线粒体膜电位检测(JC-1)
JC 线粒体膜电位的检测方法
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒产品组成：产品编号BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3规格20 assays 50 assays 100 assaysJC-1 100ul 250ul 500ul10×孵育缓冲液4ml 10ml 20ml产品简介：线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。
试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；使用方法：悬浮细胞1、孵育缓冲液和JC-1染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和JC-1染色工作液。
取100ul 10×孵育缓冲液加900ul无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×孵育缓冲液；在500ul 1×孵育缓冲液中加入5ul JC-1，涡旋混匀配成JC-1染色工作液；2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
组织线粒体膜电位检测方法
组织线粒体膜电位检测方法检测细胞内线粒体膜电位的方法可以帮助研究者了解线粒体功能和细胞代谢状态。
以下是几种常用的检测线粒体膜电位的方法：1. Rhodamine 123 染色法： Rhodamine 123 是一种荧光染料，它能够进入活性线粒体并与线粒体膜电位呈反比关系。
这种染料会在正常的线粒体内累积并发出荧光信号，可以通过荧光显微镜或流式细胞仪来观察和测量。
线粒体膜电位高时，Rhodamine 123 的荧光信号较强；而电位低时，荧光信号则减弱。
2. JC-1染色法： JC-1 是一种双荧光探针，可根据线粒体膜电位的变化而显示不同的荧光颜色。
在正常的线粒体膜电位较高时，JC-1 形成聚集体，产生红色荧光。
而当线粒体膜电位低时，JC-1 解聚，产生绿色荧光。
通过观察红色与绿色荧光的比例变化，可以间接反映线粒体膜电位的高低。
3. TMRM染色法： Tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) 是一种荧光染料，其进入细胞内后与活跃的线粒体结合并发出荧光信号。
其荧光强度与线粒体膜电位的高低成正比关系。
通过荧光显微镜或流式细胞仪来观察和测量 TMRM 的荧光信号，以评估线粒体膜电位的变化。
4. 光学显微测量法： 这种方法通常利用荧光探针或荧光指示剂结合光学显微技术，直接在细胞或组织水平上测量线粒体膜电位的变化。
可以使用适当的荧光显微镜系统和图像分析软件来观察和分析线粒体膜电位的变化。
需要指出的是，这些方法每一种都有其优缺点。
选择适合的方法应根据研究需求、实验条件和所研究的细胞类型来决定。
同时，使用这些荧光探针测量线粒体膜电位时，需要注意其特异性、灵敏度和操作的准确性，以确保获得可靠和准确的结果。
线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方法
线粒体膜电位(MMP)检测的具体步骤及方
法
线粒体膜电位（MMP）是细胞凋亡过程中最早发生的事
件之一，因此MMP的检测对于研究细胞凋亡具有重要意义。
JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可以作为检测线
粒体跨膜电位的指示剂。
当MMP水平较高时，JC-1形成聚合物，发出红色的荧光；而当MMP水平低时，JC-1主要以单体形式存在，呈绿色荧光。
因此，根据JC-1的荧光特征可以检
测线粒体膜电位的变化。
实验流程包括以下步骤：
1.细胞培养。
2.用适当的方法诱导细胞凋亡，并设立阴性和阳性对照组，收集细胞。
3.用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×10的细胞。
4.取100μL 10×___加900μL灭菌去离子水稀释成1×n Buffer，混匀并预热至37℃。
5.吸取500μL 1×n Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液。
6.取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min。
7.室温离心（2000rpm。
5min）收集细胞，用1×___洗两次。
8.吸取500μL 10×___重新悬浮细胞。
9.使用流式细胞仪检测并分析。
通过以上步骤，可以得到线粒体膜电位的变化情况，从而研究细胞凋亡的机制。
(完整版)线粒体膜电位检测(JC-1).
线粒体膜电位检测（JC-1)大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
所需仪器或者试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
JC-1线粒体膜电位检测---流式细胞仪
JC-1线粒体膜电位检测---流式细胞仪一、实验简介线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
JC-1是一种理想的用于检测线粒体膜电位的荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
其原理是，当线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式上表现为FL1和FL2双阳性；当线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图汇总所有细胞FL1为阳性。
凋亡细胞则大多为FL1单阳性。
不同荧光颜色的转变反应线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。
二、实验步骤(1) 收集细胞：细胞悬液转入离心管中，1000rpm离心5min收集细胞,弃上清。
(2) PBS洗涤细胞：加入3ml 4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1000rpm离心5min，弃上清。
沉淀震荡混匀。
(3) 细胞计数：移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数 ,调整细胞为0.5-1×10^6/ml。
(4) 装载探针：按照1:500用无血清培养基稀释JC-1，使终浓度为10μg/mL。
(5) 孵育探针：37°C细胞培养箱内孵育20分钟，每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触，用无血清的培养液洗涤细胞三次，以去除未进入细胞内的探针。
(6) 上机检测：流式细胞仪使用激发波长Ex=488 nm，发射波长FL1(Em=525±20 nm)；FL2(Em=585±20 nm)，用Flow Jo软件分析结果。
三、实验结果展示。
JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响
JC-1单染法检测CCCP对内皮细胞线粒体膜电位的影响官福新;周露露;张宸豪;李妍【摘要】目的：分析碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）对人脐静脉内皮细胞ECV304线粒体的影响。
方法体外培养ECV304细胞，不同浓度CCCP处理细胞20 min 后，装载荧光探针JC-1或Rh123，流式细胞术检测JC-1单体的发射绿色荧光。
结果伴随线粒体毒性剂CCCP浓度增加，代表JC-1单体含量的绿色荧光强度增加。
结论流式细胞术检测JC-1单体的绿色荧光可反应线粒体膜电位的变化。
%Objective Analyze the influence of carbonyl cyano-to-chlorobenzene hydrazone ( CCCP ) on human um-bilical vein endothelial cells ECV-304 mitochondria .Methods ECV-304 cell was cultured in vitro and treated with different concentrations of CCCP for 20 minutes .After straining by fluorescent probes Rh 123 or JC-1 ,cells were meas-ured by flow cytometry .Results The intensity of green fluorescence emitted by JC-1 monomer increased with the in-creasing of CCCPconcentration .Conclusion The changing of cell MMP could be well detected by flow cytometry staining by new fluorescent probe JC-1 .【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】3页(P324-326)【关键词】线粒体膜电位;碳酰氰基-对-氯苯腙;流式细胞术【作者】官福新;周露露;张宸豪;李妍【作者单位】吉林医药学院药学院2012级药学本班，吉林吉林 132013;吉林医药学院药学院2010级药学本班，吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院，吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R363线粒体是细胞内能量代谢的重要细胞器，是决定生存的控制中心。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？JC-1来助力JC-1 检测线粒体膜电位（Membrane potential）原理：在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏，这被广泛认为是细胞凋亡过程中zui早发生的事件之一。
线粒体膜电位的检测有很多方法，JC-1的流式检测是比较常见的一种方法。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，低浓度时，以单体存在，可检测到绿色荧光，用流式检测时，通常为FL-1通道(和FITC同通道）高浓度时，以多聚体存在，可检测到红光，流式检测通常为FL-2通道（和PE同通道)。
因JC-1浓度的变化,在单体和多聚体之间形成一个可逆的转变过程。
正常细胞，膜电位正常时，JC-1通过线粒体膜J性进入线粒体内，并因浓度升高而形成发射红色荧光的多聚体，而凋亡细胞，线粒体跨膜电位去J化，JC-1从线粒体内释放，浓度降低，逆转为发射绿色荧光的单体形式。
故而可以通过检测绿色和红色荧光来定性(细胞群的偏移）定量（细胞群的荧光强度）的检测线粒体膜电位的变化。
近年来研究发现线粒体功能状态和不少疾病的密切相关，多种细胞在不同因子作用下发生凋亡时均伴有MMP的下降，而检测线粒体膜电位(MMP)的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
如何快速检测分析线粒体膜电位变化？我们可以通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
Abbkine线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）#KTA4001 就此提供了一种简单的方法，基于JC-1来检测线粒体跨膜电位的变化，区分健康和凋亡细胞。
在健康细胞中，这种染料在线粒体中积聚并聚集，在线粒体中形成明亮的红色荧光团块。
任何消除线粒体膜电位的事件都会阻止JC-1染料在线粒体中的积累，因此，染料以其单体形式保留在细胞质中，导致红色转变（聚集的JC-1，Ex/Em = 585/590nm）至绿色荧光（JC-1单体，Ex/Em = 510/527nm）。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)
仅供科研版本号：161213 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)【产品组成】【保存条件】-20℃,避光,12个月【产品概述】JC-1是一种检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential) 的理想荧光探针。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1丌能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，产生绿色荧光。
这样就可以通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，这种转变也可作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm。
JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的装置即可。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)(Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1)是一种以JC-1为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】1、配制JC-1染色工作液：取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。
然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。
6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每0.5～1.0×106细胞需0.5ml JC-1染色工作液。
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线粒体膜电位检测（JC-1)
大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，
一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一种阳离子脂质荧光染
料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存
在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿
色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从
线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位
的变化。
所需仪器或者试剂
流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器
1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离
子水
使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2． JC-1避光保存及使用。
3．细胞培养的数量不宜超过1×106，否则细胞会产生自然凋亡影响检测。
4．对PH变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer孵育染色及洗涤，或延长观测时间
5．流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时
间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设
阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
6．组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测，可选用凯基细胞悬液制备试剂
盒（KGA829）或线粒体提取试剂盒（KGA827）。
操作方法
1．用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组和阳性对照组【用适当的凋亡诱导剂（如
星形孢菌素，staurosporine），诱导适当时间后经其它检测（如AnnexinV或Caspase 3
活性）证实确有凋亡产生】，收集细胞；
2．用PBS洗涤细胞二次（离心2000rpm，5min），收集不多于1×106的细胞；
3．取100μL 10× Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1× Incubation Buffer，混匀并预热至37℃；
4．吸取500μL 1× Incubation Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液；
【因JC-1在水中的溶解度很小，所以可以通过离心的方法（10，000rpm，1min）去除不溶的颗粒，吸取离心后的上清使用，以消除干扰】
5．取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15~20min；
6．室温离心（2000rpm，5min）收集细胞，用1× Incubation Buffer洗两次；
7．吸取500μL 1× Incubation Buffer重新悬浮细胞；
8．荧光显微镜观察或流式细胞仪分析。
荧光显微镜观察
1．滴一滴上述细胞悬液于载玻片，盖上盖玻片，于荧光显微镜下观察；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；用PBS洗涤细胞两次；
滴加100μL JC-1工作液，加盖玻片，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15~20min；1× Incubation Buffe洗涤1~2遍；将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察；
正常细胞：双色滤光片观察则为：绿++ 红++（高绿高红），如在同一滤光片下观察则为黄绿色
凋亡细胞：双色滤光片观察则为：绿++ 红+（高绿低红），如在同一滤光片下观察则为绿色流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测（Ex=488 nm; Em=530 nm）细胞凋亡的情况，绿色荧光通过FITC通道通常为FL1来检测；红色荧光通过PI通道通常为FL2来检测。
.正常细胞{FL-1亮,FL-2亮; R1}，凋亡细胞{FL-1亮, FL-2暗; R2}，设门的位置根椐细胞种类、实验条件等不同而变化，试验需设未经处理的正常细胞为阴性对照组和阳性对照组，根椐阴性和阳性对照组的双参数散点图来设定门的位置。