线粒体膜电位检测(JC-1).
JC 线粒体膜电位的检测方法
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒产品组成：产品编号BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3规格20 assays 50 assays 100 assaysJC-1 100ul 250ul 500ul10×孵育缓冲液4ml 10ml 20ml产品简介：线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。
试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；使用方法：悬浮细胞1、孵育缓冲液和JC-1染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和JC-1染色工作液。
取100ul 10×孵育缓冲液加900ul无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×孵育缓冲液；在500ul 1×孵育缓冲液中加入5ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1染色工作液；2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
组织线粒体膜电位检测方法
组织线粒体膜电位检测方法检测细胞内线粒体膜电位的方法可以帮助研究者了解线粒体功能和细胞代谢状态。
以下是几种常用的检测线粒体膜电位的方法：1. Rhodamine 123 染色法： Rhodamine 123 是一种荧光染料，它能够进入活性线粒体并与线粒体膜电位呈反比关系。
这种染料会在正常的线粒体内累积并发出荧光信号，可以通过荧光显微镜或流式细胞仪来观察和测量。
线粒体膜电位高时，Rhodamine 123 的荧光信号较强；而电位低时，荧光信号则减弱。
2. JC-1染色法： JC-1 是一种双荧光探针，可根据线粒体膜电位的变化而显示不同的荧光颜色。
在正常的线粒体膜电位较高时，JC-1 形成聚集体，产生红色荧光。
而当线粒体膜电位低时，JC-1 解聚，产生绿色荧光。
通过观察红色与绿色荧光的比例变化，可以间接反映线粒体膜电位的高低。
3. TMRM染色法： Tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) 是一种荧光染料，其进入细胞内后与活跃的线粒体结合并发出荧光信号。
其荧光强度与线粒体膜电位的高低成正比关系。
通过荧光显微镜或流式细胞仪来观察和测量 TMRM 的荧光信号，以评估线粒体膜电位的变化。
4. 光学显微测量法： 这种方法通常利用荧光探针或荧光指示剂结合光学显微技术，直接在细胞或组织水平上测量线粒体膜电位的变化。
可以使用适当的荧光显微镜系统和图像分析软件来观察和分析线粒体膜电位的变化。
需要指出的是，这些方法每一种都有其优缺点。
选择适合的方法应根据研究需求、实验条件和所研究的细胞类型来决定。
同时，使用这些荧光探针测量线粒体膜电位时，需要注意其特异性、灵敏度和操作的准确性，以确保获得可靠和准确的结果。
线粒体膜电位（MMP）检测的具体步骤及方法
线粒体膜电位（MMP）检测的具体步骤及方法线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方法一、技术简介大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。
它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在，分别处于不同的荧光发射峰。
当JC-1 浓度低或膜电位水平低时，主要以单体形式存在，激发波长为527nm，呈绿色荧光；当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时，形成聚合物，发出红色的荧光，激发波长为590nm。
当细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光，根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。
二、实验流程1. 细胞培养。
2. 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性依照组合阳性对照组，收集细胞。
3. 用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×106的细胞。
4. 取100μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer，混匀并预热至37℃。
5. 吸取500μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液。
6. 取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min。
7. 室温离心（2000rpm, 5min）收集细胞，用1×Incubation Buffer洗两次。
8. 吸取500μL 10×Inc ubation Buffer重新悬浮细胞。
9. 流式细胞仪检测，分析。
jc-1检测原理 -回复
jc-1检测原理-回复检测原理是指在进行某项实验、分析或测试时所采用的方法、步骤和原则。
针对你提到的"jc1检测原理"主题，我将为你详细解释这一原理的理论基础、实验步骤、技术要点和应用领域等方面内容。
以下将一步一步回答你的问题。
第一步：介绍jc1检测原理的背景和意义（200-300字）首先，我会简要介绍jc1检测原理的背景和意义。
jc1 ( JC-1) 是一种经典的荧光染料，通常用于评估细胞色素c的释放和线粒体膜电位的变化。
它可以与线粒体内的分子聚集形成荧光体，荧光颜色由红色变为绿色，反映了线粒体膜电位的变化。
因此，通过jc1检测原理，我们可以了解线粒体功能的变化，为研究细胞生理活性和疾病发展提供重要的依据。
第二步：解释jc1的工作原理（400-500字）其次，我会详细解释jc1的工作原理。
jc1荧光染料的染色特性是基于线粒体膜电位的变化，膜电位越高，聚集越多，转变为红色；膜电位降低时，聚集减少，转变为绿色。
这是因为jc1本身具有两个荧光状态，即单体形态（绿色荧光）和聚集形态（红色荧光）。
在正常的高线粒体膜电位下，jc1会大量聚集并发射红色荧光信号。
而对于低线粒体膜电位的情况，jc1不能有效地聚集，产生绿色荧光。
因此，通过检测jc1的荧光变化，我们可以了解线粒体膜电位的变化。
第三步：介绍jc1的实验步骤（400-500字）接下来，我将介绍进行jc1检测实验的具体步骤。
首先，需要准备适当的细胞样本，一般通过离心分离或组织切片来获得细胞。
然后，将jc1荧光染料与细胞悬液进行反应。
待jc1充分进入细胞后，通过荧光显微镜或流式细胞仪检测细胞内jc1的荧光强度和颜色变化。
在实验过程中，需要设置控制组和实验组，以便对比不同条件下jc1荧光强度和颜色的变化。
最后，根据荧光结果和相关数据进行分析和解释。
第四步：解释jc1检测的技术要点（400-500字）然后，我会解释jc1检测的技术要点。
首先，合适的jc1浓度和反应时间对于获取准确的结果至关重要。
JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响
养Ｅ Ｃ Ｖ ３ ０ ４细胞 ， 不 同浓度 Ｃ Ｃ Ｃ Ｐ处理 细胞 ２ ０ ｍｉ ｎ后， 装载 荧光探 针 Ｊ ｃ 一 １或 Ｒ ｈ ｌ ２ ３ ． 流 式细胞 术检 测 Ｊ Ｃ 一 １单体 的发 射绿色 荧 光。 结果 伴 随 线粒体 毒性 剂 Ｃ Ｃ Ｃ Ｐ浓度 增加 ， 代表 Ｊ Ｃ 一 １单体 含 量 的绿色 荧 光 强度增 加 、结论
流 式细胞 术检 测 Ｊ Ｃ 一 １ 单 体 的绿色 荧光 可反 应线粒 体膜 电位 的变 化。 关 键 词 ：线粒 体膜 电位 ； 碳 酰 氰基一 对一 氯 苯腙 ； 流式 细胞 术 文献标 识码 ：Ａ 中图分类 号 ：Ｒ ３ ６ ３
Ｅｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ＣＣＣＰ ｏ ｎ ｅ ｎｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｍｉ ｔ ｏ ｃ ｈ ｏ ｎ ｄ ｒ ｉ ａ ｌ ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｅ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ ｂ ｙ
２ ０ １ ４年 ｌ ０月
文章 编号 ： Ｉ ６ ７ ３ — ２ ９ ９ ５ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ５ － ０ ３ ２ ４ － ０ ３
・
论
著 ・
Ｊ Ｃ 一 １单染 法 检测 Ｃ Ｃ Ｃ Ｐ对 内皮细胞 线粒 体膜 电位 的影 响
官福 新 ， 周 露露 ， 张宸 豪 ， 李
，
２ ０ １ ０ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｙ ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ｏ ｔ ’ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｐｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｙ ３ ． Ｄｅ ｐ ｍｌ ｍｅ ｎ ｌ ｏ ｆ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ． Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｃ ｉ ｔ —
线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方法
线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方
法
线粒体膜电位（MMP）是细胞凋亡过程中最早发生的事
件之一，因此MMP的检测对于研究细胞凋亡具有重要意义。
JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可以作为检测线
粒体跨膜电位的指示剂。
当MMP水平较高时，JC-1形成聚合物，发出红色的荧光；而当MMP水平低时，JC-1主要以单体形式存在，呈绿色荧光。
因此，根据JC-1的荧光特征可以检
测线粒体膜电位的变化。
实验流程包括以下步骤：
1.细胞培养。
2.用适当的方法诱导细胞凋亡，并设立阴性和阳性对照组，收集细胞。
3.用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×10的细胞。
4.取100μL 10×___加900μL灭菌去离子水稀释成1×n Buffer，混匀并预热至37℃。
5.吸取500μL 1×n Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液。
6.取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min。
7.室温离心（2000rpm。
5min）收集细胞，用1×___洗两次。
8.吸取500μL 10×___重新悬浮细胞。
9.使用流式细胞仪检测并分析。
通过以上步骤，可以得到线粒体膜电位的变化情况，从而研究细胞凋亡的机制。
(完整版)线粒体膜电位检测(JC-1).
线粒体膜电位检测（JC-1)大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式摘要：I.引言A.介绍JC1荧光探针B.阐述JC1与线粒体膜电位的关系II.JC1在细胞内的分布与线粒体膜电位A.线粒体膜电位的定义B.JC1在不同线粒体膜电位下的分布C.JC1荧光信号与线粒体膜电位的关系III.流式细胞术检测JC1荧光信号A.流式细胞术的原理B.流式细胞术在JC1检测中的应用C.流式细胞术检测JC1荧光信号的结果分析IV.JC1在生物医学研究中的应用A.JC1在细胞凋亡研究中的应用B.JC1在神经科学研究中的应用C.JC1在其他生物医学研究中的应用V.总结正文：I.引言JC1是一种荧光探针，可以用于检测线粒体膜电位。
线粒体是细胞内的能量工厂，参与细胞的生长、发育和凋亡等过程。
线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要指标。
JC1与线粒体膜电位之间存在一定的相关性。
当线粒体膜电位低于-100mV时，JC1主要分布在细胞质中，呈现绿色荧光。
当线粒体膜电位高于-100mV时，JC1开始聚集在线粒体上，呈现红色荧光。
因此，通过流式细胞术检测JC1的荧光信号，可以间接反映线粒体膜电位的变化。
II.JC1在细胞内的分布与线粒体膜电位A.线粒体膜电位的定义线粒体膜电位是指线粒体膜内外两侧存在的电位差。
线粒体膜电位在细胞的能量代谢、信号转导等方面起着重要作用。
B.JC1在不同线粒体膜电位下的分布当线粒体膜电位低于-100mV时，JC1主要分布在细胞质中，呈现绿色荧光。
当线粒体膜电位高于-100mV时，JC1开始聚集在线粒体上，呈现红色荧光。
C.JC1荧光信号与线粒体膜电位的关系JC1的荧光信号与线粒体膜电位呈负相关。
当线粒体膜电位较低时，JC1的绿色荧光信号较强；当线粒体膜电位较高时，JC1的红色荧光信号较强。
III.流式细胞术检测JC1荧光信号A.流式细胞术的原理流式细胞术是一种通过激光束对细胞进行快速、准确计数和分选的技术。
流式细胞术可以对细胞进行多参数检测，包括荧光信号检测。
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线粒体膜电位检测（JC-1)
大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，
一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染
料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存
在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿
色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从
线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位
的变化。
所需仪器或者试剂
流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器
1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离
子水
使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间
5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时
间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设
阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
6．组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测，可选用凯基细胞悬液制备试剂
盒（KGA829）或线粒体提取试剂盒（KGA827）。
操作方法
1．用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组和阳性对照组【用适当的凋亡诱导剂（如
星形孢菌素，staurosporine），诱导适当时间后经其它检测（如AnnexinV或Caspase 3
活性）证实确有凋亡产生】，收集细胞；
2．用PBS洗涤细胞二次（离心2000rpm，5min），收集不多于1×106的细胞；
3．取100μL 10× Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1× Incubation Buffer，混匀并预热至37℃；
4．吸取500μL 1× Incubation Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液；
【因JC-1在水中的溶解度很小，所以可以通过离心的方法（10，000rpm，1min）去除不溶的颗粒，吸取离心后的上清使用，以消除干扰】
5．取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15~20min；
6．室温离心（2000rpm，5min）收集细胞，用1× Incubation Buffer洗两次；
7．吸取500μL 1× Incubation Buffer重新悬浮细胞；
8．荧光显微镜观察或流式细胞仪分析。
荧光显微镜观察
1．滴一滴上述细胞悬液于载玻片，盖上盖玻片，于荧光显微镜下观察；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；用PBS洗涤细胞两次；
滴加100μL JC-1工作液，加盖玻片，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15~20min；1× Incubation Buffe洗涤1~2遍；将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察；
正常细胞：双色滤光片观察则为：绿++ 红++（高绿高红），如在同一滤光片下观察则为黄绿色
凋亡细胞：双色滤光片观察则为：绿++ 红+（高绿低红），如在同一滤光片下观察则为绿色流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测（Ex=488 nm; Em=530 nm）细胞凋亡的情况，绿色荧光通过FITC通道通常为FL1来检测；红色荧光通过PI通道通常为FL2来检测。
.正常细胞{FL-1亮,FL-2亮; R1}，凋亡细胞{FL-1亮, FL-2暗; R2}，设门的位置根椐细胞种类、实验条件等不同而变化，试验需设未经处理的正常细胞为阴性对照组和阳性对照组，根椐阴性和阳性对照组的双参数散点图来设定门的位置。