植物生理学实验：光合作用、呼吸、蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400光合仪的日常检查和测量过程
一、LI-6400/xt光合仪日常检查
2、预热后检查
2.5 检查匹配阀
检查匹配阀是否工作； 应该在每天开始测量前，进行一次匹配。当全天都在 相同的CO2浓度下做实验，一般每20到30分钟就应当 匹配一次。如果做实验时，每次测量都要改变CO2浓
度，那么每改变一次CO2浓度，就需要进行一次匹配。
一、LI-6400/xt光合仪日常检查
2、预热后检查
2.2 检查CO2和H2O IRGAs零点
将两个化学管都旋至完全Scrub位置，完全闭合叶室； 如果CO2读数在±5微摩尔以内，H2O在±0.5毫摩尔每摩
等待大约5分钟，参比室和样品室CO2和H2O会降到零附近。
尔以内，说明零点正常，不需要校准。如果它们超过这个
一、LI-6400/xt光合仪日常检查
1、预热期间检查
1.3 检查大气压传感器
检查g行Prss_kPa值是否合理。 一般在海平面大气压值约100kPa ，海拔300m大气压 为 97 kPa ，海拔1500约83 kPa且随天气变化，大气
压可能会有1到2 kPa的变化。
一、LI-6400/xt光合仪日常检查
LI-6400/XT光合仪日常检查和校准
报告人：贾子毅
北京力高泰科技有限公司 基因有限公司
主要内容
一、日常检查
二、校准（Calib Menu）
三、测量过程
一、LI-6400/XT光合仪日常检查
1、预热期间检查 2、预热后检查
日常检查的必要性——依据计算公式
蒸腾速率(E) 流速(Flow)、参比室和样品室H2O摩尔比、叶面积
2、控制环境条件的测量步骤
手动测量
实验一 光合作用测定实验报告
实验一:光合作用测定实验报告一、实验目的了解和掌握LICOR6400便携式光合蒸腾仪测定光合速率的使用方法二、实验原理植物的净光合速率可以用单位时间内单位面积氧气的生成量、单位时间内单位面积二氧化碳的消耗量、单位时间内单位叶面积干物质的生成量来表示。
该仪器采用气体交换法来测量植物光合作用，通过测量流经叶室的空气浓度的变化来计算叶室内植物的光合速率。
中CO2三、实验材料、设备1.实验材料大小合适的小麦活体叶片2.设备和仪器LICOR6400便携式光合蒸腾仪四、操作步骤1.开机预热将LICOR6400光合仪打开预热30分钟，目的使LICOR6400光合仪性能更加稳定。
分析器调零2.CO2按照显示器中的提示进行操作，待数值稳定后按确认键确认分析器调满3.CO2标准气接出来的管子，接上“IN”并确认，把管子接有把已知浓度的CO2分析器校准界面下按照显示器上的提示进行调瓶子的的那头放到室外。
然后在CO2满操作，输入气源浓度360ppm。
4.选择开路测量方式，把安装叶室手柄上的两个管子分别与仪器面板上对应的接口相连，然后把叶室手柄上的传感器电缆插头插到面板上的“手柄接线”插座上并拧紧。
选择手动测量方法，按确认键。
5.记录实验数据五、结果处理1.实验结果2.实验结果计算与分析（1）小麦净光合速率的计算去掉一个最大值2.93（umol/ m2﹒s）一个最小值-0.25（umol/ m2﹒s）后计算Pn=(0.46+0.48+0.76)/3=0.567（umol/ m2﹒s）（2）实验结果分析由于当天的环境条件不稳定且阴天，利用的人工光源光强度较弱，所以测定的结果不具有可靠性。
出现了一个最大值表明光合速率旺盛，出现了一个负值表明小麦的光合作用小于其呼吸作用。
影响其光合作用主要的因素有①光照②温度浓度③大气湿度④CO2六、注意事项1.本仪器使用前必须预热，以保证仪器性能的稳定性。
2.本仪器在每次开机测量时，都要先对CO2分析器进行调零，调零工作在测定一段时间后也要进行。
LI-6400便携式光合仪操作使用规程
LI-6400便携式光合仪操作使用规程仪器使用范围：植物单叶或群体光合速度、蒸腾速率、气孔导度、光饱和点和补偿点、二氧化碳饱和点和补偿点等。
1、开机：打开位于主机右侧的电源开关。
仪器在启动后将显示“Is the IRGA connected? (Y/N)”选择Y2、叶室配置选择：选择Factory default（常规）或他叶室（6400-02B红蓝光源），然后回车自动进主菜单。
3、手动测量：按F4“New Measurements”菜单进入测量菜单。
①设定文件：按F1“Open Logfile”建立新文件。
回车后输入自己设定的文件名。
当显示屏出现提示“Enter Remark”时，输入需要的标记(英文，用于标记样地、植物种类、样品号等)。
继续回车，文件设置结束。
在夹入叶片之前如果ΔCO2大于0.5或小于-0.5，按F5“Match”进行匹配。
②测量：选取需要测量的植物叶片(3-5次重复)。
测量时间尽量选择在晴朗的上午10：00-11：30间最好。
③向Bypass方向拧紧碱石灰管和干燥管上端的螺母。
夹上叶片(尽量让叶片充满整个叶室空间，面积为6cm2，小叶片需测量面积，并在测量菜单状态下按数字“3”后按F1来修改叶面积值，关闭叶室，旋紧固定螺丝至适度位置。
④等待C行PHOTO读数稳定（小数点后最后一位数字的波动在2左右）后即可记录 (按F1“LOG”按钮或者按分析仪手柄上的黑色按钮2秒即可记录一组数据。
⑤换叶片进行下一次测量。
重复②--④步骤。
4、自动测量与环境条件控制LI-6400可以控制的环境条件包括温度、CO2浓度、光强等。
一般而言，需要控制环境条件的实验有两种情况。
一种是环境变化剧烈，无法准确进行同等环境条件的测量。
另一种情况是进行光曲线和ACI曲线测量。
环境控制只需要在手动测量时，按数字来切换菜单。
具体各菜单情况如下图所示。
温度控制：按数字2，按F4控制温度(输入需要的温度回车即可，注意温度控制范围是环境温度的±6℃)。
LI-6400基本测量原理介绍
6400-40 荧光叶室
Gene Company Limited
Agricultural & Environmental Division
荧光仪测量参数
最大荧光（Fm）
光下最大荧光（Fm’）
初始荧光（Fo）
光下最小荧光（Fo’）
LI-6400基本测量原理介绍
基因有限公司 北京力高泰科技有限公司
2006年5月6日 成都
内容介绍
光合作用测量方法 红外线气体分析法(IRGA) LI-6400 气体交换测量系统 LI-6400气体交换测量系统使用功能与
应用
光量子
CO2
H2O
(CH2O)
O2
酶
Gene Company Limited
● 叶温(TL)
● 气温 （Ta）
● 相对空气湿度(RH) ● 饱和蒸气压亏缺（VPD）
Gene Company Limited
Agricultural & Environmental Division
LI-6400的使用功能2
2、计算参数包括：
● 表观量子效率(AQY) ● 羧化效率(CE)
● 气孔限制值(Ls)
genecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivisionco2co2辐射源滤光片检测器信号输出genecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivisionco2co2cogenecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivision光强度光强度叶片温度叶片温度coco22水蒸气水蒸气不仅要测量这些因子而且要控制这些因子不仅要测量这些因子而且要控制这些因子genecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivision净coco22流量流量同化作用或呼吸作用同化作用或呼吸作用气孔导度气孔导度g胞间coco22浓度浓度cici电子传递电子传递植物胁迫指示植物胁迫指示genecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivisionlili64006400genecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivision红外气体分析的原理红外气体分析的原理是是lilicorcor公司生产的第三代气体交换测量系统公司生产的第三代气体交换测量系统分析器位于传感器头部分析器位于传感器头部具有两组完全独立的具有两组完全独立的非扩散性的非扩散性的开路的红外开路的红外分析器分析器同时测量同时测量coco22和和hh22oo的绝对浓度的绝对浓度可连续测量参比室和样品室的可连续测量参比室和样品室的coco22和和hh22oo绝对浓绝对浓度度达到实时测量叶片的动态指标达到实时测量叶片的动态指标lili64006400genecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivisiongenecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivisiongenecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivisiongenecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivisiongenecompanylimitedagriculturalenvironmentaldivision蒸腾作用蒸腾作用和光合作用和光合作用改变了叶室空气中水改变了叶室空气中水蒸气和蒸气和co
植物叶片光合蒸腾速率气孔导度与呼吸速率的测定
1P ： 小 区 号 ， 用 户 输 入 ； 按
设置菜单3
1 P:01 R:01 FREE RECORDS nnn
“1”键可改变，输入范围01-89 R：记录号，如改变小区号， 记录号重新设置为01；
按“Y”键仪器进入预热状态， 屏幕显示:
FREE RECORDS 器剩余存储数量。
F
光 源
气 室
滤检
光测
整
片器
流
显 示 屏
放
大
2. 气路系统工作原理
IRGA只能进行CO2浓度和水蒸气浓度的测定， 不能直接测定植物叶片的光合参数。要测定光合参 数必须与同化室组成一定的气路系统。
常用的气路系统主要有：
（1）密闭式气路系统 （2）开放式气路系统
（1）密闭式气路系统
公式：Pn=△C/△t×V/S
SET PLC：选择叶室 1:BROAD：标准叶室 2:UNIVERSAL：通用型叶室
设置菜单1 设置菜单2
1 REC: M 2 INT: 0 FLO:300
1REC： 记 录 类 型 ；A 自 动 记 录 ; M手动记录。按“1”键在A和M间 转换。按“1”键选择M。 2INT：自动记录时间间隔；M记
nnn：存储
WARM UP DELAY TPS TEMP.= 40
完显成示预“热测后定(菜55单)，”C+:/参-nn比nC分O析2浓气度与，参单比位气pCpOm2;浓度差;
Q:光量子通量密度，单位μmol·m-2·s-1
C nnnn +/-nnn Q nnnn H:参比水蒸气压，单位毫巴(0.0~75.0)
低氧气体（2～3％O2，360ppmCO2） 与正常空气（21％O2，360ppmCO2） 6.控制温度下光合速率的测定
li-6400光合作用测定仪的简单操作方法
实验二水分对植物的影响附录Ⅰ CM-3000 叶绿素测定仪的使用方法(1)按［On/Off］打开仪器，检查电池是否可用。
(2)准备。
首先要保证光源，最好是自然光源，因为叶绿素测定仪仅对700~840nm的光敏感。
(3)调节仪表前方一个带白点（聚四氟乙烯）的黑色盒子垂直于太阳光，同时还要保证植物叶片和镜头所在线与太阳光线平行。
(4)测量。
保持目标叶片垂直于太阳光线，按动手柄上的按钮，进行记录。
尽管该仪器可以进行数据保存，但由于不能设定文件夹，只能通过记录号来进行数据管理，所以必须在记录本上记录某一样品的测量记录号；另外，测量时一定要有一个一致的背景，可以用手或黑色背景。
尽量不要离体测量。
错误结果可用［Clear］删除，重新记录。
(5)关闭仪器。
(6)数据导出。
安装CM1000软件，用数据线将仪器和计算机连接，打开软件，开始下载数据。
(7)将数据在Excel或SPSS中打开，进行统计分析，做出统计图，分析结果。
附录Ⅱ LI-3000叶面积仪操作方法(1)按［On］打开仪器(2)建立文件。
按［FILE］建立一个文件，文件名将按顺序号自动指定，要求ENTER REMARK输入标记，用来标记地点或样地，然后进行测量。
字母的输入方法：如果希望打入上档字符，首先按↑，然后按字母所在按钮即可输入该字符；如果下档字符则按↓，再按字符所在按钮。
(3)测量。
用手指按住扫描头上部的把手，把扫描头上部抬起来，并把叶片夹在扫描头上下部中间，利用左手的拇指和无名指夹住叶片的叶柄处，同时无名指和食指夹住长度编码索一同匀速拉动，直到完全抽出叶片。
测量后可以按［STORE X］来存储。
抽动速度不能高于1 m/s，否则将显示错误信息，错误结果可用［CLEAR X］键来删除。
拉动编码索时要保证编码索水平，测量过程中不要来回拉动；当测量完成时要缓慢释放编码索，不要猛拉猛放。
(4)如果要测量一株植物所有叶面积的累计值（Y行），测量一片叶片就应该按［ADD］按钮一次来进行添加；如果按“SUB”按钮，则把最后一个数值从累加值中删去。
植物生理学实验-光合、呼吸速率、荧光参数测定
.
1
实验五. 植物叶片光合、蒸腾与呼吸速率的测定
一、概述 二、红外线气体分析仪（IRGA）工作原理 三、TPS-2光合作用测定系统操作方法
.
2
一、概 述
（一）意义
●光合作用是唯一能把太阳能转化为稳定的化 学能贮藏在有机物中的一个化学过程，是农 作物产量形成的决定性因素。
按“Y”键显示 正确不修改)
1P：小区号，用户输入；按“1”
设置菜单3
1 P:01 R:01 FREE RECORDS nnn
联体测定
.
5
二、红外线气体分析仪(IRGA)
工作原理
.
6
1、原理
由异原子组成的气体分子吸收红外光。 红外光经过CO2气体分子时被气体分子吸收， 透过的红外线能量减少，被吸收的红外光能量 的多少与该气体的吸收系数（K），气体浓度 （C）和气层的厚度（L）有关，并服从朗伯-比 尔定律，可用下式表示：
原则上可以测定任一反应物的消耗速率或产
物的生成速率来表示光合速率。
测定方法：CO2的吸收
O2的释放
有机物的积累
.
4
1、氧气的释放 氧电极（实验20） 离体测定
2、干物质的积累 半叶法（实验21） 离体测定 群体光合能力 离体测定
3、CO2的吸收测定光合速率
①化学滴定法, 主要测定呼吸（实验22） ②pH法（已经淘汰） ③红外线气体分析仪(IRGA)法
.
20
（二）TPS-2光合系统操作步骤
开机显示主菜单
1REC 2CAL 3DMP 4CLR 5CLK 6DIAG
按“1”进入 测定模式
浙江大学植物生理学实验：光合作用、呼吸、蒸腾和气孔导度(LI-6400)测定方法
2000
50
100
150
200
Photosynthetic photon flux (μ mol photon m-2 s-1)
Photosynthetic photon flux (μ mol photon m-2 s-1 )
4
Photosynthetic rate (μ mol CO2 m-2 s-1 )
（五）数据存取：
12、数据保存和取出。采样完后按１，Close file,按F5，end进入SLEEP（同一班只需一个 file，不同的组可以用<add mark>区分)。与电 脑连接，解除SLEEP，进入F5(Utility Manu) 选择File exchange mode。打开电脑winPX for 6400,在LI-6400/User下把自己要的测定文件拖 入专设目录。在EXCEL下选择所有文件在文 本导向下，选择“，”打开。
数据所代表的中文意义。
Ftime——持续时间(s) Photo——光合速率（μmol.m-2s-1） Cond——气孔导度（mol H2Om-2s-1） Ci——胞间CO2浓度（μl.L-1）
Trmmol——蒸腾速率（mmol.m-2s-1） VpdL——水气压差（mg/L）
Area——叶面积（cm2） BLCond——界面层导度 Tleaf——叶温（℃） StmRat——气孔比率 Tair——气温（℃） TBlk——参比室（℃） CO2S——叶室CO2（μl.L-1）
6CO2+6H2O
6(CH2O)+6O2
1、测干重——改良半叶法：同面积光暗叶片重量差。
三氯乙酸 TCA
暗 中
2、测放O2 ——氧电极法。气相和液相
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1.氧电极
氧电极是由嵌在有
机玻璃上的铂和银所构
成，以0.5mol/L KCl为
电解质，电极头外覆盖
一层聚乙烯或聚四氟乙
烯薄膜，其厚度在15～
25μm之间，用“〇”形套
膜环固定，使电极与被
Hale Waihona Puke 测溶液隔离，而溶解在溶液中的氧仍能透过薄
膜，进入电极内。较薄
图3氧电级的构造
的膜易透过氧，因而对
1.Pt极 2.Ag-AgCl极 3.填充物
氧短浓。 度变化的响植应物生时理学间实验：光合作用、(头 液呼环吸氧、6.树薄脂膜)
4.电极柄 7.套膜环
5.电极 8.KCl溶
蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
3、红外线CO2分析仪法： CO2吸收4260nm红外线
连接光源和控制器的地缆 植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400控制系统
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
四、操作方法与实验步骤： (一)仪器安装： 1、选择叶室。根据测定对象选择不同叶室进 行安装,本实验选用仪器自备的红兰光源（一 般测定选择红兰光源或自然光源不透明叶室， 荧光测定选择荧光叶室，详见说明书）。
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
二、实验内容和原理： （一）熟悉仪器基本结构，及按装调试。 （二）以绿萝和蚕豆等植物为材料，用LI6400portable photosynthesis system测定它 们的光合作用、呼吸作用、蒸腾速率和气 孔导度及光-光合响应曲线，通过比较分析 其属于什么光合类型植物。
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
三、主要仪器设备： LI-6400 portable photosynthesis system
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
红兰光源叶室和CO2红外分析器
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
实验5-6、植物光合和呼吸作用、 气孔导度和蒸腾速率的测定
• 一、实验目的和要求: • 了解改良半叶法、氧电极法测定光合作
用和呼吸作用的基本原理，掌握红外线 CO2分析仪法测定光合作用和呼吸作用， 蒸腾速率和气孔导度测定的基本原理; • 掌握用LI-6400测定光合作用、呼吸作用、 蒸腾速率和气孔导度的方法，测定光-光 合响应曲线的方法.
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
（三）实验原理 Principles for measuring photosynthesis and respiration
6CO2+6H2O 6(CH2O)+6O2
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400分析器分植析物生电理学缆实验连：光接合作用、呼吸、
蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
(二)开机与校正：
3、插上电池，打开电源开关后。 （仪器自动进行状态检测，并进入
Dir:/user/configs/Userprefs菜单）。在该菜 单下，选择一与叶室、光源相匹配的内容 （如“red blue source”表示用红兰光源不透 明底叶室） <enter>，仪器显示：
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400控制系统接线侧
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400控制系统干燥管和碱石灰管侧 植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400控制系统侧电缆连接
1、测干重——改良半叶法：同面积光暗叶片重量差。
三氯乙酸
TCA 暗 中
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
2、测放O2 ——氧电极法。气相和液相
图2 氧电极装置示意图
1、光源 2、反应杯 3、电极 4、超级恒温水浴 5、触点式温度计 6、泵 7、控制器 8、记录仪
叶室
封闭式： 分析器
单位时间内CO2下降量
叶室
开放式：气体 分析器
出口
参比室
CO2
入口
参比室和叶室CO2差值
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
• Principles for measuring transpiration,stomatal conductance and Ci :
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400控制系统侧气管连接
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400分析器电缆连接
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
LI-6400分析器气管连接 植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
植物生理学实验：光合作用、呼吸、 蒸腾和气孔导度(LI6400)测定方法
2、连接仪器各部件
电源连线与控制器正确匹配（管道和线路 切不可接错）， 多孔插线和分析器对准 （红点）插入；硬塑料管带黑圈套的端与 分析器相接并使另一端与控制器“sample”相 接。接上带“buffer”的进气管，接上电源 （切记，除“Sleep”状态外，在电源开情况 下，不可接或卸管道和线路，否则会烧毁 仪器）。
• Transpiration→H2O → RH↑in leaf chamber → Humidity sensor → computer → transpiration rate → stomatal conductance.
• There is a linear relationship between H2O diffusing in and CO2 diffusing out stomata. Intercellular CO2(Ci) concentration can be calculated in the basis of transpiration rate, stomatal conductance, atmosphere CO2(Ca) concentration.