荧光定量PCR仪操作指南eppendorf

目录：1 安全预防法2 安装2.1 交货包装2.2 仪器的安装2.3 功能性单元2.3.1 Mastercycler ep realplex2.4 启动2.4.1 realplex模块与热模块之间的连接2.4.2 Mastercycler ep realplex 与计算机之间的连接2.4.3 与其它部件的连接2.4.4 realplex软件的安装2.4.4.1 安装主程序2.4.4.2 数据恢复2.4.4.3 开始realplex软件的运行3. 操作3.1 管理者登陆3.2 登陆3.3 用户变更3.4 系统配置3.4.1 对使用者的管理3.4.1.1 新用户建立3.4.1.2 编辑用户3.4.1.3删除用户3.4.2 用户层3.4.3 循环仪3.4.4 realplex 模块3.4.5 系统层3.4.5.1 特性3.4.5.2 登陆出错信息3.4.5.3 用户登陆3.4.5.4 软件更新3.5 检测项目管理3.5.1 建立检测项目3.5.2 打开检测项目3.5.3 保存检测项目3.5.4 保存模板文件3.5.5 模板文件的使用3.5.6 复制检测项目3.5.7 检测项目的输出3.5.8 检测项目的输入3.5.9 建立文件夹3.5.10 删除检测项目和文件夹3.6 探针管理3.7 染料管理3.8 校准3.8.1 背景校准3.8.2 颜色校准3.8.2.1 使用商业的校准工具包进行的颜色校准3.8.2.2 客户特有的染料的校准3.9 数据库管理3.9.1 当前数据库的自动保存3.9.2 当前数据库的保存3.9.3 输入数据库3.9.4 数据库的归档4 编程（检测项目的建立）4.1 建立一个新的检测项目4.2 建立板布局4.2.1 染料的确定4.2.2 参考染料的选择4.2.3 样本容积输入4.2.4 探针类型的确定4.2.5 背景的确定4.2.6 样品类型的定义4.2.6.1 标准4.2.6.2 阳性对照4.2.6.3 阴性对照4.2.6.4 未知样品4.2.7 复制和标准系列的自动建立4.2.8 定量的样品类型4.2.9 相对定量的样品类型4.2.9.1 多plex分析例子4.2.9.2 单plex分析的例子4.2.10 熔点分析中的样品类型4.2.11 终点测定中的样品类型4.2.12 +/-检测项目中的样品类型4.2.13 基因辨识中的样品类型4.2.12 样品的复制与剪切4.2.15 删除样品4.2.16 几个样品的归组4.2.17 子检测项目的测定4.2.18 板布局的删除4.2.19 完整检测项目的板布局编辑4.3 pcr程序的建立4.3.1 用模板程序建立一个pcr程序4.3.2 不用模板程序建立pcr程序4.3.3 程序步的插入和编辑4.3.3.1 温度4.3.3.2 循环（1－5步循环）4.3.3.3 保温4.3.3.4 暂停4.3.3.5 声音4.3.3.6 熔解曲线4.3.3.7 终点4.3.4 程序的复制4.3.5 程序的删除4.3.6 测量点的确定4.3.7 热盖设置5 操作（监测）5.1 样品的加载5.2 模块温度控制5.3 样品体积5.4 启动检测项目5.5 单个样品的选择5.6 单个样品类型的选择5.7 循环仪状态5.8 当前运行检测项目的中断5.9 继续运行检测项目5.10 终止检测项目5.11 mastercycler ep realplex 作为pcr的使用5.12 mastercycler ep realplex 作为荧光计的使用5.13 关闭6 分析6.1 概要6.1.1 打开检测项目6.1.1.1 打开在运行的检测项目6.1.1.2 打开子检测项目6.1.2 单一检测项目的选择6.1.3 使样品处于不活动状态6.1.4 样品类型的选择6.1.5 分析模式的选择6.1.6 图标缩放6.1.7 存储默认设置6.1.8 图表的保存和复制6.1.9 样品数据的保存和复制6.1.10 编辑报告6.1.10.1 模板报告的应用6.1.11 分析的保存6.1.12 调用分析6.2 定量6.2.1 阈值确定6.2.2 基准线测定6.2.3 标准曲线6.2.4 分析6.2.5 multiplex 分析6.3 相对定量6.3.1 阈值的测定6.3.2 多plex 分析的估算6.3.3 单plex分析的估算6.4 熔解曲线分析6.4.1 阈值的测定6.4.2 分析6.5 终点测量6.5.1标准曲线6.5.2 分析6.6 +/-检测项目6.6.1 将终点测定作为数据源的+/-检测项目分析模式6.6.1.1 阈值的测定6.6.2 pcr数据作为数据源的+/-assay6.6.2.1 阈值测定6.6.3 分析6.6.4 多plex分析6.7 基因测定6.7.1 阈值测定6.7.2 分析7 维护7.1 清洁仪器的一般方法7.2 热模块的清洁7.3 热模块的验证与校准8 故障查找8.1 一般故障8.2 在sybr绿色分析中发生的错误8.3 qrt－pcr过程中发生的错误9.1 登陆9.2 新用户的建立9.3 创建一个检测项目9.4 检测项目的保存9.5 执行检测项目9.5.1 概述9.5.2 板布局9.5.3 pcr程序9.5.4 开始检测项目9.5.5 当前运行检测项目的中断9.5.6 继续运行检测项目9.5.7 退出检测项目9.5.8 分析10 技术数据2.3 功能性单元2.3.1 Mastercycler ep realplex图1：关闭的realplex模块前面观1 realplex模块2 状态显示3 密封压板（锁住状态）4 控制面板的挂钩（Mastercycler ep realplex不需要）5 热模块图2：打开的realplex模块前面观1 密封压板（开启状态）2 realplex模块3 热模块放入试验样本后，向前拉动realplex模块，覆盖住插入的试管。

然后用压板密封，程序开始启动。

注意在把密封压板归位时小心不要弄伤手指。

当realplex模块开启时，不要触碰盖子下端以防被灼伤。

2.4.4.3 开始realplex软件的运行打开mastercycler ep realplex的开关，等待位于开关上部的LED灯将变为绿色。

现在您可以开始运行realplex软件了。

您也可以在mastercycler ep realplex处于关断状态下运行realplex软件，甚至在不接任何硬件的状态下运行该软件。

第二种情况下，软件将会提示一条错误信息，可以忽略该信息继续运行软件。

注意：当使用realplex软件时，不要运行其它会占用计算机大部分内存的软件（如：CD创建器或者媒体播放器等）！决不可以使计算机工作在电池供电模式！调整计算机供电电源的设定值以保证在程序运行过程中，计算机不会进入待机状态。

3. 操作3.1 管理者登陆当realplex软件第一次被打开时，将会显示如图3.2所示的一个登陆对话框，提示软件管理者为Eppendorf命名并输入登陆密码。

这项是仪器的出厂设置，如有需要用户可以在User Administrator对话框中对此项进行修改（详细情况请查阅3.4.2节）。

此后软件再次被打开时，无论软件管理者还是其他的软件使用者，都必须建立一个用户才能登陆使用realplex软件。

3.2 登陆在打开程序时，Mastercycler ep realplex用户都必须先登陆才能进一步使用软件。

所有用户名都列在选取框中。

我们要做的就是选出自己的用户名并输入相应密码。

新用户由软件管理者建立。

（请参阅3.4.1.1节）如果登陆密码输入错误，则会显示登陆失败（login failed）。

点击OK键确认后，重新进入登陆程序。

如果点击Cancel键，则显示主屏幕（情参阅3.3节）。

但是此时所有的功能键都会处于无效状态。

为进入工作状态，使用者必须再次打开登陆对话框（情参阅3.2节）完成登陆手续。

注意：登陆以后，用户可以对自己的文件夹和分析程序进行读或者写的操作，与Mastercycler ep realplex仪器连接后可以执行其他的实验操作。

而对软件其他用户的文件夹和分析程序只有读的权限。

如果想要执行或编辑其他用户的分析程序的话，可以将其复制到自己的文件夹中。

3.3 用户变更当已有其他使用者登陆时，可以按照以下方法登陆系统：通过点击该图标以退出登陆。

如果选择登陆图标，User login对话框将被弹出，使用者可以按照3.2节中描述的登陆步骤进行登陆。

以上两种功能也可以通过File菜单来实现。

软件在同一时刻仅允许一名用户登陆，新用户的登陆将自动使原来的使用者退出系统。

当前登陆用户将被显示在屏幕下方的状态栏内。

登陆后，主屏幕显示为Administror或者User。

主屏幕包括向导区，工作区和状态区。

如果在左边的向导栏内选定某一程序函数时，该程序函数则会显示在工作区内，而状态栏中将显示热模块的状态信息和当前使用者的用户信息。

1 菜单栏2 工具栏3 向导区4 工作区5 状态栏通过选项show/hide navigator，向导区可以被显示或者隐藏。

这一操作也可以通过setup 菜单实现。

注意：所有的对程序各个功能的操作以及对系统配置的操作，都可以通过工具栏或者菜单栏实现。

选择性的操作还可以通过点击鼠标右键来实现。

3.4 系统配置在setup菜单中选择system configuration项，则在菜单栏中显示realplex system configuration 对话框。

其中对话框左边列出了所有的使用者名单以及处于连接状态的模块名单，此外还有系统设置及其功能的结点选项。

在向导栏内不同的层次显示为不同的符号。

当用光标选中某个结点时，从属文件夹将变为可见的，再选一次则可关闭该结点。

如果某层或其从属文件夹被选中，将在对话框的右边显示出相应的窗口内容。

3.4.1 对使用者的管理当选中User项，User Administration图表显示在对话框右边，列出所有的用户名单。

软件管理者登陆系统以后，可以使用该对话框进行建立新用户，编辑和删除已建立的用户的操作。

3.4.3 循环仪在cycler结点处，可以得到已连接的循环仪的信息。

设备特性被列在properties图表下。

此外相应硬件的资料以及最后登陆的用户名，还有最后运行的程序都会在此栏下显示出来。

在incubate和lid图表下，可以调整热模块和加热盖的温度值。

具体做法为首先在new temperature一栏中填入所需的温度值，然后选择incubate复选框以确认。

如停止调温，则释放incubate复选框。

PCR程序文档信息在protocol图表下显示。

首先给出了启动PCR程序的登陆用户的信息以及该PCR程序的程序名和启动时间。