M蛋白的检测与鉴定(参考资料)
智能识别鉴定M蛋白分型
６７６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０２０,V o l．４１,N o．２１ 论㊀㊀著智能识别鉴定M蛋白分型王仁浩１,谢㊀婧２,管仲斌１,谢松业１ә(１．上海兰卫医学检验所股份有限公司医学检验科,上海２００３３５;２．澳大利亚阿德莱德大学,澳大利亚南澳大利亚州阿德莱德５００５)㊀㊀摘㊀要:目的㊀计算机能做到与医学检验专家一样,智能快速准确地识别M蛋白的成分并鉴定出是哪一类型的M蛋白病.方法㊀采集免疫固定电泳后的样本图片,经电脑扫描后转换形成一维数据,为了便于智能化鉴定M蛋白成分,先在其中血清蛋白电泳中找到M蛋白带,再根据其他５个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.为了便于参数传递,将电泳峰值数据标准化纠正,以免不同因素引起偏差干扰.结果㊀如果待测患者的峰值(除清蛋白)比相应正常质控品峰值大,且峰高与峰宽之比大于４ʒ１即找到M蛋白带,根据是否有M蛋白带和健康人的免疫固定电泳６组的一维数据的峰高与峰宽的阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即患有M蛋白血症.结论㊀采用计算机编程可对免疫固定电泳图谱中血清蛋白电泳及各组分实现自动识别㊁分类㊁综合分析,给出正确鉴别结果,与传统方法比较无差异,可为临床医生鉴別诊断提供科学依据.关键词:智能;㊀M蛋白分型;㊀免疫固定电泳D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０２０．２１．０２７中图法分类号:R７３３．３;R７３０．４５文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０２０)２１Ｇ２６７６Ｇ０５文献标识码:AI n t e l l i g e n t r e c o g n i t i o na n d i d e n t i f i c a t i o no fM p r o t e i n t y p i n gWA N GR e n h a o１,X I EJ i n g２,G U A N Z h o n g b i n１,X I ES o n g y e１ә(１．D e p a r t m e n t o f M e d i c a lL a b o r a t o r y,S h a n g h a iL a b w a y C l i n i c a lL a b o r a t o r y C o．,L t d．,S h a n g h a i２００３３５,C h i n a;２．U n i v e r s i t y o f A d e l a i d e,A d e l a i d e,S o u t hA u s t r a l i a５００５,A u s t r a l i a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀A s t h e s a m ew i t hm e d i c a l l a b o r a t o r y e x p e r t s,c o m p u t e r s c a n a l s o r e c o g n i z e t h e c o m p o n e n t s o fM p r o t e i n q u i c k l y a n d a c c u r a t e l y,a n d i d e n t i f y w h i c h t y p e o fM p r o t e i nh a d c a u s e dd i s e a s e．M e t h o d s㊀T h e s a m p l e p i c t u r e s o f i mm u n o f i x a t i o ne l e c t r o p h o r e s i sw e r e s c a n n e d a n d t r a n s f o r m e d i n t oo n eＧd i m e n s i o n a l d a t a．I no r d e r t o f a c i l i t a t e t h e i n t e l l i g e n t i d e n t i f i c a t i o no fM p r o t e i n c o m p o n e n t s,t h e b a n do fM p r o t e i n i n t h e s e r u m p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i sw a s f o u n do u t f i r s t,a n d t h e n c o m p r e h e n s i v em a t c h i n gp r o c e s s i n g b a s e d o n t h e i m a g e i n f o r m aＧt i o no f t h e５d i f f e r e n tc o m p o n e n t s f r o mt h e M p r o t e i n w a s p e r f o r m e d．I no r d e rt of a c i l i t a t et h e p a r a m e t e r t r a n s f e r,t h e e l e c t r o p h o r e t i c p e a kd a t aw e r es t a n d a r d i z e da n dc o r r e c t e dt oa v o i dt h e i n t e r f e r e n c eo fd i f f e r e n t f a c t o r s．R e s u l t s㊀I f t h e p e a k(e x c e p t a l b u m i n)o f t h e p a t i e n t u n d e r t e s tw a s l a r g e r t h a n t h e p e a ko f t h e c o r r eＧs p o n d i n g n o r m a l q u a l i t y c o n t r o l,a n d t h e r a t i oo f t h e p e a kh e i g h t t o t h e p e a kw i d t hw a s g r e a t e r t h a n４ʒ１,i t w a s i n d i c a t e t h a t t h eM p r o t e i nb a n dw a s f o u n d o u t．A c c o r d i n g t o t h e t h r e s h o l d r a n g e o f p e a kh e i g h t a n d p e a k w i d t ho f６g r o u p s o f o n eＧd i m e n s i o n a l d a t a o fM p r o t e i n a n d i mm u n o f i x a t i o n e l e c t r o p h o r e s i s o f h e a l t h y p e o p l e, i t c o u l d b e j u d g e dw h e t h e r t h e p e a k c h a r a c t e r i s t i c s o f a c o m p o n e n t i n s e r u mi mm u n o f i x a t i o n e l e c t r o p h o r e s i s o f p a t i e n t sw e r em e a n i n g f u l,t h a t i f t h e y h a dM p r o t e i n．C o n c l u s i o n㊀T h e c o r r e c t i d e n t i f i c a t i o n r e s u l t s c a n b e p r oＧv i d e db y c o m p u t e r p r o g r a mm i n g t h r o u g ha u t o m a t i c a l l y i d e n t i f y i n g,c l a s s i f y i n g a n d c o m p r e h e n s i v e l y a n a l y z i n g t h e s e r u m p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i sm a p s．T h e r e i s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e c o m p a r e dw i t h t h e t r a d i t i o n a lm e t hＧo d．T h eb a s e f o r c l i n i c a l d i f f e r e n t i a l d i a g n o s i s c a na l s ob e p r o v i d e db y t h i sm e t h o d．K e y w o r d s:i n t e l l i g e n t;㊀M p r o t e i n;㊀t y p i n g;㊀i mm u n o f i x a t i o ne l e c t r o p h o r e s i s㊀㊀M蛋白分型种类多,诊断方法除流式细胞外[１Ｇ２],血清蛋白电泳及免疫学方法已成为确诊M蛋白血症作者简介:王仁浩,男,主管技师,主要从事临床免疫和生化方法学研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:１３６７１６９２７３９＠１３９．c o m.本文引用格式:王仁浩,谢婧,管仲斌,等．智能识别鉴定M蛋白分型[J]．国际检验医学杂志,２０２０,４１(２１):２６７６Ｇ２６７９．的重要手段[３Ｇ４],其中血清免疫固定电泳对多发性骨髓癌(MM)患者血清中的单克隆免疫球蛋白(I g)进行分型鉴定具有高特异性和高灵敏性[５].虽然免疫固定电泳图谱简单,但在目前临床医学检验中对M蛋白的分型㊁判断㊁识别均是通过人工肉眼观察,易产生主观判断误差及漏判.本文釆用计算机智能鉴定免疫固定电泳M蛋白成分主要的思考方法是先找到M 蛋白带,再根据其他５个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.根据健康人的免疫固定电泳６组的一维数据的峰高与峰宽的阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即患有M 蛋白血症.最后,鉴别出不同类型的M蛋白,并给出结果.这样大大提高了M蛋白血症的筛查效率,减少了人为误差,为临床诊治和预后提供了科学依据.１㊀资料与方法１．１㊀一般资料㊀标本采集:１５例免疫固定电泳(书)示范图片[６],３５例M蛋白血症标本中包括２０例不同类型M蛋白血症患者和１５例健康人.标本由上海交通大学附属第一人民医院实验室提供.１．２㊀仪器与试剂㊀(１)试剂:美国H e l e n a公司提供,试剂批号:３４１５和３４１６和３４１７;(２)仪器设备:全自动快速电泳分析仪由美国H e l e n a公司提供,为S P I F E３０００型或S P I F E４０００型;(３)参数设置和操作步骤:详见R E P电泳仪操作规程;(４)扫描仪:C a n o n K EW３６８２３.１．３㊀方法１．３．１㊀免疫固定电泳测定㊀方法学原理:免疫固定电泳将血清或其他标本在琼脂(醋酸纤维素)平板上做区带电泳,然后在其上加入已知相应单价抗血清,当抗体与其区带中的单克隆I g结合后,便形成抗原抗体复合物沉淀(固定)下来.通过漂洗和染色,呈现浓而狭窄的着色区带,即可判断单克隆I g的轻链和重链类型.一般免疫固定电泳鉴定M蛋白成分主要由６个组分组成:(１)蛋白电泳;(２)I g G;(３)I g A;(４) I g M;(５)免疫球蛋白κ链;(６)免疫球蛋白λ链.第１组分为总的血清蛋白成分,第２~４组分为 重链 (其实免疫球蛋白是由２条重链和２条轻链组成),第５~６组分为轻链,共由６个组分的电泳带组成.健康人免疫固定电泳中的蛋白电泳只出现清蛋白等５种蛋白成分,不出现M蛋白成分区带,且I g G㊁I g A㊁I g M 及κ链和λ链电泳带颜色较浅,扫描后一般峰宽大于峰高.采用不同的颜色把３幅峰形电泳图合并为一张电泳图,便于直观显示给医生,为诊断疾病提供合理的依据.１．３．２㊀设计思路㊀首先,把６幅图像经过扫描转换成数据信息.其次,将二维数据转换成一维数据,为了便于智能化鉴定M蛋白成分,采用不同的颜色把６幅电泳图数据信息绘制成一张电泳图,先在其中血清蛋白电泳中找到M蛋白带,再根据其他５个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.为了便于参数传递,根据健康人的免疫固定电泳６组的一维数据的峰高与峰宽阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即是否患有M蛋白血症.最后鉴别出不同类型的M蛋白,并给出结果.免疫固定电泳智能化鉴定M蛋白成分的电泳流程见图１.智能化鉴定免疫固定电泳M蛋白成分电泳特点,(１)正常:若蛋白电泳没有找到M蛋白带,而且重链和轻链峰值特征全部无意义输出正常;(２)正常?建议复做:仅仅蛋白电泳峰值有意义其余峰值无意义输出 正常?建议复做 ;(３)游离κ㊁λ型轻链病:若蛋白电泳出现M蛋白,重链峰值特征无意义且κ和λ型轻链同时有特征性意义时输出游离κ㊁λ型轻链病;(４)游离κ型合并κ型I g A单克隆免疫球蛋白病:当κ或λ有２个有意义峰值a和b时,若I g A有一个有意义的峰值c,a与c横坐标相同,b与c坐标不同,则输出游离κ型合并κ型I g A单克隆免疫球蛋白病;(５)游离κ型轻链病:若κ或λ有特征意义峰值,并且重链峰值全部无特征意义,则输出 游离κ型轻链病 ;(６)κ型I g A单克隆免疫球蛋白病:若蛋白电泳出现M蛋白带,κ或λ峰值有价值,同时存在有价值的I g A或I g M 或I g G,并且前一组峰值横坐标与后一组峰值横坐标相符,则输出κ型I g A单克隆免疫球蛋白病;(７)κ型I g A单克隆免疫球蛋白病(?):若蛋白电泳出现M蛋白带,κ或λ有价值峰值,同时存在有价值的I g A或I g M或I g G,但前一组峰值横坐标与后一组峰值横坐标不相符,则输出κ型I g A单克隆免疫球蛋白病(?); (８)多克隆病:κ或λ有价值,同时I g A或I g M或I g G 为有价值宽峰(波高＞１００同时波宽＞波高),其中峰值 有意义 指峰高大于峰宽４ʒ１.重链指I g G㊁I g A㊁I g M,轻链指κ型㊁λ型.１．３．３㊀实验过程㊀(１)利用按键精灵电脑软件把５０幅免疫固定电泳图片按图中不同深浅的蓝色条带转化为数据信息,再将二维数据转化为一维数据.根据M蛋白与蛋白电泳对应的位置㊁区带深浅㊁宽窄的不同即峰值数据的位置和大小及左右峰谷的长度,确立峰高度与峰宽度的比例范围,血清M蛋白在蛋白电泳中可在α２至γ区形成浓度高的区带,扫描图中可见基底较窄,高而尖锐的峰,在γ区蛋白峰高大于峰宽,在β区和α２区也是如此,以此参数来判断M蛋白的真伪,大大减少了肉眼判断的误差,见图２.７７６２国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０２０,V o l．４１,N o．２１１．４㊀统计学处理㊀采用S P S S １９．０统计软件进行数据分析处理.智能和传统两种方法鉴定M 蛋白成分的差异采用χ２检验进行比较,以P ＜０．０５为差异有统计学意义.图１㊀㊀智能化鉴定M蛋白带流程图㊀㊀注:基线与I gM 重合.图２㊀㊀免疫固定电泳λ型I gG 单克隆免疫球蛋白病２㊀结㊀㊀果２．１㊀把图片生成的数据用自编软件的程序转化为直观的一个峰值图谱,储存在E x c e l 文档中.２．２㊀按免疫固定电泳的区带位置染色的深浅和峰高与峰宽的比例关系,采用计算机语言编程,智能化鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分,最后鉴别出不同类型的M 蛋白,并做出结果.２．２．１㊀采用免疫固定电泳法用S P I F E ３０００或４０００型全自动电泳仪获得血清标本的６张凝胶电泳图.２．２．２㊀扫描６张电泳图片,输入计算机.２．２．３㊀用按键精灵软件,将６张电泳图片扫描转换成一维数据储存在E x c e l 文档里.２．２．４㊀用自编软件打开步骤C 获得的E x c e l 文档数据,软件可以从中获得免疫固定电泳中蛋白电泳(D Y )㊁I g G ㊁I g A ㊁I gM ㊁κ型㊁λ型数据.获得各条线的参数,包括:峰值坐标㊁左波谷坐标㊁右波谷坐标㊁波宽是否大于波高峰值㊁各线峰值;然后根据患者蛋白电泳中ɑ至λ区域的峰值与标准峰值(健康人)同区域的数据比较大小.如果患者输出的峰值比标准峰值大,则这条线的峰还要进一步判断是否有价值,也就是根据左波谷坐标至右波谷坐标的峰宽是否大于峰高,如果峰高大于峰宽,判断为有价值(含M 蛋白带),然后进一步按流程鉴定为哪一类型的M 蛋白.２．２．５㊀输出鉴别结果㊀根据判断M 蛋白带的理论依据寻找属于哪一类单克隆免疫球蛋白病,并打印报告,包括κ和λ链的比值.κ和λ链的比值在采用传统免疫固定电泳方法肉眼判断时是无法辨别的,因为肉眼不能判断颜色的深浅确切值,而软件采取的是按键精灵的捕色软件,它可以测出κ和λ链的颜色深浅具体值,然而κ和λ链的比值在诊断多发性骨髓瘤是很有价值的.这个结果和免疫散射比浊法测定κ和λ链的比值具有良好相关性(n ＝３８,r ＝０．８８９),经统计κ和λ链比值,健康人参考值为１．１６ʃ０．２(n ＝３２),所有M 蛋白血症患者中κ型患者κ和λ的比值明显大于１．３６,而λ型患者κ和λ的比值明显小于０．９６,这个软件可以同时测定κ和λ链,减少了患者再次测定κ和λ链所带来的麻烦.本文提供一种利用鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分的系统,该系统包括以下设备:A 步骤的设备为S P I F E ３０００或４０００型全自动电泳仪,获得血清标本的６张凝胶电泳图;B 步骤的设备为扫描仪:C a n o n K E W ３６８２３,扫描６张电泳图片,输入计算机;C 步骤的设备为计算机用按键精灵软件,将６张电泳图片扫描转换成一维数据储存在E x c e l 文档中;D 步骤的设备为自编软件安装计算机,它可以直接打开步骤C 获得的E x c e l 文档数据,然后进一步按流程鉴定为哪一种类型的M 蛋白并输出鉴别结果及图像.见图３~５.图３㊀㊀κ型I gM 单克隆免疫球蛋白病２．３㊀实验的临床应用㊀由作者和临床免疫专家[６]选８７６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d ,N o v e m b e r ２０２０,V o l ．４１,N o ．２１出５０幅免疫固定电泳图像包含血清蛋白电泳图像.选择原则是既满足于常规检查的M 蛋白类型,又包括很少见的类型和书图谱上的特例图像,经扫描成图片后,用按键精灵电脑软件把图片转化为数据.采用计算机编程智能化鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分,通过对５０幅免疫固定电泳图像和血清蛋白电泳图像的数据分析,评价自动扫描㊁鉴定的整体性能.图４㊀㊀游离λ型单克隆免疫球蛋白病图５㊀㊀κ、λ型I gG 单克隆免疫球蛋白病２．３．１㊀实验结果分析㊀采用联想电脑M ７１５０,C P U ２５６M 内存,完成资料标本５０幅扫描㊁分析及鉴定,M 蛋白区带３５,正确识别３３(９４．３％),其中M 蛋白I g G 区带κ型１０,正确识别１０(１００％),λ型５,正确识别５(１００％),κ㊁λ混合型２,正确识别２(１００％);M 蛋白I gA 区带κ型３,正确识别３(１００％),λ型＋游离λ型１,正确识别１(１００％);M 蛋白I gM 区带κ型３,正确识别３(１００％),λ型１,正确识别１(１００％),κ㊁λ混合型１,正确识别１(１００％),混合型λ型I g M ＋κ型I g G１,正确识别１(１００％),游离κ区带１,正确识别１(１００％),游离λ区带７,正确识别７(１００％).正常人区带１５,正确识别１５(１００％).２．３．２㊀性能验证㊀智能和传统两种方法鉴定M 蛋白成分差异无统计学意义(P ＞０．０５).智能化鉴定M 蛋白成分方法的正确度为９６．０％,灵敏度为９４．３％,特异度为１００．０％,假阴性率(漏诊率)为４．０％,假阳性率(误诊率)为０．０％,阴性似然比为６,K a p p a 值为０．９０８,阳性预测值为１００．０％,阴性预测值为８８．０％.３㊀讨㊀㊀论㊀㊀M 蛋白血症是一种浆细胞异常增生的恶性肿瘤,浸润骨髓和软组织产生M 球蛋白及多肽,引起骨骼破坏㊁肾脏病变和贫血,但该病起病缓慢,无症状期长短不定,短至几个月长达十余年,由于症状多样化及个体差异,出现的临床表现繁多和复杂,初发病常常不被发现而多被误诊.亚州人MM 发病率为０．５/１０００００~１．０/１０００００[７],７０岁以上的老年人发生率为３％,通过骨髓涂片㊁组织活检㊁X 线片来诊断外,其他血清蛋白电泳及免疫学方法已成为确诊MM 的重要手段,其中血清免疫固定电泳是对MM 患者血清中的单克隆免疫球蛋白进行分型鉴定,具有高特异度和高灵敏度,也可以识别M 蛋白双克隆[８].目前缺乏标准化鉴别分型方法,临床医学检验中对M 蛋白的分型㊁判断㊁识别都是人工肉眼观察,易产生主观判断误差及漏判.应用计算机模式识别技术,能做到与医学检验专家一样,智能快速㊁准确地识别细胞[９]和D N A 凝胶电泳分子量测量[１０],但未见智能鉴定M 蛋白的成分.本系统应用电脑扫描模式识别技术,采用可对血清蛋白电泳和免疫固定电泳图谱实现自动识别㊁分类㊁综合分析给出正确鉴别结果,该方法可以同时计算出κ和λ链,因为肉眼不能判断颜色的确切深浅值,然而κ和λ链的比值诊断MM 是很有价值的[１１Ｇ１２].这个软件可以同时测定κ和λ链比值,减少了患者再次测定κ和λ链所带来的麻烦.通过对５０幅免疫固定电泳图像的数据分析,虽然合并游离轻链判断有漏检,但评价自动扫描整体性能的鉴定及临床应用准确度达９６％,K a p p a 值达０．９０８,与传统方法比较差异无统计学意义(P ＞０．０５).４㊀结㊀㊀论㊀㊀计算机能做到与医学检验专家一样,智能快速㊁准确地识别M 蛋白的成分,并鉴定出是哪一种类型的M 蛋白病,提高了检查效率,减少了人为误差,给临床实验室带来了极大的方便,也为临床医生鉴別诊治和预后提供了科学依据.参考文献[１]程薇,李玉龙,黄洲风,等．血清免疫固定电泳分型结合流式细胞术免疫表型分析在诊断多发性骨髓瘤中的作用[J ]．广东医学,２０１８,３９(２):２６５Ｇ２６７．(下转第２６８８页)９７６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d ,N o v e m b e r ２０２０,V o l ．４１,N o ．２１[１８]韩冰,吴翠萍,赵芯,等．数字P C R和荧光定量P C R诊断急性期布鲁菌病的灵敏度比较初步研究[J]．传染病信息,２０１９,３２(４):３１２Ｇ３１６．[１９]宋能,谭杨,罗凤玲,等．微滴数字P C R定量检测全血样品中结核分枝杆菌特异C F P１０基因[J]．中国生化药物杂志,２０１６,３６(２):１０Ｇ１５．[２０]徐万洲,李娟,何晓云,等．血清２０１９新型冠状病毒I g M 和I g G抗体联合检测在新型冠状病毒感染中的诊断价值[J]．中华检验医学杂志,２０２０,４３(３):２３０Ｇ２３３．[２１]MU D,Y A NL,T A N G H,e t a l．As e n s i t i v e a n da c c u r a t e q u a n t i f i c a t i o nm e t h o d f o r t h ed e t e c t i o no fh e p a t i t i sBv iＧr u s c o v a l e n t l y c l o s e d c i r c u l a rD N Ab y t h e a p p l i c a t i o n o f ad r o p le td i g i t a l p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n a m p l if i c a t i o n s y s t e m[J]．B i o t e c h n o l L e t t,２０１５,３７(１０):２０６３Ｇ２０７３．[２２]A B A C H I N E,C O N V E R SS,F A L Q U ES,e t a l．C o m p a r iＧs o n o fr e v e r s eＧt r a n s c r i p t a s e q P C R a n d d r o p l e t d ig i t a l P C Rf o rth e q u a n ti f i c a t i o no fd e n g u ev i r u sn u c l e i ca c i d [J]．B i o l o g i c a l s,２０１８,５２(１):４９Ｇ５４．[２３]李晓燕,朱丛中,郭丽茹,等．嵌合人偏肺病毒(h M P V)表位的重组流感病毒免疫保护效果[J]．中华微生物学和免疫学杂志,２０２０,４０(１):１１Ｇ１８．[２４]W E E R A K O O N K G,G O R D O NC A,W I L L I AM SG M, e t a l．D r o p l e td i g i t a lP C Rd i a g n o s i so fh u m a ns c h i s t o s oＧm i a s i s:p a r a s i t e c e l lＧf r e eD N Ad e t e c t i o n i nd i v e r s e c l i n i c a l s a m p l e s[J]．J I n f e c tD i s,２０１７,２１６(１２):１６１１Ｇ１６２２．[２５]J E A N N O TE,B E C E T T EV,C AM P I T E L L IM,e t a l．C i rＧc u l a t i n g h u m a n p a p i l l o m a v i r u sD N Ad e t e c t e du s i n g d r o pＧl e td i g i t a lP C Ri nt h es e r u m o f p a t i e n t sd i a g n o s e d w i t h e a r l y s t a g e h u m a n p a p i l l o m a v i r u sＧa s s o c i a t e d i n v a s i v e c a rＧc i n o m a[J]．JP a t h o l C l i nR e s,２０１６,２(４):２０１Ｇ２０９[２６]U S H I O R,Y AMAMO T O M,N A K A S H I MA K,e ta l．D i g i t a l P C Ra s s a y d e t e c t i o n o f c i r c u l a t i n g m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i sD N A i n p u l m o n a r y t u b e r c u l o s i s p a t i e n t p l a sＧm a[J]．T u b e r c u l o s i s,２０１６,９９:４７Ｇ５３．[２７]席晓霞．初生婴儿肠道菌群与母体各部位菌群相关性研究[D]．呼和浩特:内蒙古农业大学,２０１７．[２８]郑璐．微液滴数字P C R技术和非分子诊断方法对非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病的临床应用价值研究[D]．北京:北京协和医学院,２０１９．[２９]WU XL,L I N H,C H E NSJ,e t a l．D e v e l o p m e n t a n da pＧp l i c a t i o no far e v e r s et r a n s c r i p t a s ed r o p l e td i g i t a lP C R(R TＧd d P C R)f o r s e n s i t i v e a n d r a p i d d e t e c t i o n o f J a p a n e s e e n c e p h a l i t i s v i r u s[J]．JV i r o lM e t h o d s,２０１７,２４８(１):１６６Ｇ１７１．[３０]P H O L W A T S,S T R O U PS,F O O N G L A D D AS,e t a l．D i g i t a l P C Rt o d e t e c t a n d q u a n t i f y h e t e r o r e s i s t a n c e i nd r u g r e s i s t a n t m y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s[J]．P L o S O n e,２０１７,８(２): e５７２３８．[３１]WHA L E A S,B U S H E L L C A,G R A N T P R,e t a l．D eＧt e c t i o no f r a r ed r u g r e s i s t a n c e m u t a t i o n sb y d i g i t a lP C R i nah u m a ni n f l u e n z aav i r u s m o d e ls y s t e m a n dc l i n i c a l s a m p l e s[J]．JC l i n M i c r o b i o l,２０１６,５４(２):３９２Ｇ４００．[３２]D O B N I KD,D E M S A RT,HU B E R I,e t a l．I n t e rＧl a b o r a t oＧr y a n a l y s i s o f s e l e c t e d g e n e t i c a l l y m o d i f i e d p l a n t r e f e r e n c e m a t e r i a l s w i t h d i g i t a l P C R[J]．A n a l l B i o a n a l C h e m,２０１８,４１０(１):２１１Ｇ２２１．[３３]K L I N E M C,HO L D E N M J,S C O T T C,e t a l．S t a n d a r d r e f e r e n c em a t e r i a l２３６６f o rm e a s u r e m e n t o f h u m a nc y t oＧm e g a l o v i r u sD N A[J]．J M o lD i a g n,２０１３,１５(２):１７７Ｇ１８５．(收稿日期:２０２０Ｇ０２Ｇ０２㊀修回日期:２０２０Ｇ０６Ｇ１０)(上接第２６７９页)[２]唐洁,梁效功,薛丽,等．多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤早期诊断中的应用价值[J]．中国卫生检验杂志,２０１６,２６(２):２３６Ｇ２３９．[３]郭晓聪,徐晓娅,刘伟平．血清蛋白电泳和免疫固定电泳对多发性骨髓瘤的诊断价值[J]．实用医药杂志,２０１９,３６(５):４２７Ｇ４２９．[４]毕德成．免疫球蛋白定量和免疫固定电泳对多发性骨髓瘤的临床诊断价值研究[J]．中外女性健康研究,２０１７,２５(１２):５５Ｇ５６．[５]陈云峰,葛亮,沈建江．免疫固定电泳及免疫球蛋白定量在多发性骨髓瘤诊断和分型中的应用[J]．中国实验诊断学,２０１６,２０(１１):８８１Ｇ８８３．[６]宋鉴清．电泳技术临床应用 电泳图谱[M]．沈阳:辽宁科学技术出版社,２００６:８５Ｇ９１．[７]L E EJH,Y O O NSS,S UH C,e t a l．M u l t i p l em y e l o m a i n k o r e a:p a s t,p r e s e n t,a n d f u t u r e p e r s p e c t i v e s．e x p e r i e n c eo f t h ek o r e a nm u l t i p l em y e l o m aw o r k i n gp a r t y[J]．I n t JH eＧm a t o l,２０１０,９２(１):５２Ｇ５７．[８]杨强,侯健,陈文明,等．双克隆免疫球蛋白多发性骨髓瘤六例报告并文献复习[J]．中华血液学杂志,２０１６,３７(７):６１４Ｇ６１６．[９]MA N N A A C,N A N N I C L,L UM I N I D A,e t a l．A r t i f i c i a l i n t e l l i g e n c e t e c h n i q u e sf o re m b r y oa n do o c y t ec l a s s i f i c aＧt i o n[J]．R e p r o dB i o m e dO n l i n e,２０１３,２６(１):４２Ｇ４９．[１０]T A Y L O RD,P OW E R SD．T e a c h i n g a r t i f i c i a l i n t e l l i g e n c e t o r e a de l e c t r o p h e r o g r a m s[J]．F o r e n s i cS c iL n tG e n e t,２０１６,２５:１０Ｇ１８．[１１]唐江涛,李立新,冯伟华,等．免疫固定电泳和血轻链比值诊断以肾脏损伤为首发症状的多发性骨髓瘤的价值[J]．四川大学学报(医学版),２０１６,４７(４):５５１Ｇ５５５．[１２]吴颖涛,邹琳,黄前川,等．血清游离轻链及其比值在轻链型多发性骨髓瘤中的应用价值[J]．华南国防医学杂志,２０１９,３３(７):４５８Ｇ４６１．(收稿日期:２０２０Ｇ０２Ｇ１１㊀修回日期:２０２０Ｇ０６Ｇ１７)８８６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０２０,V o l．４１,N o．２１。
免疫球蛋白M(IgM)测定标准操作程序SOP文件
mg/dl
g/l
mg/dl
g/l
40-230
0.4-2.3
男性:
50-320
女性:
60-370
0.5-3.2
0.6-3.7
8线性范围
本法线性范围为30-490mg/dl，不准确度允许范围 ±3SD，不精密度CV=2.9%，灵敏度为5mg/dl。
9注意事项
9.1血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
10.4乳糜：甘油三酯的浓度在1200mg/dl以下不会受到明显干扰。
10.5 IgM的浓度低于10000mg/dl时不会有HOOK效应。
10.6 IgA,IgG,IgM之间没有交叉反应。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-45
免疫球蛋白M（IgM）测定
版序：ABCD
页码：第3页，共3页
9.2换算公式：mg/dl×0.01＝g/l
9.3仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
10.2黄疸：黄胆指数达到63时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为63mg/dl）
10.3溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约1000mg/dl）
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-45
免疫球蛋白M（IgM）测定
版序：ABCD
页码：第1页，共3页
1测定方法
免疫比浊法。
2测定原理
抗IgM抗体与标本中的IgM抗原发生反应形成抗原-抗体复合物，为颗粒状，浊度变化与IgM的量成比例，因此，检测浊度可测得IgM的含量。
M蛋白的鉴别诊断
MM皮肤表现－坏疽性脓皮病
F61, 发现M蛋白5年，皮肤破溃 2.5年
合并高血压，糖尿病 2009年:IgAλ+, IgA 20.1g/L 2011年：皮肤破溃，活检提示坏
疽性脓皮病 BM：10.5%为成熟浆细胞，偶见
双核浆细胞。 无CRAB M蛋白稳定无治疗 应用Thal＋Dex后皮损好转
– 慢性病贫血 – 造血空间抑制 – 肾性贫血
MM继发淀粉样变
约20%发生 不影响生存 心脏淀粉样变，NT-BNP对疾病
预后有影响
MM合并淀粉样变－病例1
M45, 活动后气喘1年余，腹痛伴黑便11月，呕血1天 IgGλ型，BM 5%异常浆细胞 受累器官
✓ 骨髓：刚果红阳性 ✓ 反复消化道出血，FX 6.9% ✓ 心衰：LVEF 70%,室壁厚度15mm ✓ 肝大，肝酶升高
皮肤改变－皮肤松弛症
F32, IgGk型 反复水肿8年，皮肤松弛6年，喘
憋1年
面容苍老，皮肤松弛，吸气三凹 征
BM: 14~26%骨髓瘤细胞 FISH：14q32(IGH)易位率71.5% 肾病综合征：肾穿刺刚果红(-) 胸部HRCT:肺气肿，闭塞性细支
气管炎
无骨质破坏
Thal+Dex+克拉霉素
Normal bone remodeling
MM骨病MyΒιβλιοθήκη lomaCell1
Tumour
4
Derived
Factors
Tumour
2
3 Growth
Factors
Osteoclast
• 表现：
– 骨痛 – 病理性骨折 – 脊柱压缩
• 机制：
– 破骨细胞活性增加 – 成骨细胞活性降低
第一部分免疫球蛋白测定一、IgG、IgA、IgM的测定1、单向
三、M蛋白测定：——免疫电泳
M蛋白： 浆细胞或B淋巴细胞单克隆增殖产生的结构均 一的多无活性的单克隆免疫球蛋白。 方法步骤：血清蛋白电泳加抗体于琼脂槽内扩 散、沉淀 结果判断：在α2-γ区附近形成致密弓形沉淀弧 临床意义：主要见于多发性骨髓瘤(multiple myeloma)，也可见于巨球蛋白血症 mactoglobulinemia)、恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)和重链病
2、变应原特异性IgE检测：放射变应原吸附 试验（radioallergosorbent test,RAST) 步骤：变应原交联载体 加待检血清或正常 对照血清加 125I-抗人IgE 洗去未结合 125I-抗人IgE γ计数器测放射值 结果判定：以大于正常人3.5倍为阳性 临床意义： (1) 参见血清总IgE测定 (2) 确定变应原
散射比浊法
参考值：IgG：12.87±1.35g/L IgA：2.53±0.34g/L IgM：1.08±0.24g/L 临床意义： 1、低Ig血症： 先天性 — 体液免疫缺陷、联合免疫缺陷病 获得性 — 淋巴肉瘤、肾病综合征等 2、高Ig血症： 慢性感染、自身免疫病（类风湿性关节炎等）
二、IgE测定 1、血清总IgE测定：－ELISA法 方法：抗IgE包被反应板 IgE标准品或待 测血清 酶标记抗IgE 底物显色 测吸光度 做标准曲线求待测IgE含 量 参考值：男：631±128 IU/ml 女：337±60 IU/ml 临床意义： 含量增高：特应性皮肤病、枯草热、哮喘、 过敏性休克等
其实，世上最温暖的语言，“ 不是我爱你，而是在一起。” 所以懂得才是最美的相遇！只有彼此以诚相待，彼此尊重， 相互包容，相互懂得，才能走的更远。 相遇是缘，相守是爱。缘是多么的妙不可言，而懂得又是多么的难能可贵。否则就会错过一时，错过一世！ 择一人深爱，陪一人到老。一路相扶相持，一路心手相牵，一路笑对风雨。在平凡的世界，不求爱的轰轰烈烈；不求誓 言多么美丽；唯愿简单的相处，真心地付出，平淡地相守，才不负最美的人生；不负善良的自己。 人海茫茫，不求人人都能刻骨铭心，但求对人对己问心无愧，无怨无悔足矣。大千世界，与万千人中遇见，只是相识的 开始，只有彼此真心付出，以心交心，以情换情，相知相惜，才能相伴美好的一生，一路同行。 然而，生活不仅是诗和远方，更要面对现实。如果曾经的拥有，不能天长地久，那么就要学会华丽地转身，学会忘记。 忘记该忘记的人，忘记该忘记的事儿，忘记苦乐年华的悲喜交集。 人有悲欢离合，月有阴晴圆缺。对于离开的人，不必折磨自己脆弱的生命，虚度了美好的朝夕；不必让心灵痛苦不堪， 弄丢了快乐的自己。擦汗眼泪，告诉自己，日子还得继续，谁都不是谁的唯一，相信最美的风景一直在路上。 人生，就是一场修行。你路过我，我忘记你；你有情，他无意。谁都希望在正确的时间遇见对的人，然而事与愿违时， 你越渴望的东西，也许越是无情无义地弃你而去。所以美好的愿望，就会像肥皂泡一样破灭，只能在错误的时间遇到错的人。 岁月匆匆像一阵风，有多少故事留下感动。愿曾经的相遇，无论是锦上添花，还是追悔莫及；无论是青涩年华的懵懂赏 识，还是成长岁月无法躲避的经历……愿曾经的过往，依然如花芬芳四溢，永远无悔岁月赐予的美好相遇。 其实，人生之路的每一段相遇，都是一笔财富，尤其亲情、友情和爱情。在漫长的旅途上，他们都会丰富你的生命，使 你的生命更充实，更真实；丰盈你的内心，使你的内心更慈悲，更善良。所以生活的美好，缘于一颗善良的心，愿我们都能 善待自己和他人。 一路走来，愿相亲相爱的人，相濡以沫，同甘共苦，百年好合。愿有情有意的人，不离不弃，相惜相守，共度人生的每 一个朝夕……直到老得哪也去不了，依然是彼此手心里的宝，感恩一路有你！
M蛋白的鉴定及实验分析
M蛋白的鉴定及实验分析【关键词】 M蛋白；免疫球蛋白；分析Identify and Experimental Analysis of M ProteinKey words:M protein; Immune globin; AnalysisM蛋白(骨髓瘤蛋白)细胞大量增殖产生的具有相同氨基酸顺序和蛋白质结构的免疫球蛋白(Ig)分子或其片段,临床上常见于多发性骨髓瘤(MM)、原发性巨球蛋白血症、重链病、原发性淀粉样变性、意义未明的单克隆丙种球蛋白血症等淋巴细胞或浆细胞克隆增殖性疾病［1］。
M蛋白是单克隆免疫球蛋白的缩写,也称副蛋白、骨髓瘤蛋白、M成份。
对此病只有采取较好实验室方式与正确实验分析相结合，才能为临床提供靠得住依据。
1 血清区带电泳技术是临床实验室对蛋白质进行的一种剖析技术。
它能够对血清或其他体液中异样蛋白质进行挑选。
它是以区带电泳为基础在一种适合的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。
血清蛋白质在给定的pH条件下要紧依照其所带电荷数将其分离成各类片段。
正常人血清的区带电泳结果和扫描图像从左至右的5个区带依次为白蛋白及α一、α二、β和γ球蛋白区。
有时在慢电泳时β球蛋白可分为β1球蛋白和β2球蛋白。
白蛋白区的成份包括白蛋白、前白蛋白和部份α1脂蛋白;α1区包括α1抗胰酶蛋白、α1脂蛋白、Ｇc球蛋白;α2区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、α2巨球蛋白等;β1区包括转铁蛋白、补体Ｃ3ｃ、IgＡ、血结素等;β2区包括Ｃ3ｂ、IgＡ;γ区包括IgＧ、IgＭ、CRP等。
多克隆免疫球蛋白增殖性疾病各类Ig均增加,相应的其他区带会减少,多见于肝硬化、慢性肝炎和系统性红斑狼疮等,由于β和γ区大量增殖,致使两区之间的间隙消失,成为γβ桥,亦称γβ联,扫描时β消失,显现一高而宽的γ峰。
免疫缺点症时会显现无γ峰或低β峰。
Ｍ蛋白血症特点是区带窄而浓,扫描峰高而尖,基底部窄,在γ区高与宽的比例≥2,β区那么≥1(正常时小于此比例),其他区带明显减少。
M蛋白参考值
M蛋白参考值的意义与检验方法M蛋白是指人类机体内一种名为Myeloma Protein的蛋白质，通常是由浆细胞癌引起的一种异常免疫球蛋白。
测定M蛋白的值，可以在很大程度上帮助医生进行诊断和治疗方案的制定。
下面，我们将从的意义及检验方法两个方面展开阐述。
一、的意义M蛋白的参考值是适用于临床医学中对于人类机体内M蛋白浓度的正常范围。
一般来说，的测定主要用于白血病、淋巴瘤等血液肿瘤的诊断，以及多发性骨髓瘤和其他类似疾病的监测。
在很多情况下，M蛋白对于诊断肿瘤和血液疾病的种类，以及判断疾病程度等方面起着关键作用。
对于白血病和淋巴瘤等血液肿瘤的诊断来说，M蛋白的检测可以帮助医生进行初步筛查，具有早期诊断的重要作用，同时还可以辅助医生制定更精准的治疗方案。
另外，对于多发性骨髓瘤等疾病的患者来说，M蛋白的参考值还可以帮助医生进行疾病的监测。
这种疾病通常会导致机体内M蛋白浓度超过常规的范围，因此通过长期的M蛋白检测，可以帮助医生了解患者的病情，及时制定治疗方案。
二、M蛋白的检验方法常规的M蛋白测定分为三种常见的方法，分别是免疫电泳、Immuno Turbidimetric Assay和Fluorescence In SituHybridization(FISH)技术。
1、免疫电泳免疫电泳指利用电场将蛋白质分离为不同的条带，从而测定M蛋白的浓度。
这种方法具有灵敏度和准确性高，分析结果精确等优点，但是需要复杂的实验操作和高端仪器支持，因此在日常检测过程中可以采用其他更为简便的方法。
2、Immuno Turbidimetric AssayImmuno Turbidimetric Assay是一种常用的M蛋白检测方法。
它可以在短时间内完成样本的分析，实验操作较简单，在实际检测过程中普及率较高。
该方法主要通过免疫反应将M蛋白识别并进行测定。
虽然灵敏度不及免疫电泳，但已经能够满足大多数临床检测的要求。
3、FISH技术FISH技术是指采用荧光染色技术对测定的细胞进行染色，并通过显微镜进行显示。
M蛋白实验室检测及临床应用
血清免疫固定电泳
单克隆游离轻链 尿免疫固定电泳 血清游离轻链
初 筛
血清蛋白电泳
血清蛋白电泳原理
毛细管血清蛋白区带电泳
炎症 肝病 肾病 浆细胞病
毛细管血清蛋白电泳图谱
M蛋白的筛查
• 血清蛋白电泳是筛查M蛋白的最佳方法
在区出现异常峰 （M蛋白？）
正常血清
单克隆 Ig
高浓度M蛋白
微量的M蛋白
M蛋白出现在β1区
M蛋白出现在β2区
IgA*
多个M蛋白
中华检验医学杂志, 2013, 36:1150-1153
单克隆球蛋白血症发生率
• 22193 例标本筛查 • 354 例血清蛋白电泳异常（1.6%） • 206 例免疫固定电泳阳性（0.92%）
研究结果
序号
renal significance, MGRS ）* • 华氏巨球蛋白血症（Waldenstrom Macroglobulinemia, WM/LPL） • 原发性淀粉样变性（Primary Amyloidosis, pAL） • 轻链沉积病（Light Chain Deposition Disease, LCDD） • 重链病（ Heavy Chain Disease, HCD ） • 部分B细胞淋巴瘤（CLL/SLL；DLBCL） • ……
Bone lesions
M蛋白-重要线索
M蛋白
骨髓克隆性浆细胞 /浆细胞瘤
M蛋白筛查是关键
有症状MM
√
≥ 10%
ROTI √
无症状MM (冒烟型,SMM)
√
10-60%
意义未明M蛋白病
MGUS
√
< 10%
在骨髓瘤,血清中m蛋白的诊断标准
骨髓瘤是一种恶性肿瘤，它源自骨髓中的浆细胞并引起异常的免疫球蛋白的产生。
血清中的m蛋白是骨髓瘤的一个重要诊断标志，其浓度和特征可以帮助医生确定骨髓瘤的诊断和治疗方案。
本文将对血清中m蛋白的诊断标准进行详细介绍，帮助读者更深入地了解骨髓瘤的诊断过程和标准，为临床实践提供参考。
1. 血清中m蛋白的作用血清中m蛋白，也称为单克隆免疫球蛋白，是由浆细胞恶性增殖造成的，它是一种异常的免疫球蛋白，通常无法起到免疫功能，但却会对机体造成危害。
在骨髓瘤的诊断中，血清中m蛋白的浓度和特征可以帮助医生确定病情的严重程度和治疗方案。
2. 血清中m蛋白的检测方法对于骨髓瘤患者，血清中m蛋白的检测是非常重要的。
常见的检测方法包括蛋白电泳、免疫固定电泳和免疫荧光法等。
通过这些方法，可以确定血清中m蛋白的类型和浓度，以及其与其他蛋白的比例，为骨髓瘤的诊断提供重要依据。
3. 血清中m蛋白的诊断标准在骨髓瘤的诊断中，血清中m蛋白的浓度和特征是非常重要的。
通常情况下，根据血清中m蛋白的特征，可以将骨髓瘤分为IgG型、IgA型、IgM型、轻链型和非分泌型等。
根据其浓度和变化趋势，可以帮助医生确定病情的严重程度和治疗方案。
一般来说，诊断骨髓瘤需要满足以下条件：a. 血清中m蛋白浓度持续增高，或存在明显的蛋白电泳异常带。
b. 骨髓穿刺或骨髓活检显示存在异常浆细胞增殖。
c. 存在骨骼破坏、高钙血症、肾功能不全等伴发症状。
4. 血清中m蛋白的治疗监测血清中m蛋白的浓度和特征可以作为骨髓瘤治疗效果的监测指标。
在治疗过程中，医生可以通过定期检测血清中m蛋白的浓度和特征，来评估患者的病情变化和治疗效果。
通常情况下，对于骨髓瘤的治疗监测，需要满足以下条件：a. 血清中m蛋白浓度和特征能够稳定在正常范围内。
b. 骨髓活检显示异常浆细胞数量明显减少或消失。
c. 患者的临床症状得到明显改善。
通过以上的介绍，我们可以看到血清中m蛋白在骨髓瘤的诊断和治疗过程中起到了非常重要的作用。
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M蛋白的检测与鉴定
一、M蛋白的基础知识
M蛋白是浆细胞或B 淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白，其氨基酸组成及排列顺序十分均一，空间构象、电泳特征也完全相同，本质为免疫球蛋白或其片段（轻链、重链等）。
由于它产生于单一克隆（monoclone），又常出现于多发性骨髓瘤（multiple myeloma）、巨球蛋白血症（macroglobulinemia）、恶性淋巴瘤（malignantlym phoma）病人的血或尿中，故称M 蛋白。
这些M 蛋白大多无抗体活性，所以又称为副蛋白（paraprotein）。
M 蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。
恶性M 蛋白血症多见于多发性骨髓瘤（包括轻链病）、巨球蛋白血症、重链病、7SIg M 病（Solomen －Konkel 病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病（C 端基因缺陷）等。
意义不明的M 蛋白血症（monoclonal gammopathyof undetermined significance ，M G US）又分为两种，一种是与其他恶性肿瘤（如恶性淋巴瘤）伴发者，另一种即所谓良性M 蛋白血症。
M 蛋白的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。
二、M蛋白的鉴定
1．多发性骨髓瘤与巨球蛋白血症时的M 蛋白检测和鉴定
（1）血清总蛋白定量。
90％的患者血清总蛋白含量升高（70％的患者＞100g／L），约10％的患者正常或甚至偏低（如轻链病时）。
（2）血清蛋白醋纤膜或琼脂糖电泳。
M 蛋白在电泳时出现典型的单株峰（亦称M 区带），特点是区带窄而浓，扫描时呈现尖高峰，在γ区高比宽≥2，在β区≥1。
此M 区带可因Ig的不同而出现在在γ～α2的任何区域。
M蛋白增殖的另一特点是其他各区
带明显减少，显示图像较简单。
有时有的患者血中M蛋白并不高，这是由突变细胞的Ig分泌能力决定的。
这种病人的血清在电泳时M峰可不明显，易被其他蛋白掩盖，需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳来检测。
（3）血清Ig定量。
一般M蛋白所属Ig含量均显著增高，其他类Ig则正常或显著减低。
（4）免疫电泳。
①正常人血清免疫电泳结果：可分辨出20 多种蛋白成分。
在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。
通常Ig组分靠阴极端，最靠近加样孔者为Ig M，依次为IgA、IgG，三者成平滑的连续沉淀线。
②多发骨髓瘤：多发性骨髓瘤分IgG、IgA、Ig M、IgI）和IgE5 种，IgG 和IgA 又分亚类，所有Ig的轻链又分两个型。
因此，免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异，从慢γ～β2区皆可出现。
IgG 1 多出现在慢γ区，IgG 4 在β～α2区。
M 蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧。
由于此种病人血清中Ig 含量甚高，免疫扩散时可出现抗原绝对过剩而不出现沉淀线，此时需稀释血清重做，往往可获得满意结果。
③巨球蛋白血症：由于IgM 分子大量增殖所致。
在免疫电泳时，常常出现以下特征：一是沉淀线明显变形。
正常情况下，IgM 形成短小沉淀线，不易看到变形。
当IgM大量出现时，则会使整个IgM沉淀线变形。
二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。
三是电泳时IgM组分无迁移，这多是Ig M 分子聚合，电泳不移动所致。
（5）尿本－周蛋白检测。
①定性检测：用热沉淀法和磺基水杨酸法。
②免疫电泳法：用待检尿浓缩后进行免疫电泳，大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者，仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。
本法60％～80％的骨髓瘤病人和几乎全部轻链病病人可检出尿本周蛋白。
③轻链白蛋白－戊二醛交联免疫电泳法：多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性，正常人阴性。
本法尿本周蛋白检出率为100％，假阳性4％，尿中含有200μg／ml 时即可出现阳性结果。
2．重链病时M 蛋白检测与鉴定
与多发性骨髓瘤相同，免疫电泳时由于重链分子较Ig 分子小，故迁移率快，电泳位置较靠阳极侧（β～α）。
但重链病一般需选择免疫电泳证实。
3．7SIg M 病时M 蛋白的检测与鉴定
一般Ig M 为五聚体，沉降系数为19S ，而7S IgM患者的IgM为单体，沉降系数为7S 。
证明7S IgM 有两种方法：一种是在测定Ig M 总量后，将被测血清1～2 ml 过Sepharose 6B柱，再根据洗脱峰图用面积仪测出7S Ig M占总IgM的百分比，与Ig M总量换算即得7S IgM的绝对值。
另一方法即为植物血凝素（PHA）选择电泳。
此法原理是五聚体Ig M可与PHA 结合形成沉淀，而单体IgM不与PHA结合。
在琼脂胶中加入PHA，后进行电泳，五聚体IgM 被P H A 所阻留，而7S Ig M 继续向阳极泳动，并可与随后加至抗体槽中的Ig M 抗血清反应，形成单一沉淀弧。
4．半分子病时M 蛋白检测与鉴定
所谓半分子病（half－molecule）是指此种M 蛋白由一条重键和一条轻链组成，分子量是正常Ig 分子的1／2 或＜1／2（因半分子病肽链往往有部分缺失）。
至今报告过IgG 和IgA 的半分子病。
除上述检测方法外，尚须对“半分子”进行特殊鉴定。
方法有：
①免疫电泳法鉴定半分子M 蛋白的迁移率。
电泳时发现具有IgG 或IgA 的电泳特征而迁移率明显快于二者时（泳向正极可达α2 区），应注意有无本病的可能。
②十二烷基硫酸钠（SDS）－聚丙烯酰胺凝胶电泳，推算M 蛋白的分子量。
③超速离心分析，测定M 蛋白的沉淀系数。
④Fc抗原决定簇的确定。
用相应抗重链血清对比患者与正常人相应Ig 的区别。
5．测定免疫球蛋白轻链型筛选M 蛋白
正常人有五类免疫球蛋白，其轻链有两种型，即κ型或λ型。
对于每个Ig分子而言，其轻链只有一种，不是κ就是λ。
但对一个体的Ig 分子而言，则有κ和λ两种链型，且其比例基本上是固定的，即κ／λ约为2∶1 。
任何原因引起的Ig 分子多克隆增殖，如慢性肝病，系统性红斑狼疮、某些恶性肿瘤时，其κ／λ值不变。
而M 蛋白发生时，是单克隆细胞的恶性增殖，所以在Ig 量明显增高的同时，其κ／λ比值必然发生改变，即一种轻链型的Ig 分子增多。
利用适当的方法，分别定量测定血清中κ、λ型Ig 分子的量，即可特异而简便地诊断M 蛋白病。
测定方法有两种，一是用浊度测定技术分别测定含κ或λ的Ig 的量，一种是用单相免疫扩散法测定κ型、λ型Ig 的含量及比值。
单扩法是在琼脂凝胶板上打孔，排列呈梅花型，中心孔注入抗κ、抗λ混合抗体，周围孔放正常人及患者待测血清，然后进行扩散。
正常血清与抗血清之间可见对称双线。
若患者的κ轻链Ig 升高，其沉淀线向内移，而λ线有不同程度向外移，双环间距增宽。
若λ轻链Ig 含量增高，则表现为环距减小、融合或跨环现象。
此外，该法对IgG、IgA、IgD 类型的轻链诊断准确率较高，而对Ig M型诊断不够理想，其原因是Ig M分子大，扩散迁移率小，同时五聚体立体结构也影响了抗轻链抗体与轻链结合。
若用二疏基乙醇处理将Ig M 解为单体，则阳性率大大提高。
6．良性M 蛋白血症
良性M 蛋白血症主要指那些血清中存在电泳均质的免疫球蛋白或其片段，但无临床症状，长期观察也未发现骨髓瘤或世球蛋白血症的病人。
老年人中发现良性M 蛋白血症者较多，应注意与多发性骨髓瘤相鉴别。