细菌内毒素检验操作程序文件
细菌内毒素检查操作程序
细菌内毒素检查操作程序1 概述：本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/mL的灭菌注射用水。
2 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理检测的方法。
2.1 材料准备2.1.1 0.1ml/支规格及灵敏度的鲎试剂，细菌内毒素检查用水以及细菌内毒素国家标准品或工作标准品。
2.1.2 恒温器、旋涡混合器、试管架、计时器、剪刀、封口胶布、砂轮片、酒精棉球、酒精灯、灭菌的1ml玻璃注射器、烘箱。
2.2 实验操作2.2.1 接通恒温器电源，将温度调节至37℃±1℃。
2.2.2供试品稀释2.2.2.1 当供试品需要控制的内毒素限值大于鲎试剂灵敏度时，需要对供试品进行稀释，计算公式如下：MVD＝L/λMVD：供试品的最大有效稀释倍数L：供试品需控制的内毒素限值（EU/mL）λ：鲎试剂灵敏度值（EU/mL）2.2.2.2[举例]某供试品需要控制的内毒素限值为5EU/ml，使用灵敏度λ＝0.25EU/mL 的鲎试剂作细菌内毒素检查.MVD＝5EU/ml / 0.25EU/mL＝20倍。
即供试品需作1:20稀释后再作检查。
若检查结果为阳性，表明供试品内毒素含量≥5EU/ml，超过限值；若检查结果为阴性，表现供试品内毒素含量＜5EU/ml，低于限值。
2.3 检查操作2.3.1供试品溶液制备：取0.2g糖粉，加入2ml检查用水稀释，混匀，备用。
2.3.2 取0.1ml/支规格的鲎试剂8支，折断（或割断）安瓿颈，其中2支作为供试品管，2支作为阴性对照管，2支作为阳性对照管。
2支供试品阳性管。
2.3.3 阴性对照管加入0.2ml水，其余各管加入0.1ml水复溶；供试品管各加入0.1ml 供试品溶液，阳性对照管加入0.1ml2.0λ浓度的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml供试品阳性对照溶液[用被测供试品溶液将同一支细菌内毒素工作标准品制成2.0λ浓度的同毒素溶液。
细菌内毒素工作标准品检验操作规程
细菌内毒素工作标准品检验操作规程部门质量控制部题目细菌内毒素工作标准品检验操作规程起草审阅批准共2页编号 HY/02—ZK—203 执行日期页码第1页细菌内毒素工作标准品检验操作规程一、范围:本标准规定了细菌内毒素工作标准品的测定方法和操作要求;适用于本公司细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素质控品的质检测定。
二、引用标准:2010年版《中国药典》附录“细菌内毒素检查法"三、要求：1、操作环境：温度不得高于26？，湿度不得高于75％;2、标准品:细菌内毒素国家标准品.五、操作步骤:3(效价测定以国家标准品为基准,随机取本品2支，使用同一批鲎试剂参考品测定，2支反应终点的均值应与国家标准品的效价相平行或一致。
3。
1 凝胶法3。
1.1 根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ)，将细菌内毒素国家标准品用检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成4个浓度的标准内毒素溶液，即2λ、λ、0.5λ和0。
25λ备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。
3.1.2 设待复核的细菌内毒素工作标准品效价为P，用1ml检查用水溶解,在旋涡混合器上混合15分钟,然后制备成6个浓度的内毒素溶液，即（P/4λ)倍、(P/2λ)倍、（P/λ）倍、(2P/λ）倍、(4P/λ)倍和（8P/λ）倍备用,每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。
3。
1。
3 细菌内毒素国家标准品和细菌内毒素工作标准品稀释须同时进行.3.1.4 按《细菌内毒素检查法》项下操作，每一个内毒素浓度平行做4管。
如细菌内毒素国家标准品和细菌内毒素工作标准品的最大浓度4管均为阳性，最低浓度4管均为阴性，按下式计算细菌内毒素国家标准品反应终点浓度的几何平均值（E）和细菌内毒素工作标准品反应终点浓度对应的稀释倍数的几何平均值（D).-1其中E=1g(?X/4）式中 X为细菌内毒素国家标准品反应终点浓度的对数值（1g）;—1D=1g(?X/4) 1式中 X为细菌内毒素工作标准品反应终点浓度对应的稀释倍数的对数值（1g). 1则待复核细菌内毒素工作标准品的效价的测定值为Pc=E×D。
细菌内毒素检查法SOP(陈魏制作)
细菌内毒素检查—凝胶法标准操作程序1.简述本操作程序主要参照BP 2003 Appendix XIV C. Test for bacterial endotoxins中MethodA.Gel-clot method: limit test和Method B. Gel-clot method: semi-quantitative test以及《中国药典2010版附录ⅹⅡE细菌内毒素检查法》中凝胶法，结合实验室自身条件编写而成。
2.安全注意事项由于细菌内毒素对人体有毒害作用，且鲎试剂对人的危害作用尚不明确。
因此实验过程中一定要做好防护措施。
3.检验目的检验供试品中的的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
4.检验原理本操作程序通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量检测内毒素。
5.供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH 值在6.0～8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH 值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH 值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
6.供试品细菌内毒素的限值(L)药典有明确规定的按照药典规定值，如无规定需经计算得出，具体计算方法见各药典。
7.供试品最大有效稀释倍数(MVD)和最小有效稀释浓度的确定(MVC)最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数( 1→MVD )，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。
用以下公式来确定MVD，MVD=cL /λ。
式中L 为供试品的细菌内毒素限值；c 为供试品溶液的浓度，当L 以EU / ml 表示时，则c为1ml / ml ，当L 以EU / mg 或EU / U 表示时，c的单位需为mg / ml 或U / ml。
细菌内毒素检查标准操作规程
细菌内毒素检查标准操作规程1 简述1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌毒素限值的确定。
（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。
K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。
其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂，K=0.2EU/kg/h。
M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。
药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算：MV D=C·L/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。
当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或U/ml。
如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。
1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。
细菌内毒素检查操作规程
细菌内毒素检查操作规程1.目的规范细菌内毒素检查操作2.范围细菌内毒素检查操作3.责任人检验员4.依据标准：中国药典2010年版二部附录XII E原理鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应机理，判断供试品中细菌内毒素限量是否符合规定。
5.内容5.1 设备：超净工作台电热干燥箱恒温水浴锅电热蒸汽灭菌器5.2.试剂，标准品，玻璃仪器①细菌内毒素工作标准品：灵敏度和阳性对照②鲎试剂（0.5EU/ml）③无热原水④玻璃注射针（1ml）、（20ml）⑤具塞玻璃管20ml5.3.准备①所有器具除热原玻璃器皿180℃干热2小时或121℃蒸汽灭菌30分钟后干燥②无热原水灭菌注射用水或内毒素检查用水5.4 试验5.4.1.供试品数量：同一批号至少3个单位供试品供试液制备：取注射器抽取 5 mL无热原浸提介质，连接于留置针连接座上，注入留置针内腔至导管末端，一起置于37℃恒温箱中浸提1小时。
将注射器中剩余浸提介质推注流过留置针内腔，收集全部浸提液进行试验，注入浸提介质不超过5mL。
5.4.2.供试品检查：将鲎试剂和细菌内毒素工作标准品分别按标示量加入无热原水溶解。
细菌内毒素工作标准品逐次稀释至0.5EU/ml，为阳性对照。
取10mm×75mm试管7支，2支加入0.1ml供试液,2支管加入0.1ml无热原水为阴性对照管，2支管加入0.1ml细菌内毒素工作标准品为阳性对照管，2支管加入0.1ml细菌内毒素工作标准品与0.1ml供试液为阳性干扰对照管再逐一加入0.1ml鲎试剂溶解液。
轻轻混匀试管内容物，封闭管口，垂直放入37±1℃恒温水浴中保温60±2分钟，轻轻取出，观察结果。
5.4.4.结果判定：将试管缓慢倒转180℃，管内容物坚实凝胶者为阳性，记录为（+），不呈凝胶状和虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴性，记录为（-）。
阳性对照管与阳性干扰对照管应为（+），阴性对照管应为（-），否则试验无效。
供试品管均为（-），判定产品符合规定。
细菌内毒素检查标准操作规程
细菌内毒素检查标准操作规程1 简述1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌毒素限值的确定。
（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。
K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。
其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂，K=0.2EU/kg/h。
M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。
药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算：MV D=C?L/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。
当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或U/ml。
如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。
1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。
细菌内毒素检验操作程序
目的：规范细菌内毒素检验操作程序。
范围：适用于细菌内毒素检查操作。
责任：品质部组织制定，中心化验室负责实施。
内容 1准备工作 实验设备及用具1.1.1刻度吸管、称量瓶、镊子、安瓿瓶（2ml 、5ml ）、药匙、250℃烘烤1小时。
1.1.2干燥箱、恒温水浴锅、漩涡混合器、精密天平。
1.1.3剪刀、砂轮片、医用胶布、洗耳球、试管架、脱脂棉球、水银温度计、试管 内毒素标准品与实验试剂1.2.1鲎试剂：在使用前应进行灵敏度测定，原则上购进一个批号测定一次。
1.2.2细菌内毒素检查用水（内毒素含量＜mL灭菌注射用水）。
1.2.3细菌内毒素国家标准品和工作标准品。
75%乙醇、铬酸洗液。
实验用具的消毒处理：凡是参与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除细菌内毒素处理，将洗净的器具经纯化水冲洗后，在250℃干热灭菌至少60分钟。
恒温水浴箱内水浴温度调节到37±1℃。
2鲎试剂灵敏度复核根据鲎试剂灵敏度的标示值（如：λ= EU/ml ），细菌内毒素工作标准品加入1ml 细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟。
将工作标准品制备成2λ、λ、λ、λ四个浓度（ EU/ml 、 EU/ml 、 EU/ml 、 EU/ml ）例：工作标准品为160 EU/ml 时注意：每稀释一步均应在混合器上混匀30秒。
取18支 EU/ml鲎试剂，每支中加入水，然后分别加入中制备好的4个浓度的标准液,按浓度从高到低依次加入，每个浓度加4支，；最后2支加入水作阴性对照。
将上述试管用医用胶布封口，垂直放入37℃±1℃水浴锅中，保温60±2分钟。
放入水浴前把水搅动几下，以使水温均匀。
再次检查温度是否在所要求的范围，注意保温和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。
保温结束后将试管轻轻取出，缓缓转到180°，若关内形成凝胶，不变形、不从管壁滑落者为阳性；未形成凝胶或形成凝胶变形从壁滑落者为阴性。
细菌内毒素检查法SOP(陈魏制作)
细菌内毒素检查—凝胶法标准操作程序1.简述本操作程序主要参照BP 2003 Appendix XIV C. Test for bacterial endotoxins中MethodA.Gel-clot method: limit test和Method B. Gel-clot method: semi-quantitative test以及《中国药典2010版附录ⅹⅡE细菌内毒素检查法》中凝胶法，结合实验室自身条件编写而成。
2.安全注意事项由于细菌内毒素对人体有毒害作用，且鲎试剂对人的危害作用尚不明确。
因此实验过程中一定要做好防护措施。
3.检验目的检验供试品中的的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
4.检验原理本操作程序通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量检测内毒素。
5.供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH 值在6.0～8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH 值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH 值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
6.供试品细菌内毒素的限值(L)药典有明确规定的按照药典规定值，如无规定需经计算得出，具体计算方法见各药典。
7.供试品最大有效稀释倍数(MVD)和最小有效稀释浓度的确定(MVC)最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数( 1→MVD )，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。
用以下公式来确定MVD，MVD=cL /λ。
式中L 为供试品的细菌内毒素限值；c 为供试品溶液的浓度，当L 以EU / ml 表示时，则c为1ml / ml ，当L 以EU / mg 或EU / U 表示时，c的单位需为mg / ml 或U / ml。
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目的：规细菌毒素检验操作程序。
围：适用于细菌毒素检查操作。
责任：品质部组织制定，中心化验室负责实施。
容1准备工作1.1实验设备及用具1.1.1刻度吸管、称量瓶、镊子、安瓿瓶（2ml、5ml）、药匙、250℃烘烤1小时。
1.1.2干燥箱、恒温水浴锅、漩涡混合器、精密天平。
1.1.3剪刀、砂轮片、医用胶布、洗耳球、试管架、脱脂棉球、水银温度计、试管1.2毒素标准品与实验试剂1.2.1鲎试剂：在使用前应进行灵敏度测定，原则上购进一个批号测定一次。
1.2.2细菌毒素检查用水（毒素含量＜0.015Eu/mL灭菌注射用水）。
1.2.3细菌毒素国家标准品和工作标准品。
1.2.4 75%乙醇、铬酸洗液。
1.3实验用具的消毒处理：凡是参与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除细菌毒素处理，将洗净的器具经纯化水冲洗后，在250℃干热灭菌至少60分钟。
1.4恒温水浴箱水浴温度调节到37±1℃。
2鲎试剂灵敏度复核2.1根据鲎试剂灵敏度的标示值（如：λ=0.25 EU/ml），细菌毒素工作标准品加入1ml 细菌毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟。
2.2将工作标准品制备成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度（0.5 EU/ml、0.25 EU/ml、0.125 EU/ml、0.06 EU/ml）的毒素标准溶液，备用。
例：工作标准品为160 EU/ml 时30秒。
2.3取18支0.25 EU/ml 鲎试剂，每支中加入0.1mlBET 水，然后分别加入0.1ml2.2中制备好的4个浓度的标准液,按浓度从高到低依次加入，每个浓度加4支，；最后2支加入0.1mlBET 水作阴性对照。
2.4将上述试管用医用胶布封口，垂直放入37℃±1℃水浴锅中，保温60±2分钟。
放入水浴前把水搅动几下，以使水温均匀。
再次检查温度是否在所要求的围，注意保温和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。
2.5保温结束后将试管轻轻取出，缓缓转到180°，若关形成凝胶，不变形、不从管壁滑落者为阳性；未形成凝胶或形成凝胶变形从壁滑落者为阴性。
（注意：保温盒拿取试管过程应避免受到震动而造成的假阴性结果） 2.6 结果判定当最大浓度2λ4支管均为阳性，最低浓度0.25λ4支管均为阴性，阴性对照2支管为阴性，实验方有效。
如图1按下述公式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值λc 。
当λc 在0.5λ-2λ时，方可用于细菌毒素的检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
式中：X 为反应终点浓度的对数值lg 。
反应重点浓度是指系列递减的毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。
antilg 是lg 函数的反函数，在excel 里可以用power 公式，power （数值） 2.7举例设待复核鲎试剂的灵敏度为0.25 EU/ml ，即λ=0.25 EU/ml。
实验结果如下： 毒素浓度 （EU/ml ） 0.50 0.25 0.125 0.062 Nc 反应终点浓度X1 + + - - - 0.252 + - - - - 0.503 + + + - 0.1254 + + + - 0.125天力药业标题：细菌毒素检测操作程序 编号：SOP-QM-243- B 页码：3/9λc= antilg(Σx/4)则：λc =antilg(∑X/4)=antilg[（lg0.25＋lg0.50＋lg0.125＋lg0.125）/4]= antilg[(-0.602-0.301-0.903-0.903)/4]= antilg(-0.508)=0.310（EU/ml）λc在0.5λ-2λ围，符合规定。
结果不是毒素最大浓度（2λ）4管全部阳性，最小浓度（0.25λ）4管全部阴性，本批鲎试剂不能使用。
需查找原因，可能是灵敏度标示不准确或毒素效价标示不准确，或操作不当所致。
3.干扰实验干扰试验的目的是确定供试品在多大的稀释倍数或浓度下对毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为能否使用细菌毒素检查法提供依据。
3.1制备毒素标准对照溶液取1支细菌毒素标准品，用细菌毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2.0λ、λ、0.5λ、0.25λ。
3.2制备含毒素的供试品溶液将供试品稀释至预实验中确定的不干扰稀释倍数，再用此稀释液将11.1中的同支细菌毒素标准品稀释成4个浓度即2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的含毒素的供试品溶液。
3.3鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂36支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使容物充分溶解，避免产生气泡。
若待复核鲎试剂的规格不是0.1ml/支时，按其标示量加入检查用水复溶，将复溶后的鲎试剂溶液混和在一起，然后每0.1ml分装到10×75mm凝集管中，要求至少分装36管备用。
3.4凝胶反应将准备好的鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的毒素标准对照液，另一列2支（管）加入0.1ml检查用水作为阴性对照。
将另外18支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的毒素的含供试品溶液；另一列2支（管）加入0.1ml供试品溶液作为样品阴性对照，如表1所示。
加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，两同试管架放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，保温60±2分钟后，观察并记录结果。
注：A为供试品溶液；B为干扰试剂系列；C鲎试剂标示灵敏度的对照系列；D为阴性对照。
3.5判定并计算C和B的反应终点浓度的集合平均值(Es和Et)只有当溶液A 和阴性对照溶液D 的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C 的结果在鲎试剂灵敏度复核围时，试验方为有效。
按下式计算系列溶液C 和B 的反应终点浓度的几何平均值（Es和Et ) :Es= antilg （∑Xs / 4 )Et=antilg （∑Xt / 4 )式中Xs、Xt分别为系列溶液C 和溶液B 的反应终点浓度的对数值（lg）。
当Es在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）及Et在0.5Es～ 2 Es （包括0.5Es和 2 Es）时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。
若供试品溶液在小于MVD 的稀释倍数下对试验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD 的进一步稀释，再重复干扰试验。
可通过对供试品进行更大倍数的稀释或通过其他适宜的方法（如过滤、中和、透析或加热处理等）排除干扰。
为确保所选择的处理方法能有效地排除干扰且不会使毒素失去活性，要使用预先添加了标准毒素再经过处理的供试品溶液进行干扰试验。
当进行新药的毒素检查试验前，或无毒素检查项的品种建立毒素检查法时，须进行干扰试验。
当鲎试剂、供试品的处方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。
3 供试品细菌毒素检查凝胶限度试验4.1要求：在细菌毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品和2支供试品阳性对照，同时每次试验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。
4.1.1因《药典》对甘露醇原料药毒素无要求，参照甘露醇注射液毒素限值，每1g甘露醇中含毒素的量应小于1.25EU。
根据MVD=CL/λ，且当供试品为注射用原料药时，MVD取1。
故20%甘露醇注射液的鲎试剂限度为：λ=0.2g/ml×1.25EU/g=0.25EU/ml4.2操作方法4.2.1供试品溶液的制备准确称取0.2甘露醇用1mlBET水溶解，制成20%甘露醇溶液。
根据MVD=CL/λ，将供试品进行稀释，其稀释倍数不得超过MVD。
式中：C为供试品浓度。
L为供试品的细菌毒素限值。
λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度。
例：①当用标示值为0.25EU/ml灵敏度的鲎试剂时，MVD=CL/λ=20%×1.25/0.25=1(倍),所以把供试品制成20%的稀释液即可。
②当用标示值为0.125EU/ml灵敏度的鲎试剂时，MVD=CL/λ=20%×1.25/0.125=2(倍),所以把供试品制成10%的稀释液即可。
③当用标示值为0.06EU/ml灵敏度的鲎试剂时，MVD=CL/λ=20%×1.25/0.06=4(倍),所以把供试品制成5%的稀释液即可。
4.3阳性对照溶液的制备用检查用水将毒素标准品稀释制成2λ浓度的毒素标准溶液。
取规格为10EU的细菌毒素标准品一支用酒精棉球将瓶颈消毒后开启，加BET检查用水1.0ml混合15分钟后备用。
例：当用标示值为0.25EU/ml灵敏度的鲎试剂时，2λ=0.5EU/ml，例：当用标示值为0.125EU/ml灵敏度的鲎试剂时，2λ=0.25EU/ml，4.4供试品阳性对照溶液的制备用待检测的供试品溶液或其稀释液将毒素标准品制成2λ浓度的毒素溶液。
例：当用标示值为0.25EU/ml灵敏度的鲎试剂时，2λ=0.5EU/ml，例：当用标示值为0.125EU/ml灵敏度的鲎试剂时，2λ=0.25EU/ml，4.5阴性对照液即细菌毒素检查用水4.5.1鲎试剂的准备取规格为0.1ml的鲎试剂8支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后开启备用，防止玻璃屑落入瓶。
每支加入0.1ml检查用水溶解。
4.5.2加样取8支2.2.5溶解好的鲎试剂，其中2支加入0.1ml供试品溶液，作为供试品管；2支加入0.1ml阳性对照溶液，作为阳性对照管（PC）；2支加入0.1ml供试品阳性对照溶液，作为供试品阳性对照管（PPC）；2支加入0.1ml检查用水作为阴性对照管（NC）。
4.5.3将2.2.6试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37℃±1℃水浴锅中，保温60±2分钟。
注意保温和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。
4.6结果判断当阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，试验方为有效。
若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定；如若供试品2管均为阳性，认为该供试品不符合规定；如2管中1管为阳性，另1管为阴性，则必须领取4支供试品管复试，4管中如有1管为阳性，即认为不符合规定。