梅毒检测试验

梅毒（syphilis）是危害人类健康较为严重的性传播疾病之一，近年来在我国的发病率呈逐年上升趋势，选择敏感性、特异性均高的梅毒检测方法有助于梅毒的诊断。梅毒的病原体是梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP），其含有表面抗原，能刺激机体产生两类抗体，一类为抗密螺旋体的特异性抗体；另一类为非特异性抗体。根据梅毒螺旋体的生物学及免疫学特性，目前国内外所用的梅毒螺旋体的检测方法主要有以下几种。

1、病原体的检测直接观察分泌物中的梅毒螺旋体，如见到运动活泼的苍白螺旋体可直接诊断梅毒，是最特异、最准确的诊断方法，但灵敏度低。

1.1暗视野显微镜检查梅毒螺旋体（DF）是梅毒病原体检测的主要方法之一。用暗视野显微镜可直接观察到病灶分泌物中的梅毒螺旋体，结合临床症状可直接诊断梅毒，适用于早期梅毒的诊断。该方法不仅操作简单，且经济、快速，但此法对晚期及隐性梅毒或口腔病灶标本不适用。

1.2活体组织检查梅毒螺旋体常用银染色法（warthinstarry）或荧光抗体染色，可查见梅毒螺旋体，呈黑褐色。银染色的阳性结果需谨慎解释，因为类似梅毒螺旋体的其他物质易混淆。

1.3多功能显微诊断仪（multifunctional microscopy diagnostic instrument,MDI）是近年来国外开发的一种综合相差对比、暗视野及偏振光的可变投影显微镜，其特点是待检查标本不需染色及任何加工处理，而是将“活的”真实的样品直接进行观察，具有直接、方便、快速的优点。但整套仪器价格昂贵，很难普及到各个梅毒检测实验室。

2、梅毒血清学试验是梅毒诊断最主要的实验室检查方法，根据所用抗原不同可分为两类。

2.1非梅毒螺旋体抗原血清试验用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，此类试验为非特异性抗体检测试验，目前多数医院列为梅毒的常规筛查试验。这类试验可观察疗效、复发及再感染，适于二期梅毒的诊断，而不适于诊断一、三期梅毒，包括潜伏梅毒、神经梅毒的诊断。

2.1.1康、瓦氏试验是最早检测梅毒患者体内存在抗体的方法，这两种试验的抗原采自牛心肌粉酒精浸液，称作心肌脂抗原。此类试验操作复杂，易出现假阳性。这2种试验现已被淘汰。

2.1.2性病研究实验室试验（venereal disease research laboratory test，VDRL）美国Pangborn 等发现一种性病研究实验室抗原（VDRL），是从牛心肌中提取的心拟脂，适量加入胆固醇及卵磷脂以提高敏感性，通常称这种抗原为心拟脂抗原。VDRL试验属于微量玻片法，是唯一推荐用于检测脑脊液反应素的试验，对诊断神经梅毒具有重要价值，可作定量及定性试验，操作简单，试剂及对照血清已标准化，费用低。但对一期梅毒敏感性不高。

2.1.3快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）是80年代问世的非特异性梅毒血清学试验，所用抗原为标准的牛心肌脂抗原，该方法操作简便、迅速，适用于大量标本检测，目前许多血站用RPR试验对献血者进行梅毒普查。RPR试验和DF方法对一期梅毒的诊断相互配合，可早期诊断梅毒［1］。缺点是当抗体含量过高时，易出现假阴性反应，即前带现象（prozone phenomenon），会有漏检；还易出现生物学假阳性反应。对潜伏期梅毒、神经梅毒不敏感。

2.1.4不加热血清反应素试验（USR）是VDRL抗原的改良，本方法在我国目前广泛采用。血清不需加热灭活，节省操作时间，但主观性强，易出现漏检。USR与RPR试验可作为疗效观察或随访是否复发或再感染的指征。

2.1.5甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）TRUST试验所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇，试验结果清晰易读，简便快速，稳定性好，TRUST 法比RPR、USR效价测定高一个滴度［2］。缺点是许多因素影响结果，如高脂血症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰而出现假阳性结果［3］。

2.2梅毒螺旋体抗原血清试验用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗原测定抗螺旋体抗体。这种试验敏感性和特异性均高，一般用作确认试验［4］。这种试验是检测血清中抗梅毒螺旋体IgG或IgM抗体，该抗体即使患者经过足够治疗，仍能长期存在，甚至终身不消失，血清反应持续存在阳性，因此，不能用于观察疗效。

2.2.1荧光密螺旋体抗体吸收试验（fluorescent treponemal antibody αbsorption test，FTA-ABS)是以Reiter株抗原吸收待检血清，保证了试验结果的特异性；以整条梅毒螺旋体检测血清中抗体，提高了试验的敏感性。文献报道FTA ABS对各期梅毒检测的特异性达到92%，对一期梅毒的敏感性为80%，二期为99%～100%，三期为95%～100%［5］。它的主要缺点是需荧光显微镜设备［6］，当标本荧光微弱病情可疑时，试验结果判定常带有主观色彩。美国常用此试验作为梅毒的确认试验［7］。

2.2.2梅毒螺旋体血球凝集试验（treponema pallidum hemagglutination assay,TPHA）是用生物细胞（火鸡或羊红细胞）做抗原载体，吸附从兔睾丸中提取的粗制梅毒螺旋体粉碎物抗原，检测血清中特异性梅毒螺旋体抗体，是目前国内许多医院常用的梅毒血清确认试验。试剂制备过程排除了各种非特异性反应，因此TPHA的敏感性和特异性较高。缺点是试剂成本较高，操作较麻烦，且易发生自凝现象和生物学假阳性［8］。

2.2.3梅毒螺旋体明胶凝集试验(treponema pallidum particle agglutination，TPPA)TPPA作为梅毒抗体检测的确证方法，有着很高的敏感度和特异性，操作较简便，结果清晰易判断，但价格昂贵且结果判断难以自动化。

2.2.4梅毒螺旋体免疫印迹试验（western immunoblotting technique）是80年代发展起来的一种检测技术，它结合了免疫学和分子生物学的特点，敏感性高，特异性强。Dettori等[9］认为免疫印迹法用于梅毒诊断优于FTA-ABS和TPHA方法，对二期梅毒或早期潜伏梅毒、神经梅毒的阳性率均为100%，对于非螺旋体标本（包括正常标本、生物学假阳性标本以及γ球蛋白增高或抗核抗体的标本）检测没有假阳性或可疑反应。免疫印迹法操作简便，不要求试验仪器和环境，结果容易判定，但成本较高。

2.2.5梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,TP-ELISA）TP-ELISA方法检测梅毒螺旋体最早出现于1975年，是用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体。TP-ELISA方法主要检测梅毒螺旋体IgG和IgM抗体，文献报道TP-ELISA方法的敏感性高于FTA-ABS方法[10］，对Ⅰ期梅毒的诊断灵敏度为9

3.8%，诊断特异性为100%。TP-ELISA方法检测操作简便，不受样本中纤维蛋白和溶血等影响，一次可进行多份样本的检测，用酶标仪分析，客观准确，结果便于保留及标准化管理，可用作筛查和确认试验。因此，TP-ELISA方法被公认为梅毒血清学诊断实验的首选方法。

3、基因诊断技术检测梅毒螺旋体（TP-PCR）TP-PCR检测梅毒螺旋体DNA，特异性很强，敏感性很高，是目前诊断梅毒螺旋体的先进方法。PCR检测梅毒螺旋体的DNA，其敏感性、特异性均优于血清学方法。由于临床标本可能含有大量人细胞和微生物，建立对梅毒螺旋体高度特异的PCR方法是很重要的。但目前国内TP-PCR试剂盒的质量有待改进。

4、脑脊液检查用于诊断神经性梅毒，包括细胞计数、蛋白含量，VDRL试验、PCR检测、胶体金试验等。脑脊液VDRL试验是神经梅毒的较可靠诊断依据，有条件的单位行脑脊液PCR检测，可以快速准确的诊断神经性梅毒。

总之，及早、准确地诊断梅毒需要梅毒实验室的检测，所以选择一种敏感性和特异性均高的检测方法非常重要。目前，国内实验室用梅毒非特异性试验（如RPR法、TRUST法）进行梅毒的常规筛查及疗效观察、判断复发及再感染，用梅毒特异性试验（如FTA ABS、TPPA或ELISA法）进行确认试验，用于诊断各期梅毒。这些试验各有优缺点，研究人员仍在寻找敏感、准确、全面的检测方法。