是
的 有 效 手 段 ， 用 于 酱油 的质 量 评 定 。 可 关 键 词 ： 前 衍 生 ； 高 效 液 相 色 谱 ；一 基 喹 啉 基一 羟 基 琥 珀 酰 亚 氨 基 甲酸 酯 ； 基 酸 ； 油 柱 超 ６氨 Ⅳ一 氨 酱 中图分类号 ：６８ ０ ５ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： ０ —７ ３ ２ ｌ ） ２ ｌ ５ —４ １ ０ ８ ｌ （ ０ ０ １ 一 ｌ ４０ ０
摘 要 ： 立 了一 种 ６ 氨基 喹啉 基 一 羟 基 琥 珀 酰 亚 氨 基 甲酸 酯 （ Ｑ 柱 前 衍 生 ， 高 效 液 相 色 谱 （ Ｌ 对 酱 油 中 建 一 Ⅳ一 Ａ Ｃ） 超 ＵＰ Ｃ） １ 氨 基 酸 进 行 快 速 分 离 检 测 的方 法 。采 用 Ｂ Ｈ Ｃ ８色 谱 柱 分 离 ， ２ ０ ｎ ｔ 长 下 检 测 ， 乙 酸 铵 一 酸一 腈 － ８种 Ｅ １ 在 ６ ｌ 波 Ｔ 以 乙 乙 水 和 乙腈 一 乙酸 为流 动相 ． 流 动 相 梯 度 和 流 速 梯 度 相 结 合 ， ｌ ｎ内实 现 了 ｌ 将 在 ２ ｍｉ ８种 氨 基 酸 衍 生 物 的 分 离 。方 法 的线 性 回归 系数 （ 均 大 于 ０ ９ ９， 出 限 为 ０ ０ ２～ ． ２ ｍｇ Ｌ， ｒ） ．９ 检 ．３ ０ １ ／ 日间 相 对 标 准 偏 差 （ Ｓ 为 ０ ７ ％ ～ ． ５ 在 Ｒ Ｄ） ．２ ４ ０ ％，
２ ０年 １ ０１ ２月
Ｄｅｃ ｍ ｂｅ ０１ ｅ ｒ２ ０
色
谱
异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相法同时测定18种氨基酸
文对其实验过程进行了改进， 不用常规的两次蒸发， 仅以正己烷除去干扰因素， 过滤后直接进样分析， 从 而简化了实验步骤， 既节约了时间， 又降低了费用。 将该方法应用于测定含无机离子及小分子肽 （相对 分子质量小于 ） 、 氨基酸、 核苷酸、 低聚糖、 脂类 % " " " 等小分子有机物的小牛血去蛋白注射液中的游离氨 基酸， 结果令人满意。
# 结果
# " ! 对照品混合溶液和实际样品的分离结果 对照品混合溶液和小牛血去蛋白注射液中游离 氨基酸的色谱分离结果见图%和图0 。
图 ! 异硫氰酸苯酯衍生化法测定! %种氨基酸对照品混合溶液的色谱图 & ’ " ! ) * + , . / , + . -, 0 ! %. ’ 1 ,. 2 ’ 3 4 / . 1 3 . + 3 4 3 5 + ’ 6 . / ’ 7 5 38 ’ / *9 * 5 1 ; ’ 4 , / * ’ , 2 . 1 . / 5 ( ( : : ： （ ） ； ： ： ： * D C R B L . 9 D B @ < 7 C * 1! B， 0 & &B BE F ? GB B7 H I H : D C R B L S 8 B 8 9 @ S R 9 8 J 5K； I 8 S 8 : S 7 D LT @ ( 8 C 8 L S = 0 1 FL B； B D U 7 C = @ < 8 8 C R 8 L S’， ) Q ) % 5 ／ ； ， ； ： ， ； ， ； J P@ : 8 S D L 7 S 9 7 C 8 7 L& ? %B D C-< D I 7 R B@ : 8 S @ S 88 C R 8 L S2 5 & P@ : 8 S D L 7 S 9 7 C 8 7 LT @ S 8 9C 7 L 8 @ 9Q 9 @ I 7 8 L S 8 C R S 7 D L& ? &B 7 L& P2 % JB 7 LN P2 0 J ， ； ， ； ， ； ， ； ， ； ， ； ： ／ B 7 L0 J P2 0 MB 7 LJ 1 P2 J 1B 7 LF & P2 F &B 7 L% & & P2 F 1B 7 L% & & P2 F NB 7 L& P2 V C D T9 @ S 8% ? &B -B 7 L H （’ ） ； （W ） ； （ ） ； （W ） ； （Y ） ； （’ ） ； （+ ） ； % H @ < @ 9 S 7 : @ : 7 I < 0 H C R S @ B 7 : @ : 7 I C R J H < 8 9 7 L 8 ! 8 9 F H C : 7 L 8 C 1 H = 7 < S 7 I 7 L 8 7 < G H @ 9 7 L 7 L 8 9 N H S = 9 8 D L 7 L 8 = 9 ) ) Q Q X X Q Q （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； （ ） ； 5 H @ C @ L 7 L 8’ C @ M H 9 D C 7 L 8" 9 D % & H S 9 D < 7 L 8+ 9 % % H ( @ C 7 L 8Z @ C % 0 HB 8 S = 7 D L 7 L 8[ 8 S % J H : < S 8 7 L 8* < % F H 7 < D C 8 R : 7 L 86 C 8 % 1 H ) X X X X （） ； ； （" ） ； （+ ） ； （） 8 R % G H L D 9 C 8 R : 7 L 8 % N H = 8 L C @ C @ L 7 L 8 = 8 % 5 H S 9 S D = @ L 9 % M H C < 7 L 8 < H C 8 R : 7 L 8 ) X X ) ) ) X X
液相色谱-串联质谱法测定徽州毛豆腐中18种氨基酸
分析检测液相色谱-串联质谱法测定徽州毛豆腐中18种氨基酸郝玉玲1，盛新颖1*，武文文1，徐雅芫2，程江华2，张 雷3（1.安徽科博产品检测研究院有限公司，安徽合肥 230001；2.安徽省农业科学院农产品加工研究所，安徽合肥 230031；3.安徽省食品药品检验研究院，安徽合肥 230021)摘 要：本文建立了徽州毛豆腐中18种氨基酸快速检测的方法，样品以沸水浸提，以液相色谱-串联质谱法测定。
结果显示，该方法在9 min内可完成所有氨基酸的分离，检出限为2.44～6.36 μg·kg-1，定量限为8.05～20.99 μg·kg-1，加标回收率在83.60%～101.20%，相对标准偏差在0.27%～2.61%。
该方法具有分析速度快、重复性好等优点。
关键词：氨基酸；液相色谱-串联质谱；徽州毛豆腐Determination of 18 Amino Acids in Huizhou Maotofu byLiquid Chromatography Tandem Mass SpectrometryHAO Yuling1, SHENG Xinying1*, WU Wenwen1, XU Yayuan2, CHENG Jianghua2, ZHANG Lei3(1.Anhui Kebo Product Testing and Research Institute Co., Ltd., Hefei 230001, China; 2.Institute of Agricultural Products Processing, Anhui Academy of Agricultural Sciences, Hefei 230031, China; 3.Anhui Institute of Food andDrug Inspection, Hefei 230021, China)Abstract: This article establishes a rapid detection method for 18 amino acids in Huizhou Maotofu. The samples are extracted with boiling water and determined by liquid chromatography tandem mass spectrometry. The results showed that the method could complete the separation of all amino acids within 9 minutes, with a detection limit of 2.44～6.36 μg·kg-1, a quantification limit of 8.05～20.99 μg·kg-1, an spiked recovery rate of 83.60%～101.20%, and a relative standard deviation of 0.27%～2.61%. This method has the advantages of fast analysis speed and good repeatability.Keywords: amino acids; liquid chromatography tandem mass spectrometry; Huizhou Maotofu徽州毛豆腐因其长毛和口感独特等特征，成为我国著名的素食佳肴。
离子色谱-积分脉冲安培法测定烟草中18种游离氨基酸
离子色谱-积分脉冲安培法测定烟草中18种游离氨基酸于宏晓;徐海涛;马强;吕健;张晋;岳勇;赵曰利;肖协忠【摘要】10.3969/j.issn.1007-5119.2012.04.011% 采用离子色谱-积分脉冲安培法同时测定了烟草中18种游离氨基酸的含量.结果表明,该方法同时检测烟草中18种游离氨基酸的平均回收率为80%~115%,最低检出限为0.03~0.75μg/mL,线性相关系数为0.9900~0.9992.该方法成功对比分析测定了烤烟、白肋烟和香料烟3种不同类型单料烟以及国内外不同风格卷烟中18种游离氨基酸的含量【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2012(000)004【总页数】4页(P51-54)【关键词】离子色谱-积分脉冲安培法;游离氨基酸;卷烟【作者】于宏晓;徐海涛;马强;吕健;张晋;岳勇;赵曰利;肖协忠【作者单位】山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101;山东中烟工业有限责任公司技术中心,青岛266101【正文语种】中文【中图分类】S572.01烟草中的含氮化合物对烟草的感官评吸质量和吸者健康有重要的影响，历来受到人们的普遍关注。
氨基酸是烟草和烟气的香味成分之一，也是烟草中一类重要的致香前体物质。
氨基酸的含量与烟草的品质有着密切的关系，其含量的高低直接影响到烟草的味道和烟气的丰满度[1-2]。
适量的氨基酸对形成优美的烟草香气和吸味有重要贡献。
在烟草调制、醇化和加工直至燃烧过程中，游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应，生成多种具有烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物，某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物，如苯甲醇、苯乙醇等。
6 种农业特种养殖动物肉中18 种氨基酸含量分析
6 种农业特种养殖动物肉中18 种氨基酸含量分析农业特种养殖动物肉是人类主要的蛋白质来源之一，其中的氨基酸含量对人体健康和营养很重要。
通过分析6种农业特种养殖动物肉中的18种氨基酸含量，我们可以了解到这些动物肉的营养价值和潜在的健康益处。
本文将对6种农业特种养殖动物肉中的氨基酸含量进行详细分析，并探讨其对人体健康的影响。
我们来介绍一下这6种农业特种养殖动物肉，它们分别是猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉和鱼肉。
这些动物肉在人们的日常饮食中占据着重要的地位，因为它们含有丰富的蛋白质和氨基酸，对人体的生长发育和健康非常重要。
接下来，我们将对这6种农业特种养殖动物肉中的氨基酸含量进行分析。
这些氨基酸包括赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、精氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和组氨酸。
这些氨基酸对人体的生理功能和健康非常重要，它们是构成蛋白质的基本成分，参与了人体的新陈代谢和生理调节。
在猪肉中，赖氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、苏氨酸和丝氨酸的含量较高，而色氨酸、丝氨酸和苏氨酸的含量较低。
牛肉中，亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸的含量较高，而色氨酸、苏氨酸和组氨酸的含量较低。
羊肉中，亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸和苏氨酸的含量较高，而色氨酸、苏氨酸和组氨酸的含量较低。
鸡肉中，亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、甲硫氨酸和丝氨酸的含量较高，而色氨酸、苏氨酸和组氨酸的含量较低。
鸭肉中，赖氨酸、精氨酸、苏氨酸、丝氨酸和组氨酸的含量较高，而色氨酸、苏氨酸和组氨酸的含量较低。
鱼肉中，亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸和丝氨酸的含量较高，而色氨酸、苏氨酸和组氨酸的含量较低。
从上述数据可以看出，不同种类的农业特种养殖动物肉中，氨基酸含量存在一定差异。
这些差异可能与动物的种类、饲养环境、饲料等因素有关。
通过合理的饲养管理和饲料调配，可以有效地提高动物肉中氨基酸的含量，提高其营养价值和品质。
柱前衍生化-超高效液相色谱法快速测定酱油中的18种氨基酸
柱前衍生化-超高效液相色谱法快速测定酱油中的18种氨基酸陈丽梅;尚艳芬;赵孟彬;刘虎威【摘要】建立了一种6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生,超高效液相色谱(UPLC)对酱油中18种氨基酸进行快速分离检测的方法.采用BEH C18色谱柱分离,在260 nm波长下检测,以乙酸铵-乙酸-乙腈-水和乙腈-乙酸为流动相,将流动相梯度和流速梯度相结合,在12 min内实现了18种氨基酸衍生物的分离.方法的线性回归系数(r2)均大于0.999,检出限为0.032～0.12 mg/L,日间相对标准偏差(RSD)为0.72% ～4.05% ,在酱油中18种氨基酸的加标回收率为90.2% ～103.7% .该方法前处理过程简单,分离时间短,是检测酱油中氨基酸的有效手段,可用于酱油的质量评定.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2010(028)012【总页数】4页(P1154-1157)【关键词】柱前衍生;超高效液相色谱;6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯;氨基酸;酱油【作者】陈丽梅;尚艳芬;赵孟彬;刘虎威【作者单位】北京大学化学与分子工程学院,北京,100871;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京大学化学与分子工程学院,北京,100871【正文语种】中文【中图分类】O658酱油是烹饪和食品加工中的重要调味料,是以大豆、小麦为原料,经过天然晾晒或发酵制成。
在酱油酿造过程中,原料中的蛋白质经蛋白酶作用逐渐分解成氨基酸等人体需要的主要营养物质。
氨基酸含量是评价酱油品质的重要指标,同时氨基酸种类及含量也影响着酱油的风味[1]。
目前酱油品质的分级主要是根据其中氨基酸态氮的含量进行。
用于氨基酸检测的色谱方法主要有液相色谱法(LC)[2-4]、气相色谱法 (GC)、毛细管电泳法 (CE)、离子交换色谱法 (IEC)[5,6]及液相色谱-质谱 /质谱法 (LC-MS/MS)[7,8]。
高效液相色谱法检测奶牛初乳中18种氨基酸
高效液相色谱仪 （ ｔ ｓ 司） Ｃ ８色谱柱 ： Ｗａ ｒ 公 ｅ ，１
收稿 日期 ：０ ８— ６—０ ２０ ０ ６ 作者简介 ： 立 强 ， （１７ 韩 男 ９ ９一） 讲 师 ， 士 研 究 生 ， 箱 ： ａ— ， 博 邮 ｈｎ
（ 南农业 大学 牧 医工 程学 院 ， 河 郑州 ４００ ） ５０２
摘要 ： 应用高效液相色谱法对奶牛分娩后 １～ 初乳 中 １ ３ｄ ８种氨基酸 的含量变化进行 了分析 。结果 表 明： 初乳 中各 种氨 基酸的含量均随泌乳时间的延 长而下 降 ， 谷氨酸的含量在第 １ 天达 到最高 ， 而蛋氨酸的含 量是初乳 氨基酸 中最低 的。 关键词 ： 牛初乳 ； 氨基酸 ； 高效液相色谱
１４ １ 品处 理 ： 确量取 ２ ０ ｔ ．． 样 准 ０ Ｌ样 品 于长 颈试 管 ｘ 中 ， 入 ６ｍｏ ・ 浓 盐 酸 １ ， 加 ｌ Ｌ ０ｍＬ 酒精 喷 灯灼烧 封
口。将 样 品封 口放于烘 箱 （ １ ￣ ２ ， 试管 口打 １０Ｃ） ４ｈ 将
破 ， 出水解 液 于烧杯 中 ， 氢氧 化钠调 ｐ 至 ８— 倒 用 Ｈ ９ 之 间。然后 移 于 ５ Ｌ容量 瓶定 容 ， ０ｍ 烧杯 充分 润洗 。 将定容 液 过滤至 锥 形瓶 中 ， ５ｍ 用 Ｌ针 管 吸 出滤 液 ， 用微孔 滤膜 过滤 至 ２ｍＬ小 管 内。
汁 ， 冷 冻 离 心 机 在 ４Ｃ，００ ｒ・ｍｉ 离 心 ２ 用 ￣ ３０ ｎ ０ ｍｎ弃 掉上 层 的脂 肪 和离 心 管 底 的沉 淀 ， 中间乳 ｉ， 取
清进 行氨基 酸检 测 。
１ ２ 试 剂 ．
乙睛 （ 色谱纯 ） ，浓盐 酸 （ 优级 纯 ）丙 氨 酸 一谷 ，
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1) 天平一台（精度0.1mg）2) 恒温水浴锅一台3) 容量瓶
4) 试管（1.5×15cm或1.5×10cm）5) 微量进样器（5μL或10μL）一支
6) 微量可调移液枪（1000μL，200μL）一支、吸头多个。
7) 旋涡混匀器一台
8) HPLC系统及氨基酸分析专用柱（4.6×250mm 5μm）
一. 仪器及试剂
二. 流动相的配制
三. 衍生化反应
1. 对照品溶液浓度值
18种氨基酸分析方法
仪 器：
流动相 A：0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0
流动相 B：水：乙腈＝20.0：80.0
配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22µm滤膜1) 超纯水（≥18MΩ·cm）2) 乙腈（HPLC级）3) 三水合醋酸钠（分析纯）4) 冰醋酸（分析纯）
5) 衍生试剂A和衍生试剂B溶液，至于冰箱保存（衍生试剂包对身体有害，用时请做好防护措施）6) 正己烷（HPLC级）
7) 0.1mol/L盐酸溶液：量取9.0mL浓盐酸，加去离子水稀释至1000mL。
8) 正亮氨酸内标溶液：称取正亮氨酸约10mg，加0.1mol/L 盐酸溶液 10mL溶解，混匀。
试 剂：
配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三 水合醋酸钠溶液930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22µm滤膜。
月旭科技（上海）股份有限公司
公司官网：
服务热线：400-808-6760
2. 注意事项：
1）进样分析：先进对照品溶液，后进供试品溶液；2）缓冲溶液，隔天需重新配制；3）防止缓冲盐析出。
5）运行一次空白梯度； 6）进样分析；7) 分析完成后：
I）用乙腈：水＝20：80代替流动相A ，进水样（清洗自动进样器）， 进行梯度洗脱；
II）换90％乙腈冲洗色谱柱40min以上。
波 长：254nm 进样量：10μL ｍｉｎ
５1015202530100
80
60
40
20
12
3
45
6
78
9
10
11
12
14
13
1516
17
18
19
色谱图：。